植入的人GBM肿瘤细胞被允许在小鼠大脑中生长9天，然后用缓冲液对照（C)或 aldoxorubicin (T)处理。在第9、16和23天，向小鼠施用缓冲液（C)或aldoxorubicin。通 过在第7、21、29和33天检测扫描之前施用于小鼠的荧光素酶底物的生物发光来监测肿瘤 生长。根据右侧色度方案显示肿瘤细胞中荧光素酶表达的强度，其中变暗区域表明最大表 达（最多肿瘤细胞）且黑色表明没有表达（无肿瘤细胞）。
[0024] 在7天时，在对照（C)和aldoxorubicin处理（T)的动物中均看到荧光素酶的肿 瘤细胞表达。在21天时，所有对照小鼠均具有正在生长的肿瘤，而仅1个aldoxorubicin 处理的小鼠具有可检测的肿瘤。在第29天，所有C小鼠都已死亡，而仅1个aldoxorubicin 处理的小鼠死亡且在2个小鼠中观察到肿瘤再生长。在第33天，3个T小鼠已死亡且在4 个其它小鼠中肿瘤的再生长。t指示动物死亡。
[0025] 图6显示对照（C)和aldoxorubicin处理组（T)中的小鼠的散布图，其显示获得 自图5中所示图像的表示为辐照函数（光子数/sec/cm2/sr)的肿瘤大小之间的关系。7天 后对照组和处理组之间不存在平均肿瘤大小的相对差异（p>〇. 05)(图6A)，但21天后观察 到对照组和处理组之间的差异（P〈〇. 05,参见图6B中星号）。处理组在21天至29天之间 没有相对差异（P>〇. 05)，但由于肿瘤再次出现，在33天时观察到差异（p〈0. 05 ;图6C中由 星号显示）。
[0026] 图7显示具有GBM的小鼠的根据研究天数的Kaplan-Meier存活曲线。接受 aldoxorubicin的小鼠 （η = 8 ;虚线）比接受媒介物的那些（η = 8 :实线）存活更长（p = 0· 0006)。
[0027] 图8显示肿瘤组织中的aldoxorubicin保留是周围脑组织中的3至4倍。小鼠 的肿瘤和周围脑组织中的aldoxorubicin保留在向具有颜内GBM肿瘤的小鼠静脉内施用 24mg/kg剂量（最大耐受剂量的75% )后通过HPLC测量。
[0028] 图9显示对aldoxorubicin (ALD0X)处理相对于对照（NT)在增殖（Ki-67)、瘤内脉 管（CD31)、中间丝蛋白表达（波形蛋白）和细胞凋亡效应物（切割的胱天蛋白酶-3)的活 化的免疫组织化学评估的图示。
[0029] 图10显示aldoxorubicin而非多柔比星在无胸腺裸小鼠中的颜内人神经胶质母 细胞瘤肿瘤中的选择性累积。具有肿瘤的小鼠如实施例1所述接受aldoxorubicin和多柔 比星的静脉内注射。在最后注射后24小时对小鼠进行安乐死。收获脑部且使用装有针对 明场和落射荧光的多柔比星特异性波长的立体显微镜进行成像以显现药物累积。
[0030] 图11显示如具有肿瘤的小鼠的脑组织冷冻切片中看到的aldoxorubicin而非多 柔比星的选择性累积。还显示⑶31 (微血管密度标志物）和波形蛋白（促侵袭性III型中 间丝蛋白）的免疫组织化学染色。所有细胞核均用DAPI复染。
[0031] 图 12 显不对照（control)、多柔比星（doxo)和 aldoxorubicin (aldoxo)处理组中 的小鼠的柱状图，其显示获得自图1中所示图像的表示为辐照（光子数/sec/cm2/sr)与时 间的函数的肿瘤大小之间的关系。
[0032] 发明详述
[0033] 除非本文另有定义，否则本申请中使用的科学和技术术语应具有普通技术人员通 常理解的含义。通常，本文中所述的与化学、分子生物学、细胞和癌症生物学、免疫学、微生 物学、药理学以及蛋白和核酸化学结合使用的命名法及其技术是本领域中众所周知且常用 的命名法和技术。
[0034] 本申请中提及的所有出版物、专利和公开的专利申请通过引用具体并入本文。在 冲突的情况下，以本说明书（包括其具体定义）为准。除非另有指明，否则应理解本发明的 各实施方案可单独使用或与本发明的任一个或多个其它实施方案组合使用。
[0035] 在本说明书通篇中，词语〃包含（comprise) 〃或变型诸如〃包含（comprises) 〃或 〃包含（comprising)"应理解为暗示包括所述整体（或组成）或整体（或组成）的组，但不 排除任何其它整体（或组成）或整体（或组成）的组。
[0036] 除非上下文另有明确指示，否则单数形式〃一（a) 〃、〃一（an) 〃和〃该〃包括复 数。
[0037] 术语〃包括（including) 〃用于意指〃包括、但不限于〃。〃包括（including) 〃和 〃包括（including)、但不限于〃可互换使用。
[0038] 对于由术语〃约〃限定的数字，2%、5%或甚至10%的变化在限定数字的范围内。
[0039] 术语〃蒽环霉素〃是指一类具有蒽二酮（也称为蒽醌或二氧代蒽）结构单元的抗 肿瘤抗生素。例如，术语〃蒽环霉素〃特别意欲个别包括多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊 达比星、戊柔比星、吡柔比星、佐柔比星、阿柔比星、洋红霉素、米托蒽醌和阿美蒽醌。
[0040] 术语〃患者〃和〃个体〃可互换使用且是指人或非人的动物。这些术语包括哺 乳动物，诸如人、灵长类动物、家畜动物（例如牛、猪）、伴侣动物（例如犬、猫）和啮齿动物 (例如小鼠和大鼠）。
[0041] 术语〃药学上可接受〃意指不干扰活性成分的生物活性的有效性的无毒物质。载 体的特征将取决于施用途径。
[0042] 术语"药学上可接受的载体"是指可与本发明的治疗有效物质一起施用于患者且 不破坏细胞毒素剂的药理学活性的无毒载体。术语"赋形剂"是指制剂或组合物中的不是 药物活性成分的添加剂。
[0043] 术语〃药学有效量〃或〃治疗有效量〃是指有效治疗患者中的脑癌的量，例如实 现患有疾病（例如癌症）的患者的总体健康的有利和/或所需变化的量。技术人员应认识 到，治疗脑癌包括、但不限于杀死癌细胞、防止新癌细胞生长、引起肿瘤消退（肿瘤大小减 小）、引起癌转移减少、改善患者生命机能、改善患者康乐、减少疼痛、改善食欲、改善患者体 重和其任何组合。〃药学有效量〃或〃治疗有效量〃也指改善患者临床症状所需的量。本 文所述的治疗方法或治疗脑癌的方法不应解释为或以其它方式限于"治愈"脑癌。
[0044] 如本文所使用，术语〃治疗（treating) 〃或〃治疗（treatment) 〃包括以改善或稳 定受试者病症的方式逆转、减少或停滞病症的症状、临床体征和潜在病理学。如本文所使用 和如本领域中所充分理解，〃治疗〃是获得有利或期望结果（包括临床结果）的方法。有 利或期望的临床结果可包括、但不限于缓解或改善一种或多种症状或病症，减轻疾病程度， 稳定（即，不恶化）疾病状态，延迟或减缓疾病进展，改善或缓和疾病状态和缓解（部分或 全部），无论是可检测或不可检测的。"治疗"也可意指与不接受治疗的预期存活相比存活 延长。
[0045] 术语〃被取代〃是指具有替换化合物骨架的一个或多个碳上的氢的取代基的部 分。应理解，〃取代（substitution)〃或〃被…取代（substituted with)〃包括以下隐含 条件：此类取代与被取代的原子和取代基的允许化学价一致，和取代产生稳定化合物，例如 其不会自发地经历转换，诸如通过重排、环化、消除等。如本文所使用，术语"被取代"考虑 包括有机化合物的所有可容许取代基。在一个广泛方面，所述可容许取代基包括有机化合 物的非环状和环状、分支和未分支、碳环和杂环、芳族和非芳族取代基。对于适当有机化合 物，所述可容许取代基可以是一个或多个和相同或不同的。出于本发明的目的，杂原子诸如 氮可具有氢取代基和/或满足杂原子化学价的本文所述有机化合物的任何可容许取代基。 取代基可包括本文所述的任何取代基，例如卤素、羟基、羰基（诸如羧基、烷氧基羰基、甲酰 基或酰基）、硫代羰基（诸如硫酯、硫代乙酸酯或硫代甲酸酯）、烷氧基、烷硫基、酰氧基、磷 酰基、磷酸酯、膦酸酯、氨基、酰胺基、脒、亚胺、氰基、硝基、叠氮基、巯基、烷硫基、硫酸酯、磺 酸酯、氨磺酰基、磺酰氨基、磺酰基、杂环基、芳烷基或芳族或杂芳族部分。
[0046] 治疗有效物质
[0047] 可用于本发明的治疗有效物质包含结构：
[0049] 或其药学上可接受的盐，
[0050] 其中X是可在患者体内以pH依赖性方式水解裂解或酶促裂解的键。
[0051] 在一些实施方案中，用于治疗有效物质中的细胞毒素剂是蒽环霉素。蒽环霉素包 括、但不限于多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、戊柔比星、吡柔比星、佐柔比星、阿 柔比星、洋红霉素、米托蒽醌和阿美蒽醌或其衍生物。在一些实施方案中，所述蒽环霉素是 多柔比星或其药学上可接受的盐。
[0052] 在一些实施方案中，可裂解部分（"X")是酸可裂解部分。酸可裂解部分包括、但不 限于缩醛、缩酮、亚胺、腙、羧基腙或磺酰基腙，或顺乌头基（cis-aconityl)部分或含有被 取代或未被取代的三苯甲基的部分。在某些实施方案中，所述酸可裂解部分是腙部分。在 一些实施方案中，当部分X在患者体内裂解时释放细胞毒素剂。
[0053] 在一些实施方案中，可裂解部分（"X")是酶可裂解的。酶可裂解部分包括、但不 限于包含一个或多个氨基甲酸酯键的肽。肽部分可包含例如1-5、1-10、1-15、1-20、1-25、 1-30、1-35、1-40、2-5、2-10、2-15、2-20、2-25、2-30、2-35、或 2-40 个氨基酸残基。肽部分 包括、但不限于包含 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、 24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、或40个氨基酸残基的部分。肽部 分可被设计为可被一种或多种蛋白酶特异性裂解。在一些实施方案中，所裂解键是肽键、酰 亚胺键或肼部分的羧基-腙键。
[0054] 在一些实施方案中，所述连接基是有机分子。此类连接基可包含至少一个具有 1-12个碳原子的脂族碳链和/或脂族碳环，其中任一碳原子均可被-OH或=0取代，且其中 当适当和化学上可行时，任一碳原子均可被杂原子或芳族部分替换。在一些实施方案中，所 述杂原子是氧。在一些实施方案中，所述脂族连接基可包含含有1-12个碳原子的烷基链、 含有2-12个碳原子的烯基链或含有2-12个碳原子的炔基链，其中任一碳原子均可被-OH 或=〇取代，其中当适当和化学上可行时，任一碳原子均可被氧原子替换。在特定实施方案 中，所述脂族连接基是包含1-12个碳原子的烷基链，其中当适当和化学上可行时，任一碳 原子均可被=〇取代。在其它实施方案中，所述脂族连接基是包含3-9、4-8或5-7个碳原 子的烷基链，其中当适当和化学上可行时，任一碳原子均可被=0取代。在一个特定实施方 案中，所述脂族连接基是包含6个碳原子的烷基链，其中连接至可裂解部分"X"的碳原子被 =〇取代。
[0055] 所述共价蛋白结合基团包括、但不限于马来酰亚胺基、卤代乙酰胺基、卤代乙酸酯 基、吡啶基二硫基、N-羟基琥珀酰亚胺酯基和异硫氰酸酯基。在某些实施方案中，所述共价 蛋白结合基团是马来酰亚胺基。共价蛋白结合基团还包括二硫化物基、乙烯基羰基、1-氮 杂环丙烷基或乙炔基。二硫化物基可通过作为可交换基团的硫代硝基苯甲酸（例如5'-硫 基-2-硝基苯甲酸）活化。马