专利名称：一种青黛酮的制备方法
技术领域：
本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及一种青黛酮的制备方法。
背景技术：
青黛酮(Qingdainone)为生物碱类物质，暗紫色细针晶，CAS号97457-31-3，分子式 C23H13N3O2,分子量 363.38,来源于爵床科(Acanthaceae)马兰 BaphicacanthusCusia(Nees)Brem.的莖叶。研究表明，青黛酮具有抗肿瘤活性。对小鼠Lewis肺癌及黑色素瘤细胞株B16均有抑制作用。马兰味辛，性微寒。归肝、肾、胃、大肠经。能清热解毒，散瘀止血，利湿，消食，消积。用于感冒发烧，咳嗽，急性咽炎，扁桃体炎，流行性腮腺炎，传染性肝炎，胃、十二指肠溃瘍，小儿疳积，肠炎，痢疾，吐血，崩漏，月经不调；外用治疮疖肿痛，乳腺炎，外伤出血；痢疾或湿热腹泻；咽喉肿痛，痈肿疮疡；血热衄血、便血；湿热黄疸；或水肿，小便不利；饮食积滞，脘腹胀满。通过文献检索，国内尚未见采用超临界流体萃取法从马兰的茎叶中制备青黛酮的相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种青黛酮的制备方法，工艺简单、提取率高，整个过程具有安全、无毒等优点。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:
一种青黛酮的制备方法，其特征在于以下步骤:
a.取马兰的茎叶粉碎，加入超临界萃取釜中，95%乙醇溶液为夹带剂，在萃取压力28-35MPa、温度45-62 °C的条件下，通入液态CO2萃取50_100min，在压力6.5_9MPa，温度30-40°C解析得萃取物；
b.上述萃取物用甲醇溶解，加少量中性氧化镁拌样，挥干溶剂，干法上氧化镁柱，石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱，收集洗脱液减压浓缩得粗提物；
c.上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，冷藏结晶，得青黛酮。步骤a中所述CO2流量为3.5_5ml/g生药/min，夹带剂用量为总萃取溶剂的10-15%。步骤b中所述中性氧化镁为200-300目，石油醚-丙酮体积比为20-3:3。步骤c中所述高速逆流色谱的溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水组合，比例为5-7:8-10:3-4:5-7，下相为流动相，上相为固定相。本发明的积极效果是:
1.采用超临界CO2萃取，高效无溶剂残留，对环境无污染；
2.采用柱层析纯化，操作简单，处理量大；3.采用高速逆流色谱分离，分离速度快，样品无损失，溶剂可以循环使用，适合连续制备。
具体实施方式
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下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明。实施例1:
马兰的茎叶粉碎，取Ikg加入超临界萃取釜中，通入液态CO2，设置萃取压力28MPa、温度45°C，达到上述参数后，调整液态CO2流量为4ml/g生药/min，95%乙醇溶液为夹带剂，夹带剂用量为总萃取溶剂的12%，动态萃取90min，在压力6.5MPa、温度40°C下解析，所得萃取物加甲醇溶解后，加少量中性氧化镁拌样，挥干溶剂，干法上氧化镁柱，石油醚-丙酮20: 3、12:3、3:3混合溶剂梯度洗脱，收集洗脱液减压浓缩得粗提物。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按7:9:4:5混合，混合充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机IOOOrpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为2.5ml/min,同时用固定相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，冷藏流分，得结晶物，经HPLC检测，纯度 97.2%ο实施例2:
马兰的茎叶粉碎，取2kg加入超临界萃取釜中，通入液态CO2，设置萃取压力30MPa、温度50°C，达到上述参数后，调整液态CO2流量为3.5ml/g生药/min，95%乙醇溶液为夹带剂，夹带剂用量为总萃取溶剂的10%，动态 萃取50min，在压力9MPa、温度35°C下解析，所得萃取物加甲醇溶解后，加少量中性氧化镁拌样，挥干溶剂，干法上氧化镁柱，石油醚-丙酮18:3、10:3、3:3混合溶剂梯度洗脱，收集洗脱液减压浓缩得粗提物。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按5:8:3:7混合，混合充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机900rpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为3ml/min，同时用固定相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，冷藏流分，得结晶物，经HPLC检测，纯度98.0%。实施例3:
马兰的茎叶粉碎，取2kg加入超临界萃取釜中，通入液态CO2，设置萃取压力35MPa、温度62°C，达到上述参数后，调整液态CO2流量为5ml/g生药/min，95%乙醇溶液为夹带剂，夹带剂用量为总萃取溶剂的15%，动态萃取lOOmin，在压力8MPa、温度30°C下解析，所得萃取物加甲醇溶解后，加少量中性氧化镁拌样，挥干溶剂，干法上氧化镁柱，石油醚-丙酮17:3、9:3、3:3混合溶剂梯度洗脱，收集洗脱液减压浓缩得粗提物。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按5:10:3:5混合，混合充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机800rpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为2.5ml/min,同时用固定相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，冷藏流分，得结晶物，经HPLC检测，纯度 97.1%。
权利要求
1.一种青黛酮的制备方法，其特征在于以下步骤: a.取马兰的茎叶粉碎，加入超临界萃取釜中，95%乙醇溶液为夹带剂，在萃取压力28-35MPa、温度45-62 °C的条件下，通入液态CO2萃取50_100min，在压力6.5_9MPa，温度30-40°C解析得萃取物； b.上述萃取物用甲醇溶解，加少量中性氧化镁拌样，挥干溶剂，干法上氧化镁柱，石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱，收集洗脱液减压浓缩得粗提物； c.上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，冷藏结晶，得青黛酮。
2.据权利要求1所述青黛酮的制备方法，其特征在于步骤a中所述CO2流量为3.5-5ml/g生药/min，夹带剂用量为总萃取溶剂的10_15%。
3.根据权利要求1所述青黛酮的制备方法，其特征在于步骤b中所述中性氧化镁为200-300目，石油酿-丙丽体积比为20-3:3。
4.根据权利要求1所述青黛酮的制备方法，其特征在于步骤c中所述高速逆流色谱的溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水组合，比例为5-7:8-10:3-4:5-7，下相为流动相，上相为固定相。`
全文摘要
本发明公开了一种青黛酮的制备方法。方法步骤如下a.取马兰的茎叶粉碎，加入超临界萃取釜中，乙醇为夹带剂进行超临界CO2萃取；b.萃取物采用中性氧化镁柱层析进行纯化，石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱，收集洗脱液减压浓缩得粗提物；c.粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，冷藏结晶，得青黛酮。采用本发明制备青黛酮，工艺简单、效率高，所得产品含量高，适合工业化生产。
文档编号C07D487/04GK103242320SQ20131018871
公开日2013年8月14日 申请日期2013年5月21日 优先权日2013年5月21日
发明者刘东锋, 万冬梅 申请人:南京泽朗医药科技有限公司