9] (1)取解淀粉芽孢杆菌，在LB固体平板培养基上划线，在30°C活化24h;取活化后 的健壮、典型菌落，接种于l〇mlLB液体培养基中，在35°C培养24h;再接种于300mlLB液 体培养基中，在30°C培养24h，获得有效活菌数为1.OX109cfu/ml的种子液；
[0050] (2)将所述种子液按30ml/100g与固体含水培养基混合均匀，所述固体含水培养 基由以下步骤制备而成：取花生饼粉53g、麦麸35g、棉柏11. 5g、碳酸钠0. 5g、葡萄糖0. 5g、 蛋白胨〇. 5g以及占全部固体物料重量之和45%的蒸馏水，搅拌均匀后，以300g/L装入培养 瓶中，在121°C下间歇灭菌两次，每次灭菌45min，即得；
[0051] 将种子液与固体含水培养基的混合物在35°C条件下静置培养3d，干燥至混合物 含水量为8%，粉碎过筛，即得。
[0052] 采用梯度挂线法对所得解淀粉芽孢杆菌固态菌剂进行活菌体计数，测得有效活菌 体为2. 5X101Qcfu/g。
[0053] 实施例4
[0054] 取本发明所述解淀粉芽孢杆菌L-S60,按照以下步骤制备解淀粉芽孢杆菌固态菌 剂：
[0055] (1)取解淀粉芽孢杆菌，在LB固体平板培养基上划线，在40°C活化36h;取活化后 的健壮、典型菌落，接种于l〇mlLB液体培养基中，在40°C培养36h;再接种于300mlLB液 体培养基中，在40°C培养36h，获得有效活菌数为8.OX108cfu/ml的种子液；
[0056] (2)将所述种子液按30ml/100g与固体含水培养基混合均匀，所述固体含水培养 基由以下步骤制备而成：取花生饼粉53g、麦麸35g、棉柏11. 5g、碳酸钠0. 5g、葡萄糖0. 5g、 蛋白胨〇. 5g以及占全部固体物料重量之和45%的蒸馏水，搅拌均匀后，以350g/L装入培养 瓶中，在121°C下间歇灭菌两次，每次灭菌45min，即得；
[0057] 将种子液与固体含水培养基的混合物在40°C条件下静置培养3d，干燥至混合物 含水量为10%，粉碎过筛，即得。
[0058] 采用梯度挂线法对所得解淀粉芽孢杆菌固态菌剂进行活菌体计数，测得有效活菌 体为 7. 0X108cfu/g。
[0059] 实施例5
[0060] 本发明提供的解淀粉芽孢杆菌固态菌剂在番茄工厂化育苗中的应用
[0061] 实验组：将每升育苗基质与0.lg实施例3提供的解淀粉芽孢杆菌固态菌剂混合后 作为栽培基质，按照常规方法播种番茄中杂9号的种子并常规管理。
[0062] 对照组：采用育苗基质作为栽培基质，按照常规方法播种番茄中杂9号的种子并 常规管理。
[0063] 出苗后第20天对照组和实验组植株的形态如图1所示。
[0064] 出苗后第20天，测量植株生长的各个参数，结果见表1 (进行三次重复实验，每次 重复实验每组测量15株穴盘苗，结果取平均值）。每升育苗基质与0.lg芽孢杆菌固态菌剂 混合的实验组对番茄穴盘苗促生有效果但并不明显。
[0065] 表1 :出苗后第20天实验组和对照组番茄的各个参数的测量结果
[0067]出苗后第20天，将各组的栽培基质干燥，检测其中速效氮的含量、速效磷的含量 和速效钾的含量。检测速效氮的含量的方法为碱解扩散法，检测速效磷的含量的方法为 0. 5mol/L碳酸氢钠浸提-钼锑抗比色法，检测速效钾的含量的方法为lmol/L醋酸铵浸 提-火焰光度计法；结果见表2。与对照相比，每升育苗基质与0.lg芽孢杆菌固态菌剂混 合的实验组栽培基质中速效氮磷钾含量有所增加，但并不明显。
[0068] 表2 :芽孢杆菌固态菌剂对栽培基质中速效氮磷钾含量的影响
[0070] 实施例6
[0071] 本发明提供的解淀粉芽孢杆菌固态菌剂在番茄工厂化育苗中的应用
[0072] 实验组：将每升育苗基质与10g实施例3提供的解淀粉芽孢杆菌固态菌剂混合后 作为栽培基质，按照常规方法播种番茄中杂9号的种子并常规管理。
[0073] 对照组：采用育苗基质作为栽培基质，按照常规方法播种番茄中杂9号的种子并 常规管理。
[0074] 出苗后第20天对照组和实验组植株的形态如图2所示。
[0075] 出苗后第20天，测量植株生长的各个参数，结果见表3 (进行三次重复实验，每次 重复实验每组测量15株穴盘苗，结果取平均值）。每升育苗基质与10g芽孢杆菌固态菌剂 混合的实验组可显著促进番茄穴盘苗的生长，具有良好的促生效果。
[0076] 表3 :出苗后第20天实验组和对照组植株的各个参数的测定结果
[0078]出苗后第20天，将各组的栽培基质干燥，检测其中速效氮的含量、速效磷的含量 和速效钾的含量。检测速效氮的含量的方法为碱解扩散法，检测速效磷的含量的方法为 0. 5mol/L碳酸氢钠浸提-钼锑抗比色法，检测速效钾的含量的方法为lmol/L醋酸铵浸 提-火焰光度计法；结果见表4。与对照相比，每升育苗基质与10g芽孢杆菌固态菌剂混合 的实验组可明显提高栽培基质中速效氮、速效磷和速效钾的含量。
[0079] 表4 :芽孢杆菌固态菌剂对番茄栽培基质中速效氮磷钾含量的影响
[0081] 实施例7
[0082] 本发明提供的解淀粉芽孢杆菌固态菌剂在黄瓜工厂化育苗中的应用
[0083] 实验组：将每升育苗基质与10g实施例3提供的解淀粉芽孢杆菌固态菌剂混合后 作为栽培基质，按照常规方法播种黄瓜中农6号的种子并常规管理。
[0084] 对照组：采用育苗基质作为栽培基质，按照常规方法播种黄瓜中农6号的种子并 常规管理。
[0085] 出苗后第20天对照组和实验组植株的形态如图3所示。
[0086] 出苗后第20天，测量植株生长的各个参数，结果见表5 (进行三次重复实验，每次 重复实验每组测量15株穴盘苗，结果取平均值）。每升育苗基质与10g芽孢杆菌固态菌剂 混合的实验组可显著促进番茄穴盘苗的生长，具有良好的促生效果。
[0087] 表5 :出苗后第20天实验组和对照组黄瓜的各个参数的测量结果
[0089] 表1~5中所列结果为平均值土标准误，每列数字后相同字母表示在0. 05水平 上无显著差异。
[0090] 虽然，上文中已经用一般性说明、【具体实施方式】及试验，对本发明作了详尽的描 述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见 的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的 范围。
【主权项】
1. 一种解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，其保藏登记号为CGMCC NO. 10045。2. -种解淀粉芽孢杆菌固态菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 取权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌，进行活化、增殖后，获得有效活菌数为〇. 1~ 1.0 X 109cfu/ml 的种子液； (2) 将所述种子液按15~35mL/100g与固体含水培养基混合均匀，将所得的混合物在 30~40°C静置培养2~5d，干燥至混合物含水量为10%以下，粉碎过筛，即得。3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述固体含水培养基包括以下重量 份的成分：花生饼粉25~55份，麦麸20~55份，棉柏11. 5~40份，碳酸钠0. 1~I. 0份， 葡萄糖0. 1~1.0份，蛋白胨0. 1~1.0份；还包括占全部固体物料重量之和30~60%的 水。4. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述固体含水培养基包括以下重量 份的成分：花生饼粉25~53份，麦麸31. 4~55份，棉柏11. 5~17份，碳酸钠0. 2~I. 0 份，葡萄糖0. 2~I. 0份，蛋白胨0. 2~I. 0份；还包括占全部固体物料重量之和30~45% 的水。5. 根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，所述方法还包括：将固体含水培 养基混合均匀后，以200~350g/L装入培养瓶中。6. 根据权利要求3~5任意一项所述的制备方法，其特征在于，所述固体含水培养基在 与种子液混合前，在120~125°C条件下间歇灭菌两次，每次灭菌30~45min。7. 根据权利要求2~6任意一项所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)所述静置培养 具体为：在35°C条件下静置培养3~5d。8. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 取权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌，在LB固体平板培养基上划线，在30~40°C活 化24~36h ;取活化后的健壮、典型菌落，接种于IOml LB液体培养基中，在30~40°C培养 24~36h ;再接种于300ml LB液体培养基中，在30~40°C培养24~36h，获得有效活菌数 为0? 1~1.0 X 109cfu/ml的种子液； (2) 将所述种子液按15~30ml/100g与固体含水培养基混合均匀；所述固体含水培 养基由包括以下步骤的方法制备而成：取花生饼粉25~53份、麦麸31. 4~55份、棉柏 II. 5~17份、碳酸钠0.2~1.0份、葡萄糖0.2~1.0份、蛋白胨0.2~1.0份以及占全 部固体物料重量之和30~45%的蒸馏水，混合均匀后，以200~350g/L装入培养瓶中，在 121°C条件下间歇灭菌两次，每次灭菌30~45min，即得； 将种子液与固体含水培养基的混合物在35°C条件下静置培养3~5d，干燥至混合物含 水量为5~10%，粉碎过筛，即得。9. 权利要求2~8任意一项所述方法制备而成的解淀粉芽孢杆菌固态菌剂。10. 权利要求9所述解淀粉芽孢杆菌固态菌剂在促进植物生长中的应用，其特征在于， 在每升植物培养基质中添加0. 01~IOg所述解淀粉芽孢杆菌固态菌剂。
【专利摘要】本发明涉及一种解淀粉芽孢杆菌，其保藏登记号为CGMCCNO.10045。本发明还涉及所述解淀粉芽孢杆菌的固态菌剂及其制备方法及应用。本发明提供的解淀粉芽孢杆菌固态菌剂发酵工艺简单，对环境污染小，能耗低，符合国家产业政策。本发明提供的解淀粉芽孢杆菌固态菌剂的有效活菌数高，且对于植物促生、特别是经济植物的栽培具有重大应用价值。CGMCC NO.1004520141121
【IPC分类】C12R1/07, C12N1/20, A01P21/00, A01N63/02, A01N25/12
【公开号】CN104962492
【申请号】CN201510342516
【发明人】李平兰, 游成真, 尚庆茂, 秦宇轩, 张志刚, 于亚琼, 王卉
【申请人】中国农业大学
【公开日】2015年10月7日
【申请日】2015年6月18日