formalin nociceptive bioassay).J Appl F*hysiol.2001;90:2386-402。
[0141] 如图I中所示，使用纯合(-/-)雌性小鼠（n=16)、野生型雌性(n = 15)、纯合(-/-) 雄性小鼠（n = 9)和野生型雄性(n= 18)来获得第1阶段和第2阶段数据。在所有组中和在两 个阶段中，AAKl纯合(-/-)小鼠相比于其野生型(+/+)同窝小鼠表现出显著更少的所记录到 的爪退缩。
[0142] 4-川比挫并[1，5-曰]喀晚-5-基)-5,6-二氨化晚-1(2扣-甲酸叔下醋的合成5.6.2.
[0144]将5-氯化挫并[1，5-a]喀晚（307mg，2mmol)溶于4ml DME和2ml水中。添加4-(4，4， 5,5-四甲基-1,3,2-二氧棚戊环-2-基）-5,6-二氨化晚-U 2H)-甲酸叔下醋（650mg， 2.2mmol)、碳酸钢（421mg，4mmol)和Pd(dppf )Cl2:DCM( 164mg，0.2mmol)并且在微波中在密 封管中在150°C下揽拌反应15分钟。将反应混合物冷却并经由娃藻±过滤，用乙酸乙醋洗涂 并浓缩。从制备型HPLC获得纯产物。Ih NMR(400MHz,甲醇-(U)Sppm 1.52(s，9H)2.71-2.76 (m，2H)3.66(t，J = 5.68Hz，2H)4.20(br.s.，2H)6.63(d, J = 2.27Hz，lH)6.82(br.s.，1H) 7.28(d，J = 7.58Hz，lH)8.10(d，J = 2.27Hz，lH)8.75(d J = 7.58Hz，lH)<3LRMS(ESI)m/z 301.0[ (M+H) ] +，关于 Ci6 出 qN4〇2 的计算值:300.4。
[0145] 4-(3-(2-甲氧基化晚-3-基川比挫并[I，5-a]喀晚-5-基)-5,6-二氨化晚甲 酸异丙醋的合成5.6.3.
[0147] 部分A.5-(l，2,3,6-四氨化晚-4-基川比挫并[l，5-a]喀晚
[0149] 向4-"比挫并[l，5-a]喀晚-5-基）-5,6-二氨化晚甲酸叔下醋（2.4g， 8mmol)于Me0H(30ml)中的溶液添加乙酷氯巧.7ml)。将所得混合物在室溫下揽拌过夜。浓缩 混合物，得到标题化合物（1.9g)。分析样品W甲酸盐形式从制备型HPLC获得。Ih NMR (400MHz，甲醇-d4)Sppm3.00(ddt，J = 6.06,4.04,2.02,2.02Hz，2H)3.48(t，J = 6.19Hz，2H) 3.95-3.98(m，2H)6.68(d，J = 2.27Hz，lH)6.88(dt，J = 3.54，1.77Hz，lH)7.34(d，J = 7.58Hz，lH)8.15(d，J = 2.27Hz，lH)8.53(br.s.，0.5H)8.84(d，J = 7.58Hz，lHKLRMS(ESI) m/z 201.0[ (M+H) ] +，关于。化2抓的计算值:200.25。
[0150] 部分B.4-(化挫并[l，5-a]喀晚-5-基)-5,6-二氨化晚-1(2H)-甲酸异丙醋
[01对将5-(1,2,3,6-四氨11比晚-4-基川比挫并[1,5-曰]喀晚（1.9邑，81]皿〇1)、氯甲酸异丙醋 (謹于甲苯中，9.61111，9.61]11]1〇1)和164(3.21111，241]皿〇1)于00\1(5〇1111)中的混合物在室溫下揽 拌过夜。将混合物用水洗涂，干燥并浓缩。对残余物进行ISC0,得到氨基甲酸异丙醋（1.3g)。 [。巧引部分C. 4-(3-(2-甲氧基化晚-3-基）化挫并[l，5-a]喀晚-5-基)-5,6-二氨化晚-1 (2H)-甲酸异丙醋
[01W]将4-"比挫并[l，5-a]喀晚-5-基）-5,6-二氨化晚甲酸异丙醋（1.2g， 4.2mmol)和化2(0.32ml，6.3mmol)于AcOH(20ml)中的混合物在室溫下揽拌2小时。浓缩混合 物，得到2.5g栋色油状物。
[0156] 将上述栋色油状物、（2-甲氧基化晚-3-基）棚酸（85Img，5mmol)、碳酸钢（1.33g， 12.6mmol)和 Pd(dppf)Cl2:DCM(343mg，0.42mmol)于 DME(20ml)和水（IOml)中的混合物在 90 °C下揽拌过夜。将反应物冷却，过滤并浓缩。对残余物进行ISC0,然后进行制备型HPLC，得到 标题化合物。Ih NMR(400MHz，甲醇-(U)Sppm 1.32(d，J = 6.32Hz，6H)2.81(br.s.，2H)3.73 (t，J = 5.56Hz，2H)4.10(s，3H)4.26(br.s.，2H)4.96(m，lH)6.90(br.s.，lH)7.08(dd，J = 7.58,5.05Hz，lH)7.：M(d，J = 7.5Wz，lH)8.04(dd，J = 5.05，1.77Hz，lH)8.71(s，lH)8.76 (d，J = 7.5細z，lH)8.95(dd，J = 7.58，1.77Hz，lH)。LRMS(ESI)m/z 394.1[(M+H)] +，关于 C21 出 3N5O3 的计算值:393.45。
[0157] 4-(3-(2-甲氧基化晚-3-基）化挫并[I，5-a]喀晚-5-基）赃晚-I-甲酸异丙醋的合 成5.6.4.
[0159] 在MeOH中用5%Pd/C对4-(3-(2-甲氧基化晚-3-基川比挫并[l，5-a]喀晚-5-基)-5， 6-二氨化晚-1 (2H)-甲酸异丙醋进行氨化，得到标题化合物。Ih NMR(400MHz，甲醇-cU) Sppm 1.30(d，J=6.32Hz，6H)1.76-1.87(m,2H)2.05-2.08(m,2H)2.97-3.14(m，3H)4.09(s，3H) 4.27-4.31(m，2H)4.92(m，lH)7.04(d，J = 7.07Hz，lH)7.08(dd，J = 7.58，1.77Hz，lH)8.04 (dd J = 4.93,1.89Hz, lH)8.74(s,lH)8.82(dJ = 7.07Hz, lH)8.96(ddJ = 7.58,1.77Hz, IH) oLRMS化SI)m/z 396.1 [ (M+H) ] +，关于C21 出曲5〇3的计算值：395.46。
[0160] (5-(2-异丙氧基化晚-4-基川比挫并[I，5-a]喀晚-3-基）甲醇的合成5.6.5.
[0162] 将(5-氯化挫并[l，5-a]喀晚-3-基）甲醇(600mg，3.9mmol)溶于3ml乙腊和1.5ml水 中。添加2-异丙氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧棚戊环-2-基川比晚（Ig,3.9mmol)、碳 酸钟（1.07g ,7. Smmol)和 PcKdppf )Cl2:DCM(319mg，0.39mmol)并且在微波中在密封管中在 120°C下揽拌反应12分钟。将反应物冷却，经由娃藻±过滤并在真空中缩减体积。在 化imadzu中性相制备型仪器上纯化反应物，冻干，获得96mg产物。Ih Mffi(DMS0-d6)S : 9.21 (d，J = 7.3Hz，lH)，8.33(d，J = 5.細z，lH)，8.27(s，lH)，7.74(dd，J = 5.4，1.4Hz，lH)，7.71 (d，J = 7.3Hz，lH)，7.54(d，J = 0.8Hz，lH)，5.28-5.40(m，lH)，5.03(s，lH)，4.75(d，J = 5.3Hz，2H)，1.34(d，J = 6. IHz，6H) eLRMS化SI )m/z 285[ (M+H) ] +，关于Cl出 16N4O2的计算值： 284.32。
[01创 （3-(3-(2-甲氧基化晚-3-基)邮挫并[l，5-a]喀晚-5-基俩基）（甲基)氨基甲酸异 丙醋的合成5.6.6.
[01化]部分A.締丙基（甲基)氨基甲酸异丙醋
[0167] 向含213mg ( 3 . OOmmo 1)的N-甲基丙-2-締-1-胺的 20mL EtOAc 中添加3.6mL (3.6mmol)的氯甲酸异丙醋（IM甲苯溶液），接着添加0.83血(6.OOmmol)的S乙胺。将运种混 合物在室溫下揽拌1小时。将其用化OAc稀释，用5mL水泽灭，用盐水洗涂，经MgS化干燥，在旋 转蒸发仪上浓缩，并且在未经进一步纯化的情况下向前进行用于下一步骤。产率假定为理 论值。
[0168] 部分B.甲基(3-(化挫并[l，5-a]喀晚-5-基)丙基)氨基甲酸异丙醋
[0170] 向在0°C下溶解在IOmL THF中的3mmol締丙基（甲基)氨基甲酸异丙醋中添加7.SmL (3.9mmo 1)9-BBN(0.5M THF溶液），和所得混合物。将溫度在0°C下维持0.25小时，然后加热 至60°C持续2.5小时。向其中添加554mg(3.6mmol)的5-氯化挫并[1，5-a]喀晚、828mg (6. OOmmo 1)的K2CO3、346mg(0.3mmo 1)Pd (PPh3)4、20mL THF、4mL水和 ImL DMF。将所得混合物 回流(65°C)过夜。将其冷却至室溫，用化OAc稀释，用盐水洗涂，经MgS化干燥，在旋转蒸发仪 上浓缩并在ISCO上纯化，获得483mg所需产物(经两个步骤的产率为58%)。4 NMR(400MHz， 氯仿-d)S 卵m 1.23(d，J = 6.06Hz，6H)2.05(quin，J = 7.26Hz，2H)2.81-2.99(m，5H)3.39 (br.s.，2H)4.91(dt，J=12.06,5.97Hz，lH)6.59(d，J = 1.77Hz，lH)6.72(br.s.，1H)8.09 (d，J = 2.27Hz，lH)8.57(d，J = 7.33Hz，lHKLRMS(ESI)m/z 277[(M+H)]%关于Cl祖20N4O2的 计算值:276。
[0171] 部分C. (3-(3-漠化挫并[l，5-a]喀晚-5-基)丙基）（甲基)氨基甲酸异丙醋
[0173] 向室溫下溶解于IOmL AcOH中的276mg(l.〇〇mmol)的甲基（3-(化挫并[l，5-a]喀 晚-5-基)丙基)氨基甲酸异丙醋中添加77化(1.50mmol)的漠，并且在室溫下揽拌所得溶剂。 在0.25小时后，LCMS指示反应已完成。将其在旋转蒸发仪上浓缩至干燥，然后用化OAc稀释。 然后将此用化2〇)3水溶液洗涂，经MgS〇4干燥，并在旋转蒸发仪上再次浓缩。将粗混合物在用 20-100%化OAc/己烧洗脱的ISCO上纯化，获得241mg(68% )的所需产物。LRMS化SI)m/z 355 [(M+H) ] +，（双重峰在357)，关于C14H1沁rN4〇2的计算值:354。
[0174] 部分0.(3-(3-(2-甲氧基化晚-3-基)邮挫并[l，5-a]喀晚-5-基俩基）（甲基)氨基 甲酸异丙醋
[01M]向可微波小瓶中的100mg(0.28mmol)的（3-(3-漠[I比挫并[1,5-a]喀晚-5-基)丙基） (甲基）氨基甲酸异丙醋添加86mg(0.563mmol)的（2-甲氧基化晚-3-基）棚酸，接着添加 178mg (0.84mmo 1)的K3PO4、32mg (0.03mmo 1)的Pd (PI%3 )4、3血的MeCN和 1.5mL 水。然后将其在 140°C下微波O . 5小时。将其用EtOAc稀释，用盐水洗涂，经MgS〇4干燥，浓缩并在制备型HPLC 上纯化，获得所需产物。Ih 匪R(400MHz，氯仿-d)S邮m 1.24(br.s.，6H)2.12(quin，J = 7.14Hz，2H)2.92(t，J = 7.45Hz，5H)3.43(t，J = 6.82Hz，2H)4.12(s，3H)4.86-5.00(m，lH) 6.76(br.s.，lH)7.04(dd，J = 7.45,4.93Hz，lH)8.10(dd，J = 4.93，1.89Hz，lH)8.60(d，J = 7.07Hz，lH)8.79(s，lH)8.88(d，J = 7.07Hz，lHKLRMS(ESI)m/z 384[(M+H)r，关于 C20出5N503的计算值:383。
[0177] 4-(3-漠化挫并[I，5-a]喀晚-5-基)-1-异戊基化晚-2(IH)-酬的合成5.6.7.
[0179] 部分A. 4-漠-1-异戊基化晚-2( IH)-酬
[0181 ] 将4-漠-2-?基化晚(600mg，3.4mmol)在氮气下溶于无水DMF中。添加60 %氨化钢 的油溶液（165mg，4. Immol)并揽拌30分钟。添加漠化裡(598mg，6.Smmol)并揽拌1小时。添加 1 -漠-3-甲基下烧(870化，6. Smmo 1)并揽拌过夜。在真空中缩减反应物并溶于DCM中。将其用 水、IN化OH洗涂，然后经硫酸儀干燥，过滤并在真空中缩减体积，获得840mg粗产物，其原样 用于下一步骤中。LRMS化SI)m/z 245[(M+H)] +，关于Cl地14化NO的计算值:244.13。
[01剧部分B.(l-异戊基-2-氧代基-1,2-二氨化晚-4-基)棚酸
[0184] 将4-漠-1-异戊基化晚酬(840mg，3.4mmol)在氮气下溶于IOmL无水DMF中。 添加双(频哪醇）二棚烧（1.3g，5. Immol)、乙酸钟（1.01邑，10.21111]1〇1)和？(1(化口;〇(：12二氯甲 烧(281111肖，0.34111111〇1)，将反应物加热至85°(3并揽拌过夜。将反应物冷却至室溫并利用0〔1经 娃藻±过滤。将其在真空中缩减体积，溶于IN化OH中并用DCM洗涂。然后用IN肥1使水性层 呈酸性并用DCM萃取。DCM层经硫酸儀干燥，过滤并在真空中缩减体积，得到600mg粗物质，其 用于下一步骤中。〇?15化51)111八210[(1+扣]+，关于打地168側3的计算值:209.05。
[01化]部分(：.1-异戊基-4-川比挫并[1，5-3]喀晚-5-基川比晚-2(1扣-酬
[0187] 将6-氯-咪挫并[1，2-b]化嗦(400mg，2.6mmol)溶于20血乙腊和IOmL水中。添加（1- 异戊基-2-氧代基-1,2-二氨R比晚-4-基)棚酸(654mg，3. Immo 1)、碳酸钟(72Img，5.2mmo 1)和 Pd(化时)Cl2二氯甲烧（19711^，0.26111111〇1)并且将反应混合物在85°(3下揽拌2小时。冷却至室 溫，利用DCM经由娃藻±柱塞过滤并在真空中缩减体积。然后，使用DCM通过二氧化娃柱塞， 在真空中干燥，得到646mg粗产物，其原样进行下一步骤。Ih ^R(400MHz，DMS0-d6)S9.19-9.26(m，lH)，8.30(d，J = 2.27Hz，lH)，7.85(d，J = 7.07Hz，lH)，7.67(d J = 7.58Hz，lH), 7.20(d，J = 2.02Hz，lH)，7.01(dd，J = 2.02,7.07Hz，lH)，6.85(dd，J = 0.63,2.40Hz，lH)， 3.91-3.99(m，2H),1.48-1.65(m,3H)，0.94(d，J=6.32Hz，6H)eLRMS(ESI)m/z 283[(M+H) ]+，关于Cl曲sN4〇的计算值:282.35。
[01则部分0.4-(3-漠化挫并[l，5-a]喀晚-5-基)-1-异戊基化晚酬
[0190] 将1-异戊基-4-(化挫并[l，5-a]喀晚-5-基川比晚酬(646mg，2.3mmol)溶于 乙腊中。添加N-漠代班巧酷亚胺(400mg，2.3mmol)并将反应物揽拌4小时。然后在真空中汽 提反应物并且将其溶于乙酸乙醋中并用水、IN NaOH、盐水和水洗涂。有机层经硫酸儀干燥， 过滤并在真空中缩减体积，获得653mg粗产物，其用于进一步的反应中。Ih匪R(400M化， DMS0-d6)d 9.28(d，J = 7.33Hz，lH)，8.46(s，lH)，7.88(d J = 7.33Hz，lH)，7.77(d，J = 7.5細z，lH)，7.25(dJ = 2.02Hz，lH)，7.03(ddJ=1.89,7.20Hz，lH)，3.93-3.99(m，2H)， 1.53-1.63(m，3H)，0.94(d，J = 6.32Hz，6H)DLRMS(ESI)m/z 361/363[(M+H)r，关于 Cl姐1巧城40的计算值：361.24。
[0191] 1-异戊基-4-(3-(2-甲氧基化晚-3-基川比挫并[l，5-a]喀晚-5-基川比晚酬 的合成5.6.8.
[0193] 将4-(3-漠化挫并[l，5-a]喀晚-5-基）-1-异戊基化晚-2(lH)-酬（150mg， 0 41 mmol)、2_甲氧基II比晚-3-棚酸（127mg，0.82mmol)、碳酸钟（172mg，1.23mmol)、Pd(0Ac)2 (2mg，0.0082mmo I)和X-I^o S (8mg，0.0164mmo I)在密封管中溶于2mL二Si烧和I血水中并在 85°C下加热2小时。然后将反应物冷却至室溫，利用乙腊和DCM经由娃藻±柱塞过滤，在真空 中缩减体积。在化imadzu中性相制备型仪器上纯化，冻干，得到56mg产物。Ir NMR(400MHz , DMS0-d6)d 9.31(d，J = 7.58Hz，lH)，8.88(dd，J=1.77,7.5細z，lH)，8.83(s，lH)，8.13(dd， J=1.77,4.80Hz，lH)，7.89(d, J = 7.07Hz，1H) ,7.78( d, J = 7.33Hz，1H) ,7.27 (d, J = 1.77Hz，lH)，7.20(dd，J = 4.80,7.58Hz，lH)，7.07(dd，J = 2.02,7.07Hz，lH)，4.04(s，3H)， 3.97(t J = 7.20Hz，2H) ,1.58(tJ = 6.44Hz，3H)，0.95(d,J = 6.32Hz,細）eLRMS(ESI)m/z 390[ (M+H) ] +，关于 C22 出 3N5O2 的计算值:389.46。
[0194] 5-(2-异丙氧基化晚-4-基)-3-(2-甲氧基化晚-3-基）化挫并[l，5-a]喀晚的合成 5.6.9.
[01 %] 部分A. 5-(2-异丙氧基化晚-4-基川比挫并[l，5-a]喀晚
[019引将5-氯[I比挫并[1