存期 限的稳定剂。合适的稳定剂可以包括谷氨酸钠和2-苯氧乙醇。此外，可以添加防腐剂以预 防细菌污染并允许多次剂量瓶。合适的防腐剂可以包括苯氧乙醇和甲醛。
[0154] 上述实施方案和实施例只作为示例使用。具体的实施方案、实施例，或具体实施方 案或实施例的元件不应理解为任意权利要求的关键、必要或必需元件或特征。可以对公开 的实施方案进行各种改变、修饰、取代和其他变化而不脱离本发明的范围，其是由所附的权 利要求限定。说明书，包括附图和实施例，应被理解为示例性方式，而不是限制性方式，所有 这类修饰和取代旨在包括在本发明的范围内。因此，本发明的范围应当由所附权利要求和 它们的法定等同物所确定，而不是由上文给出的实施例确定。例如，任意方法或工艺权利要 求所述的步骤可以按照任何可行的顺序进行，并且不限于在任意实施方案、实施例或权利 要求中存在的顺序。
[0155] 表1.用于沿着恶性疟原虫染色体13的微卫星标记物的PCR扩增的寡核苷酸引 物。
[0156]
【主权项】
1. 一种重组多核苷酸，包括编码P47蛋白的免疫原性片段或其变体的核苷酸序列。
2. 权利要求1的重组多核苷酸，其中所述片段或变体P47蛋白是Pfs47(SEQ ID N0:1) 或Pvs47(SEQ ID N0:2)的片段或变体。
3. 权利要求1的重组多核苷酸，其中所述免疫原性片段具有至少约5个氨基酸的长度。
4. 权利要求1的重组多核苷酸，其中所述多核苷酸包括编码变体的核苷酸序列，所述 变体与P47蛋白的免疫原性片段具有至少约80%的相同性。
5. -种载体，包括权利要求1的多核苷酸。
6. -种宿主细胞，其用权利要求5的载体转染。
7. -种药物组合物，用于实质性阻断或实质性降低疟原虫属的寄生虫在人类中的传 播，其中所述组合物包括P47蛋白、其免疫原性片段、或其变体以及药学上可接受的载体。
8. 权利要求7的组合物，其中所述寄生虫是恶性疟原虫并且所述P47蛋白是Pf s47 (SEQ ID NO:l)，或者所述寄生虫是间日疟原虫并且所述P47蛋白是Pvs47(SEQ ID NO:2)。
9. 权利要求7的组合物，其中所述组合物还包括一或多种人类病原体的抗原。
10. 权利要求9的组合物，其中所述病原体选自流感、麻瘆、汗毒、白喉、破伤风、百日 咳、脊髓灰质炎病毒、乙肝病毒、水痘、脑膜炎奈瑟氏菌和风瘆。
11. 权利要求7的组合物，其中所述组合物还包括佐剂。
12. 权利要求7的组合物，其中所述免疫原性片段具有至少约5个氨基酸的长度。
13. 权利要求7的组合物，其中所述变体与P47蛋白或其免疫原性片段具有至少约 80%的相同性。
14. 一种药物组合物，用于实质性阻断或实质性降低疟原虫属的寄生虫在人类中的传 播，其中所述组合物包括与P47或其免疫原性片段或变体特异性反应的抗体或其片段，以 及药学上可接受的载体。
15. 权利要求14的药物组合物，其中所述P47选自来自恶性疟原虫的Pfs47和来自间 日疟原虫的Pvs47。
16. 权利要求14的组合物，其中所述抗体是单克隆抗体。
17. 权利要求14的组合物，其中所述抗体是多克隆抗体。
18. 权利要求14的组合物，其中所述寄生虫是恶性疟原虫。
19. 权利要求14的组合物，其中所述免疫原性片段具有至少约5个氨基酸的长度，或所 述变体与P47或其免疫原性片段具有至少约80%的相同性。
20. -种实质性阻断或实质性降低疟原虫属的寄生虫在人类群体中传播的方法，包括 给至少一个人施用包括P47蛋白、其免疫原性片段或其变体的药物组合物。
21. 权利要求20的方法，其中所述寄生虫是恶性疟原虫并且所述P47是Pfs47 (SEQ ID NO: 1)，或者所述寄生虫是间日疟原虫并且所述P47是Pvs47 (SEQ ID NO: 2)。
22. 权利要求20的方法，其中所述组合物还包括一或多种人类病原体的抗原。
23. 权利要求22的方法，其中所述病原体选自流感、麻瘆、汗毒、白喉、破伤风、百日咳、 脊髓灰质炎病毒、乙肝病毒、水痘、脑膜炎奈瑟氏菌和风瘆。
24. 权利要求20的方法，其中所述组合物还包括佐剂。
25. 权利要求20的方法，其中所述免疫原性片段具有至少约5个氨基酸的长度。
26. 权利要求20的方法，其中所述变体与P47蛋白或其免疫原性片段具有至少约80% 的相同性。
27. 权利要求20的方法，其中通过选自以下的一或多种方法施用组合物：静脉内、肌 内、鼻内和皮下。
28. -种实质性阻断或实质性降低疟原虫属的寄生虫在人类群体中传播的方法，包括 给至少一个人施用药物组合物，所述药物组合物包括与P47或其免疫原性片段或变体特异 性反应的抗体或其片段，以及药学上可接受的载体。
29. 权利要求28的方法，其中所述寄生虫是恶性疟原虫并且所述P47蛋白是Pf s47 (SEQ ID NO:l)，或者所述寄生虫是间日疟原虫并且所述P47蛋白是Pvs47(SEQ ID NO:2)。
30. 权利要求28的方法，其中所述组合物还包括一或多种人类病原体的抗原。
31. 权利要求30的方法，其中所述病原体选自流感、麻瘆、汗毒、白喉、破伤风、百日咳、 脊髓灰质炎病毒、乙肝病毒、水痘、脑膜炎奈瑟氏菌和风瘆。
32. 权利要求28的方法，其中所述组合物还包括佐剂。
33. 权利要求28的方法，其中所述免疫原性片段具有至少约5个氨基酸的长度。
34. 权利要求28的方法，其中所述变体与P47蛋白或其免疫原性片段具有至少约80% 的相同性。
35. 权利要求28的方法，其中通过选自以下的方法施用组合物：静脉内、肌内、鼻内和 皮下。
36. -种给蚊子提供与一或多种抗原特异性反应的一或多种抗体或其片段的方法，包 括给人施用包括所述一或多种抗原的组合物。
37. 权利要求36的方法，其中所述抗原是P47蛋白、其免疫原性片段或其变体。
38. 权利要求37的方法，其中所述P47是由恶性疟原虫产生的Pfs47,或者所述P47是 由间日疟原虫产生的Pvs47。
39. 权利要求37的方法，其中所述片段具有至少约5个氨基酸的长度，或所述变体与 P47蛋白或其免疫原性片段具有至少约80%的相同性。
40. -种重组质粒，包括编码蛋白的多核苷酸，所述蛋白选自P47蛋白或其免疫原性片 段或变体；以及对P47或其免疫原性片段或变体特异的抗体或抗体片段。
41. 权利要求40的质粒，其中所述多核苷酸的翻译受到选自劳斯肉瘤病毒和巨细胞病 毒的病毒启动子的控制。
42. 权利要求40的质粒，其中所述质粒还包括选自牛生长激素或兔0-球蛋白多腺苷 酸化序列的多腺苷酸化信号。
43. 权利要求40的质粒，其中所述片段具有至少约5个氨基酸的长度，或所述变体与 P47蛋白或免疫原性片段具有至少约80%的相同性。
44. 一种处理哺乳动物的方法，包括给需要其的个体施用药学上有效量的权利要求40 的重组质粒。
45. -种用于鉴定可以干扰P47功能的药剂的方法，包括： a) 将蚊子群体与疟原虫寄生虫接触以产生感染的蚊子群体； b) 将所述感染的蚊子群体与候选分子接触，所述候选分子已经经过预筛选并发现其有 可能干扰P47功能； c) 确定所述候选分子是否影响蚊子实质性降低疱原虫寄生虫传播的能力；由此确定 的改善蚊子降低疟原虫传播的能力的候选分子被鉴定为干扰P47功能的所述药剂。
46. 权利要求45的方法，其中所述疟原虫是恶性疟原虫并且所述P47是Pfs47,或者所 述疟原虫是间日疟原虫并且所述P47是Pvs47。
47. 权利要求45的方法，其中使用对Pfs47或Pvs47特异的细胞系，针对干扰P47的可 能性对所述候选分子进行预筛选。
48. 权利要求45的方法，其中，在步骤a)中，疟原虫包括恶性疟原虫配子母细胞培养物 或来自感染间日疟原虫的人类供体的血液，并且恶性疟原虫或间日疟原虫与蚊子的接触在 膜饲养测定中发生。
49. 权利要求45的方法，其中步骤b)中感染的蚊子群体与候选分子的所述接触包括在 膜饲养测定中给蚊子饲喂所述候选分子。
50. -种用于鉴定可以在系统中恢复JNK信号转导的药剂的方法，包括： a) 提供一种系统，其中已经确定使JNK信号转导途径失活； b) 将所述系统与候选药剂接触；和 c) 确定所述候选药剂对恢复JNK信号转导的效应。
51. 权利要求50的方法，其中步骤a)的所述系统包括果蝇S2细胞或其他昆虫细胞系， 其中完整的JNK信号转导途径已经通过将细胞暴露于P47而失活。
52. 权利要求51的方法，其中所述果蝇S2细胞或其他昆虫细胞系的所述暴露包括选自 以下的方法： a) 通过向培养基中添加重组P47蛋白，将所述细胞的表面暴露于P47 ;和 b) 用表达质粒转染所述细胞，由此使重组P47在细胞的细胞质中表达。
53. 权利要求51的方法，其中在果蝇S2或其他昆虫细胞系中确定候选药剂对恢复JNK 信号转导的效应的步骤包括在JNK途径调控下JNK的磷酸化或报道基因诸如绿色荧光蛋白 (GFP)的活化。
54. 权利要求50的方法，其中步骤a)的系统包括已经感染表达P47的疟原虫寄生虫的 蚊子，导致蚊子的JNK信号转导途径被抑制，并且蚊子的补体样反应被破坏。
55. 权利要求50的方法，其中所述蚊子包括闪比亚按蚊，并且所述疟原虫寄生虫包括 选自恶性疟原虫和间日疟原虫的种。
56. -种转基因蚊子，其中所述蚊子表达干扰P47功能的抑制因子。
57. 权利要求56的转基因蚊子，其中所述抑制因子包括外源多核苷酸序列，所述外源 多核苷酸序列编码特异性针对P47并干扰P47的免疫抑制活性的抗体或抗体片段。
58. 权利要求56的转基因蚊子，其中所述P47选自来源于恶性疟原虫的Pfs47和来源 于间日疟原虫的Pvs47。
59. 权利要求56的转基因蚊子，其中所述蚊子是副转基因的，并且来自肠微生物群的 细菌被改造以表达编码所述抑制因子的多核苷酸。
60. 权利要求59的副转基因蚊子，其中所述抑制因子包括外源多核苷酸序列，所述外 源多核苷酸序列编码特异性针对P47并干扰P47的免疫抑制活性的抗体或抗体片段。
61. -种检测存在于生物样品中的疟疾抗体的方法，包括： 提供来自受试者的生物样品，其中所述样品被怀疑包含针对P47或其免疫原性片段的 抗体， 将所述样品与P47或片段接触，其中所述接触是在允许形成免疫复合物的条件下，和 检测复合物的存在，由此检测到的存在指示样品中的疟疾抗体。
62. 权利要求61的方法，其中P47或片段是可检测标记的。
63. 权利要求61的方法，其中P47或片段被固定到固相支持物上。
64. 权利要求63的方法，还包括将所述样品与P47或片段接触以形成复合物后，去除未 结合的组分。
65. 权利要求61的方法，其中所述检测包括通过选自以下的方法检测复合物：光密度 法、荧光测定法和比色法。
66. -种用于确定生物样品中疟疾抗体存在的试剂盒，包括： P47或其免疫原性片段， 一种用于使Pfs47或片段与生物样品中存在的抗疟疾抗体之间形成免疫复合物的缓 冲液，和 用于检测免疫复合物形成的工具。
67. 权利要求66的试剂盒，其中P47或其片段被固定在固相支持物上。
68. 权利要求66的试剂盒，其中用于检测免疫复合物形成的工具选自：荧光测定法、化 学发光法、放射性测量法和比色法。
【专利摘要】本发明人已经鉴定出Pfs47，来自疟疾寄生虫恶性疟原虫的基因，是这些寄生虫在冈比亚按蚊中存活的关键因素。在非洲冈比亚按蚊是人疟疾的主要天然媒介。通过控制蚊子的免疫系统，Pfs47蛋白可以允许寄生虫在蚊子中存活。本发明人提出P47蛋白(包括Pfs47和Pvs47)作为疫苗或药剂的靶标的用途，所述疫苗或药剂将阻断或降低冈比亚按蚊或其他按蚊中的恶性疟原虫或间日疟原虫感染，从而防止寄生虫在人类中的进一步传播。
【IPC分类】G01N33-15, A61K39-015, C12N15-63, C12N15-30, C07K14-445
【公开号】CN104736710
【申请号】CN201380054025
【发明人】C·V·巴里拉斯-米里, A·莫利纳-克鲁兹
【申请人】美国健康及人类服务部
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2013年8月16日
【公告号】EP2885410A1, US20150203547, WO2014028852A1