盐、2-糞横酸盐、草酸盐、栋桐酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸 盐、新戊酸盐、丙酸盐、班巧酸盐、酒石酸盐、=氯乙酸盐、=氣乙酸盐、憐酸盐、谷氨酸盐、碳 酸氨盐、对甲苯横酸盐和十一烧酸盐。可用于形成药学上可接受的加成盐的酸的实例包括 无机酸如盐酸、氨漠酸、硫酸和憐酸W及有机酸如草酸、马来酸、班巧酸和巧樣酸。
[0087] 碱加成盐可W在化合物的最终分离和纯化期间，通过将簇基与适合的碱例如金属 阳离子的氨氧化物、碳酸盐或碳酸氨盐，或与氨或有机伯胺、仲胺或叔胺进行反应来制备。 药学上可接受的盐的阳离子包括裡、钢、钟、巧、儀和侣，W及无毒性的季锭阳离子例如锭、 四甲基锭、四乙基锭、甲胺、二甲胺、S甲胺、S乙胺、二乙胺、乙胺、S下胺、化晚、N，N-二甲 基苯胺、N-甲基赃晚、N-甲基吗嘟、二环己胺、普鲁卡因、二节胺、N，N-二苄基苯乙胺和N，N'-二苄基乙二胺。可用于形成碱加成盐的其它代表性的有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇 胺、赃晚和赃嗦。
[0088] 当在下面实施例中描述的P81过滤板测定法中测量时，特定的本发明化合物W小 于0.1、0.0 l或0.0 OliiM的ICso抑制AAKl。当在下面实施例中描述的基于肥K281细胞的测定法 中测量时，特定的本发明化合物W小于0.1、0.01或0.00 IyM的I Cso抑制AAK1。
[0089] 合成方法
[0090] 本发明化合物（即，本文公开的化合物)可使用下文所述的方法和使用有机化学领 域的技术人员已知的方法来制备。特定化合物是如下通式的化合物：
[0092] 其中Ri、R2和R3在本文中定义，并且包括其盐。运些化合物可W通过下文概述的方 法来制备。
[0093] 上文所示式的化合物可通过下文概述的方法来制备。方案1示出可用于制备其中 R2是芳基(包括杂芳基和化晚酬类似物）的本发明化合物的方法。此处，化合物1与适当的棚 酸或醋[R浊(0R)2]的Suzuki偶联提供2。2的漠化得到中间体3。第二Suzuki偶联得到化合物 4。
[0094] 方案 1
[0096] 方案2示出可用于制备其中R2是控基并且R'是R2c、R2d或其前体的本发明化合物的 方法。此处，化合物10与适当的棚酸、醋[R浊(0R)2]或締控的Suzuki、Heck或其它偶联得到 11。将11中的締控还原，得到化合物12。12的漠化得到中间体13。第二Suzuki偶联得到化合 物14。
[0097] 方案 2
[0099] 使用方法
[0100] 本发明的一个实施方式涵盖在体外和体内抑制转接物关联激酶I(AAKl)的方法， 其包括使AAK1与本发明化合物接触。
[0101] 另一个实施方式涵盖治疗和管控由AAKl活性介导的疾病和病症的方法。由AAKl活 性介导的疾病和病症是具有受AAKl活性影响的至少一种症状、严重性或表现的疾病和病 症。运些疾病和病症的实例被认为包括阿尔茨海默氏病、双相情感障碍、疼痛、帕金森氏病 和精神分裂症(包括精神分裂症中的认知缺陷）。具体方法包括向有需要的患者(人类或其 它哺乳动物)施用治疗或预防有效量的AAKl抑制剂(例如，本文公开的化合物）。
[0102] 本发明的另一个实施方式涵盖治疗或管控疾病或病症的方法，其包括向有需要的 患者施用治疗或预防有效量的AAKl抑制剂，其中所述疾病或病症是阿尔茨海默氏病、双相 情感障碍、疼痛、帕金森氏病或精神分裂症(包括精神分裂症中的认知缺陷）。疼痛的具体类 型包括慢性疼痛、急性疼痛和神经性疼痛。神经性疼痛的具体类型包括纤维肌痛和周围神 经病(例如，糖尿病性神经病）。
[0103] 当用于治疗或管控疾病或病症时，本发明化合物优选作为包含一种或多种药学上 可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物的一部分施用。
[0104] 药物组合物或制剂可W每单位剂量含有预定量的活性成分的单位剂型呈现。本公 开的化合物的每天约0.01至约250毫克/公斤（"mg/kg")体重、优选地每天约0.05至约 lOOmg/kg体重的剂量水平在用于预防和治疗疾病的单一疗法中是典型的。通常，本公开的 药物组合物每天施用约1至约5次或可选地W连续输注方式施用。运种施用可用作慢性或急 性疗法。可与制造单一剂型的载体材料组合的活性成分的量将根据如下因素而改变:所治 疗的病状，病状的严重性，施用时间，施用途径，所用化合物的排泄速率，治疗持续时间，W 及患者的年龄、性别、体重和病状。优选的单位剂量制剂是含有如上文所述的每日剂量或子 剂量或者其适当分率的活性成分的那些制剂。可用大幅度地小于最佳剂量的小剂量的化合 物来起始治疗。其后，剂量W小的增量增加，直至达到在所述情况下的最佳作用。一般来说， 所述化合物最希望在一般将得到有效结果而不造成任何有害或有毒副作用的浓度水平下 施用。
[0105] 本发明化合物可与一种或多种另外的治疗或预防剂组合施用。例如，当用于治疗 疼痛时，可能的另外的药剂包括免疫抑制剂和抗炎剂。
[0106] 适用于本发明的方法和组合物中的免疫抑制剂包括本领域中已知的那些。实例包 括氨基蝶岭、硫挫嚷岭、环抱菌素A、D-青霉胺、金盐、径氯哇、来氣米特、甲氨蝶岭、米诺环 素、雷帕霉素、柳氮横化晚、他克莫司(FK506)和其药学上可接受的盐。具体的免疫抑制剂是 甲氨蝶岭。
[0107] 其它实例包括抗TNF抗体，例如阿达木单抗、赛妥珠单抗pegol、依那西普和英利昔 单抗。其它实例包括白细胞介素-1阻断剂，例如阿那白滞素(anakinra)。其它实例包括抗B 细胞(CD20)抗体，例如利妥昔单抗。其它实例包括T细胞活化阻断剂，例如阿己西普。
[0108] 其它实例包括单憐酸肌巧脱氨酶抑制剂，例如霉酪酸吗嘟乙醋(mycophenolate mof eti 1) (CellC巧t?巧日霉酪酸(Myfbrtic?) q
[0109] 适用于本发明的方法和组合物中的抗炎药物包括本领域中已知的那些。实例包括 糖皮质激素和NSAID。
[0110] 糖皮质激素的实例包括醒固酬、倍氯米松、倍他米松、可的松、脱氧皮质酬、地塞米 松、氣氨可的松、氨化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙、泼尼松、曲安西龙和其药学上可接受的 盐。
[0111] NSAID的实例包括水杨酸盐(例如，阿司匹林、阿莫普林(amoxiprin)、贝诺醋、水杨 酸胆碱儀、二氣尼柳、法斯拉明（faislamine)、水杨酸甲醋、水杨酸儀、水杨酸水杨醋和其药 学上可接受的盐）、芳基链烧酸(例如，双氯芬酸、醋氯芬酸、阿西美辛、漠芬酸、依托度酸、吗I 噪美辛、糞下美酬、舒林酸、托美汀和其药学上可接受的盐）、芳基丙酸(例如，布洛芬、卡洛 芬、芬布芬、非诺洛芬、氣比洛芬、酬洛芬、酬咯酸、洛索洛芬、糞普生、奥沙普嗦、嚷洛芬酸、 舒洛芬和其药学上可接受的盐）、芳基邻氨基苯甲酸(例如，甲氯芬那酸、甲芬那酸和其药学 上可接受的盐）、化咯烧衍生物(例如，阿扎丙宗、安乃近、径基保泰松、保泰松、苯横挫酬和 其药学上可接受的盐）、昔康类(例如，氯诺昔康、美洛昔康、化罗昔康、替诺昔康和其药学上 可接受的盐）、C0X-2抑制剂(例如，塞来考昔、艾托考昔、罗美昔布、帕瑞考昔、罗非考昔、伐 地考昔和其药学上可接受的盐)和横酷苯胺(例如，尼美舒利和其药学上可接受的盐）。
[0112] 用于治疗疼痛(包括但不限于神经性和炎性疼痛）的其它药剂包括药剂如普瑞己 林、利多卡因、度洛西汀、加己喷下、卡己西平、辣椒素和其它血清素/去甲肾上腺素/多己胺 再摄取抑制剂，和鸦片剂(例如奥施康定、吗啡和可待因）。
[0113] 在由已知疾病或病状如糖尿病、感染(例如，带状瘤疹或HIV感染)或癌症造成的疼 痛的治疗中，本发明化合物可与针对潜在的疾病或病状的一种或多种其它治疗或预防剂组 合施用。例如，当用于治疗糖尿病性神经病时，本发明化合物可与一种或多种抗糖尿病剂、 抗高血糖剂、降血脂/脂质降低剂、抗肥胖剂、抗高血压剂和食欲抑制剂组合施用。抗糖尿病 剂的实例包括双脈类(例如，二甲双脈、苯乙双脈）、葡糖巧酶抑制剂(例如，阿卡波糖、米格 列醇）、膜岛素(包括膜岛素促分泌剂和膜岛素敏化剂）、美格列奈(例如，瑞格列奈）、横酷脈 (例如，格列美脈、格列本脈、格列齐特、氯横丙脈和格列化嗦）、双脈/格列本脈组合(例如， 库鲁泛斯(Glucovance))、嚷挫烧二酬(例如，曲格列酬、罗格列酬和化格列酬）、PPAR-a激动 剂、PPAR- 丫激动剂、PPARa/ 丫双重激动剂、糖原憐酸化酶抑制剂、脂肪酸结合蛋白（aP2)的 抑制剂、膜高血糖素样肤-I(GLP-I)或化P-I受体的其它激动剂、二肤基肤酶IV(DPP4)抑制 剂和钢-葡萄糖共转运体2(SGLT2)抑制剂(例如，达格列净、卡格列净和LX-4211)。
[0114] 药物组合物
[0115] 药物制剂可适于通过任何适当的途径施用，例如通过经口（包括经颊或舌下）、经 直肠、经鼻、局部(包括经颊、舌下或透皮）、经阴道或肠胃外(包括皮下、皮内、肌内、关节内、 滑膜内、胸骨内、銷内、病灶内、静脉内或真皮内注射或输注)途径。运样的制剂可通过制药 领域中已知的任何方法制备，例如通过使活性成分与一种或多种载体或一种或多种赋形剂 缔合。经口施用或通过注射施用是优选的。
[0116] 适于经口施用的药物制剂可W离散单元形式呈现，例如胶囊或片剂;粉末剂或颗 粒剂;在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液;可食用泡沫剂或揽拌剂(whip);或水包油液 体乳液或油包水乳液。
[0117] 例如，对于W片剂或胶囊形式经口施用来说，活性药物组分可与药学上可接受的 口服无毒惰性载体如乙醇、甘油、水等组合。粉末剂是通过将化合物粉碎成合适的微细尺寸 并与类似粉碎的药物载体如可食用碳水化合物例如淀粉或甘露醇混合来制备。也可W存在 调味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。
[0118] 胶囊是通过制备如上所述的粉末混合物并填充成形的明胶外壳来制造的。可在填 充操作之前向粉末混合物中添加助流剂和润滑剂如胶体二氧化娃、滑石、硬脂酸儀、硬脂酸 巧或固体聚乙二醇。也可W添加崩解剂或增溶剂如琼脂、碳酸巧或碳酸钢W改善当胶囊被 摄入时药物的可用性。
[0119] 此外，当需要时或必要时，也可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂并入混 合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖如葡萄糖或e-乳糖、玉米甜味剂、天然和合成 胶如阿拉伯胶、黄巧胶或海藻酸钢、簇甲基纤维素、聚乙二醇等。运些剂型中使用的润滑剂 包括油酸钢、氯化钢等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润±、黄原胶等。例 如通过制备粉末混合物，制粒或预压，添加润滑剂和崩解剂并压制成片剂来配制片剂。通过 将适当粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或碱W及任选地与粘合剂如簇甲基纤维素、海藻 酸盐、明胶或聚乙締化咯烧酬、溶解延迟剂如石蜡、再吸收促进剂如季锭盐和/或吸收剂如 膨润±、高岭±或憐酸二巧混合来制备粉末混合物。可通过用粘合剂如糖浆、淀粉糊、阿拉 伯胶浆、或者纤维素或聚合材料的溶液润湿并挤压通过筛网来对所述粉末混合物制粒。作 为制粒的替代方案，可使粉末混合物通过压片机并且结果是不完全成形的预压片破裂成颗 粒。所述颗粒可借助于添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油而被润滑W防止粘附到片剂成 形模。然后将润滑的混合物压制成片剂。本公开的化合物也可与自由流动的惰性载体组合 并且无需经历制粒或预压步骤而直接压制成片剂。可提供由虫胶密封包衣、糖或聚合材料 包衣和蜡的抛光包衣组成的透明或不透明的保护性包衣。可将染料添加到运些包衣中W区 分不同的单位剂量。
[0120] 口服流体如溶液、糖浆和馳剂可制备成单位剂型W使得给定量含有预定量的所述 化合物。可通过将化合物溶解在适当调味的水溶液中来制备糖浆，而通过使用无毒媒介物 来制备馳剂。还可W添加增溶剂和乳化剂如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙締山梨醇酸，防腐 剂，风味添加剂如薄荷油或天然甜味剂、或糖精或其它人工甜味剂等。
[0121] 在适当时，可W将用于经口施用的剂量单位制剂微胶囊化。所述制剂也可W被制 备成延长或持续释放，例如通过对颗粒材料进行包衣或将颗粒材料包埋在聚合物、蜡等中。
[0122] 所述式（I)化合物和其药学上可接受的盐还可W脂质体递送系统如小单层囊泡、 大单层囊泡和多层囊泡的形式施用。脂质体可由各种憐脂如胆固醇、硬脂酷胺或憐脂酷胆 碱形成。
[0123] 所述式(I)化合物和其药学上可接受的盐还可W通过使用单克隆抗体作为所述化 合物分子偶联的单独载体来递送。所述化合物还可与作为可祀向药物载体的可溶性聚合物 偶联。运样的聚合物可包括聚乙締化咯烧酬、化喃共聚物、聚径丙基甲基丙締酷胺苯酪、聚 径乙基天冬酷胺苯酪或被栋桐酷基残基取代的聚氧化乙締聚赖氨酸。此外，所述化合物可 与可用于实现药物受控释放的一类可生物降解的聚合物偶联，所述聚合物例如聚乳酸、聚e 己内醋、聚径基下酸、聚原酸醋、聚缩醒、聚二氨化喃、聚氯基丙締酸醋，和水凝胶的交联或 两亲性嵌段共聚物。
[0124] 适于透皮施用的药物制剂可W预期与接受者的表皮保持紧密接触持续延长的时 段的离散贴片形式呈现。例如，活性成分可通过离子电渗而从贴片递送，如化armaceutical Research 1986,3(6) ,318中一般描述的。
[0125] 适于局部施用的药物制剂可配制成软膏、乳膏、混悬剂、洗剂、粉末剂、溶液、糊剂、 凝胶剂、喷雾剂、气溶胶或油。
[01%]适于经直肠施用的药物制剂可W栓剂或灌肠剂形式呈现。
[0127] 适于经鼻施用的药物制剂(其中载体是固体)包括粒度例如在20至500微米范围内 的粗粉末，其W吸取鼻烟的方式施用，即，通过从靠近鼻子的粉末容器中经鼻孔快速吸入。 用于W鼻喷雾剂或滴鼻剂形式施用的合适的制剂(其中载体是液体)包括活性成分的水溶 液或油溶液。
[0128] 适于通过吸入施用的药物制剂包括细粒粉尘或气雾，其可借助于各种类型的计量 的剂量加压气雾剂、喷雾器或吹入器来产生。
[0129] 适于经阴道施用的药物制剂可W阴道栓、棉塞、乳膏、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾 制剂形式呈现。
[0130] 适于肠胃外施用的药物制剂包括水性和非水性无菌注射溶液，其可含有抗氧化 剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与预期接受者的血液等张的溶质；W及水性和非水性无菌悬浮 液，其可包括悬浮剂和增稠剂。所述制剂可W单剂量或多剂量容器例如密封安飯和小瓶的 形式呈现，并且可储存在冷冻干燥(冻干)条件下，其仅需要在使用前不久添加无菌液体载 体例如注射用水。临时注射溶液和悬浮液可从无菌粉末剂、颗粒剂和片剂来制备。
[0131] 应当理解的是，除了上文特别提及的成分之外，所述制剂可包括本领域中关于所 讨论的制剂类型常规的其它试剂，例如适于经口施用的那些试剂可包括调味剂。
[0。。实施例
[0133] 本发明的某些方面可根据W下实施例进行理解。
[0134] AAKl 敲除小鼠 5.6.1.
[0135] 通过如下两种方法来制备对于AAKl基因的破坏来说纯合(-/-)的小鼠：基因捕获 和同源重组。
[0136] 基因捕获是使用编码报道基因或可选择标记基因的DNA片段作为诱变剂的随机插 入诱变方法。基因捕获载体已被设计成W允许将载体编码的外显子剪接成细胞mRNA的细胞 剪接机制的方式整合到内含子或基因中。通常，基因捕获载体含有可选择标记序列，所述可 选择标记序列的前面附有强剪接受体序列并且前面不附有启动子。因此，当运样的载体整 合到基因中时，细胞剪接机制将来自捕获基因的外显子剪接到可选择标记序列的5'末端 上。通常，如果编码基因的载体已经整合到内含子中，则只能表达运些可选择标记基因。随 后通过选择可在选择性培养中存活的细胞来鉴定所产生的基因捕获事件。
[0137] 通过如下方法来突变胚胎干细胞(来自衍生鼠类品系A129的Lex-I细胞），所述方 法包括将基因工程改造的载体序列的至少一部分插入所关注的基因中，将突变的胚胎干细 胞显微注射到胚泡中，随后使用既定方法将所述胚泡引入假孕雌性宿主中并携带至足月。 参见例如"小鼠诱变(Mouse Mutagenesis)" ,1998,Zambrowicz等编辑，Lexicon Press,Ilie Woodlands,TX。随后使所产生的嵌合动物繁殖，W产生能够实现在所关注基因中含有工程 改造突变的等位基因的种系传递的后代。
[0138] 还通过同源重组制造AAKl基因破坏的小鼠。在运种情况下，通过本领域中已知的 方法除去鼠类AAKl基因的第二编码外显子(参见GenBank登录号NM_177762)。参见例如美国 专利No. 5,487，992、5,627,059和5,789,215。
[0139] 结合对于AAKl基因的破坏来说杂合(+/-)的小鼠和野生型(+/+)同窝小鼠来研究 对于AAK堪因的破坏来说纯合(-/-)的小鼠。在运项分析期间，使用被设计成评估哺乳动物 受试者中主要器官系统的功能的医疗诊断程序的集成套件对小鼠进行医学处理。结合杂合 (+/-)和野生型（+/+)同窝小鼠对纯合(-/-)"敲除"小鼠进行研究。通过Southern分析证实 了 AAKl基因的破坏。通过RT-PCR检测AAKl的鼠类同源物在W下中的表达：鼠类大脑;脊髓； 眼睛;胸腺;脾脏;肺;肾脏;肝脏;骨骼肌;骨骼；胃、小肠和结肠;屯、脏;脂肪;哮喘肺;LPS肝 脏；血液；带状屯、脏；主动脉树；前列腺；和乳腺（5周未孕（virgin)动物、成熟未孕动物、 12DPC、产后第3天(哺乳期）、断奶后第3天(早期退化)和断奶后第7天(晚期退化））。
[0140] 使用福尔马林爪测试来测试AAKl纯合(-/-)和其野生型(+/+)同窝小鼠W评估其 急性和强直性疼痛反应。对于运些测试，使用自动痛觉分析仪(购自加州大学圣地亚哥分校 的化aki实验室）。在测试前30分钟，将金属带放置在每个小鼠的左后爪周围。在30分钟适应 期后，将20iU的5%福尔马林皮下注入左后爪的背侧面中。将小鼠单独圈养在圆筒形腔室中 持续45分钟。计算机记录通过电磁场的每分钟退缩数、第I阶段的总退缩数(急性期二前8分 钟）和第II阶段的总退缩数（强直期=20-40分钟之间的时间）。参见化ksh化，Ozaki G， McCumber D,Rathbun M,Svensson C,Ma化mus S,化ksh MC.用于福尔马林疼痛生物测定法 的自动退缩检测系统（An automated flinch detecting system for use in the