试管中的包 含lOg/L乳糖的M-17培养基值ifco公司制）中接种1接种环，在40°C下静置一晚进行培 养。接着，W在2mL的10质量％脱脂奶粉水溶液值ifco公司制）中成为1质量％的方式 接种该培养物之后，在40°C下静置一晚进行培养，作为预培养。在主培养培养基（3质量％ 脱脂奶粉水溶液）IOOmL中接种1质量％预培养物，在40°C下静置24小时进行培养。对培 养后的菌液在4°C、W 8000 X g进行15分钟离屯、分离，去除沉淀物。对于得到的沉淀物去除 液（上清）使用分级分子量20000Da的离屯、分离方式超滤过滤器（Centricut MiniV-20 : KURABO INDUSTRIES LTD.制造），在4°C，W 3000Xg进行1小时超滤，得到低分子级分 lOmL。该低分子级分中包含干燥固体成分2% (20000 yg/mL)。另外，该乳酸菌发酵物（乳 成分）上清的低分子级分的平均分子量为300化左右。
[0059] 需要说明的是，平均分子量是将上述低分子级分溶解于50mM氯化钢溶液之后，在 下述条件下进行HPLC而测定的值。 W60] 出PLC条件]
[0061]装置：Waters-eOOE
[0062]检测器 JSI RI-980
[0063]柱：ShodexSUGA 服 S-804
[0064] 柱溫：80°C 阳0化]流动相：50mM NaCl
[0066] 流速：1血/分钟
[0067]注入量：IOyL W側由戊糖素的生成量计算出上述得到的低分子级分的戊糖素生成抑制率（％)。首 先，作为底物溶液，准备将50mM核糖、50mM赖氨酸盐酸盐、50mM精氨酸盐酸盐和IOOmM憐酸 钢缓冲液（pH7. 4)分别等量混合而成的溶液。接着，将该底物溶液与对上述得到的低分子 级分用IOOmM憐酸钢缓冲液（pH7. 4)进行了稀释的待检试样溶液混合W使底物溶液：待检 试样溶液成为5 :1，在60°C的恒溫槽中进行24小时反应。作为对照，代替低分子级分使用 水同样地进行反应。需要说明的是，作为空白使用不包含核糖、赖氨酸、精氨酸的缓冲液。加 热结束之后，对各待检体照射330nm的激发光，测定生成的390nm的巧光强度，W巧光量计 算出戊糖素的生成量。由该巧光强度通过W下的式子计算戊糖素生成抑制率。将运些结果 示于表1中。 W例[数学式1]
[0070]戊糖素生成抑制率（％) = ((Ec-Eb)-(Es-Eb))/巧C-Eb) XlOO
[0071] Es:试样的巧光强度
[0072] Ec :对照的巧光强度
[0073] Eb:空白的巧光强度
[0076] 由W上的结果可知，对于乳酸菌发酵物（乳成分）上清的低分子级分，在0.05质 量％运样低的浓度下为高的戊糖素生成抑制率。另外，也可W确认，戊糖素生成抑制率浓度 依赖地提高。
[0077] 实施例2
[0078] 乳酸菌发酵物（乳成分）上清的高分子级分的戊糖素生成抑制活性：
[0079] 将嗜热链球菌YIT2084株师RM BP-10879)的-80°C保存菌株向2血试管中的包 含lOg/L乳糖的M-17培养基值ifco公司制）中接种1接种环，在40°C下静置一晚进行培 养。接着，W在2mL的10质量％脱脂奶粉水溶液值ifco公司制）中成为1质量％的方式接 种该培养物之后，在40°C下静置一晚进行培养，作为预培养。在发酵罐中准备的主培养培养 基（包含1 %的大豆肤的10质量％脱脂奶粉水溶液）IL中W 0. 1质量％接种该预培养物， 在40°C下边使用8N的氨氧化钢溶液将培养基保持在抑7边在转速10化pm的条件下培养24 小时。接着，在冰中进行冷却之后，W终浓度成为10% w/v的方式加入立氯乙酸（TCA)，在 4°C下静置2小时。对其W 18300X g进行30分钟离屯、，向上清液中加入等量的99质量％冷 乙醇，进而在4°C下静置一晚。对其用透析管（Spectra/Por Membrane (MW3500) :Spectrum Medical Ltd.制造）进行透析，按照常规方法对得到的高分子级分进行冷冻干燥。需要说 明的是，该乳酸菌发酵物（乳成分）上清的高分子级分的平均分子量为90万化左右。平 均分子量的测定方法与乳酸菌发酵物（乳成分）上清的低分子级分是同样的。
[0080] 对于上述得到的乳酸菌发酵物（乳成分）上清的高分子级分，与实施例1同样地 计算出戊糖素生成抑制率（％)。将其结果示于表2。 阳0川[表引[0082]
[0083] 由W上的结果可知，对于乳酸菌发酵物（乳成分）上清的高分子级分，在0.05质 量％运样低的浓度下也为高的戊糖素生成抑制率。另外，也可W确认，戊糖素生成抑制率浓 度依赖地提高。
[0084] 实施例3
[00化]乳酸菌发酵物（芦苔）上清的戊糖素生成抑制活性：
[0086] 将库拉索芦苔（学名：Aloe barbadensis Miller)的冷冻叶解冻之后进行破碎， 加入2倍量的水和巧樣酸0. 05质量％，在40°C下使纤维素酶（纤维素酶"化OZ址a" 3S : 化kult Pharmaceutical IndustiT Co. ,Ltd.制造）作用3小时。之后，暂时加热至90°C之 后冷却至室溫，并进行过滤，进行减压浓缩至成为化ix3. 5为止，得到库拉索芦苔提取液。 对于得到的库拉索芦苔提取液（pH3. 7)在100°C下进行100分钟加热灭菌。向其中接种植 物乳杆菌的标准株（ATCC14917)的预培养菌液1%之后，在30°C下静置72小时进行培养。 培养之后，通过过滤，采集滤液，得到乳酸菌发酵物（芦苔）上清。该乳酸菌发酵物（芦苔） 上清中包含干燥固体成分2. 9% (29000 y g/mL)。
[0087] 对于上述得到的乳酸菌发酵物（芦苔）上清，与实施例1同样地，计算出戊糖素生 成抑制率（％)。另外，对于没有用植物乳杆菌进行发酵的库拉索芦苔提取液，也同样地计 算出戊糖素生成抑制率（％)。将它们的结果示于表3和4中。
[0092]由W上的结果可知，乳酸菌发酵物（芦苔）上清与没有用乳酸菌发酵的库拉索芦 苔提取液相比较，W 0. 05质量％运样低的浓度具有1. 4倍W上高的戊糖素生成抑制率。另 夕F，也可W确认，戊糖素生成抑制率浓度依赖地提高。 阳〇9引 实施例4
[0094] 化妆水的调制：
[0095] 调制W下表5所述的组成的化妆水。需要说明的是，化妆水是向成分7中加入成 分1~6并充分地进行揽拌而调制的。
[0098] *直接使用实施例1中得到的乳酸菌发酵物（乳成分）上清的低分子级分。
[0099] 实施例5 阳100] 乳液的调制： 阳101] 调制W下表6所述的组成的乳液。需要说明的是，乳液是如下调制的：向成分11 中加入成分7、8和10进行加溫，在80°C下加入成分1~6进行乳化，之后加入成分9进行 揽拌，冷却至室溫。
阳104] *直接使用实施例2中得到的乳酸菌发酵物（乳成分）上清的高分子级分。 阳105] 实施例6 阳106] 霜的调制： 阳107] 调制W下表7所述的组成的霜。需要说明的是，霜是如下调制的：向成分13中加 入成分9、10、12进行加溫，在80°C下加入成分1~8进行乳化，之后加入成分11进行揽拌， 冷却至室溫。
[0110] *直接使用实施例3中得到的乳酸菌发酵物（芦苔）上清。 阳1川 产化h的可利用忡
[0112] 本发明的戊糖素生成抑制剂能够用于与戊糖素相关的疾病的预防、治疗。
【主权项】
1. 一种戊糖素生成抑制剂，其以乳酸菌发酵物作为有效成分。2. 根据权利要求1所述的戊糖素生成抑制剂，其中，乳酸菌发酵物的浓度以干燥固体 成分计为〇. 05质量％时，戊糖素生成抑制率为25%以上。3. 根据权利要求1或2所述的戊糖素生成抑制剂，其中，作为乳酸菌发酵物，使用用乳 酸菌使含有乳成分的培养基发酵而成的物质。4. 根据权利要求1或2所述的戊糖素生成抑制剂，其中，作为乳酸菌发酵物，使用由用 乳酸菌使含有乳成分的培养基发酵而成的物质得到的上清。5. 根据权利要求1或2所述的戊糖素生成抑制剂，其中，作为乳酸菌发酵物，使用由用 乳酸菌使含有乳成分的培养基发酵而成的物质得到的上清的低分子级分。6. 根据权利要求1或2所述的戊糖素生成抑制剂，其中，作为乳酸菌发酵物，使用由用 乳酸菌使含有乳成分的培养基发酵而成的物质得到的上清的高分子级分。7. 根据权利要求3~6中的任一项所述的戊糖素生成抑制剂，其中，乳酸菌为嗜热链球 菌。8. 根据权利要求3~6中的任一项所述的戊糖素生成抑制剂，其中，乳酸菌为嗜热链球 菌YIT2084 株（FERMBP-10879)。9. 根据权利要求1或2所述的戊糖素生成抑制剂，其中，作为乳酸菌发酵物，使用用乳 酸菌使含有芦荟的培养基发酵而成的物质。10. 根据权利要求9所述的戊糖素生成抑制剂，其中，乳酸菌为植物乳杆菌。
【专利摘要】一种戊糖素生成抑制剂，作为具有抑制戊糖素生成的作用的成分，以具有更强的作用、安全性高的乳酸菌发酵物作为有效成分。FERM BP-1087920060818
【IPC分类】A61P29/00, A61K35/74, A61P37/08, A61P43/00, A61P17/00
【公开号】CN105358165
【申请号】CN201480038614
【发明人】伊泽直树, 丹羽大辅, 曾根俊郎
【申请人】株式会社益力多本社
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2014年6月25日
【公告号】US20160166622, WO2015002043A1