CRIg拮抗剂的制作方法

专利名称：：CRIg拮抗剂的制作方法CRIg拮抗剂发明领域本发明关注特异性结合最近发现的巨噬细胞特异性受体CRIg的阻断性抗体，及其预防细胞内病原体(诸如病毒、细菌或寄生虫)进入细胞以及预防不想要的红细胞和血小板清除的用途。
背景技术：
：补体系统补体系统是由正常情况下以无活性的酶原形式存在的一系列血清糖蛋白构成的复杂酶级联。两种主要途径，即经典途径和旁路途径，能活化补体，它们在C3水平合并，其中两种类似的C3转化酶将C3切割成C3a和C3b。巨噬细胞是已经发展出如下先天能力的专门细胞，即识别细胞表面表达的鉴定标签的结构中的微小差异，所述的鉴定标签即所谓的分子样式(Taylor等，EurJImmunol33，2090-2097(2003);Taylor等，AnnuRevImmunol23，901-944(2005))。虽然这些表面结构的直接识别是先天免疫的一个基础方面，但是调理作用容许通用巨噬细胞受体介导吞食，提高效率和使吞噬细胞的识别全集多样化(Stuart和Ezekowitz，Immunity22,539-550(2005))。吞食过程涉及多种配体-受体相互作用，而且现在清楚了多种调理素(包括免疫球蛋白、胶原凝集素、和补体成分)经由与巨噬细胞表面受体的相互作用来引导病原体内在化所需要的细胞活性(综述见Aderem和Underhill，AnnuRevImmunol17,593-623(1999);Underhill和Ozinsky,AnnuRevImmunol20,825-852(2002》。虽然由种系基因编码的天然免疫球蛋白能识别极其多种病原体，但是大多数调理性IgG是经由适应性免疫生成的，而且因此经由Fc受体的高效清除不是立即的(Carroll,NatImmunol5,981-986(2004))。另一方面，补体快速识别病原体表面分子并使微粒准备好由补体受体来摄取(Brown,InfectAgentsDis1,63-70(1991))。补体由30种以上的血清蛋白质组成，它们调理极其多种病原体，用以被补体受体所识别。取决于级联的初始触发，可区别三种途径(综述见Walport，N4EnglJMed344,1058-1066(2001))。所有这三种途径共享活化中枢成分C3的共同步骤，但是它们依据识别的本质和导致C3活化的初始生化步骤而不同。经典途径如下活化，抗体结合至病原体表面，其继而结合Clq补体成分，引起一系列蛋白酶级联，最终将C3切割成其活性形式C3b。凝集素途径在碳水化合物基序受到凝集素蛋白质识别后被活化。至今，已经鉴定了此途径的三个成员结合甘露糖的凝集素(MBL)，SIGN-Rl凝集素家族和ficolin(Pyz等，AnnMed38，242-251(2006))。MBL和ficolin都与丝氨酸蛋白酶有关，其像经典途径中的C1那样起作用，活化成分C2和C4，导致中枢C3步骤。旁路条件与经典条件和凝集素途径二者形成对照，即它是由于内部C3酯与病原体表面上的识别基序的直接反应而被活化的。经由旁路途径蛋白酶因子B和因子D的作用，初始C3结合活化性表面导致C3b沉积的快速扩大。重要的是，经由因子B和D的作用，通过经典途径或凝集素途径任一所沉积的C3b也能导致C3b沉积的扩大。在补体活化的所有三种途径中，调理中的关键步骤是成分C3转化成C3b。补体级联的酶对C3的切割将硫酯暴露于亲核攻击，容许C3b经由硫酯结构域共价附着到抗原表面上。这是补体调理中的初始步骤。对所结合的C3b的后续蛋白水解生成iC3b、C3c和C3dg,即受到不同受体识别的片段(Ross和Medof,AdvImmunol37，217-267(1985))。此切割消除了C3b进一步扩大C3b沉积和活化补体级联晚期成分(包括能够指导膜破坏的膜攻击复合物)的能力。然而，巨噬细胞的吞噬细胞受体优先识别C3b及其片段；由于酯键形成的通用性，C3介导的调理对于病原体识别是重要的(Holers等，ImmunolToday13,231-236(1992))，而且各种C3降解产物的受体因此在宿主免疫应答中发挥重要作用。C3自身是由13个独特结构域组成的复杂的且有柔性的蛋白质。该分子的核心由8个所谓的巨球蛋白(MG)结构域构成，它们构成了C3的紧密压缩的cc和(3链。插入此结构的是CUB(Clr/Cls、Uegf和骨形态生成蛋白-l)和TED结构域，后者含有容许C3b与病原体表面共价结合的硫酯键。剩余结构域含有C3a，或者作为核心结构域的接头和间隔物起作用。C3b和C3c结构与C3的比较证明了该分子在每次蛋白水解时经历重大构象重排，不仅暴露TED，而且暴露了该分子的能与细胞受体相互作用的别的新的表面(Janssen和Gros，MolImmunol44,3-10(2007》。吞噬细胞上的补体C3受体有三个已知的补体受体基因超家族短共有重复(SCR)模块(其编码CR1和CR2)，P-2整联蛋白家族成员CR3和CR4，及免疫球蛋白Ig超家族成员CRIg。CR1是由30个短共有重复(SCR)组成的180-210kDa糖蛋白，在免疫复合物清除中发挥主要作用。SCR是约60个氨基酸的模块结构，每个有两对二硫键，提供结构刚性。对C3b和C4b二者的高亲和力结合经由两个独特位点发生，每个由3个SCR构成(综述见Krych-Goldberg和Atkinson,ImmunolRev180,112-122(2001》。CR1的SCR15-17内所包含的C3b结合位点(位点2)的结构已经通过MRI测定(Smith等，Cell108,769-780(2002))，揭示了三个模块处于延伸的头对尾排列中，在16-17连接处有柔性。结构指导的诱变鉴定了模块15上对C4b结合至关重要的一个带正电荷的表面区域。此片与CR1同一面上暴露的模块16的碱性侧链一起是C3b结合所需要的。CR1的主要功能，首先描述为免疫粘附受体(Rothman等，JImmunol115,1312-1315(1975)),用以捕捉红细胞上的IC，供转运和肝的清除(Taylor等，ClinImmunolImmunopathol82,49-59(1997))。嗜中性细胞上的CR1在吞噬中有作用，但是在组织巨噬细胞中不然(Sengelov等，JImmunol153，804-810(1994))。在其在免疫复合物清除中的作用之外，经由其与相应转化酶的相互作用，CRl是经典途径和旁路途径二者活化的有力抑制剂(Krych-Goldberg和Atkinson,2001,见上文；Krych-Goldberg等，JBiolChem274，31160-31168(1999))。在小鼠中，CRl和CR2是同一基因通过可变剪接形成的两种产物，主要与B淋巴细胞和滤泡树突细胞有关，且主要在调节B细胞应答中发挥功能(Molina等，1996)。CRl的小鼠功能等效物Crry灭活经典途径和旁路途径酶，并作为补体活化的内在调控物起作用，而不是作为吞噬细胞受体起作用(Molina等，ProcNatlAcadSciUSA93，3357-3361(1992))。CR2(CD21)结合iC3b和C3dg,而且是增强B细胞免疫的主要补体受体(Carroll,NatImmunol5,981-986(2004);Weis等,ProcNatlAcadSciUSA81,881-885(1984))。关联B细胞对C3d包被的抗原的摄取经由B细胞抗原受体导致增强的信号。如此，CD21-CD19-CD81共同受体与B细胞抗原受体的共参与降低了B细胞活化的阈值并提供了重要的存活信号(Matsumoto等，JExpMed173,55-64(1991))。iC3b上的CR2结合位点已经部分定位在介于TED和MGl结构域之间的界面上(Clemenza和Isenman,JImmunol165，3839-3848(2000》。CR3和CR4是由a亚基(分別为CDllb或c(m和CD11c或cxx)和共同(3链(CD18或P2)构成的跨膜异二聚体，而且涉及对胞外基质和对其它细胞的粘附以及iC3b识别。它们属于整联蛋白家族，而且不仅在吞噬中，而且在白细胞运输、突触形成和共刺激中实施功能(综述见Ross,AdvImmunol37,217-267(2000))。整联蛋白粘性经由称作内向外信号传导的过程来调控，将整联蛋白自低亲和力结合状态转化成高亲和力结合状态(Liddington和Ginsberg,JCellBiol158,833-839(2002))。另夕卜，配体结合将信号自胞外结构域转导至胞质。iC3b的结合位点已经定位至CR3和CR4的cx链上的数个结构域(Diamond等，JCellBiol120,1031-1043(1993);Li和Zhang，JBiolChem278:34395—34402(2003);Xiong和Zhang,JBiolChem278,34395-34402(2001))。CR3的多种配体(iC3b、(3-葡聚糖和ICAM-l)似乎结合CDllb的I结构域内所包含的部分交叠位点(Balsam等，1998;Diamond等，1990;Zhang和Plow,1996)。基于将CR3结合位点定位至在C3b中CUB结构域解折叠后变成暴露的残基的结构研究，预测了它对蛋白水解灭活形式的C3b(即iC3b)的特异性识别(Nishida等，ProcNatlAcadSciUSA103,19737-19742(2006》，这发生在补体调控蛋白酶因子I的a，链切割后。CRIg是一种新的巨噬细胞相关受体，与A33抗原和JAM1有同源性。人CRIg蛋白是使用识别人JAM1的保守Ig结构域的简并引物首先自人胎cDNA文库克隆的。对数个克隆的测序揭示了400个氨基酸的可读框。Blast搜索证实了与l型跨膜蛋白Z39Ig的相似性(Langnaese等，BiochimBi叩hysActa1492(2000)522-525)。发现此分子的胞外区有两个Ig样结构域组成，包含N端V-set结构域和C端C2-set结构域。这种新的人蛋白质最初称作"单次跨膜Ig超家族成员巨噬细胞相关的"(huSTIgMA)。(huSTIgMA)。随后，使用3，和5，引物，克隆了huSTIgMA的一种剪接变体，它缺少最接近膜的IgC结构域，而且短50个氨基酸。因而，这种人蛋白质的较短剪接变体称作huSTIgMA-短。huSTIgMA(称作PR0362)的氨基酸序列和编码多核苷酸序列^皮露于2002年6月25日授权的美国专利No.6,410,708。另外，huSTIgMA和huSTIgMA-短二者以及鼠STIgMA(muSTIgMA)蛋白质和核酸序列披露于2004年4月15日公布的PCT公开文本WO2004031105。驻留在肝血窦的内腔内的Kupffer细胞(KC)形成身体中最大群的巨噬细胞。虽然KC具有与其它组织驻留的巨噬细胞共同的标志物，但是它们实施专门化的功能，连接通向有效清除自消化道的微血管系统排出的门静脉血中存在的、肠衍生的细菌、微生物碎片、细菌内毒素、免疫复合物和死细胞(Bilzer等，LiverInt26，1175-1186(2006))。病原体对KC表面的有效结合是针对病原体的一线免疫防御中的一个至关重要的步骤(Benacerraf等，JExpMed110，27-48(1959))。消减了KC的小鼠中显著升高的死亡率证明了KC在自循环中快速清除病原体方面的重要作用(Hirakata等，InfectImmun59，289-294(1991))。CRIg的鉴定进一步强调补体和KC在针对循环中的病原体的一线免疫防御中的重要作用。在小鼠KC上鉴定的唯一补体C3受体是CRIg和CR3(Helmy等，Cell124,915-927(2006)),而人KC显示额外的CRl和CR4表达(Hinglais等，1989)。在体外，KC上的CRIg和CR3都有助于对iC3b调理的微粒的结合(Helmy等，LabInvest61,509-514(2006))。在体内，KC表达的CR3在结合iC3b包被的病原体中的作用不太清楚。已经提出，CR3有助于经嗜中性细胞募集和与嗜中性细胞表达的ICAM1的相互作用而间接清除病原体(Conlan和North,ExpMed179，259-268(1994);Ebe等,PatholInt49，519-532(1999);Gregory等，JImmunol157,2514-2520(1996);Gregory和Wing,JLeukocBiol72,239-248(2002);Rogers和Unanue,InfectImmun61,5090-5096(1993》。相反，CRIg通过捕捉穿过肝血窦内腔的病原体而实施直接作用(Helmy等，2006，见上文)。CRIg与CR3在结合特征中的差异部分反映了这两种受体在生物学中的差异。在KC上表达的CRIg组成性地结合单体C3片段，而CR3只结合iC3b调理的微粒(Helmy等，2006,见上文)。CRIg有效捕捉单体C3b和iC3b以及C3b/iC3b包被的微粒的能力反映了通过在巨噬细胞的膜延伸的尖端处集中的CRIg分子(Hdmy等，2006，见上文)与病原体表面上存在的C3b和iC3b多聚体之间的多价相互作用而创建的升高的亲合力。虽然CR3只结合iC3b包被的微粒，但是CRIg另外结合C3b,即在血清调理的病原体上形成的第一C3切割产物(Croize等，InfectImmun61，5134-5139(1993))。既然结合至病原体表面的大量C3b分子受到保护免于因子H和I的切割(Gordon等，JInfectDis157，697-704(1988))，那么CRIg对C3b配体的识别确保了快速结合和清除。如此，虽然CRIg和CR3都在KC上表达，但是它们显示不同的配体特异性、独特的结合特性和利用细胞表面受体来实现细胞进入的病原体的例子是病毒，像人免疫缺陷病毒(HIV),和细胞内细菌，像结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosum)、麻风分枝杆菌(Mycobacteriumleprae)、々支结核耶尔森氏菌(Yersiniapseudotuberculosis)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)和单核细胞增生利斯特氏菌(ListeriaMonocytogenes),及寄生虫，l象类前气门(prostigmatoid)硕大利什曼原虫(Leishmaniamajor)(Cossart和Sansonetti，Science304:242-248(2004);Galan,Cell103:363-366(2000);Hornef等，Nat.Immunol.3:1033-1040(2002);Stoiber等，Mol.Immunol.42:153-160(2005))。虽然补体系统设计用于杀死病原体和加速吞噬，但是它也通过至今未知的补体受体介导病原体的细胞进入。认为CRIg充当介导细胞内病原体的补体依赖性细胞进入的受体之发明概述本发明关注阻断C3调理的病原体结合细胞表面的抗CRIg抗体，及其预防此类病原体的细胞进入和/或阻断此类病原体的存活的用途。在一个方面，本发明关注CRIg拮抗剂，其阻断天然序列CRIg多肽结合C3b和/或iC3b,并抑制CRIg介导的、细胞内病原体的补体依赖性细胞进入或自循环清除细胞内病原体。在一个实施方案中，所述拮抗剂是抗CRIg抗体或其片段，其中所述抗体片段可以例如选自下组Fab,Fab，，F(ab，)2，scFv,(scFv)2，dAb，互补决定区(CDR)片段，线性抗体，单链抗体分子，微抗体(minibodies)，双抗体(diabodies),和自抗体片^a形成的多特异性抗体。在另一个实施方案中，所述CRIg拮抗剂是本质上(基本上)与选自下组的抗CRIg抗体结合相同表位的单克隆抗体或其片段14G8(ATCC保藏号PTA-8298),3D10(ATCC保藏号PTA-8299)和2H1(ATCC保藏号PTA-8300)。在又一个实施方案中，所述CRIg拮抗剂是选自下组的单克隆抗CRIg抗体或其片段14G8(ATCC保藏号PTA-8298)，3D10(ATCC保藏号PTA-8299)和2H1(ATCC保藏号PTA-8300)。在所有实施方案中，所述抗体或抗体片段可以是嵌合的、人源化的或人的。9在所有实施方案中，所述细胞内病原体可以选自下组病毒，寄生虫，细菌，真菌和朊病毒。在另一个方面，本发明关注编码本文中的阻断性抗CRIg抗体的核酸或其片段。在一个不同的方面，本发明关注包含与载体混和的CRIg拮抗剂的组合物。在又一个方面，本发明关注用于抑制CRIg介导的、细胞内病原体的补体依赖性细胞进入的方法，包括对有所需要的哺乳动物受试者施用有效量的CRIg拮抗剂。在又一个方面，本发明关注用于自哺乳动物受试者的循环清除细胞内病原体的方法，包括对所述受试者施用有效量的CRIg拮抗剂。在另一个方面，本发明关注用于预防或治疗传染病的方法，包括对有所需要的哺乳动物受试者施用有效量的CRIg拮抗剂。在所有方面，所述哺乳动物受试者优选是人，而且所述CRIg拮抗剂优选是阻断性抗CRIg抗体。在又一个方面，本发明关注试剂盒，其包含CRIg拮抗剂和关于施用所述CRIg拮抗剂以治疗传染病的说明。附图简述图1A-1B显示了399个氨基酸的全长形式的天然人CRIg(huCRIg)的核苦酸和氨基酸序列(分别是SEQIDNO:l和2)。图2A-2B显示了305个氨基酸的短形式的天然人CRIg(huCRIg-短)的核苷酸和氨基酸序列(分别是SEQIDNO:3和4)。图3A-3C显示了280个氨基酸的天然鼠CRIg(muCRIg)的核苦酸和氨基酸序列(分别是SEQIDNO:5和6)。图4和5显示了杂交瘤上清液的表征，关于其阻断muCRIg-iC3b/C3b或huCRIg-iC3b/C3b结合的能力。图6。抗CRIg抗体2Hl和14G8阻断iC3b结合表达鼠CRIg的CHO细胞。图7。抗CRIg抗体2Hl阻断iC3b结合CRIg+腹膜巨噬细胞.图8。在体外抗CRIg阻断性抗体2Hl抑制单核细胞增生斯特氏菌结合CRIg+腹膜巨噬细胞。图9。CRIg抗体14G8抑制自循环清除单核细胞增生利斯特氏菌。图10。抗CRIg抗体14G8抑制自循环清除金黄色葡萄球菌菌抹M,导致肝中细菌载荷降低及心、脾和肾中细菌载荷升高。图11A和B。抗CRIg抗体14G8在抗原诱导的关节炎(AIA)中的作用。图12。抗CRIg抗体3D10对表达CRIg的细胞的结合。图13。抗CRIg抗体3D10阻断iC3b结合表达人和鼠CRIg的细胞。表1提供了抗CRIg抗体3D10、2H1和14G8的特征的汇总。发明详述I.定义术语"CRIg"、"PR0362"、"JAM4"、和"STIgMA，，可互换使用，指天然序列和变体CRIg多肽。"天然序列"CRIg指与从自然界衍生的CRIg多肽具有相同氨基酸序列的多肽，不管其制剂形式。如此，天然序列CRIg可以从自然界分离，或者可以通过重组和/或合成手段生成。术语"天然序列CRIg"明确涵盖天然存在的截短或分泌形式的CRIg(例如胞外结构域序列)、CRIg的天然存在的变体形式(例如可变剪接形式)和天然存在的等位变体。天然序列CRIg多肽明确包括SEQIDNO:2的全长的长399个氨基酸的人CRIg多肽(huCRIg,图1A和1B所示)，含或不含N端信号序列，含或不含第l位处的起始曱硫氨酸，及含或不含SEQIDNO:2大约第277-307位氨基酸处的任何或所有跨膜结构域。在又一个实施方案中，天然序列CRIg多肽是305个氨基酸的短形式的人CRIg(huCRIg-短(huCRIg-short),SEQIDNO:4,图2A和2B所示)，含或不含N端信号序列，含或不含第l位处的起始甲硫氨酸，及含或不含SEQIDNO:4大约第183-213位处的任何或所有跨膜结构域。在一个不同的实施方案中，天然序列CRIg多肽是SEQIDNO:6的长280个氨基酸的全长鼠CRIg多肽(muCRIg，图3A-3C所示)，含或不含N端信号序列，含或不含第l位处的起始曱硫氨酸，及含或不含SEQIDNO:6大约第181-211位氨基酸处的任何或所有跨膜结构域。其它非人动物(包括高等灵长类和哺乳类)的CRIg多肽被明确包括在此定义内。CRIg"胞外结构域"或"ECD"指CRIg多肽的基本上不含相应全长分子的跨膜和胞质结构域的一种形式。通常，CRIgECD具有少于l。/。的此类跨膜和/或胞质结构域，而且优选具有少于0.5%的此类结构域。CRIgECD可包含SEQIDNO:2，4，或6的氨基酸残基1或约21至X，其中X是SEQIDNO:2中约271至281的任何氨基酸、SEQIDNO:4中约178至186的任何氨基酸、和SEQIDNO:6中约176至184的任何氨基酸。术语"CRIg拮抗剂"以最广义使用，包括阻断天然序列CRIg多肽结合C3b和/或iC3b，且部分或完全阻断或中和(统称"抑制")天然序列CRIg多肽的定性生物学活性的任何分子。所述生物学活性优选是CRIg介导细胞内病原体的补体依赖性细胞进入和/或预防不想要的红细胞或血小板清除的能力。如此，优选的拮抗剂抑制CRIg介导的细胞内病原体的补体依赖性细胞进入。合适的CRIg拮抗剂分子明确包括但不限于阻断性抗CRIg抗体(包括抗体片段)、其它多肽(诸如本文中的天然序列CRIg多肽的变体和融合物)、肽和非肽(有机)小分子、及反义多核苷酸分子。一组优选的CRIg拮抗剂包括特异性结合天然CRIg多肽且阻断其结合C3b和/或iC3b的抗CRIg抗体，包括抗体片段。如本文中所定义的，"阻断性抗体"指阻断天然序列CRIg多肽结合C3b和/或iC3b，且部分或完全阻断或中和(统称"抑制")天然序列CRIg多肽的定性生物学活性的抗体。所述生物学活性优选是CRIg介导细胞内病原体的补体依赖性细胞进入的能力。如此，优选的阻断性抗体抑制CRIg介导的细胞内病原体的补体依赖性细胞进入和/或预防不想要的红细胞或血小板清除。"小分子"在本文中定义为具有低于约600，优选低于约1000道尔顿，诸如例如介于100与600，或100与1000道尔顿之间的分子量。术语"非肽小分子'，指在指定分子量范围中的小有机化合物。"抗体"(Ab)和"免疫球蛋白"(Ig)是具有相同结构特征的糖蛋白。虽然抗体展现出对特定抗原的结合特异性，但是免疫球蛋白包括抗体和缺乏抗原特异性的其它抗体样分子二者。后一类多肽例如由淋巴系统以低水平生成而由骨髓瘤以升高的水平生成。术语"抗体"以最广义使用，明确覆盖但不限于完整单克隆抗体、多克隆抗体、自至少两种完整抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)、及抗体片段，只要它们展现出期望的生物学活性。"天然抗体，，和"天然免疫球蛋白"指通常由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链构成的约15O，OOO道尔顿的异四聚体糖蛋白。每条轻链通过一个共价二硫键与重链连接，而二硫键的数目在不同免疫球蛋白同种型的重链间有变化。每条重链和轻链还具有间隔规律的链内二硫键。每条重链在一端具有一个可交域(Vh)，接着是多个恒定域。每条轻链在一端具有一个可变域(vo,而另一端是一个恒定域。轻链的恒定域与重链的第一恒定域排列在一起，而轻链的可变域与重链的可变域排列在一起。认为特定的氨基酸残基在轻链与重链可变域之间形成界面。术语"可变的，，指可变域中的某些部分在抗体序列间差异广泛且用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性的事实。然而，变异性并非均匀分布于抗体的整个可变域。它集中于轻链和重链可变域中称作互补决定区(CDR)或高变区的三个区段。可变域中更加高度保守的部分称作框架(FR)。天然重链和轻链的可变域各自包含四个FR，它们大多采取(3-折叠片构象，通过形成环状连接且在有些情况中形成P-折叠片结构一部分的三个CDR连接。每条链中的CDR通过FR非常接近的保持在一起，并与另一条链的CDR—起促成抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat等，A/7J7M.97-WW，巻I，页647-669(1991))。恒定域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应器功能，诸如抗体依赖性细胞的细胞毒性中抗体的参与。"抗体片段"包含完整抗体的一部分，优选完整抗体的抗原结合或可变区。抗体片段的例子包括但不限于Fab，Fab',F(ab')2，scFv,(scFv)2,dAb，和互补决定区(CDR)片段，线性抗体，单链抗体分子，微抗体，双抗体，自抗体片段形成的多特异性抗体，及一般而言至少含有免疫球蛋白的这样一部分的多肽，所述部分足以赋予多肽以特异性抗原结合。根据其恒定域的氨基酸序列，来自任何脊推动物物种的抗体(免疫球蛋白)的"轻链"可归入两种截然不同的型中的一种，称作卡帕(K)和拉姆达(入)。根据其重链恒定域的氨基酸序列，免疫球蛋白可归入不同的类。免疫球蛋白有五大类IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中有些可进一步分为亚类(同种型)，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。将与不同类的免疫球蛋白对应的重链恒定域分别称作a、S、e、y和P。不同类的免疫球蛋白的亚基结构和三维构造是众所周知的。术语"单克隆抗体，，在用于本文时指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各个抗体相同，除了可能以极小量存在的可能的天然存在突变形式外。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原性位点。此外，与典型的包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的常规(多克隆)抗体制备物不同，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。在它们的特异性以外，13单克隆抗体的优势在于它们是由杂交瘤培养物合成的，未受到其它免疫球蛋白的污染。修饰语"单克隆"指示抗体从基本上同质的抗体群获得的特征，不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，有待依照本发明使用的单克隆抗体可以通过首次由Kohler等(1975)Nature256:495记载的杂交瘤方法来制备，或者可以通过重组DNA方法来制备(参见例如美国专利No.4,816,567)。"单克隆抗体，，也可以使用例如Clackson等(1991)Nature352:624-628及Marks等(1991)J.Mol.Biol.222:581-597中记载的技术从噬菌体抗体库分离。还可参见美国专利No.5,750,373;5，571，698;5，403，484和5，223,409，i们记载了使用噬菌粒和噬菌体载体制备抗体。单克隆抗体在本文中明确包括"嵌合"抗体(免疫球蛋白)，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们展现出期望的生物学活性(美国专利No.4,816,567;Morrison等，尸rac.A^/.爿cad园81:6851-6855(1984))。非人(例如鼠)抗体的"人源化"形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段。在极大程度上，人源化抗体指人免疫球蛋白(受体抗体)中的数个或所有互补决定区(CDR)残基用具有期望特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠或家兔的CDR残基替换的免疫球蛋白。在有些情况中，人免疫球蛋白的某些Fv框架区(FR)残基也能用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体或输入CDR或框架序列中都没有找到的残基。进行这些修饰是为了进一步改进或最大化抗体的性能。一般而言，人源化抗体将包含至少一个、通常两个基本上整个如下可变域，其中所有或基本上所有CDR对应于非人免疫球蛋白的高变环，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR。最佳的是，人源化抗体还将包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节参见Jones等，A^wre321:522-525(1986);Riechmann等，AWw332:323-329(1988);和Presta,CWkOp.&rw".所o/.2:593-596(1992)。人源化抗体包括"灵长类化，，抗体，其中抗体的抗原结合区衍生自通过用感兴趣抗原免疫猕猴而生成的抗体。含有来自旧大陆猴类(OLDWORLDmonkey)的残基的抗体也在本发明内。参见例如美国专利No.5,658,570;5,693,780;5,681,722;5,750,105;和5，756，096。"单链Fv"或"sFv，，抗体片段包含抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于一条多肽链上。优选的是，Fv多肽在VH与VJ吉构域之间进一步包含多肽接头，其使得sFv能够形成结合抗原的期望结构。关于sFv的综述参见Pluckthun，于《ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies》，第113巻，Rosenburg和Moore编，Springer-Verlag,NewYork,第269-315页，1994。术语"双抗体"指具有两个抗原结合位点的小型抗体片段，该片段在同一条多肽链(VH-Vi)中包含相连的重链可变域(VH)和轻链可变域(VL)。通过使用过短的接头使得同一条链上的两个结构域之间不能配对，迫使这些结构域与另一条链的互补结构域配对，从而产生两个抗原结合位点。双抗体更完整的记载于例如EP404,097;WO93/11161;Hollinger等,腐.^c"d5W.90:6444-6448(1993)。在用于本文时，术语"免疫粘附素"指将异源蛋白质("粘附素")的结合特异性与免疫球蛋白恒定域的效应器功能联合起来的抗体样分子。在结构上，免疫粘'附素包括不同于抗体的抗原识别和结合位点(即是"异源"的)、具有期望结合特异性的氨基酸序列和免疫球蛋白恒定域序列的融合物。免疫粘附素分子的粘附素部分典型的是至少包含受体或配体的结合位点的连续氨基酸序列。免疫粘附素中的免疫球蛋白恒定域序列可以从任何免疫球蛋白获得，诸如IgG-l、IgG-2、IgG-3或IgG-4亚型，IgA(包括IgA-l和IgA-2),IgE，IgD或IgM。.术语"传染病"在本文中用于指由传染性生物体引起的任何疾病。传染性生物体可包括病毒(例如单链RNA病毒，单链DNA病毒，人免疫缺陷病毒(HIV)，甲型、乙型、和丙型肝炎病毒，单纯疱瘆病毒(HSV)，巨细胞病毒(CMV),埃巴二氏病毒(EBV),人乳头瘤病毒(HPV))、寄生虫(例如原生动物和后生动物病原体，诸如症原虫属(Plasmodia)物种，利什曼原虫属(Leishmania)净勿种例长口石贞大利fl"曼原虫(Leishmaniamajor)，血吸虫属(Schistosoma)物种，锥虫属(Trypanosoma)物种)、纟田菌(例如分枝杆菌属(Mycobacteria)特别是结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、麻风分枝杆菌(M.leprae),f支结核耶尔森氏菌(Yersiniapseudotuberculosis)，鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)，单核纟田胞增生利斯特氏菌(ListeriaMonocytogenes),链球菌(Streptococci)，大肠杆菌(E.coli)，葡萄球菌(Staphylococci))、真菌(例如假丝酵母属(Candida)物种，曲霉属(Aspergillus)物种)、卡氏肺嚢虫(Pneumocystiscarinii)、和朊病毒。"治疗"或"处理"指有意预防病症的发生或改变病症的病理而实施的干预。因而，"治疗"指治疗性处理和预防性或防范性措施二者。需要治疗的受试者包括早就患有病症的受试者以及要预防病症的受试者。如本文中所使用的，术语"预防或抑制传染病的发生"指如下情形，其中传染病的发生得到预防或传染病的发作得到延迟，或者现有感染的扩散得到逆转。如本文中所使用的，"改善"在本文中定义为使得更好或改进。如本文中所使用的，术语"哺乳动物"指归为哺乳类的任何动物，包括但不限于人，非人灵长类，家畜和牲畜，及动物园中的动物、运动用动物或宠物动物，诸如马、猪、牛、犬、猫和雪貂等。在一个优选的实施方案中，哺乳动物指高等灵长类，最优选人。II.详述CRIg多肽的拮抗剂的鉴定CRIg多肽的拮抗剂指阻断天然序列CRIg多肽结合C3b和/或iC3b，且部分或完全阻断、抑制、或中和天然序列CRIg多肽的定性生物学活性的分子。CRIg拮抗剂包括但不限于抗CRIg抗体(包括抗体片段)、多肽、肽和非肽小分子、及反义分子，而且可以通过本领域已知方法来鉴定，包括标准结合和/或功能测定法。由于它们预防细胞内病原体(诸如病毒、细菌或寄生虫)的细胞进入的能力，天然序列CRIg多肽的拮抗剂可用于传染病的预防和治疗。抗CRIg抗体可通过本领域已知方法来生成，所述方法诸如上文和实施例l中所描述的那些。有能力结合CRIg的其它分子可以在本领域公知的结合测定法中鉴定。用于拮抗剂的所有结合测定法的共同之处在于它们需要使候选拮抗剂接触CRIg多肽，其条件和时间足以使这两种組分相互作用。在结合测定法中，相互作用指结合，而且所形成的复合物可在反应混合物中分离或检测。在一个具体的实施方案中，将CRIg多肽或候选拮抗剂通过共i"介或非共价附着固定化在固相上，例如微量滴定板。非共价附着通常通过用CRIg多肽溶液包被固体表面并干燥来实现。或者，对待固定化的CRIg多肽特异性的固定化抗体例如单克隆抗体可用于将它锚定到固体表面上。测定法如下实施，将可以用可检测标记物标记的非固定化组分加到固定化组分例如包含锚定组分的包被表面上。在反应完成时，例如通过清洗除去未反应的组分，并纟企测锚定到固体表面上的复合物。若最初非固定化的组分携带可斥企测标记物，检测出固定化到表面上的标记物表明发生了复合作用。若最初非固定化的组分不携带标记物，可例如通过使用特异性结合已固定化复合物的标记抗体来检测复合作用。如果候选化合物是与CRIg相互作用但不结合CRIg的多肽，那么CRIg与该多肽的相互作用可通过用于^r测蛋白质-蛋白质相互作用的^^知方法来测定。此类测定法包括传统方法，诸如例如交联、免疫共沉淀、和流经梯度或层析柱的共纯化。另外，可以如Chevray和Nathans,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:5789-5793(1991)所披露的，使用Fields及其同事(Fields和Song，Nature(London),340:245-246(1989);Chien等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88:9578-9582(1991))描述的基于酵母的遗传系统来监测蛋白质-蛋白质相互作用。许多转录激活物，诸如酵母GAL4，由两个物理上离散的模块结构域组成，一个起DNA结合结构域的作用，另一个起转录激活结构域的功能。上述出版物中描述的酵母表达系统(通称为"双杂交系统，，)利用了这一点，采用两种杂合蛋白质，在一个中将靶蛋白质与GAL4的DNA结合结构域融合，而在另一个中将候选激活蛋白质与激活结构域融合。GALWacZ报道基因在GAL4激活的启动子控制下的表达依赖于GAL4活性经由蛋白质-蛋白质相互作用的重建。用P-半乳糖苷酶的显色底物检测包含相互作用多肽的菌落。使用双杂交技术鉴定两种特定蛋白质之间的蛋白质-蛋白质相互作用的完整试剂盒(MATCHMAKERTM)可从Clontech购买。此系统还可延伸到对参与特定蛋白质相互作用的蛋白质结构域的作图以及指出对这些相互作用至关重要的氨基酸残基。要强调本文中具体讨论的筛选测定法仅用于例示。可根据所筛选拮抗剂候选物的类型(例如多肽、肽、非肽有机小分子、核酸等)来选择的多种其它测定法是本领域技术人员众所周知的，而且同等地适用于本发明的目的。本文中所描述的测定法可用于筛选化合物文库，包括但不限于化学制品文库、天然产物文库(例如微生物、动物、植物等的集合)、和由随机肽、寡核苷酸或有机小分子构成的组合文库。在一个具体的实施方案中，本文中的测定法用于筛选抗体文库，包括但不限于未接触抗原的人抗体库、重组抗体库、合成抗体库和半合成抗体库。抗体库可以是例如噬菌体展示库，包括单价文库(平均每个噬菌体颗粒展示一个单链抗体或抗体片段)和多价文库(平均每个病毒颗粒展示两个或更多抗体或抗体片段)。然而，依照本发明待筛选的抗体库不限于噬菌体展示库。其它展示技术包括例如核糖体或mRN媒示(Mattheakis等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,91:9022-9026(1994);Hanes和Pluckthun，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,94:4937-4942(1997))、微生物细胞展示诸如细菌展示(Georgiou等，NatureBiotech"15:29-34(1997))、酵母细胞展示(Kieke等，ProteinEng.,10:1303-1310(1997))和在哺乳动物细胞上展示、孑包子展示、病毒展示i者3口逆專争录病毒展示(Urban等，NucleicAcidsRes.,33:e35(2005))、基于蛋白质-DNA联系的展示(Odegrip等，Proc.Acad.Natl.Sci.USA,101:2806-2810(2004);Reiersen等，NucleicAcidsRes.，33:el0(2005))、和微珠展示(Sepp等，FEBSLett.,532:455-458(2002))。也可以以相似的方式筛选其它分子的文库，诸如合成小分子的组合文库。候选拮抗剂阻断CRIg结合C3b和/或iC3b的能力可以在基于细胞的测定法中评估。如此，可以将表达CRIg的细胞(诸如经CRIg核酸转染并表达CRIg核酸的重组CHO细胞)与C3b/iC3b及一种或多种在先前的实验中显示出或未显示结合CRIg的候选拮抗剂一起温育，并通过本领域已知方法分析结果，诸如FACScan，如实施例2中所描述的。或者/另外，候选拮抗剂阻断CRIg结合C3b和/或iC3b的能力可以在使用天然表达CRIg的细胞(诸如腹膜巨噬细胞)的测定法中测试。在本文中的初级结合/相互作用测定法中获得的结果可以在各种感染的体外和/或体内测定法中验证和补充。或者，感染或传染病治疗功效的体外和以测试在体内对传染原(诸如单核细胞增生利斯特氏菌)结合表达CRIg的腹膜巨噬细胞的抑制，如实施例2中所描述的。动物模型也可用于测试本文中的抗体和其它CRIg拮抗剂。实施例2中描述了对自小鼠循环清除利斯特氏菌和金黄色葡萄球菌的抑制。抗CRIg拮抗性抗体的制备(i)抗原制备抗体。对于跨膜分子，诸如受体，它们的片段(例如受体的胞外结构域)可用作免疫原。或者，表达跨膜分子的细胞可用作免疫原。此类细胞可衍生自天然来源(例如癌细胞系)，或者可以是经重组技术转化而表达跨膜分子的细胞。对于制备抗体有用的其它抗原及其形式对于本领域技术人员会是显而易见的。(ii)多克隆抗体多克隆抗体优选在动物中生成，通过多次皮下(SC)或腹膜内(ip)注射相关抗原和佐剂。使用双功能或衍生化试剂，例如马来酰亚氨基苯曱酰基磺基琥珀酰亚胺酯(通过半胱氨酸残基偶联)、N-羟基琥珀酰亚胺(通过赖氨酸残基)、戊二酪、琥珀酸酐、SOCl2或R,N二ONR(其中R和R,是不同的烃基)，将相关抗原与在待免疫物种中有免疫原性的蛋白质偶联可能是有用的，例如匙孔i戚血蓝蛋白、血清白蛋白、牛曱状腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制剂。通过将例如100昭或5jag蛋白质或偶联物(分别用于兔或小鼠)与3倍体积的弗氏完全佐剂混和并将该溶液皮内注射于多个部位，将动物针对抗原、免疫原性偶联物或衍生物进行免疫。l个月后，通过多个部位的皮下注射，用弗氏完全佐剂中初始量l/5-l/10的肽或偶联物对动物进行加强免疫。7-14天后，采集动物的血液并测定血清的抗体滴度。对动物进行加强免疫直到滴度达到平台(plateau)。优选的是，将动物用相同抗原但与不同蛋白质和/或通过不同交联剂偶联得到的偶联物进行加强免疫。偶联物还可在重组细胞培养中作为蛋白质融合物来制备。同样，适当使用凝聚剂诸如明矾来增强免疫应答。(iii)单克隆抗体单克隆抗体可以使用最初由Kohler等，Nature,256:495(1975)记载的杂交瘤方法来生成，或者可以通过重组DNA方法(美国专利No.4,816,567)来生成。在杂交瘤方法中，如上所述免疫小鼠或其它适宜的宿主动物，诸如仓鼠或猕猴，以引发生成或能够生成如下抗体的淋巴细胞，所述抗体将特异性结合用于免疫的蛋白质。或者，可以在体外免疫淋巴细胞。然后使用合适的融合剂诸如聚乙二醇将淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，以形成杂交瘤细胞(Goding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,pp.59-103，AcademicPress,1986)。19将如此制备的杂交瘤细胞在合适的培养基中接种和培养，所述培养基优选含有抑制未融合的亲本骨髓瘤细胞生长或存活的一种或多种物质。例如，若亲本骨髓瘤细胞缺少次黄噪呤鸟噪呤磷酸核糖基转移酶(HGPRT或HPRT),则用于杂交瘤的培养基典型的将含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷(HAT培养基)，这些物质阻止HGPRT缺陷细胞生长。优选的骨髓瘤细胞是那些高效融合、支持所选择的抗体生产细胞稳定且高水平的生成抗体、且对培养基诸如HAT培养基敏感的骨髓瘤细胞。其中，优选的骨髓瘤细胞系是鼠骨髓瘤系，诸如那些自可从索尔克研究所细胞分配中心(SalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiego，Calif.USA)获得的MOPC-21和MPC-11小鼠肺瘤和可乂人美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,Rockville,Md.USA)获得的SP-2或X63-Ag8-653衍生的。人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系也有用于生成人单克隆抗体的记载(Kozbor,J.Immunol.,133:3001(1984);Brodeur等，MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,pp.51-63,MarcelDekker,Inc.,NewYork,1987)。可对杂交瘤细胞正在其中生长的培养基测定针对抗原的单克隆抗体的生成。优选的是，通过免疫沉淀或通过体外结合测定法，诸如放射性免疫测定法(RIA)或酶联免疫吸附测定法(ELISA)，测定由杂交瘤细胞生成的单克隆抗体的结合特异性。在鉴定出生成具有期望特异性、亲和力和/或活性的抗体的杂交瘤细胞后，所述克隆就可通过有限稀释规程进行亚克隆，并通过标准方法进行培养(Goding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,pp.59-103,AcademicPress,1986)。适于这一目的的培养基包括例如D-MEM或RPMI-1640培养基。另外，杂交瘤细胞可在动物中作为腹水瘤进行体内培养。可通过常规免疫球蛋白纯化规程，诸如例如蛋白A-Sepharose、羟磷灰石层析、凝胶电泳、透析、或亲和层析，将由亚克隆分泌的单克隆抗体与培养基、腹水或血清适当分开。编码单克隆抗体的DNA易于使用常规规程分离和测序(例如通过使用能够特异性结合编码单克隆抗体重链和轻链的基因的寡核香酸探针)。杂交瘤细胞是此类DNA的优选来源。一旦分离，就可将DNA置于表达载体中，然后将该表达载体转染到不另外生成免疫球蛋白蛋白质的宿主细胞中，诸如大肠杆菌细胞、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞，以在重组宿主细胞中获得单克隆抗体的合成。抗体的重组生产在下文中有更详细在另一个实施方案中，可从使用McCafferty等，Nature,348:552-554(1990)中记载的技术构建的噬菌体抗体库中分离抗体或抗体片段。Clackson等，Nature,352:624-628(1991)及Marks等，J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)分别记载了使用噬菌体文库进行的鼠和人抗体的分离。后续出版物记载了通过链改组生成高亲和力(nM范围)的人抗体(Marks等，Bio/Technology10:779-783(1992))，以及组合感染和体内重组作为构建非常大的噬菌体文库的策略(Waterhouse等，Nucl.AcidsRes.21:2265-2266(1993))。如此，这些技术是用于分离单克隆抗体的传统单克隆抗体杂交瘤技术的可行替代方法。也可以修饰DNA,例如通过用人重链和轻链恒定域的编码序列替代同源鼠序列(美国专利No.4,816,567;Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851(1984))，或通过将免疫球蛋白编码序列与非免疫球蛋白多肽的整个或部分编码序列共价连接。典型地，用此类非免疫球蛋白多肽替代抗体的恒定域，或者用它们替代抗体的一个抗原结合位点的可变域，以产生嵌合二价抗体，它包含对一种抗原具有特异性的一个抗原结合位点和对不同抗原具有特异性的另一个抗原结合位点。(iv)人源化和人抗体人源化抗体具有一个或多个导入其中的来自非人来源的氨基酸残基。这些非人氨基酸残基常常称作"输入，，残基，它们通常取自"输入，'可变域。人源化可基本上遵循Winter及其同事的方法进行(Jones等，Nature,321:522-525(1986);Riechmann等，Nature,332:323-327(1988);Verhoeyen等，Science,239:1534-1536(1988))，即用啮齿类CDR或CDR序列替代人抗体的相应序列。因此，此类"人源化"抗体是嵌合抗体(美国专利4,816,567),其中本质上少于整个人可变域用来自非人物种的相应序列替代。在实践中，人源化抗体通常是其中一些CDR残基和可能的一些FR残基用来自啮齿类抗体中类似位点的残基替代的人抗体。用于制备人源化抗体的人可变域的选择，包括轻链和重链，对于降低抗原性非常重要。依照所谓的"最适"(best-fit)法，用啮齿类抗体的可变域序21列对已知的人可变域序列的整个文库进行筛选。然后选择与啮齿类序列最接近的人序列作为人源化抗体的人框架(FR)(Sims等，J.Immunol.,151:2296(1993);Chothia等，J.Mol.Biol.，196:901(1987》。另一种方法使用由特定轻链或重链亚组的所有人抗体的共有序列衍生的特定框架。同一框架可用于数种不同的人源化抗体(Carter等，Pro"Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992);Presta等，J.Immunol"151:2623(1993))。更为重要的是，抗体在人源化后保持对抗原的高亲和力及其它有利的生物学特性。为了实现这一目的，依照一种优选的方法，通过使用亲本和人源化序列的三维模型分析亲本序列和各种概念性人源化产物的方法来制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型通常是可获得的，且为本领域技术人员所熟悉。还可获得图解和显示所选候选免疫球蛋白序列的可能三维构象结构的计算机程序。检查这些显示图像能够分析残基在候选免疫球蛋白序列行使功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。这样，可从受体和输入序列中选出FR残基并进行组合，乂人而获得期望抗体特征，诸如对靶抗原的亲和力提高。通常，CDR残基直接且最实质的涉及对抗原结合的影响。或者，现在有可能生成在缺乏内源免疫球蛋白生成的情况下能够在免疫时生成人抗体完整全集的转基因动物(例如小鼠)。例如，已经描述了嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合删除导致内源抗体生成的完全抑制。在此类种系突变小鼠中转移大量人种系免疫球蛋白基因将导致在抗原攻击时生成人抗体。参见例如Jakobovits等，Proc.Natl.Acad.Sd.USA,90:2551(1993);Jakobovits等，Nature,362:255-258(1993);Bruggermann等,YearinImmunol"7:33(1993);及Duchosal等，Nature,355:258(1992)。还可从噬菌体展示库衍生人抗体(Hoogenboom等，J.Mol.Biol.，227:381(1991);Marks等，J.Mol.Biol"222:581-597(1991);Vaughan等,NatureBiotech"14:309(1996))。下文进一步描述了自抗体噬菌体展示文库生成人抗体。(v)抗体片段已经开发了用于生成抗体片段的多种技术。传统上，通过蛋白水解消化完整抗体来衍生这些片段(参见例如Morimoto等，JournalofBiochemicalandBiophysicalMethods24:107-117(1992);及Brennan等，Science,229:81(1985))。然而，现在可直接由重组宿主细胞生成这些片段。例如，可以从上文讨论的噬菌体抗体库分离抗体片段。或者，可直接从大肠杆菌回收Fab'-SH片段并化学偶联以形成F(ab')2片段(Carter等，Bio/Technology10:163-167(1992))。在另一个实施方案中，如下文实施例所述，使用亮氨酸拉链GCN4促进F(ab')2分子的装配来形成F(ab')2。依照另一种方法，可直接从重组宿主细胞培养物分离F(ab')2片段。用于生成抗体片段的其它技术对熟练从业人员将是显而易见的。在其它实施方案中，所选抗体是单链Fv片段(scFv)。参见WO93/16185。(vi)多特异性抗体多特异性抗体具有对至少两种不同表位的结合特异性，其中所述表位通常来自不同抗原。尽管此类分子通常只结合两种不同表位(即双特异性抗体，BsAb)，但是此表述在用于本文时涵盖具有额外特异性的抗体，诸如三特异性抗体。BsAb的例子包括那些一个臂针对CRIg而另一个臂针对另一种在免疫复合物清除中发挥作用的蛋白质，诸如选自CR1、CR2、CR3、和CR4的巨噬细胞受体。用于构建双特异性抗体的方法是本领域已知的。全长双特异性抗体的传统生产基于两对免疫球蛋白重链-轻链的共表达，其中两种链具有不同的特异性(Millstein等，Nature,305:537-539(1983))。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机分配，这些杂交瘤(四源杂交瘤(quadroma))生成10种不同抗体分子的潜在混合物，其中只有一种具有正确的双特异性结构。通常通过亲和层析步骤进行的正确分子的纯化相当麻烦且产物产量低。类似的规程披露于WO93/08829及Traunecker等，EMBOJ.,10:3655-3659(1991)。依照一种不同的方法，将具有期望结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变域与免疫球蛋白恒定域序列融合。优选的是，与包含至少部分铰链、CH2和CH3区的免疫球蛋白重链恒定域进行融合。优选在至少一种融合物中存在包含轻链结合所必需的位点的第一重链恒定区(CH1)。将编码免疫球蛋白重链融合物和，在需要时，免疫球蛋白轻链的DNA插入分开的表达载体中，并共转染到合适的宿主生物体中。在用于构建的三种多肽链比例不等时提供所期望的最佳产量的实施方案中，这为调整三种多肽片段的相互比例提供了很大的灵活性。然而，在至少两种多肽链以相同比例表达导致高产量时或在该比例没有特别意义时，有可能将两种或所有三种多肽链的编码序列插入一个表达载体。在该方法的一个优选实施方案中，双特异性抗体由一个臂上具有第一结合特异性的杂合免疫球蛋白重链，和另一个臂上的杂合免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)构成。由于免疫球蛋白轻链仅在半个双特异性分子中的存在提供了便利的分离途径，因此发现这种不对称结构便于将期望的双特异性复合物与不想要的免疫球蛋白链组合分开。该方法披露于WO94/04690。关于生成双特异性抗体的进一步详情参见例如Suresh等，MethodsinEnzymology,121:210(1986)。依照WO96/27011中记载的另一种方法，可改造一对抗体分子间的界面，以将从重组细胞培养物回收的异二聚体的百分比最大化。优选的界面包含抗体恒定域的至少部分CH3结构域。在该方法中，将第一抗体分子界面的一个或多个小氨基酸侧链用较大侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替换。通过将大氨基酸侧链用较小氨基酸侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)替换，在第二抗体分子的界面上产生与大侧链相同或相似大小的补偿性"空腔"。这提供了较之其它不想要的终产物诸如同二聚体提高异二聚体产量的机制。双特异性抗体包括交联的或"异源偶联的"抗体。例如，可以将异源偶联物中的一种抗体与亲合素偶联，而将另一种抗体与生物素偶联。此类抗体已经建议用于例如将免疫系统细胞耙向不想要的细胞(美国专利No.4,676,980)和用于治疗HIV感染(WO91/00360，WO92/200373)。异源偶联抗体可以使用任何方便的交联方法来制备。合适的交联剂连同许多交联技术是本领域众所周知的，而且披露于美国专利No.4,676,980。文献中还记载了由抗体片段生成双特异性抗体的技术。例如，可使用化学连接来制备双特异性抗体。Brennan等，Science,229:81(1985)记载了通过蛋白水解切割完整抗体以生成F(ab')2片段的规程。将这些片段在存在二硫醇络合剂亚砷酸钠的情况下还原，以稳定邻近的二辟l醇并防止分子间二辟d建的形成。然后将产生的Fab'片段转变为硫代硝基苯曱酸酉旨(TNB)衍生物。然后将Fab'-TNB衍生物之一通过巯基乙胺的还原重新恢复成Fab'-硫醇，并与等摩尔量的另一种Fab'-TNB衍生物混合，以形成双特异性抗体。产生的双特异性抗体可用作酶的选择性固定化试剂。也可以从大肠杆菌直接回收Fab'-SH片段，而且可以将这些片段化学偶联以形成双特异性抗体。Shalaby等，J.Exp.Med.,175:217-225(1992)记载了完全人源化的双特异性抗体F(ab')2分子的生成。由大肠杆菌分开分泌每种Fab'片段，并在体外进行定向化学偶联以形成双特异性抗体。还记载了从重组细胞培养物直接生成和分离双特异性抗体片段的多种技术。例如，已使用亮氨酸拉链生成双特异性抗体。Kostelny等，J.Immunol.,M8(5):1547-1553(1992)。将来自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽通过基因融合与两种不同抗体的Fab'部分连接。抗体同二聚体在铰链区还原以形成单体，然后重新氧化以形成抗体异二聚体。这种方法也可用于生成抗体同二聚体。Hollinger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90:6444-6448(1993)记载的"双抗体"技术提供了构建双特异性抗体片段的替代机制。该片段包含通过接头相连的重链可变域(VH)和轻链可变域(VL)，所述接头太短使得同一条链上的两个结构域之间不能配对。因此，迫使一个片段上的VH和VL结构域与另一个片段上的互#卜VL和VH结构域配对，由此形成两个抗原结合位点。还报道了通过使用单链Fv(sFv)二聚体构建双特异性抗体片段的另一种策略。参见Gmber等，J.Immunol.,152:5368(1994)。设想了具有超过两种特异性的抗体。例如，可制备三特异性抗体。Tutt等，J.Immunol.,147:60(1991)。另外，具有超过一种针对同一抗原的结合特异性的多价(例如二价)抗体也在本发明的范围内。(vii)效应器功能工程改造可能希望在效应器功能方面修饰本发明的抗体，从而增强抗体的效力。例如，可向Fc区中引入半胱氨酸残基，从而使得在该区中形成链间二硫键。如此生成的同二聚体抗体可具有改善的内在化能力和/或提高的补体介导的细胞杀伤和抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)。参见Caron等，J.Exp.Med.,176:1191-1195(1992)和Shopes,B.,J.Immunol"148:2918-2922(1992)。具有增强的抗肺瘤活性的同二聚体抗体还可使用如Wolff等，CancerResearch,53:2560-2565(1993)中记栽的异双功能交联剂来制备。或者，抗体可改造成具有双重Fc区，由此可具有增强的补体溶解和ADCC能力。参见Stevenson等,Anti-CancerDrugDesign,3:219-230(1989)。(viii)抗体-补救受体结合表位融合物在本发明的某些实施方案中，可能希望使用抗体片段，而非完整抗体，来例如提高肿瘤穿透。在这种情况中，可能希望修饰抗体片段以延长其血清半衰期。这可通过例如将补救受体结合表位掺入抗体片段中来实现(例如通过抗体片段中适宜区域的突变或通过将表位掺入肽标签中然后将该肽标签融合至抗体片段的任一末端或中部，后者通过例如DNA或肽合成来实现)。补救受体结合表位优选构成这样一个区域，其中将来自Fc结构域的一个或两个环的任何一个或多个氨基酸残基转移至抗体片段的类似位置。甚至更优选的是，转移来自Fc结构域的一个或两个环的三个或更多残基。仍更优选的是，表位取自Fc区(例如IgG的)的CH2结构域并转移至抗体的CH1、CH3、或Vh区，或超过一个此类区域。或者，表位取自Fc区的CH2结构域并转移至抗体片段的6L区或VL区或二者。(ix)抗体的其它共价修饰抗体的無价修饰包括在本发明的范围内。如果适用，它们可通过化学合成或者通过fe促或化学切割抗体来生成。抗体的其它类型共价修饰如下引入分子，即通过使抗体的目标氨基酸残基与能够与选定侧链或N-或C-末端残基反应的有机衍生化试剂起反应。共价修饰的例子记载于美国专利No.5,534,615,明确收入本文作为参考。一类优选的抗体共价修饰包括将抗体连接至多种非蛋白质性质聚合物之一，例如聚乙二醇、聚丙二醇、或聚氧化烯，以美国专利No.4，640，835;4,496,689;4,301,144;4,670,417;4,791,192;或4,179,337所列方式。(x)从合成的抗体噬菌体文库中产生抗体在一个优选的实施方案中，本发明提供利用独特的噬菌体展示法来产生和挑选新的Jt体的方法。该方法包括产生基于单个框架模板的合成抗体噬菌体文库，设计可变域内的足够的多样性，展示具有多样化可变域的多肽，选择对耙抗原>有高亲和力的候选抗体，和分离所选的抗体。噬菌体泉示方法的详情可在例如2003年12月11日公开的W003/102157中找到，#其完整公开内容明确收入本文作为参考。CDR中突变溶剂可及的和/或高度多变的位置来产生。一些或全部CDR可用本文提供的方法来突变。'在一些实施方案中，优选突变CDRH1、CDRH2和CDRH3中的位置以形成单个文库或突变CDRL3和CDRH3中的位置以形成单个文库或突变CDRL3和CDRH1、CDRH2和CDRH3中的位置以形成单个文库，由此产生多样的抗体文库。例如，可产生这样的抗体可变域文库，其在CDRH1、CDRH2和/或CDRH3中溶剂可及的和/或高度多变的位置上有突变。产生的另一种文库在CDRL1、CDRL2和/或CDRL3中有突变。这些文库也可互相结合使用以产生具有期望亲和力的结合物。例如，在一轮或多轮选择对靶抗原结合的重链文库后，在其它轮次的选择中可将轻链文库替换入重链结合物群中以提高结合物的亲和力。文库优选通过用重链序列可变区CDRH3区中的变异氨基酸替代原始氨基酸来产生。所得文库可包含多种抗体序列，其中所述序列多样性主要位于重链序列的CDRH3区中。在一个方面，所述文库在人源化抗体4D5序列、或人源化抗体4D5序列的框架氨基酸序列的背景中产生。所述文库优选通过用DrK密码子集编码的氨基酸至少替代重链残基95-100a来产生，其中Z)^:密码子集用于编码这些位置中每个位置的变异氨基酸集。可用于产生这些替代的寡核苷酸集的例子包括序列(DKX)7。在一些实施方案中，文库通过用DFK和AWK两个密码子集编码的氨基酸替代残基95-100a来产生。可用于产生这些替代的寡核苷酸集的例子包括序列(DFK)6(AWX)。在另一个实施方案中，文库通过用DFK和AW尺两个密码子集编码的氨基酸至少替代残基95-100a来产生。可用于产生这些替代的寡核苷酸集的例子包括序列(DFX)5(AWX)。可用于产生这些替代的寡核普酸集的另一个例子包括序列(AWX)6。根据本文所述标准，本领域技术人员可确定合适寡核苷酸序列的其它例子。在另一个实施方案中，利用不同的CDRH3设计来分离高亲和力结合物和分离针对各种表位的结合物。该文库中产生的CDRH3的长度范围是11至13个氨基酸，尽管也可产生不同于此的长度。通过用AW《、DF《和A^X密码子集也可拓展H3多样性，以及在N和/或C-末端处的较有限的多样性。CDRH1和CDRH2中也可产生多样性。CDR-H1和H2多样性的设计遵循目标为模拟所述带有如下修饰的天然抗体全集的策略，所述修饰使多样性较前述设计更紧密地与天然多样性相匹配。对于CDRH3中的多样性，可分开构建多个文库，它们具有不同长度的H3，然后组合起来以选择针对靶抗原的结合物。可合并多个文库并用前述和本文下述的固体支持物选择和溶液分选法来选择。可采用多种选择策略。例如，一种变化涉及在结合至固相的靶物上选择，然后分选可能在融合多肽上存在的标签(例如抗gD标签)，然后再一次在结合至固相的把物上分选。或者，文库可首先在结合至固体表面的靶物上选择，然后用靶抗原浓度逐渐减低的溶液相结合来分选所洗脱的结合物。利用不同分选方法的组合来最低限度地只选择高度表达的序列并选择许多不同的高亲和力克隆。针对靶抗原的高亲和力结合物可由文库分离。Hl/H2区中的有限多样性可降低简并性约104至105倍并允许为更多高亲和力结合物提供更大的H3多样性。利用在CDRH3中具有不同类型多样性的文库(例如利用DVK或NVT)可分离能与靶抗原的不同表位结合的结合物。对于如上所述合并的文库中分离的结合物，已经发现亲和力可通过提供轻链中的有限多样性来进一步提高。在该实施方案中，轻链多样性如下产生，在CDRL1中氨基酸第28位由RDT编码；氨基酸第29位由RKT编码；氨基酸第30位由RVW编码；氨基酸第31位由ANW编码；氨基酸第32位由THT编码；任选的，氨基酸第33位由CTG编码；在CDRL2中氨基酸第50位由KBG编码；氨基酸第53位由AVC编码；任选的，氨基酸第55位由GMA编码；在CDRL3中氨基酸第91位由TMT或SRT或这两者编码；氨基酸第92位由DMC编码；氨基酸第93位由RVT编码；氨基酸第94位由NHT编码；和氨基酸第96位由TWT或YKG或这两者编码。在另一个实施方案中，产生在CDRH1、CDRH2和CDRH3区中具有多样性的一个或多个文库。在该实施方案中，用各种长度的H3区并主要用密码子^TZ和AWX或AWS来产生CDRH3中的多样性。可用各寡核苷酸形成文库并合并，或者可合并寡核苷酸来形成文库子集。该实施方案的文库可针对结合至固体的耙物进行分选。分离自多次分选的克隆可利用ELISA测定法来筛选特异性和亲和力。对于特异性，克隆可以针对期望靶抗原以及其它非靶抗原进行筛选。然后，在溶液结合竟争ELISA测定法或点竟争测定法中对那些针对耙抗原的结合物筛选亲和力。可以用如上所述制备的zyz密码子集由文库分离高亲和力结合物。可方便地在细胞培养中以高产率将这些结合物制备成抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，可能希望产生在CDRH3区长度方面具有更大多样性的文库。例如，可能希望产生CDRH3区的长度范围为约7至19个氨基酸的文库。由这些实施方案中的文库分离的高亲和力结合物可方便地在细菌和真核细胞培养中以高产率产生。可设计载体以方便地去除如下序列诸如gD标签、病毒外壳蛋白成分序列，和/或增加恒定区序列来高产率地产生全长抗体或抗原结合片段。CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1和/或CDRH2)的文库组合。因此，例如，在一个实施方案中，将CDRH3文库与CDRL3文库组合，所述CDRL3文库用预先确定的密码子集在第28、29、30、31、和/或32位有变异氨基酸的人源化4D5抗体序列的背景中产生。在另一个实施方案中，可将CDRH3有突变的文库与包含变异CDRH1和/或CDRH2重链可变域的文库组合。在一个实施方案中，所述CDRH1文库用第28、30、31、32和33位有变异氨基酸的人源化抗体4D5序列产生。CDRH2文库可用预先确定的密码子集用第50、52、53、54、56和58位有变异氨基酸的人源化抗体4D5序列产生。Cxi)抗体突变体可进一步修饰噬菌体文库产生的新抗体以产生抗体突变体，所述抗体突变体具有比亲本抗体改善了的物理、化学和/或生物学性质。当所用的测定法是生物学活性测定法时，优选抗体突变体在所选测定法中的生物学活性比亲本抗体在该测定法中的生物学活性好至少约10倍，优选好至少约20倍，更优选好至少约50倍，有时好至少约100倍或200倍。例如，优选抗CRIg抗体突变体针对CRIg的结合亲和力比亲本抗体的结合亲和力强至少约10倍，优选强至少约20倍，更优选强至少约50倍，有时强至少约100倍或200倍。为了产生抗体突变体，将一处或多处氨基酸改变(例如替代)导入亲本抗体的一个或多个高变区。或者/另外，可将框架区残基的一处或多处改变(例如替代)导入亲本抗体，这些改变导致抗体突变体针对来自第二哺乳动物物种的抗原的结合亲和力有所改善。要修饰的框架区残基的实例包括那些直接非共价结合抗原的(Amit等(1986)Science233:747-753);相互作用于/影响CDR构象的(Chothia等(1987)J.Mol.Biol.196:901-917);和/或参与Vl-Vh界面的(EP239400Bl)残基。在某些实施方案中，一个或多个这类框架区残基的修饰导致抗体针对来自第二哺乳动物物种的抗原的结合亲和力有所增强。例如，在本发明的该实施方案中，可改变约1个至约5个框架残基。有时，这可足以产生适用于临床前试验中的抗体突变体，甚至其中没有高变区残基被改变。可是通常，抗体突变体将包含别的高变区改变。改变的高变区残基可以是随机改变的，尤其是在其中亲本抗体的起始结合亲和力使得这类随机产生的抗体突变体可方便地被筛选出来。可用于生成此类抗体突变体的一种方法称作"丙氨酸扫描诱变"(Cunningham和Wells(1989)Science244:1081-1085)。这里，一个或多个高变区残基用丙氨酸或多丙氨酸残基替代，以影响氨基酸与来自第二哺乳动物物种的抗原的相互作用。然后通过在或对替代位点引入更多或其它突变，推敲那些对替代展现出功能敏感性的高变区残基。如此，虽然引入氨基酸序列变异的位点是预先决定的，但是突变本身的性质不需要预先决定。如本文所述对如此生成的丙氨酸突变体筛选它们的生物学活性。通常，从保守替代诸如下文显示在标题"优选替代"下的那些开始。如果此类替代导致生物学活性(例如结合亲和力)的改变，那么引入下表中称为"例示替代"的更实质性改变，或如下文中关于氨基酸种类的进一步描述，并筛选产物。优选替代<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>果上显著不同的替代来完成(a)替代区域的多肽主链的结构，例如作为折叠片或螺旋构象，(b)靶位点处分子的电荷或疏水性，或(c)侧链的体积。基于共同的侧链特性，将天然存在残基如下分组(1)疏水性的正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile;(2)中性、亲水性的cys、ser、thr、asn、gin;(3)酸性的asp、glu;(4)石威性的his、lys、arg;(5)影响链取向的残基gly、pro;及(6)芳香力矣的trp、tyr、phe。非保守替代将需要用这些类别之一的一个成员替换另一个类别的。在另一个实施方案中，利用噬菌体展示(见上)，对为修饰而选择的位点进4亍亲和力成熟。编码氨基酸序列突变体的核酸分子由本领域已知的多种方法制备。这些方法包括但不限于，寡核苷酸介导的(或定点)诱变、PCR诱变、和盒式诱变早先制备的突变或非突变型式的亲本抗体。制备突变体的优选方法是定点诱变(参见例如Kunkel(1985)Proc.Natl，Acad.Sci.USA82:488)。在某些实施方案中，抗体突变体仅有单个高变区残基被替代。在其它实施方案中，有亲本抗体的两个或更多个高变区残基被替代，例如约2个至约IO个高变区替代。通常，生物学特性得到改善的抗体突变体所具有的氨基酸序列与亲本抗体重链或轻链可变域的氨基酸序列有至少75%，更优选至少80%,更优选至少85%,更优选至少90%，和最优选至少95%的氨基酸序列同一性或相似性。关于此序列的同一性或相似性在本文中定义为在比对序列并在必要时引入缺口以实现最大百分比序列同一性后，候选序列中与亲本抗体残基相同(即相同残基)或相似(即根据共同侧链特性来自同一组的氨基酸残基，见上文)的氨基酸残基的百分比。N-末端、C-末端、或内部的延伸、删除、或插入可变域以外的抗体序列都不应^f见为影响序列同一性或相似性。产生抗体突变体后，测定该分子相对于亲本抗体的生物学活性。如上所优选实施方案中，制备一组抗体突变体并筛选针对抗原或其片段的结合亲和力。任选将该初始筛选中选出的一个或多个抗体突变体进行一种或多种其它生物学活性测定法以确证结合亲和力增强的抗体突变体是真正有用的，例如可用于临床前研究。这样选出的抗体突变体可进一步修饰，修饰时常取决于抗体的预期用途。此类修饰可包括进一步改变氨基酸序列，融合异源多肽和/或共价修饰，诸如下文所详述的那些。对于氨基酸序列改变，示例性的修饰上文有详述。例如，也可替代任何不涉及保持抗体突变体正确构象的半胱氨酸残基，一般替代为丝氨酸，用以改善分子的氧化稳定性并防止异常交联。相反地，可向抗体中加入半胱氨酸键以改善其稳定性(特别是在抗体是抗体片段，诸如Fv片段时)。另一类氨基酸突变体具有改变的糖基化模式。这可通过删除抗体中发现的一个或多个碳水化合物模块和/或增加不存在于抗体中的一个或多个糖基化位点来实现。抗体糖基化通常是N-连接的或O-连接的。N-连接的指碳水化合物模块附着于天冬酰胺残基侧链。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸，其中X是除了脯氨酸之外的任何氨基酸，是碳水化合物模块酶促附着于天冬酰胺侧链的识别序列。因此，多肽中存在这些三肽序列之任一产生潜在的糖基化位点。O-连接的糖基化指糖类N-乙酰半乳糖胺、半乳糖、或木糖之一附着于羟基氨基酸(最常见的是丝氨酸或苏氨酸，尽管也可用5-羟脯氨酸或5-羟赖氨酸)。在抗体上增加糖基化位点可通过改变氨基酸序列使之包含一个或多个上述的三肽序列来方便地实现(用于N-连接的糖基化位点)。也可在原始抗体序列中通过添加、或替代一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基来产生改变(用于O-连接的糖基化位点)。(xii)抗体的重组生产为了重组生产抗体，分离编码抗体的核酸，并插入可复制载体中，用于进一步克隆(DNA扩增)或表达。编码单克隆抗体的DNA易于使用常规规程分离和测序(例如通过使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。可以获得许多载体。载体构件通常包括但不限于下列一种或多种信号序列、复制起点、一种或多种标志基因、增强子元件、启动子、和转录终止序列(例如如美国专利No.5，534,615中所记载的，明确收入本文作为参考)。适于克隆或表达本文载体中的DNA的宿主细胞是上文描述的原核生物、酵母或高等真核细胞。适于此目的的原核生物包括真细菌，诸如革兰氏阴性生物体或革兰氏阳性生物体，例如肠杆菌科，诸如埃希氏菌属0&c/zen'c&a)例如大肠埃希氏菌或大肠杆菌(五.co//)、肠杆菌属(五wtera6acter)、欧文氏菌属(EnWw'a)、克雷伯氏菌属(《/e6w'e//a)、变形菌属(Prafew)、沙门氏菌属(Sa/wowe〃a)如J浊口鼠i"另寒沙、门氏菌(Sa/mowe〃a/y//n'mw〃'wm)、沙、雷氏菌属(Serra/^)例如粘质沙雷氏菌(6"errafmarcesca""、和志贺氏菌属(5Tw'ge〃a)、以及芽孢杆菌属CBac庙)诸如枯草芽孢杆菌(及wto7&)和地衣芽孢杆菌(及//c/2ew/om2&)(例如1989年4月12日公布的DD266,710中披露的地衣芽孢杆菌41P)、假单胞菌属CP化w^mo"os)诸如铜绿假单胞菌(尸aen^'"osa)、和链霉菌属(5^eptom_yces)。一种优选的大肠杆菌克隆宿主是大肠杆菌294(ATCC31，446),尽管其它菌抹诸如大肠杆菌B、大肠杆菌X1776(ATCC31，537)和大肠杆菌W3110(ATCC27，325)也是合适的。这些例子是例示性的，而不是限制性的。在原核生物以外，真核微生物诸如丝状真菌或酵母也是编码抗体的载体的合适克隆或表达宿主。酿酒糖酵母或酿酒酵母(5bcc/zara/^cescereWw'ae)或常用的面包酵母是最常用的低等真核宿主微生物。然而，通常可获得许多其它属、种和菌抹且可用于本发明，诸如粟酒裂殖糖酵母(^Sb/2/zay"cc/wra附^cw/ow^e);克鲁维酵母属(A7"yi^ra附ycey)宿主，i者如例如乳酸克鲁维酵母(K/ac&)、脆壁克鲁维酵母(《./rag/fc)(ATCC12，424)、保加利亚克鲁维酵母(尺.6w/gan'cw力(ATCC16,045)、威克克鲁维酵母(Kw/cferam")(ATCC24,178)、〖wa/"/(ATCC56,500)、果蝇克鲁维酵母(尺.Acwop/n7anm7)(ATCC36,906)、耐热克鲁维酵母(/Cf/7^moto/era"力和马克思克鲁维酵母(Kwwx/a"w力；亚罗酵母属(Fa/row'a)(EP402,226);巴斯德毕赤酵母0P/c/z/aposto^)(EP183,070);假丝酵母属(Ca"c/Wa);瑞氏木霉(7h.c/zc^fe/7wam/")(EP244,234);104造月永孢菌(iVewmy/oracrowa);许旺酵母属(Sc/rwaww'owycas),i者^口西方i午旺酵母(5b/nvawm.om^ycesocc/(ie"to/;禾口丝状真菌，诸如例如脉孢菌属(A^wra^ora)、青霉属(尸em'"7//1^)、弯颈霉属(ro/j^oc/a&ww)、和曲霉属(^^e^/〃w力宿主诸如构巢曲霉(Am'甴/ara)和黑曲适于表达糖基化抗体的宿主细胞衍生自多细胞生物体。无脊椎动物细胞的例子包括植物和昆虫细胞。已经鉴定了许多杆状病毒^^和变体及相应的允许昆虫宿主细胞，它们来自诸如草地夜蛾OS/x^opfera/n^^e^/a)(毛虫)、埃及伊蚊(/iedesaegy;^〕(蚊子)、白紋伊蚊04ecfesa/6op/"w"(蚊子)、黑腹果錄(Z)ra，Ma匿/twogoster)(果虫邑)和家蚕(S蘭xmw/)等宿主。公众可获得多种病毒林用于转染，例如苜蓿尺蠖G4wtograp/zaca/i/br"/ca)NPV的L-1变体和家蚕(^owxwon')NPV的Bm-5抹，而且此类病毒可依照本发明用作本文中的病毒，特别是用于转染草地夜蛾细胞。还可利用棉、玉米、马铃薯、大豆、矮牵牛、番茄和烟草的植物细胞培养物作为宿主。然而，脊推动物细胞得到最多关注，而且培养(组织培养)中脊推动物细胞的繁殖已经成为常规流程。有用哺乳动物宿主细胞系的例子是用SV40转化的猴肾CVl系(COS-7，ATCCCRL1651);人胚肾系(293或为了在悬浮培养中生长而亚克隆的293细胞，Graham等，J.GenVirol.,36:59(1977));幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCCCCL10);中国仓鼠卵巢细胞ADHFR(CHO，Urlaub等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，77:4216(1980));小鼠塞托利(sertoli)细胞(TM4，Mather,編.23:243-251(1980》;猴肾细胞(CV1，ATCCCCL70);非洲绿猴肾细胞(VERO-76,ATCCCRL-1587);人宫颈癌细胞(HELA，ATCCCCL2);犬肾细胞(MDCK,ATCCCCL34);牛鼠(buffalorat)肝细胞(BRL3A,ATCCCRL1442);人肺细胞(W138,ATCCCCL75);人肝细胞(HepG2，HB8065);小鼠乳瘤(MMT060562，ATCCCCL51);TRI细胞(Mather等，TV.K爿cad383:44-68(1982);MRC5细胞；FS4细胞；和人肝瘤系(HepG2)。用上文所述用于生产抗体的表达或克隆载体转化宿主细胞，并在为了诱导启动子、选择转化子或扩增编码期望序列的基因而适当更改的常规营养培养基中进行培养。可以在多种培养基中培养用于生产本发明抗体的宿主细胞。商品化培养基诸如Ham氏F10(Sigma)、极限必需培养基(MEM,Sigma)、RPMI-1640(Sigma)、和Dulbecco氏改良的Eagle氏培养基(DMEM，Sigma)适于培养宿主细胞。另外，可以使用下列文献中记载的任何培养基作为宿主细胞的培养基Ham等，Afe仇58:44(1979);Barnes等，^"a/.Aoc/zew.102:255(1980);美国专利No,4，767，704;4,657,866;4,927,762;4，560，655;或5，122,469;WO90/03430;WO87/00195;或美国专利复审30，985。任何这些培养基可以根据需要补充激素和/或其它生长因子(诸如胰岛素、运铁蛋白或表皮生长因子)、34盐(诸如氯化钠、钙、镁和磷酸盐)、緩冲剂(诸如HEPES)、核芬酸(诸如腺苷和胸苷)、抗生素(诸如GENTAMYCINTM)、痕量元素(定义为通常以微摩尔范围的终浓度存在的无机化合物)、和葡萄糖或等效能源。还可以以本领域技术人员知道的适宜浓度包含任何其它必需补充物。培养条件，诸如温度、pH等，就是先前为表达而选择用于宿主细胞的，这对于普通技术人员而言是显而易见的。在使用重组技术时，可以在细胞内、在周质空间中生成抗体，或者直接分泌到培养基中。如果在细胞内生成抗体，那么作为第一步，通过例如离心或超滤除去宿主细胞或裂解细胞的微粒碎片。如果将抗体分泌到培养基中，那么通常首先使用商品化蛋白质浓缩滤器，例如Amicon或MilliporePellicon超滤单元浓缩来自此类表达系统的上清液。在任何上述步骤中，可以包括蛋白酶抑制剂诸如PMSF来抑制蛋白水解，而且可以包括抗生素来防止外来污染物的生长。可以使用例如羟磷灰石层析、凝胶电泳、透析和亲和层析来纯化由细胞制备的抗体组合物，优选的纯化技术是亲和层析。蛋白A作为亲和配体的适宜性取决于抗体中存在的任何免疫球蛋白Fc结构域的种类和同种型。蛋白A可用于纯化基于人yl、y2或Y4重链的抗体(Lindmark等，//www"o/,Me仇62:1-13(1983))。蛋白G推荐用于所有小鼠同种型和人y3(Guss等，五MBO乂5:1567-1575(1986))。亲和配体所附着的基质最常用的是琼脂糖，但是可以使用其它基质。物理稳定的基质诸如可控孔径玻璃或聚(苯乙烯二乙烯)苯容许获得比琼脂糖所能获得的更快的流速和更短的加工时间。若抗体包含Ch3结构域，则可使用BakerbondABXTM树脂(J.T.Baker，Phillipsburg,NJ)进行纯化。根据待回收的抗体，也可使用其它蛋白质纯化技术，诸如离子交换柱上的分级、乙醇沉淀、反相HPLC、硅土上的层析、肝素SEPHAROSETM上的层析、阴离子或阳离子交换树脂(诸如聚天冬氨酸柱)上的层析、层析聚焦、SDS-PAGE、和石危S吏4妄沉淀。CRIg拮抗剂的用途本发明的CRIg拮抗剂(包括阻断性抗CRIg抗体及其片段)可用于抑制细胞内病原体的细胞进入和/或自循环清除病原体。如此，本文中的CRIg拮抗剂可用于预防和/或治疗由此类病原体引起的感染性疾病(infectiousdisease)。此类感染性疾病包括但不限于病毒感染性疾病，诸如人免疫缺陷病毒(HIV),曱型、乙型、和丙型肝炎病毒，单纯疱渗病毒(HSV),巨细胞病毒(CMV)，埃巴二氏病毒(EBV)，或人乳头瘤病毒(HPV)感染；由寄生虫引起的疾病，诸如疾原虫属(Plasmodia)各种，利什曼原虫属(Leishmania)各种例如硕大利fl"曼原虫(Leishmaniamajor),血吸虫属(Schistosoma)各种，4,虫属(Trypanosoma)各种)；和细菌感染，诸如由分枝杆菌属(Mycobacteria)特别是结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、麻风分枝杆菌(M.leprae),假结核耶尔森氏菌(Yersiniapseudotuberculosis),鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium),单核细月包增生利斯特氏菌(ListeriaMonocytogenes),链-求菌(Streptococci),大肠杆菌(E.coli)，葡萄球菌(Staphylococci)引起的感染；真菌感染，诸如由假丝酵母属(Candida)各种，曲霉属(Aspergillus)各种、和卡氏肺嚢虫(Pneumocystiscarinii)引起的那些感染性疾病。另外，本发明的CRIg拮抗剂(包括阻断性抗CRIg抗体及其片段)可用于预防不想要的经由补体受体CRIg的红细胞或血小板清除。结果，本文中的拮抗剂可用于溶血性贫血和/或血'j、板减少的预防或治疗。本文化合物的治疗用配制剂可通过将具有期望纯度的所鉴定化合物(诸如抗体)与任选的生理学可接受的载体、赋形剂或稳定剂(iem/"gto"、尸/wrmacewf/co/Sc/e"c^，见上文)混合，以冻干々并或水:容液的形式制备供贮存。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，包括緩沖剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA;糖醇，诸如甘露醇或山梨醇；成盐反荷离子，诸如钠；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEEN、PLURONICS或PEG。用于体'内施用的待使用化合物必须是无菌的。这可容易地通过在冻干和重建之前或之后使用无菌滤膜过滤来实现。治疗用组合物可置于具有无菌存取口的容器中，例如具有皮下注射针可刺穿的塞子的静脉内溶液袋或管形瓶。施用路径依照已知方法，例如通过静脉内、腹膜内、大脑内、肌肉内、36眼内、动脉内或病变内^各径的注射或输注，表面施用，或通过下文所述持续孝奪方文系统。对于大脑内使用，可以通过输注入CNS的液体池中来连续施用化合物，尽管推注也是可接受的。优选将化合物施用入脑室中或以其它方式导入CNS或脊髓液中。可使用连续施用手段诸如泵通过留置导管来实施施药，或者可通过植入(例如大脑内植入)持续释放々某介来施用。更具体的说，可通过长期植入的插管来注射化合物，或者借助渗透微泵长期输注化合物。皮下泵可用于通过通向脑室的小管道来投递蛋白质。可穿过皮肤再填充高度复杂的泵，而无需手术介入就可设定它们的投递速率。牵涉经由完全植入的药物投递系统进行连续脑室内输注或皮下泵装置的合适施用方案和投递系统的例子是那些用于给阿耳茨海默氏病患者和帕金森氏病动物模型施用多巴胺、多巴胺激动剂、和胆石威能激动剂的例子，记载于Harbaugh，J.NeuralTransm.Suppl.，24:271(1987);及DeYebenes等，Mov.Disord"2:143(1987)。持续释放制剂的合适例子包括定型产品形式的半透性聚合物基质，例如薄膜或微胶嚢。持续释放基质包括聚酯、水凝胶、聚交酯(美国专利No.3,773,919,EP58,481)、L-谷氨酸与L-谷氨酸Y乙酯的共聚物(Sidman,等，1983,Biopolymers22:547)、聚(2-羟乙基-曱基丙烯酸酯)(Langer等，1981,J.Biomed.Mater.Res.15:167;Langer,1982,Chem.Tech.12:98)、乙烯-乙酸乙烯(Langer,等，同上)或聚-D-(-)-3-羟基丁酸(EP133，988A)。持续释放组合物还包括脂质体封装的化合物，其可通过本身已知的方法来制备(Epstein等，Proc.Natl.Acad.Sci.82:3688(1985);Hwang等,Proc.Natl.Acad,Sci.USA77:4030(1980);美国专利No.4，485,045和4,544,545;及EP102,324A)。一4殳而言，所述脂质体是小(约200-800埃)单层类型，其中脂质含量大于约30mol.。/。胆固醇，并对所选的比例进行调整以实现最优疗法。活性化合物在治疗上采用的有效量取决于例如治疗目的、施用路径、和患者状况。因而，治疗学家有必要在需要时调整剂量和变更施用路径以获得最佳治疗效果。典型的日剂量的范围可以是约liag/kg至高达100mg/kg或更多，这取决于上文所述因素。典型地，临床医师会施用活性化合物，直至达到修复、维持、和最好重建神经元功能的剂量。此疗法的进展易于通过常规测定法来监测。以下非限制性实施例例示了本发明的更多详情。实施例1:针对muCRIg和huCRIg-短的单克隆抗体的生成如下生成了针对鼠CRIg(muCRIg)的单克隆抗体，即在B6(KO)、鼠Jam46E3(Genentech,Inc,)的足垫中中11次注射单磷酰脂质A/二棒分枝菌酸海藻糖(thehalosedicorynomycolate)佐剂(Corixa,Hamilton,MT)中的2jdg免疫粘附素小鼠(mu)CRIg-mFc(PUR9465,小鼠CRIg融合至小鼠IgGl的C端Fc部分)。将来自小鼠的胭淋巴结与P3X63Ag.U.1(ATCC弁CRL-1957)骨髓瘤细胞融合。使用muCRIg-LFH(PUR9052，小鼠CRIg偶联至亮氨酸拉链、flag和(8x)组氨酸标签)对杂交瘤细胞筛选对muCRIg的结合亲和力。通过有限稀释克隆生成抗体的细胞系。在另一项研究中，如下生成了针对muCRIg和huCRIg-短(huCRIg-short)的单克隆抗体，即通过在B6(KO)小鼠Jam46E3的足垫中ll次注射单磷酰脂质A/二棒分枝菌酸海藻糖佐剂(Corixa,Hamilton,MT)中的muCRIg和huCRIg-短-huFc各2Jig,共免疫muCRIg-hFc(PUR9460，小鼠CRIg带小鼠IgGl的C端Fc部分)和huCRIg-短-huFc(PUR10125,人CRIg短形式带人IgGl的C端Fc部分)。将来自小鼠的胭淋巴结与P3X63Ag.U.l骨髓瘤细胞融合。使用muCRIg和huCRIg-短二者对杂交瘤细胞筛选对muCRIg、huCRIg-短、或二者的结合亲和力。通过有限稀释克隆生成抗体的细胞系。图4和图5中显示了杂交瘤上清液的表征，关于它们阻断小鼠CRIg-iC3b/C3b或人CRIg-iC3b/C3b结合的能力。实施例2:针对muCRIg和huCRIg-短的单克隆抗体的进一步表征对iC3b结合与抗CRIg阻断性抗体一起温育的表达CRIg的CHO细胞的抑制将400，000个CHO细胞用抗体于4。C温育25分钟，并清洗1次。添加5pg/ml(27nM)iC3b,并于4。C温育30分钟，清洗并在FACScan上分析。结果显示于图6。对iC3b结合CRIg+腹膜巨噬细胞的阻断将腹膜细胞灌洗，离心一次并重悬于含1%明胶、lmM€&++和1111]^Mg++(0￥8++)的佛罗拿(>^0肌1)緩冲液。在有或无不含内毒素的单克隆抗体(抗CRIgmAb,克隆2H1，和同种型对照)的情况中温育细胞。温育30分钟后，将细胞与不同浓度的A488标记的iC3b(AdvencedResearchTechnologiesInc.)—起温育。然后对细胞封闭FcR介38导的结合(如上所述)并对17C9-A647和F4/80-PE染色。评估补体蛋白质对CRIg《F4/80，口CRIgMF4/80田胞的结合。结果显示于图7。在体外对单核细胞增生利斯特氏菌结合CRIg+腹膜巨噬细胞的抑制将腹膜细胞灌洗并在有或无M1/70或2H1单克隆抗体的情况中温育。将LM-A488悬浮在Hank氏平衡盐溶液(HBSS)中，与C3敲除或野生型小鼠血清(10%)混和并于37。C旋转30分钟。然后将经血清调理的LM-A488添加至RPM并在摇床上于37。C混和30分钟。将细胞在冰上冷却，封闭FcR介导的结合并对17C9-A647和F4/80-PE染色。将细胞再与7-AAD—起温育以检测死细胞和碎片。在冰上温育数分钟后，将细胞清洗两次以除去任何未结合的7-AAD和抗体。将细胞悬浮在HBSS中并用1Q/。甲醛固定16小时，之后在4色流式细胞仪上运行。结果显示于图8。对自循环清除单核细胞增生利斯特氏菌的抑制在单核细胞增生利斯特氏菌感染前那天，小鼠接受100(ig14G8阻断性抗体的两次注射。注射相隔6小时。一天后，用2x107CFU单核细胞增生利斯特氏菌感染小鼠。IO分钟后采集血液并通过对在脑心浸液板上培养过夜的菌落计数来分析细菌的存在。结果显示于图9。对自循环清除金黄色葡萄球菌菌林M的抑制此实验中所使用的方法如上所述，只是i.v.注射2x107CFU金黄色葡萄球菌菌抹M，代替单核细胞增生利斯特氏菌。图10所示结果显示了所测试的CRIg阻断性抗体抑制自循环清除金黄色葡萄球菌菌林M，导致肝中的细菌载荷降低及心、脾和肾中的细菌载荷升高。在被动关节炎小鼠模型中阻断性小鼠CRIg抗体处理抑制爪肿胀(图11A,B):在无菌、无病原体的条件下饲养所有动物，而且动物实验得到了龄Balb/c'j、鼠(TheJacksonLaboratory)中注射促关节炎单克隆抗体混合物(Chemicon)来诱导关节炎。简言之，在小鼠中静脉内注射2mg抗II型胶原抗体，3天后腹膜内注射25ngLPS。在抗体注射前那天开始用4mg/kgCRIg-Fc或针对gp-120的抗体(IgGl同种型，对照-Fc)处理小鼠。由受过训练的人在不知道处理性质的情况下实施临床评分。结合小鼠和人CRIg二者的阻断性抗体将表达鼠CRIg(muCRIg)或短型和长型人CRIg(huCRIg(S)、huCRIg(L))的CHO细胞与Alexa-488偶联的抗体一起于4。C温育25分钟，清洗，并在FACScan上分析。结果显示于图12。用交叉阻断性单克隆抗体抑制小鼠和人CRIg结合C3片段。对iC3b结合与抗CRIg阻断性抗体一起温育的表达小鼠CRIg的CHO细胞和表达人CRIg的THP-1细胞的抑制将400,000个CHO细胞或THP-1用抗体于4。C包被25分钟并清洗1次。添加5ng/ml(27nM)iC3b并于4。C温育30分钟。清洗，并在FACScan上分析。结果显示于图13。表l总结了CRIg抗体的表征，其基于对Maxisorp板上包被的CRIg融合蛋白的结合、对细胞表面上CRIg的结合(通过流式细胞术监测)、及对CRIg-C3b/iC3b相互作用的阻断。编码抗CRIg抗体的cDNA根据布达佩斯条约(BudapestTreaty)保藏于美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,10801UniversityBlvd.,Manassas,VA20110-2209,USA)(ATCC)。材料ATCC保藏号保藏曰14G8PTA-82982007年3月27日3D10PTA-82992007年3月27日2H1PTA-83002007年3月27日这些保藏是依据国际承认用于专利程序的微生物保藏布达佩斯条约(BudapestTreaty)及其(布达佩斯条约)实施细则的规定进行的。这保证了自保藏之日起保存保藏的存活培养物30年。保藏物可根据布达佩斯条约的条款通过ATCC获得，并服从Genentech公司与ATCC之间的协议，它保证了在有关美国专利授权后或者在任何美国或外国专利申请向公众公开后，以两者中居先者为准，公众可永久且不受限制的获得保藏培养物的后代，而且保证了依据35USC§122及依照它的管理章程(包括37CFR§1.14,特别要提及886OG638)由美国专利和商标局长批准的个人将有资格获得保藏培养物的后代。本申请的受让人已同意，若保藏材料的培养物在合适条件下培养时死亡、丟失或遭到破坏，则他将在接到通知后迅速用同一培养物的另一份材料更换。所保藏材料的可获得性并不解释为对违反任何政府机构依据其专利法所授予的权利实施本发明的许可。在此通过述及明确地完整收录本说明书中所引用的所有专利和参考文献。虽然已经参照具体实施方案描述了本发明，但是要理解，本发明不限于此类实施方案。相反，本发明意图覆盖所附权利要求的精神和范围内所包括的各种修改和等效方案。权利要求1.CRIg拮抗剂，且阻断天然序列CRIg多肽结合C3b和/或iC3b，并抑制CRIg介导的、细胞内病原体的补体依赖性细胞进入或自循环清除细胞内病原体。2.权利要求l的CRIg拮抗剂，其是抗CRIg抗体或其片段。3.权利要求2的CRIg拮抗剂，其是单克隆抗体或其片段。4.权利要求3的CRIg拮抗剂，其中所述抗体片段选自下组Fab，Fab，，F(ab，)2，scFv,(scFv)2，dAb,互补决定簇区(CDR)片段，线性抗体，单链抗体分子，微抗体，双抗体，和自片段抗体形成的多特异性抗体。5.权利要求3的CRIg拮抗剂，其是本质上与选自下组的抗CRIg抗体结合相同表位的单克隆抗体或其片段14G8(ATCC保藏号PTA-8298)，3D10(ATCC保藏号PTA-8299)和2H1(ATCC保藏号PTA-8300)。6.权利要求3的CRIg拮抗剂，其是选自下组的单克隆抗体或其片段14G8(ATCC保藏号PTA-8298)，3D10(ATCC保藏号PTA-8299)和2H1(ATCC保藏号PTA画8300)。7.权利要求3的CRIg拮抗剂，其中所述抗体或其片段是嵌合的、人源化的或人的。8.权利要求7的CRIg拮抗剂，其中所述抗体是人源化抗体或其片段。9.权利要求l的CRIg拮抗剂，其中所述细胞内病原体选自下组病毒，寄生虫，纟田菌，真菌和朊病毒。10.权利要求9的CRIg拮抗剂，其中所述病原体是RNA或DNA病毒。11.权利要求10的CRIg拮抗剂，其中所述表达选自下组人免疫缺陷病毒(HIV)，曱型、乙型、和丙型肝炎病毒，单纯疱渗病毒(HSV)，巨细胞病毒(CMV)，埃巴二氏病毒(EBV)，和人乳头瘤病毒(HPV)。12.权利要求9的CRIg拮抗剂，其中所述病原体是寄生虫。13.权利要求9的CRIg拮抗剂，其中所述病原体是细菌。14.权利要求9的CRIg拮抗剂，其中所述病原体是真菌。15.权利要求9的CRIg拮抗剂，其中所述病原体是朊病毒。16.编码权利要求3的抗体的核酸或其片段。17.—种组合物，其包含与载体混和的权利要求l或3的CRIg拮抗剂。18.权利要求17的组合物，其是药物组合物。19.用于抑制CRIg介导的、细胞内病原体的补体依赖性细胞进入的方法，包括对有所需要的哺乳动物受试者施用有效量的CRIg拮抗剂。20.权利要求19的方法，其中所述哺乳动物受试者是人。21.权利要求20的方法，其中所述CRIg拮抗剂是抗CRIg抗体或其片段。22.用于自哺乳动物受试者的循环清除细胞内病原体的方法，包括对所述受试者施用有效量的CRIg拮抗剂。23.权利要求22的方法，其中所述哺乳动物受试者是人。24.权利要求23的方法，其中所述CRIg拮抗剂是抗CRIg抗体或其片段。25.用于预防或治疗传染病的方法，包括对有所需要的哺乳动物受试者施用有效量的CRIg拮抗剂。26.权利要求25的方法，其中所述CRIg拮抗剂是抗CRIg抗体或其片段。27.—种试剂盒，其包含CRIg拮抗剂和关于施用所述CRIg拮抗剂以治疗传染病的指示。全文摘要本发明关注特异性结合最近发现的巨噬细胞特异性受体CRIg的阻断性抗体，及其预防细胞内病原体(诸如病毒、细菌或寄生虫)进入细胞以及预防不希望的红细胞和血小板清除的用途。文档编号C07K16/18GK101675078SQ200880014866公开日2010年3月17日申请日期2008年4月25日优先权日2007年5月1日发明者门诺·范卢克伦坎佩恩申请人:健泰科生物技术公司