融合基因ttty15-usp9y及其作为前列腺癌标志物的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于分子生物学领域，具体地，本发明涉及尿液长链非编码TTTY15-USP9Y 及其作为前列腺癌标志物的应用。
【背景技术】
[0002] 前列腺癌（Prostatic Cancer，PCa)是一种严重威胁男性健康的恶性肿瘤，其发病 及死亡率高峰在70岁左右，占全球肿瘤发病率第二位、死亡率第六位。我国PCa的发病率 近年来一直处于显著的上升趋势。在北京、上海、广州等医学、经济发达城市，PCa发病率已 位于当地十大常见肿瘤之列。来自上海市疾病控制中心的资料进一步显示，PCa的发病率 自2002年起已跃居男性泌尿生殖系恶性肿瘤的首位，从1990年2. 6/10万上升到2009年 32. 23/10万，跃居男性恶性肿瘤的第5位。流行病学数据还显示，中国PCa发病率已从1993 年的1. 71/10万男性人口增加到2005年的7. 9/10万男性人口，年增幅13%。
[0003] PCa-旦突出包膜就失去了根治手术的机会，其患者生存时间大大下降，因此，PCa 的早期诊断就显得尤为重要。血清PSA检测是目前应用最为广泛的PCa早期诊断分子标 志物，它的应用大大降低了 PCa特异性死亡。但是，PSA是前列腺特异性而非PCa特异性 分子标记物，诸如如列腺炎、良性如列腺增生等都能引起PSA的升尚。在PSA的"诊断灰 区"（PSA4-10ng/ml)，其诊断阳性率仅为25-40%，这就导致了众多的不必要的穿刺，同时， 也给穿刺患者带来了经济负担和精神负担。所以，临床上亟需找到更具敏感性和特异性的 分子标志物。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的为提供一种前列腺癌标志物融合基因（gene-fusion) TTTY15-USP9Y 及其应用，即尿液融合基因 TTTY15-USP9Y作为前列腺癌标志物的应用。
[0005] 在本发明的第一方面，提供了一种从尿液中分离的融合基因 TTTY15-USP9Y，所 述融合基因 TTTY15-USP9Y序列SEQ ID N0:1所示序列的全长或其片段。本发明所检测 的特异性的融合基因片段序列如SEQ ID NO :1所示，其由两个基因 TTTY15(基因 ID为 64595 ;NCBI Reference Sequence:NR_001545. 2 ;其全长序列数据库链接为：http://www. ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/142379120)以及基因 USP9Y(基因 ID:8287, NCBI Reference Sequence:NG_008311. 1,其基因全长序列数据库链接为：http://www. ncbi. nlm. nih. gov/ nuccore/195228748)在转录阶段特异性地契合而成。
[0006] 本发明中，所述融合基因 TTTY15-USP9Y序列为SEQ ID NO :1所示序列的全长或其 片段。所述片段包括融合基因 TTTY15-USP9Y的任意一个PCR片段，该任意一个PCR片段为 PCR反应产物，因不同的PCR引物可获得不同的PCR产物。
[0007] SEQ ID NO : 1 为：
[0008] CTCATCACCTGGAGTCCGTGTAAGCTCGGCGACAGCCCTAGCAGCGAGGCCAAAACAGTTTGGGAAGAA AGAAAACCTAAAGTATTTGCCGTTGGTGATTCAAGGGAATCAAACTTGACGTATGGAGCCAAGAAAGCCCTTGGAAA AACTGGCCTCATATTTTGTGTACACAGTCCCTGTACAGGGTTTCTGACCTGTGAIgagcttggagataattctggtg gctgtgtggagtatgtgttggaggtattaaattttcacagtatatataaggcagcaattgataggcctttcacagat tcttctgataactacataaagagacaaaaaaaagaaaaaagagcaaagatctgtgctgtgtcaagtatgacagccat cactcatggctctccagtaggagg
[0009] (其中分隔符" I "之前的片段来自TTTY15,分割后" I "之后的片段来自USP9Y)
[0010] 在另一优选例中，所述融合基因 TTTY15-USP9Y分离自人的尿液。
[0011] 在另一优选例中，所述尿液为前列腺按摩后尿液。所述尿液还包括非前列腺按摩 后尿液。
[0012] 在另一优选例中，所述融合基因 TTTY15-USP9Y提取自尿液离心后的尿沉渣。
[0013] 在本发明的第二方面，提供了一种分离的前体融合基因 TTTY15-USP9Y，所述的前 体融合基因能在人细胞内剪切并表达成第一方面所述的融合基因 TTTY15-USP9Y。
[0014] 在另一优选例中，所述的融合基因 TTTY15-USP9Y前体分离自人前列腺按摩后尿 液，还可以分离自非前列腺按摩后尿液。
[0015] 在本发明的第三方面，提供了一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸能被转录成第 一方面所述的融合基因 TTTY15-USP9Y。
[0016] 在另一优选例中，所述多核苷酸能被人细胞转录成第一方面所述的融合基因 TTTY15-USP9Y。
[0017] 在另一优选例中，所述的多核苷酸具有式（I)所示的结构：
[0018] Seq正向-X-Seq反向式⑴，
[0019] 式（I)中，
[0020] Seq正自为能在人细胞中表达成所述的融合基因 TTTY15-USP9Y的核苷酸序列；
[0021] Seqfi自为与Secte自基本上互补或完全互补的核苷酸序列；
[0022] X为位于Seq正向和Seq反向之间的间隔序列，并且所述间隔序列与Seq正向和Seq反向 均不互补；并且，式（I)所示的结构在转入人细胞后，形成式（II)所示的二级结构：
[0023]
【主权项】
1. 一种融合基因TTTY15-USP9Y，其特征在于，所述融合基因的序列如SEQ ID N0:1所 示；所述融合基因TTTY15-USP9Y为SEQ ID NO :1所示序列的全长或其片段。
2. 如权利要求1所述的融合基因TTTY15-USP9Y，其特征在于，所述融合基因 TTTY15-USP9Y分离自人的尿液。
3. -种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸能被转录成权利要求1所述的融 合基因 ITTY15-USP9Y。
4. 一种载体，其特征在于，其含有权利要求1所述融合基因TTTY15-USP9Y或权利要求 3所述的多核苷酸。
5. 权利要求1所述的融合基因TTTY15-USP9Y作为前列腺癌检测的标志物的应用。
6. 权利要求1所述的融合基因TTTY15-USP9Y在制备用于检测前列腺癌的芯片、制剂或 试剂盒中的应用。
7. -种芯片、制剂或试剂盒，其特征在于，其含有如权利要求1所述的融合基因 TTTY15-USP9Y或如权利要求3所述的多核苷酸。
8. -种融合基因TTTY15-USP9Y芯片，其特征在于，所述融合基因TTTY15-USP9Y芯片包 括： 固相载体；以及有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针特异 性地对应于权利要求1所述融合基因TTTY15-USP9Y所示的部分或全部序列。
9. 权利要求7或8所述芯片在制备用于检测前列腺癌的试剂盒中的应用。
10. 如权利要求9所述的应用，其特征在于，通过融合基因TTTY15-USP9Y芯片检测待测 对象的尿液中的融合基因TTTY15-USP9Y含量；所述检测步骤包括：先获得分离自待测对象 尿液的RNA样品，在所述RNA上设置标记物，将其与所述融合基因TTTY15-USP9Y芯片接触， 杂交形成寡核苷酸探针-RNA二元复合物，检测得到融合基因TTTY15-USP9Y含量。
11. 一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求7或8所述的芯片。
【专利摘要】本发明公开了一种基于尿液中的融合基因(gene-fusion)TTTY15-USP9Y及其作为前列腺癌标志物的应用、以及在制备用于检测前列腺癌的芯片或制剂或试剂盒中的应用。
【IPC分类】C40B40-06, C12Q1-68, C12N15-113
【公开号】CN104611336
【申请号】CN201510067493
【发明人】孙颖浩, 任善成, 朱亚生
【申请人】上海长海医院
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年2月9日