一种艾氟康唑中间体的合成方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种艾氟康唑中间体的合成方法，属于药物中间体合成技术领域。
【背景技术】
[0002] 艾氟康唑（通用名：Efinaconazole，商品名为Jublia)，化学名为 (2R，3R) -2- (2, 4-二氟苯基）-3- (4-亚甲基哌啶-1-基）-1- (1H-1，2, 4-三唑-1-基）-2- 丁 醇。艾氟康唑的分子量：762. 75 ;CAS登记号：164650-44-6 ;结构式为式1所不：
[0003]
[0004] 艾氟康唑由Dow Pharmaceutical研发。2014年6月6日FDA批准的抗真菌药物， 对人和动物的真菌疾病有效治疗，临床上用10%的溶液来治疗灰指甲（onychomycosis)。
[0005] 目前，现有技术中艾氟康唑中间体的合成方法，中国专利CN104292214A公开了一 种艾氟康唑及其中间体的合成方法，中间体的制备包括取代反应、酰化反应、加成反应、手 性拆分以及还原反应等，中间体众多，且工艺复杂；CN104557746A公开了一种艾氟康唑中 间体的合成方法，包括不对称Benzoin缩合反应、羟基保护、还原反应以及羟基脱保护，最 后得到中间体，其中间体虽然只有一种，但是合成步骤多，工艺复杂。
【发明内容】
[0006] 发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供了一种艾氟康唑中间体 的合成方法。
[0007] 技术方案：为实现上述目的，本发明提供了一种艾氟康唑中间体的合成方法，在反 应溶剂中，化合物（2)经转氨酶催化不对称氨化反应制得化合物（1)，即为所述艾氟康唑中 间体，其反应式如下所示：
[0008]
〇
[0009] 作为优选，所述转氨酶为转氨酶ATA-117或者该转氨酶的定向突变体，转氨酶 ATA-117的氨基酸序列为：
[0011] 所述定向突变体为H62T，G69C，A209L和G215C中的一种或者几种。
[0012] 作为另一种优选，所述反应溶剂选自水/二甲基亚楓、水/甲醇、水/乙醇、水/异 丙醇、水/丙酮、水/二甲基亚楓/甲醇和水/二甲基亚楓/丙酮中的一种或者几种。
[0013] 作为另一种优选，所述反应中还包括氨源，其选自异丙胺、三乙胺、丙胺、乙胺和丁 胺中的一种或者几种，浓度为〇. 2-1M。
[0014] 作为另一种优选，所述化合物（2)的质量浓度为2_200g/L。
[0015] 作为另一种优选，所述化合物（2)和转氨酶的质量浓度比为1:1~70:1。
[0016] 作为另一种优选，所述反应中，反应温度为22-45 °C，反应pH为7. 5-8. 5。
[0017] 作为进一步优选，所述反应中，反应温度为22-25°C，反应pH为8. 0。
[0018] 本发明合成方法为酶催化反应，绿色环保，并且结合基因工程对蛋白质进行定向 突变，提高其活性。
[0019] 有益效果：相对于现有技术中艾氟康唑中间体合成步骤多，合成工艺复杂，本发 明合成方法能够一步合成中间体，简单易行，成本低，收率高，产品质量好，适合大工业化生 产。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例对本发明作更进一步的说明。
[0021] 本发明中间体HPLC的检测纯度的方法：
[0022] 试验仪器：Agilent 1100高效液相色谱仪（DAD检测器）。
[0023]色谱条件：以Kromasil C18 (4. 6 X 250mm，5 y m)为色谱柱，流速：0?6ml/min。
[0024] 流动相A :0? 01mol/L乙酸铵（乙酸调pH至3. 5);流动相B :乙腈
[0025] 按下表进行线性梯度洗脱：
[0026]
[0027] 紫外检测波长：210nm。
[0028] 实施例1
[0029] 在25°C条件下，往反应釜中加入反应溶剂，然后加入氨源，用盐酸调节pH至8.0， 再加入PLP和转氨酶H62T，缓慢搅拌至全部溶解，随后加入化合物（2)后反应16小时，反 应结束后用盐酸调节pH至2. 0,加入乙酸异丙酯萃取，留下水相，用氢氧化钠水溶液调节pH 至12. 0,加入乙酸异丙酯萃取，将乙酸异丙酯经减压浓缩得化合物（1)。
[0030] 所述反应溶剂为水和二甲亚楓，两者体积比为1:1。
[0031] 氨源为异丙胺和三乙胺，浓度为0. 5M，两者的摩尔比为1:1。
[0032] 所述化合物（2)的质量浓度为100g/L。
[0033] 所述化合物（2)和转氨酶ATA-117的定向突变体的质量浓度比为35:1。
[0034] 按前述方法检测所得中间体，其质量收率为97%，HPLC检测纯度：99. 92%。
[0035] 实施例2
[0036] 在22°C条件下，往反应釜中加入反应溶剂，然后加入氨源，用盐酸调节pH至7. 5， 再加入PLP和转氨酶G69C，缓慢搅拌至全部溶解，随后加入化合物（2)后反应14小时，反 应结束后用盐酸调节pH至2. 0,加入乙酸异丙酯萃取，留下水相，用氢氧化钠水溶液调节pH 至12. 0,加入乙酸异丙酯萃取，将乙酸异丙酯经减压浓缩得化合物（1)。
[0037] 所述反应溶剂选自水/甲醇。
[0038] 氨源为异丙胺，浓度为0? 2M。
[0039] 所述化合物（2)的质量浓度为2g/L。
[0040] 所述化合物（2)和转氨酶ATA-117的定向突变体的质量浓度比为1: 1。
[0041] 按前述方法检测所得中间体，其质量收率为96%，HPLC检测纯度：99. 93%。
[0042] 实施例3
[0043] 在45°C条件下，往反应釜中加入反应溶剂，然后加入氨源，用盐酸调节pH至8. 5， 再加入PLP和转氨酶A209L，缓慢搅拌至全部溶解，随后加入化合物（2)后反应18小时，反 应结束后用盐酸调节pH至2. 0,加入乙酸异丙酯萃取，留下水相，用氢氧化钠水溶液调节pH 至12. 0,加入乙酸异丙酯萃取，将乙酸异丙酯经减压浓缩得化合物（1)。
[0044] 所述反应溶剂选自水/二甲基亚楓/甲醇，三者的体积比为1 :1:1。
[0045] 氨源为丁胺，浓度为1M。
[0046] 所述化合物（2)的质量浓度为200g/L。
[0047] 所述化合物（2)和转氨酶ATA-117的定向突变体的质量浓度比为70:1。
[0048] 按前述方法检测所得中间体，其质量收率为98%，HPLC检测纯度：99. 97%。
[0049] 实施例4
[0050] 在30°C条件下，往反应釜中加入反应溶剂，然后加入氨源，用盐酸调节pH至7. 8， 再加入PLP和转氨酶G215C，缓慢搅拌至全部溶解，随后加入化合物（2)后反应15小时，反 应结束后用盐酸调节pH至2. 0,加入乙酸异丙酯萃取，留下水相，用氢氧化钠水溶液调节pH 至12. 0,加入乙酸异丙酯萃取，将乙酸异丙酯经减压浓缩得化合物（1)。
[0051] 所述反应溶剂选自水/二甲基亚楓/丙酮，三者的体积比为1:1:2。
[0052] 氨源为异丙胺，浓度为0? 5M。
[0053] 所述化合物（2)的质量浓度为50g/L。
[0054] 所述化合物（2)和转氨酶ATA-117的定向突变体的质量浓度比为20:1。
[0055] 按前述方法检测所得中间体，其质量收率为96%，HPLC检测纯度：99. 95%。
[0056] 实施例5
[0057] 在40°C条件下，往反应釜中加入反应溶剂，然后加入氨源，用盐酸调节pH至8. 2， 再加入PLP和转氨酶H62T和转氨酶G69C，两者摩尔比为1: 1，缓慢搅拌至全部溶解，随后 加入化合物（2)后反应14-18小时，反应结束后用盐酸调节pH至2.0,加入乙酸异丙酯萃 取，留下水相，用氢氧化钠水溶液调节pH至12. 0,加入乙酸异丙酯萃取，将乙酸异丙酯经减 压浓缩得化合物（1)。
[0058] 所述反应溶剂选自水/二甲基亚楓，其体积比为2:1。
[0059] 氨源异丙胺和乙胺，浓度为0.8M，两者的摩尔比为1:2。
[0060] 所述化合物（2)的质量浓度为150g/L。
[0061] 所述化合物（2)和转氨酶ATA-117的定向突变体的质量浓度比为50:1。
[0062] 按前述方法检测所得中间体，其质量收率为98%，HPLC检测纯度：99. 95%。
[0063] 实施例6
[0064] 按照实施例1方法，将转氨酶H62T\替换为未改造前的转氨酶ATA-117,制得中间 体。
[0065] 按前述方法检测所得中间体，只有4%的转化率，其余全是原料，均远低于实施例 1所得中间体的1〇〇 %的转化率。
[0066] 实施例7氢谱检测
[0067] 仪器：BRUKER AV-500型核磁共振仪
[0068] 溶剂：CDC13
[0069]温度：303K
[0070]内标：TMS
[0071] 实施例1所得中间体图谱参数如下：
[0072]虫NMR (500MHz，CDC13) 5 8.01 (1H，s)，7.81 (lH，s)，7. 24-7. 14 (lH，m)，6. 96-6. 89 ( 1H, m), 6. 86-6. 77 (1H, m), 4. 91 (1H, d, J = 12. 4Hz), 4. 81 (1H, d, J = 12. 4Hz), 2. 97 (1H,q,J =6. 5Hz), 1.07(2H, b),0. 86(3H, d, J = 6. 4Hz). [M+H] + (ESI+) = 269〇
【主权项】
1. 一种艾氟康唑中间体的合成方法，其特征在于，在反应溶剂中，化合物（2)经转氨酶 催化不对称氨化反应制得化合物（1)，即为所述艾氟康唑中间体，其反应式如下所示：〇2. 根据权利要求1所述的艾氟康唑中间体的合成方法，其特征在于，所述转氨酶为转 氨酶ATA-117或者该转氨酶的定向突变体，转氨酶ATA-117的氨基酸序列为：所述定向突变体为H62T，G69C，A209L和G215C中的一种或者几种。3. 根据权利要求1所述的艾氟康唑中间体的合成方法，其特征在于，所述反应溶剂选 自水/二甲基亚楓、水/甲醇、水/乙醇、水/异丙醇、水/丙酮、水/二甲基亚楓/甲醇和 水/二甲基亚楓/丙酮中的一种或者几种。4. 根据权利要求1所述的艾氟康唑中间体的合成方法，其特征在于，所述反应中还包 括氨源，其选自异丙胺、三乙胺、丙胺、乙胺和丁胺中的一种或者几种，浓度为0.2-1M。5. 根据权利要求1所述的艾氟康唑中间体的合成方法，其特征在于，所述化合物（2)的 质量浓度为2-200g/L。6. 根据权利要求1所述的艾氟康唑中间体的合成方法，其特征在于，所述化合物（2)和 转氨酶的质量浓度比为1:1~70:1。7. 根据权利要求1所述的艾氟康唑中间体的合成方法，其特征在于，所述反应中，反应 温度为22-45 °C，反应pH为7. 5-8. 5。8. 根据权利要求1所述的艾氟康唑中间体的合成方法，其特征在于，所述反应中，反应 温度为22-25 °C，反应pH为8. 0。
【专利摘要】本发明提供了一种艾氟康唑中间体的合成方法，在反应溶剂中，化合物(2)经转氨酶催化不对称氨化反应制得化合物(1)，即为所述艾氟康唑中间体，其反应式如下所示：相对于现有技术中艾氟康唑中间体合成步骤多，合成工艺复杂，本发明合成方法能够一步合成中间体，简单易行，成本低，收率高，产品质量好，适合大工业化生产。
【IPC分类】C12N9/10, C12P17/10
【公开号】CN105039450
【申请号】CN201510358073
【发明人】曲大辉, 黄燕鸽
【申请人】南京迪缘医药科技有限公司
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年6月25日