加入丹参素 2_〇1 (少量稀硝酸、四氢呋喃溶解）、功能单体丙烯酰胺（AA)SmmoU交联剂乙二醇二甲基 丙烯酸酯30mmol、引发剂偶氮二异丁腈0.2g、致孔剂乙腈、二氯甲烷混合液5mL混合均后匀 超声5min，通氮气5min后密封，在50°C~60°C水浴中反应10~12h，然后体系升温至85°C 熟化lh，得颗粒/饼状物，粒化、过筛，用乙醇浸泡，洗涤，抽滤，再用乙醇、水和乙酸的混合 溶液（体积比为7 : 2 : 1)进行洗脱，直到洗脱液紫外检测不出丹参素为止，60°C真空干 燥得丹参素表面分子印迹聚合物SMIP2。
[0031] 实施例3
[0032] 称取聚酰胺活化接枝基质10g，经乙醇水浸泡凉干后置于反应斧中、加入丹参素 2mmol(用少量稀硝酸、四氢咲喃溶解）、功能单体4-乙烯基吡啶8mmoL、交联剂乙二醇二甲 基丙烯酸酯30mmol、引发剂偶氮二异丁腈0.2g、致孔剂乙腈、二氯甲烷混合液5mL混合均 后勾超声5min，通氮气5min后密封，在50°C~60°C水浴中反应10~12h，然后体系升温至 85°C熟化lh，得颗粒/饼状物，粒化、过筛，用乙醇浸泡，洗涤，抽滤，再用乙醇、水和乙酸的 混合溶液（体积比为7 : 2 : 1)进行洗脱，直到洗脱液紫外检测不出丹参素为止，60°C真 空干燥得丹参素表面分子印迹聚合物材SMIP3。
[0033] 实施例4
[0034] 称取聚酰胺活化接枝基质10g，经乙醇水浸泡凉干后置于反应斧中、加入丹参素 2mmol(少量稀硝酸、四氢咲喃溶解）、功能单体甲基丙稀酸（MAA)4mmoL、苯乙稀（St)4mmoL、 交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯30mmol、引发剂偶氮二异丁腈0.2g、致孔剂乙腈、二氯甲烷 混合液5mL混合均后勾超声5min，通氮气5min后密封，在50°C~60°C水浴中反应10~ 12h，然后体系升温至85°C熟化lh，得颗粒/饼状物，粒化、过筛，用乙醇浸泡，洗涤，抽滤，再 用乙醇、水和乙酸的混合溶液（体积比为7 : 2 : 1)进行洗脱，直到洗脱液紫外检测不出 丹参素为止，60°C真空干燥得丹参素表面分子印迹聚合物材SMIP4。
[0035] 实施例5
[0036] 称取聚酰胺活化接枝基质10g，经乙醇水浸泡凉干后置于反应斧中、加入丹参素 2mmol(用少量稀硝酸、四氢咲喃溶解）、功能单体甲基丙稀酸（MAA)4mmoL、4-乙烯基P比啶 4mmoL、交联剂乙二醇二甲基丙稀酸酯30mmol、引发剂偶氮二异丁腈0. 2g、致孔剂乙腈、二 氯甲烧混合液5mL混合均后勾超声5min，通氮气5min后密封，在50°C~60°C水浴中反应 8~12h，然后体系升温至85°C熟化lh，得颗粒/饼状物，粒化、过筛，再用乙醇、水和乙酸的 混合溶液（体积比为7 : 2 : 1)进行洗脱，直到洗脱液紫外检测不出丹参素为止，60°C真 空干燥得丹参素表面分子印迹聚合物材SMIP5。
[0037] 实施例6
[0038] 上述五种丹参素表面分子印迹聚合物（SMIP1-SMIP5)对目标分子的吸附性能测 定。在直径13. 4_、高度200. 3mm的G3砂心板层析柱中，加入分子印迹聚合物使其高度为 20cm，砂心板压实，用50mL洗脱液（乙醇/冰乙酸/水体积比为7 : 2 : 1的混合液）冲 洗，洗脱液用紫外光谱进行检测，检测不出丹参素，则分子印迹聚合物材料中的模板分子已 经被洗脱干净，用乙醇冲去洗脱液备用。
[0039] 取0? 6g丹参提取干膏（贵州景峰注射剂有限公司提供，含量48. 65% )，用80% 乙醇水150mL溶解，乙酸调节pH值为6,超声5min，IOOmL石油醚萃取两次除去酯类化合物， 水层上样于分子印迹聚合物分离柱中，静置lOmin，用乙酸乙酯/石油醚（体积比为1 : 3) 快速冲洗除去杂质，用洗脱液（乙醇/冰乙酸/水体积比为7 : 2 : 1的混合液）洗脱丹参 素，流速ImL?min\洗脱液用紫外光谱检测不出丹参素后，收集洗脱液定容，测定吸光度， 计算回收率；然后，脱溶、干燥得产品，计算杂质量，计算分离因子。空白操作方法同上，所得 数据列于下表。
[0040]分子印迹聚合物材料的吸附量
[0041]
[0042] 注：a=SMIP对SAA吸附量/SNIP对SAA吸附量，P=SMIP对SAA吸附量/SMIP 对其杂质
[0043] 结论：用该印迹材料制成固相萃取柱对丹参干膏中丹参素进行分离纯化，回收率 在89. 7 %~97. 4%之间，标准偏差为2. 8 %。
[0044] 上述实施例表明该制备方法制备操作简单、成本较低、所得印迹材料分离纯化效 果好、可重复使用；所以，本
【发明内容】
具有现实的应用意义。
【主权项】
1. 一种丹参素表面分子印迹聚合物的制备方法，其特征在于该方法主要包括以下步 骤： (1) 将固相基质聚酰胺微粒，分别经5%盐酸溶液、乙醇、异丙醇、丙酮、四氢呋喃、正己 烷浸泡、水清洗、凉干备用；在队氛围下，在反应瓶中分别加入Sg固相基质、2g叔丁醇钾、 0. 3g二环己基-18-冠-6醚、IOOmL四氢咲喃，室温搅拌Ih后加入IOmL 3-缩水甘油醚氧 基丙基三乙氧基硅烷，升温至50°C下反应5h，粗产品用四氢呋喃、甲醇冲洗，浸泡在去离子 水中过夜，然后，经水、甲醇、丙酮和正已烷清洗，凉干12h得活化基质；称取IOg活化基质 于250 mL烧瓶中，加入150 mL50%乙醇水溶液，25 mL三乙氧基乙烯基硅烷，电动搅拌下， 50°C反应24 h，用乙醇浸泡、搅拌4h，洗去吸附在产物表面的反应物、副产物等，抽滤，凉干 12h得接枝基质； (2) 取接枝基质、模板分子、功能单体或混合功能单体、交联剂、引发剂、致孔剂、溶剂 按一定比例置于反应爸中混合均勾，通氮气5min密封，将反应爸置于恒温水浴中，50 °C~ 60°C下反应10~12h，然后体系升温至80°C~85°C熟化I h，得颗粒饼状物，粒化、过筛备 用； (3) 粒状产品用醇浸泡，洗涤，再用醇、水和有机酸的混合溶液进行洗脱，直到洗脱液 紫外检测不出模板分子丹参素为止，60°C真空干燥，真空干燥得丹参素表面分子印迹聚合 物吸附材料。2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于第（1)步中所述固相基质为聚酰胺、硅胶、其 他树脂中的一种，其粒度为300~500目。3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于第（2)步中所述功能单体或混合功能单体是 甲基丙烯酸、丙烯酰胺、丙烯酸、苯乙烯、4-乙烯基吡啶中的一种或两种或两种以上组成的 混合功能单体；优选甲基丙烯酸、丙烯酰胺的混合物，或直链形与环状化合物的混合物；所 述交联剂是乙二醇二甲基丙烯酸酯或乙二醇二缩水甘油醚或N，N-二甲基双丙烯酰胺；优 选乙二醇二甲基丙烯酸酯；所述致孔剂是乙腈、丙酮、二氯甲烷、氯仿、乙醇、甲醇中的一种 或其两种的混合物；优选乙腈、二氯甲烷的混合物；所述引发剂是过氧苯甲酰、偶氮二异丁 腈类物质中的一种，优选偶氮二异丁腈。4. 如权利要求1所述的方法，其特征在于第（2)步中所述：模板分子与功能单体、交联 剂物质的质量比为1 : 3~6 : 10~20,模板分子与接技基质、引发剂、致孔剂用量之比例 为 Immol : 3 ~5 g : 100 ~300mg : 5 ~15mL。5. 如权利要求1所述的方法，其特征在于第（3)步中所述：醇是乙醇或甲醇，所述有机 酸是甲酸或乙酸，所述醇、水和有机酸混合溶液的体积比为6~8 : 3~1 : 1，所述洗脱方 法为索式提取和渗漉法。6. 丹参素表面分子印迹聚合物吸附材料对丹参素分离纯化的应用方法，其特征在于： 将丹参素表面分子印迹聚合物装入分离柱中，用乙醇浸没，冲洗；将样品溶液慢速过柱，使 丹参素被充分吸附，用乙酸乙酯/石油醚质量比为1 : 3的混合液冲洗除去杂质，然后用乙 醇、水与乙酸混合液洗脱，收集洗脱液，脱溶、结晶得到丹参素。7. 如权利要求6所述的应用方法，其特征在于所述分离柱为直径13. 4 mm、高度200. 3 mm的G3砂心板层析柱；所述样品溶液为中药丹参提取液，或含丹参素药物溶解液，或含有 丹参素的其他溶液；所述乙醇、水与乙酸混合液为乙醇、水与乙酸按照6~8 : 3~I : 1 的体积比配制的混合液。
【专利摘要】本发明公开了一种丹参素表面分子印迹聚合物的制备方法，该方法包括以下步骤：第一步：固相基质的活化接枝处理；第二步：丹参素表面分子印迹聚合物的制备；第三步，洗脱模板分子丹参素制得丹参素表面分子印迹聚合物材料。本方法制备的丹参素表面分子印迹聚合物具有与丹参素分子结构、官能团完全匹配的印迹位点；除去模板分子后，丹参素表面分子印迹聚合物对丹参素具有较高的选择性吸附性能，分离因子分别达到3.36和5.35，是一种丹参素的分离纯化的新方法。本发明方法制备的印迹材料，制备方法简单、成本低，对酸、碱及热稳定性高，吸附、分离效果好、可重复使用。适用于丹参素表面分子印迹聚合物的制备。
【IPC分类】C08F220/06, B01J20/26, C08F226/06, C08F220/56, B01J20/30, C08F285/00, B01D15/08
【公开号】CN105085827
【申请号】CN201510532673
【发明人】周进康
【申请人】贵州师范学院
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年8月27日