一种慢性淋巴细胞白血病患者NOTCH1基因突变检测组合物的制作方法

技术特征：

1.一种慢性淋巴细胞白血病患者NOTCH1基因突变检测组合物，其特征在于，所述慢性淋巴细胞白血病患者NOTCH1基因突变检测组合物，包括以下内容：

(1)针对NOTCH1基因34号外显子PEST区域的直接测序法检测引物

NOTCH1 Ex34_F：5′-CTGGCGGTGCACACTATTCTG-3′，

NOTCH1 Ex34_R：5′-GCGCGCCGTTTACTTGAAG-3′；

(2)HRM反应引物-1

NOTCH1 Ex34a_F：5′-ACAGCTACTCCTCGCCTGTG-3′，

NOTCH1 Ex34a_R：5′-GTCGGAGACGTTGGAATGCG-3′；

(3)HRM反应引物-2

NOTCH1 Ex34b_F：5′-GTGCACACTATTCTGCCCCAG-3′，

NOTCH1 Ex34b_R：5′-GAGTAGCTGTGCTGCGAGG-3′。

2.如权利要求1所述的慢性淋巴细胞白血病患者NOTCH1基因突变检测组合物，其特征在于，所述直接测序法的聚合酶链式反应扩增体系是：每20μl体系包含10×platinum缓冲液2μl，10mM dNTP mix 0.5μl，20pmol/μl NOTCH1 Ex34_F 0.5μl，20pmol/μl NOTCH1 Ex34_R0.5μl，Platinum DNA聚合酶0.1μl，50mM硫酸镁0.6μl，100ng基因组DNA和超纯水。

3.如权利要求2所述的慢性淋巴细胞白血病患者NOTCH1基因突变检测组合物，其特征在于，所述直接测序法的PCR扩增条件是：第一阶段：94℃，5分钟；第二阶段：94℃，30秒，60℃，30秒，72℃，45秒；循环40次；第三阶段：72℃，10分钟延伸。

4.如权利要求1所述的慢性淋巴细胞白血病患者NOTCH1基因突变检测组合物，其特征在于，所述HRM反应体系1为：每20μl体系包含2×Fast qPCR Master Mix 10μl，5pmol/μl NOTCH1Ex34a_F 0.8μl，5pmol/μl NOTCH1 Ex34a_R 0.8μl，100ng基因组DNA和超纯水；

HRM反应体系2为：每20μl体系包含2×Fast qPCR Master Mix 10μl，5pmol/μl NOTCH1 Ex34b_F 0.8μl，5pmol/μl NOTCH1Ex34b_R 0.8μl，100ng基因组DNA和超纯水。

5.如权利要求4所述的慢性淋巴细胞白血病患者NOTCH1基因突变检测组合物，其特征在于，所述HRM反应的扩增和溶解条件为：第一阶段：95℃，2分钟；第二阶段：95℃，5秒，60℃，35秒，72℃，25秒，50个循环；HRM条件为：95℃，1分钟，40℃，1分钟，65℃，1秒，从65℃起以0.02℃/秒速率升温至95℃，每度采集25个单信号，降温：40℃，30秒。

6.如权利要求1所述的慢性淋巴细胞白血病患者NOTCH1基因突变检测组合物，其特征在于，所述引物对(1)的产物长度在325～328bp。

7.如权利要求1所述的慢性淋巴细胞白血病患者NOTCH1基因突变检测组合物，其特征在于，所述引物对(2)的产物长度在129～132bp。

8.如权利要求1所述的慢性淋巴细胞白血病患者NOTCH1基因突变检测组合物，其特征在于，所述引物对(3)的产物长度为116bp。