已被分离。根据本发明，术语"经分离核酸"是指该核 酸：⑴被体外扩增，例如通过聚合酶链式反应（PCR)来实现，（ii)通过克隆被重组产生， (iii)被纯化，例如通过切割和凝胶电泳分离来实现，或者（iv)被合成，例如通过化学合成 来实现。经分离核酸是可用于进行重组DNA技术操作的核酸。
[0211] 根据本发明，核酸可以单独存在或与另一些核酸（其可以是同源的或异源的）组 合存在。在一些优选的实施方案中，核酸与表达调控序列功能性连接，所述表达调控序列可 以与所述核酸是同源的或异源的，其中术语"同源的"是指核酸在自然条件下也与该表达调 控序列功能性连接，而"异源的"是指核酸在自然条件下不与该表达调控序列功能性连接。
[0212] 核酸（如表达RNA和/或蛋白质或肽的核酸）与表达调控序列彼此是"功能性"连 接的，如果它们以如下方式彼此共价连接的话：所述核酸的表达或转录受所述表达调控序 列的调控或影响。如果核酸（其含有与编码序列功能性连接的表达调控序列）将被翻译成 有功能的蛋白质，诱导所述表达调控序列会导致所述核酸的转录，而不会造成编码序列的 移码或者所述编码序列不能被翻译成预期的蛋白质或肽。
[0213] 根据本发明，术语"表达调控序列"包括启动子、核糖体结合位点、增强子以及调节 基因转录或mRNA翻译的其它调控元件。在本发明一些特别的实施方案中，所述表达调控序 列可以被调节。表达调控序列的确切结构可因物种或细胞类型的功能而不同，但一般包含 分别参与起始转录和翻译的5'-非转录序列以及5'-和3'-非翻译序列，例如TATA盒、加 帽序列、CAAT序列等。更特别地，5' -非转录表达调控序列包含启动子区域，其包含用于转 录调控功能性连接之核酸的启动子序列。表达调控序列还可包括增强子序列或上游激活序 列。
[0214] 根据本发明，术语"启动子"或"启动子区域"涉及如下核酸序列，其位于所表达 核酸序列的上游（5'）并通过为RNA聚合酶提供识别和结合位点来调控该序列的表达。所 述"启动子区域"还可包含针对另一些因子的识别和结合位点，所述因子参与基因转录的调 节。启动子可以调控原核基因或真核基因的转录。另外，启动子可以是"诱导型的"（其可 以响应于诱导剂而起始转录）或"组成型的"（如果转录不受诱导剂调控的话）。如果不存 在诱导剂，则受诱导型启动子调控的基因不表达或者仅很低程度表达。在诱导剂存在时，所 述基因被开启或者说其转录水平提高。这一般由特异性转录因子的结合来介导。
[0215] 本发明优选的启动子包括SP6、T3和17聚合酶的启动子，人U6RNA启动子、CMV启 动子及其（例如CMV)人工杂合启动子（其一部分或多个部分与另外细胞蛋白质（例如人 GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶））之基因启动子的一部分或多个部分融合，并且包含或不包 含（一个或多个）额外内含子。
[0216] 根据本发明，术语"表达"以其最一般的含义使用，并包括产生RNA或者产生RNA和 蛋白质/肽。其还包括核酸的部分表达。此外，可进行瞬时或稳定表达。
[0217] 在一个优选的实施方案中，根据本发明，核酸分子存在于载体中，并视情况带有调 控该核酸表达的启动子。本文使用的术语"载体"以其最一般的含义使用，并包括其核酸能 够使所述核酸例如被引入原核和/或真核细胞并视情况被整合进基因组中的任何中介运 载体（vehicle)。这种载体优选地在细胞中复制和/或表达。载体包括质粒、噬菌粒、噬菌 体或病毒基因组。本文使用的术语"质粒" 一般地涉及可独立于染色体DNA进行复制的染 色体外遗传物质构建体，通常是环状DNA双链体。
[0218] 作为用于表达抗体的载体，可使用抗体重链和轻链存在于不同载体中的载体类 型，或者重链和轻链存在于同一载体中的载体类型。
[0219] 应当理解，本文给出的有关特异性核酸和氨基酸序列（例如所述序列表中所示的 序列）的教导还涉及对所述特异性序列进行修饰，所得序列在功能上等同于所述特异性序 列，例如表现出与所述特异性氨基酸序列一致或类似特性的氨基酸序列以及所编码的氨基 酸序列表现出与由所述特异性核酸序列编码之氨基酸序列一致或类似特性的核酸序列。类 似地应当理解，本文给出的有关特异性抗体或生产特异性抗体的杂交瘤的教导还涉及下述 抗体，所述抗体的特征是氨基酸序列和/或核酸序列与特异性抗体的氨基酸序列和/或核 酸序列相比被修饰，但是功能上等同的。一个重要的特性是保留了抗体与其靶标的结合或 者说维持了抗体的效应物功能。优选地，当针对特异性序列进行修饰的序列取代了所述特 异性序列时，所述经修饰序列保留了所述抗体与GT468的结合以及优选地如本文所述之抗 体的功能（例如CDC介导的裂解或ADCC介导的裂解）。
[0220] 本领域技术人员应理解，可特别地对CDR、高变区和可变区的序列进行修饰而不丧 失与GT468结合的能力。例如，CDR区域与本文指明的抗体区域一致或高度同源。"高度同 源"是指，在⑶R中可进行1~5处、优选1~4处（例如1~3处或1~2处）替换。此 外，可对高变区和可变区进行修饰使它们显示与本文指明的抗体区域基本同源。
[0221] 应当理解，本文所述的特异性核酸还包括为了在特定宿主细胞或生物体中优化密 码子使用而进行修饰的核酸。生物体之间密码子使用的差异可引起与异源基因表达有关的 多种问题。通过改变原始序列的一个或多个核苷酸进行密码子优化可导致待表达所述核酸 的同源或异源宿主中核酸表达的优化（特别是对翻译效率的优化）。例如，如果根据本发 明使用来源于人并编码抗体恒定区和/或框架区的核酸（例如用于制备嵌合或人源化的抗 体），可优选地为了优化密码子使用而修饰所述核酸，特别是如果所述核酸（其任选地与异 源核酸（例如源自本文所述之其它生物的核酸）融合）将在非人生物（例如小鼠或仓鼠） 的细胞中表达的话。例如，所述编码人的轻链和重链恒定区的核酸序列（如SEQ ID N0 :19 和20分别所示的序列）可被修饰为包含一个或多个（优选地至少1、2、3、4、5、10、15、20个， 以及优选地多达1〇、15、20、25、30、50、70或100或更多个）核苷酸替换，其导致密码子使用 的优化但不引起氨基酸序列的改变。这样的核苷酸替换优选地涉及SEQ ID No :19和20中 分别的核苷酸替换，其分别选自SEQ ID No :19和20的以下比对中所示的替换（其经修饰 的对应物不引起所编码氨基酸序列的改变），或者涉及分别编码人的轻链和重链恒定区的 另一些核酸序列中相应位置的对应替换。优选地，SEQ ID No :19和20的以下比对中分别 所示的所有替换（其经修饰的对应物不引起所编码氨基酸序列的改变）分别由编码人的轻 链和重链恒定区的核酸序列产生。
[0222] SEQ ID N0 :19 和 SEQ ID N0 :21 的比对：
【主权项】
1. 能够与GT468结合并具有一种或多种以下活性的抗体： (i) 杀死表达GT468的肿瘤细胞， (ii) 抑制表达GT468的肿瘤细胞的增殖， (iii) 抑制表达GT468的肿瘤细胞的集落形成，和 (iv) 抑制表达GT468的肿瘤细胞的转移。
2. 权利要求1所述的抗体，其中所述一种或多种活性通过所述抗体与所述细胞所表达 GT468之胞外结构域的结合来诱导。
3. 权利要求1或2所述的抗体，其中所述表达GT468的肿瘤细胞是癌细胞。
4. 权利要求3所述的抗体，其中所述癌细胞来自于选自以下的癌症：乳腺癌、肺癌、胃 癌、卵巢癌、肝细胞癌、结肠癌、胰腺癌、食管癌、头颈癌、肾癌尤其是肾细胞癌、前列腺癌、肝 癌、黑素瘤、肉瘤、骨髓瘤、神经母细胞瘤、胎盘绒毛膜癌、宫颈癌和甲状腺癌，及其转移形 式，和肺中的转移癌。
5. 权利要求1至4中任一项所述的抗体，其是单克隆抗体、嵌合抗体、人抗体或人源化 抗体，或者抗体片段。
6. 权利要求1至5中任一项所述的抗体，其中GT468具有SEQ ID NO :2的氨基酸序列。
7. 权利要求1至6中任一项所述的抗体，其中所述抗体与GT468特异性结合。
8. 权利要求1至7中任一项所述的抗体，其与GT468的天然表位结合。
9. 权利要求1至8中任一项所述的抗体，其可通过包括以下步骤的方法来获得：用含 有选自SEQ ID NO :2-10和35-82之氨基酸序列的蛋白质或肽或者其免疫原性片段或衍 生物、或者表达所述蛋白质或肽或者其免疫原性片段或衍生物的核酸或宿主细胞来免疫动 物。
10. 选自以下的抗体： (i) 由以如下登记号保藏的克隆所产生的或可由所述克隆获得的抗体： DSM ACC2822 (4E9-1H9), DSM ACC2826 (9B6-2A9), DSM ACC2824(59D6-2F2), DSM ACC2825 (61C11-2B5), DSM ACC2823 (78H11-1H6), DSM ACC2895 (22-1A-1), DSM ACC2893 (22-2A-1), DSM ACC2896 (22-9B-1), DSM ACC2897 (23-33A-1), DSM ACC2891 (23-19A-1), DSM ACC2894 (FI1#33F7D12), DSM ACC2892(4A12 2D4 1A10), DSM ACC2898(4E9 1D12 2D4), DSM ACC2961(42H11 1C11 2B2), DSM ACC2962(51G6 2H3 2B4)， DSM ACC2943(16-5B-1)， DSM ACC2956(20-11A-1)， DSM ACC2947(29-1A_2)， DSM ACC2964(29-8B-1)，DSM ACC2959(35-48B-1)，DSM ACC2963(35-50A-2a)， DSM ACC2957 (38-10B-1), DSM ACC2958 (38-1A-1), DSM ACC2948 (44-3A-2), DSM ACC2949(45-2A-1)， DSM ACC2950(45-8A-2)， DSM ACC2951(48-3B-1)， DSM ACC2952 (48-4A-1)，DSM ACC2946 (49-3A-1)，DSM ACC2945 (49-8A-1)， DSM ACC2944(51-1A-1), DSM ACC2953(53-13A-2), DSM ACC2955(53-29A-1), DSM ACC2960(54-4B-2), DSM ACC2954(56-4A-2),or DSM ACC3001(62-9B-1), (ii) 作为（i)所述抗体的嵌合或人源化形式的抗体， (iii) 具有（i)所述抗体的特异性的抗体，和 (iv) 包含（i)所述抗体的抗原结合部分或抗原结合位点的抗体。
11. 权利要求10所述的抗体，其中（i)所述抗体的抗原结合部分或抗原结合位点包含 (i)所述抗体的可变区。
12. 能够产生权利要求1至11中任一项所述抗体的杂交瘤。
13. 以如下登记号保藏的杂交瘤：DSM ACC2822(4E9-1H9)，DSM ACC2826(9B6-2A9)， DSM ACC2824(59D6-2F2)，DSM ACC2825(61C 11-2B5)，DSM ACC2823(78H11-1H6)， DSM ACC2895 (22-1A-1),DSM ACC2893 (22-2A-1),DSM ACC2896 (22-9B-1),DSM ACC2897 (23-33A-1),DSM ACC2891 (23-19A-1),DSM ACC2894 (FI1#33F7D12),DSM ACC2892(4A12 2D4 1A10),DSM ACC2898 (4E9 1D122D4),DSM ACC2961 (42H11 1C11 2B2),DSM ACC2962(51G6 2H3 2B4),DSM ACC2943(16-5B-1),DSM ACC2956(20-11A-1), DSM ACC2947 (29-1A-2),DSM ACC2964 (29-8B-1),DSM ACC2959 (35-48B-1), DSM ACC2963 (35-50A-2a),DSM ACC2957 (38-10B-1),DSM ACC2958 (38-1A-1), DSM ACC2948 (44-3A-2)，DSM ACC2949 (45-2A-1)，DSM ACC2950 (45-8A-2)， DSM ACC2951 (48-3B-1),DSM ACC2952 (48-4A-1),DSM ACC2946 (49-3A-1), DSM ACC2945 (49-8A-1),DSM ACC2944 (51-1A-1),DSM ACC2953 (53-13A-2), DSM ACC2955(53-29A-1)，DSM ACC2960(54-4B-2)，DSM ACC2954(56-4A-2)或 DSM ACC3001(62-9B-1)〇
14. 缀合物，其包含与治疗剂偶联的权利要求1至11中任一项所述抗体。
15. 权利要求14的缀合物，其中所述治疗剂是毒素、放射性同位素、药物或细胞毒剂。
16. 药物组合物，其包含权利要求1至11中任一项所述抗体和/或权利要求14或15 的缀合物，以及可药用载体。
17. 抑制表达GT468和/或特征在于其细胞表面与GT468缔合之细胞的生长的方法，其 包括使所述细胞接触权利要求1至11中任一项所述抗体和/或权利要求14或15的缀合 物。
18. 杀死表达GT468和/或特征在于其细胞表面与GT468缔合之细胞的方法，其包括使 所述细胞接触有效量的权利要求1至11中任一项所述之抗体和/或权利要求14或15的 缀合物。
19. 抑制表达GT468和/或特征在于其细胞表面与GT468缔合之细胞的转移性传播的 方法，其包括使所述细胞接触有效量的权利要求1至11中任一项所述之抗体和/或权利要 求14或15的缀合物。
20. 治疗或预防对象中与表达GT468和/或特征在于其细胞表面与GT468缔合之细胞 有关的疾病或病症的方法，其包括向所述对象施用权利要求1至11中任一项所述的抗体、 权利要求14或15的缀合物或权利要求16的药物组合物。
21. 权利要求20的方法，其中所述疾病或病症是肿瘤相关疾病。
22. 权利要求21的方法，其中所述肿瘤相关疾病是癌症。
23. 权利要求22所述的方法，其中所述癌症选自乳腺癌、肺癌、胃癌、卵巢癌、肝细胞 癌、结肠癌、胰腺癌、食管癌、头颈癌、肾癌尤其是肾细胞癌、前列腺癌、肝癌、黑素瘤、肉瘤、 骨髓瘤、神经母细胞瘤、胎盘绒毛膜癌、宫颈癌和甲状腺癌，及其转移形式，和肺中的转移 癌。
【专利摘要】本发明涉及用于治疗癌症的单克隆抗体，提供了可用作治疗和/或预防与表达GT468细胞相关之疾病的治疗剂的抗体，所述疾病包括肿瘤相关疾病例如乳腺癌、肺癌、胃癌、卵巢癌、肝细胞癌、结肠癌、胰腺癌、食管癌、头颈癌、肾癌(尤其是肾细胞癌)、前列腺癌、肝癌、黑素瘤、肉瘤、骨髓瘤、神经母细胞瘤、胎盘绒毛膜癌、宫颈癌和甲状腺癌，及其转移形式。在一个实施方案中，所述肿瘤疾病是肺中的转移癌。DSM ACC289420080311DSM ACC289520080311DSM ACC289620080311DSM ACC289720080311DSM ACC289820080311DSM ACC294320080901DSM ACC294420080901DSM ACC294520080901DSM ACC294620080901DSM ACC294720080901DSM ACC294820080901DSM ACC294920080901DSM ACC295020080901DSM ACC295120080901DSM ACC295220080901DSM ACC295320080901DSM ACC295420080901DSM ACC295620080901DSM ACC295720080901DSM ACC295820080901DSM ACC295920080901DSM ACC296020080901DSM ACC296120080901DSM ACC296220080901DSM ACC296320080901DSM ACC296420080902DSM ACC300120090716DSM ACC289320080311DSM ACC289220080311DSM ACC289120080311DSM ACC282620070313DSM ACC282520070313DSM ACC282420070313DSM ACC282320070313DSM ACC282220070313DSM ACC295520080901
【IPC分类】A61K47-48, C12N5-20, A61K39-395, C12R1-91, A61P35-00, C07K16-30
【公开号】CN104628858
【申请号】CN201410649373
【发明人】乌尔·沙欣, 厄兹莱姆·图雷奇, 米夏埃尔·科斯洛夫斯基, 里塔·米特纳赫特-克劳斯
【申请人】加尼梅德药物公司, 约翰内斯·古滕伯格美因兹大学
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2009年9月16日
【公告号】CA2732594A1, CN102164963A, CN102164963B, EP2166021A1, EP2342234A2, US8946388, US20110223182, WO2010031551A2, WO2010031551A3