一株产中温α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌的制作方法
【专利摘要】本发明公布了一株产中温α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌。所述菌株通过-氯化锂-硫酸二乙酯复合诱变获得，具体为枯草芽孢杆菌304 Bacillus subtilis304，保藏号为CCTCC NO:M 2013600。该菌株所产中温α-淀粉酶最适作用温度为65℃，该酶在65℃条件下保存24h仍具有80％酶活，70℃条件下保存12h仍具有50％以上酶活；该酶最适反应pH值为5.0，在pH4-6下保存18h后仍有80％以上的酶活；该酶酶活力为7000-8500U/ml，特别适合反应温度高、液化工艺与糖化工艺并存的工业化需求。
CCTCC NO：M 2013600
20131124
【专利说明】一株产中温a-淀粉酶的枯草芽孢杆菌
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物【技术领域】，具体涉及一株产中温a -淀粉酶的枯草芽孢杆菌。
【背景技术】
[0002] a-淀粉酶全称为a-l，4-葡聚糖水解酶（EC3.2. 1. 1)，作用于淀粉时，可从分子 内部切开a-1，4-糖苷键而生成糊精和还原糖，由于产物的末端葡萄糖残基C1碳原子为 构型，故得名为a_淀粉酶。根据其使用的温度范围又分为高温a_淀粉酶、中温a_淀 粉酶以及a-淀粉酶。在不同的工业中，需要对不同酶学性质的a-淀粉酶进行选择使用。
[0003] 中温a -淀粉酶是一类使用温度在60-90°C，且在60°C以下、pH6. 0-7. 0时较为稳 定的淀粉酶。广泛应用于酒精、啤酒、味精、淀粉糖、发酵工业的液化以及纺织、印染退浆、饲 料行业、制浆造纸等。但由于此类酶稳定性差，且pH低于5. 0以下时便会失活严重，从而限 制了它的应用，并且给工业生产过程带来一定的麻烦。比如在淀粉质原料的糖化液化过程 中，由于淀粉浆的pH -般在4. 5左右，而广泛应用的a -淀粉酶的适用pH在6. 0-7. 0,因此 在此阶段需要调节淀粉浆的pH以适应淀粉液化过程在a -淀粉酶的作用条件，而在此后的 糖化过程中，糖化酶的作用pH-般在4. 2-5. 0,为了适用糖化酶的作用条件，需要在此调节 体系的pH，由于pH的反复调整，不仅增加了工艺过程，消耗试剂，而且引入了外源离子，增 加了分类的负担。
[0004] 若能改变此类淀粉酶的作用pH范围，将能够极大的简化工艺过程，减少消耗与能 耗，降低生产成本，因此，开发出一种性能优良的中温a -淀粉酶将具有极大的工业价值。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一株生产中温a -淀粉酶的枯草芽孢杆菌。
[0006] 本发明提供的产中温a -淀粉酶的菌株具体为枯草芽孢杆菌304Bacillus SUbtilis304。该菌株已于2013年11月24日保藏于中中国典型培养物保藏中心（简称 CCTCC，地址为：中国.武汉.武汉大学），保藏号为CCTCC NO:M 2013600。
[0007] 所述枯草芽孢杆菌304由一株分离自酸性土壤的产中温a -淀粉酶的枯草芽孢杆 菌出发菌株经紫外线-氯化锂-硫酸二乙酯复合诱变筛选获得，菌株特点如下：
[0008] 所述菌株在固体平板上菌落颜色为乳白色，表面干燥褶皱，色暗不透明，边缘整 齐，镜检为长杆状，革兰氏染色呈阳性，周生鞭毛，芽孢呈椭圆形。
[0009] 理化特性：
[0010]
【权利要求】
1. 一株产中温a-淀粉酶的枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌具体为枯 草芽孢杆菌 304Bacillus subtilis304,保藏编号为 CCTCC NO:M 2013600。
2. 如权利要求1所述的一株产中温a -淀粉酶的枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述中 温a _淀粉酶具有以下特性：该酶最适作用温度为65°C，该酶在65°C条件下保存24h仍具 有80%酶活，70°C条件下保存12h仍具有50%以上酶活。
3. 如权利要求1-2所述的一株产中温a -淀粉酶的枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述中 温a -淀粉酶具有以下特性：该酶最适反应pH值为5. 0,在pH4-6下保存18h后仍有80% 以上的酶活。
4. 如权利要求1-3所述的一株产中温a -淀粉酶的枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述中 温a -淀粉酶具有以下特性：该酶酶活力为7000-8500U/ml。
5. 如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌在a -淀粉酶生产中的应用。
【文档编号】C12N9/28GK104450572SQ201410735023
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月4日 优先权日:2014年12月4日
【发明者】李洪兵, 张锦杰, 李海清, 胡永明, 朱永明, 孙明芳 申请人:湖南新鸿鹰生物工程有限公司