性中间体，不会与生物大分子形成毒性加合物。
[0018] 在本发明公开前没有发现有关琉基哇嘟类化合物在抑制酪氨酸酶方面的应用报 道。本发明首次发现琉基哇嘟类化合物能显著抑制酪氨酸酶所介导的多己酿和黑色素的生 成速率，且具有明显的剂量-效应依赖关系，表明琉基哇嘟类化合物具有十分良好的抗氧 化及美白作用，提示其在治疗色素沉着性疾病及防止蔬果褐变方面的潜在应用前景。
【附图说明】
[0019] 图1、2-琉基哇嘟对酪氨酸酶抑制常数/G。的考察； 图2、2-琉基哇嘟对马铃馨褐变过程的抑制作用； 图3、2-琉基哇嘟对酪氨酸酶抑制作用随时间变化情况。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例对本发明予W进一步说明，但并不因此而限制本发明。
[0021] 实施例1:琉基哇嘟类系列化合物对酪氨酸酶的抑制活性测定 W左旋多己的氧化代谢作为探针反应，借助马铃馨来源酪氨酸酶粗酶液体外解育体 系，测定系列琉基哇嘟类化合物对酪氨酸酶抑制的IC50,具体实验流程如下： (1) 300微升体外代谢反应体系中，含有抑6. 86的憐酸盐缓冲液，马铃馨酪氨酸酶液 的蛋白浓度为1.7mg/mU抑制剂终浓度范围为0.01iiM-500iiM，于30°C条件下震荡预解 5分钟。
[0022] (2)向反应体系中加入底物，其终浓度为1ml,起始反应；于30°C条件下继续反应 20分钟。
[0023] (3)迅速转移200微升反应液至96孔板中，置于酶标仪上，在492nm下进行吸光 度的测定，W0D492?的大小表示反应体系中左旋多己代谢产物生成的量，从而反应其中酶的 催化活性。
[0024] 该类化合物对酪氨酸酶呈现出强抑制活性，Lineweaver-Burk及Dixon作图均显 示该类化合物是酪氨酸酶的混合性抑制剂。各化合物的半数抑制浓度如表1所示，从中可 W看出琉基哇嘟类系列化合物对酪氨酸酶有较强的抑制活性，且多数化合物的抑制活性优 于曲酸
[00巧] 实施例2:如图巧日图2所示，2-琉基哇嘟对马铃馨褐变过程的抑制作用： 其实验步骤如下：配置5ml和20ml的曲酸溶液备用。将马铃馨切成大小一致的块 状，分别取5ml的曲酸溶液，20ml的曲酸溶液，95%的乙醇溶液和2-琉基哇嘟溶液液200 均匀的涂抹在切好的马铃馨块上，每隔1h观察一次马铃馨切片的颜色变化并且拍照 记录。通过颜色的变化观察2-琉基哇嘟对马铃馨酪氨酸酶的抑制能力。结果表明，2-琉基 哇嘟在1ml浓度时对马铃馨酪氨酸酶介导的褐变过程的抑制作用比5ml的曲酸强，与20 ml的曲酸溶液抑制强度相近。
[0026] 实施例3:2-琉基哇嘟和曲酸对酪氨酸酶抑制作用随时间变化 取=个1. 5mL离屯、管，分别加入憐酸盐缓冲液和马铃馨酪氨酸酶粗酶液，然后往第一支离屯、管中中加入95%的乙醇溶液，第二支中加入浓度为5ml的2-琉基哇嘟溶液，第S支 中加入浓度为100ml的曲酸，充分混匀，使其在30°C的水浴锅中反应5分钟。然后加入左 旋多己起始反应。迅速将=个样品分别转移到酶标仪的96孔板中，每隔5分钟测一次吸光 度，时间为60分钟，记录数据，得到体系的吸光度与反应时间的对应关系如图3所示。结果 显示，2-琉基哇嘟和曲酸对酪氨酸酶均呈现明显的抑制作用，而2-琉基哇嘟在50yM浓度 时的抑制作用更是超过了曲酸在1ml时的抑制作用。
[0027] W上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征及本发明的优点，本行业的技术 人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本 发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，运些变 化和改进都落入要求保护的本发明范围内，本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其 等效物界定。
【主权项】
1. 具有巯基喹啉骨架结构的酪氨酸酶抑制剂，其特征是：该酪氨酸酶抑制剂类化合物 具有巯基喹啉的骨架结构，其结构通式如式（1)所示：其中：喹啉环上的2-8位上的Rp R2、R3、&取代基中至少有一个为-SH，其他位置取代 基可以为-OH、_CH3、-0CH3、-CH2CH3、-Ph、-OPh、-0CH 2CH3等取代基中的一种。2. 根据照权利要求1所述的具有巯基喹啉骨架结构的酪氨酸酶抑制剂，其特征是：该 类抑制剂抑制的酪氨酸酶来源包括马铃薯来源、双孢菇来源、苹果来源和人源。3. 按照权利要求1或2所述的具有巯基喹啉骨架结构的酪氨酸酶抑制剂，其特征是： 所述酪氨酸酶抑制剂作为单体成分使用，或药物组合物使用，或以巯基官能团的羧酸酯、葡 萄糖醛酸酯、前药及生理上可接受的盐的形式使用。4. 一种权利要求1所述的酪氨酸酶抑制剂的应用，其特征是：该酪氨酸酶抑制剂能够 起到美白皮肤和抑制蔬果中存在的多酚氧化酶的活性、具有防褐变的作用。5. 根据照权利要求4所述的酪氨酸酶抑制剂的应用，其特征是：能够通过抑制人体皮 肤中表达的酪氨酸酶的活性，减少黑色素的生成，达到美白皮肤的目的。6. 根据照权利要求4所述的酪氨酸酶抑制剂的应用，其特征是：该酪氨酸酶抑制剂可 以用于制备治疗色素沉着性疾病的药物和作为美白护肤品的功能性添加剂。7. 按照权利要求4所述的酪氨酸酶抑制剂的应用，其特征是：该酪氨酸酶抑制剂可以 用于制备蔬果保鲜剂。
【专利摘要】本发明具体涉及一类具有巯基喹啉结构的强效酪氨酸酶抑制剂，及其在制备治疗色素沉着性疾病的药物及制备蔬果保鲜剂方面的应用。该类化合物具体包括2-巯基喹啉、4-巯基喹啉、6-巯基喹啉、8-巯基喹啉以及其结构类似及衍生物。体外活性测定发现该类化合物抑制酪氨酸酶的IC50可达纳摩尔级，显示了十分良好的抗氧化及美白作用。
【IPC分类】A23B4/20, C07D215/36, A61Q19/02, A61K8/49
【公开号】CN105272912
【申请号】CN201510768985
【发明人】刘兆明, 王慧云, 孙珊珊, 崔亚男, 张方可
【申请人】济宁医学院
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2015年11月12日