异喹啉-3-甲酰-RF-OBzl,其制备,纳米结构,活性和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-N02)-Phe-0Bzl 及制备方法，Arg(NG-N02)-Phe 简称RF，涉及它的体外抗细胞增殖活性，涉及它的体内抗肿瘤活性，涉及它的体内抗血栓活 性，进一步涉及它的纳米结构。因而本发明涉及它在制备抗肿瘤药物和抗血栓药物中的应 用。本发明属于生物医药领域。 技术背景
[0002] 癌症是一组可影响身体任何部位的多种疾病的通称。使用的其它术语为恶性肿瘤 和赘生物。据世界卫生组织统计，癌症是世界上的头号死因之一，尤其是在发展中国家。而 全世界癌症死亡人数预计将继续上升，到2030年将超过1310万。因此，开发新的高效、低 毒、毒副作用小的抗肿瘤药物一直是新药研究的重要课题之一。
[0003] 随着对肿瘤特性和发病本质的认识，最近几年抗肿瘤药物不断从传统的细胞毒 药物向发展非细胞毒药物过渡。咔啉是天然来源的细胞毒性抗肿瘤化合物。发明人 认识到，β-咔啉抗肿瘤的细胞毒性本质是与肿瘤细胞DNA之间的嵌插。这种形式的扦 插可造成细胞毒性。发明人曾经发现，β-咔啉可以插入肿瘤细胞DNA之间的双螺旋碱 基之间。在进一步的研究中，发明人认识到，β_咔啉的抗肿瘤活性来自嵌插。发明人还 认识到，在β-咔啉的1位引入二肽生成β-咔啉-3-羧酸苄酯及衍生物可增强β-咔 啉与肿瘤细胞的作用，增强抗肿瘤活性。根据这些认识，发明人提出下式的异喹啉-3-甲 酰-Arg(Ν°-Ν02)-AA-OBzl。与发明人前期的发明的异喹啉-3-甲酰氨基酸苄酯相比，本发明 的突出创造性在于在3-甲酰基与氨基酸苄酯基之间插入ArgW^NOj，保留了异喹啉-3-甲 酰氨基酸苄酯与肿瘤细胞DNA之间的嵌插作用，又可以通过插入ArgW^NOj延缓代谢， 使得它们的有效剂量大幅度降低。发明人还认识到，将Arg(NG-N02)与Phe-OBzl搭配可 以带来抗血栓活性。肿瘤患者并发血栓症可以恶化肿瘤患者的预后。于是，异喹啉-3-甲 酰-Arg(Ns-N02)-Phe-0Bzl的抗血栓作用可以更好地发挥它的抗肿瘤疗效。
[0004] 发明的内容
[0005] 本发明的第一个内容是提供下式的异喹啉-3-甲酰-ArgW^NOj-Phe-OBzl。
[0007] 本发明的第二个内容是提供异喹啉-3-甲酰-ArgW^NOj-Phe-OBzl的制备方法， 该方法包括以下步骤：
[0008] (1)将L-苯丙氨酸在35%盐酸的催化下与甲醛进行？丨(^6卜5口61^161缩合，得到 四氢异喹啉-3-羧酸；
[0009] (2)将四氢异喹啉-3-羧酸在甲醇溶液中，冰浴下用氯化亚砜催化得到四氢异喹 啉-3-羧酸甲酯；
[0010] (3)将四氢异喹啉-3-羧酸甲酯在无水的N，N_二甲基甲酰胺（DMF)溶液中，用高 锰酸钾为氧化剂得到异喹啉-3-羧酸甲酯；
[0011] (4)在NaOH存在下，在甲醇中将异喹啉-3-羧酸甲酯皂化为异喹啉-3-羧酸；
[0012] (5)在二环己基碳二亚胺（DCC)和N-羟基苯并三唑（HOBt)存在下，Boc-Arg(N0 2) 在无水 DMF 中与 Phe-OBzl 缩合为 Boc-Arg(N02)_Phe-0Bzl ;
[0013] (6)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(N02)_Phe-0Bzl脱去Boc生成 Arg(N02)-Phe_0Bzl ;
[0014] (7)在DCC和HOBt存在下，异喹啉-3-羧酸在无水DMF中与Arg(N02)-Phe-OBzl 缩合得到异喹啉-3-甲酰-Arg (Ns-N02) -Phe-OBzl。
[0015] 本发明的第三个内容是评价异喹啉-3-甲酰-Arg(NG-N02)-Phe-0Bzl对肿瘤细胞 增殖的抑制作用。
[0016] 本发明的第四个内容是评价异喹啉-3-甲酰-ArgW^NOj -Phe-OBzl对S180肿瘤 小鼠肿瘤生长的抑制作用。
[0017] 本发明的第五个内容是评价异喹啉-3-甲酰-Arg(Ns-N02)-Phe-OBzl的抗血栓活 性。
[0018] 本发明的第六个内容是测定异喹啉-3-甲酰-ArgW^NOj-Phe-OBzl的纳米结构。
【附图说明】
[0019] 图 1 异喹啉-3-甲酰-Arg(NG_N02)-Phe-0Bzl 的合成路线.i)HCH0,35% HC1 ;ii) S0C12, CH30H iii)DMF, KMn02 ；iv)Na0H, CH30H ；v)DCC, HOBt, DMF ；vi) 2NHCl/Et0Ac〇
[0020] 图2异喹啉-3-甲酰-Arg (Ng-N02) -Phe-OBzl在纯水环境中1 X 10 5M浓度下的透 射电镜照片。
【具体实施方式】
[0021] 为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它 们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
[0022] 实施例1制备四氢异喹啉-3-羧酸
[0023] 称取L-苯丙氨酸lg，加入2. 4mL的甲酸，再加入8mL35%的盐酸，溶液先澄清后析 出白色物质，油浴80°C，反应8小时。反应结束后，除去溶剂，置于茄瓶中。加入乙醚超声 搅拌1小时，反复磨洗，过滤，得到〇.91g(85%)四氢异喹啉-3-羧酸，为无色固体。熔点 246-247°C。ESI-MS(m/e) :176[M-H]。
[0024] 实施例2制备四氢异喹啉-3-羧酸甲酯
[0025] 向50ml的爺型瓶中加入6ml的甲醇，0. 4ml的二氯亚砜，搅拌，活化30min，冰 浴。加入四氢异喹啉-3-羧酸239mg，冰浴下反应12小时。抽干溶剂，再加甲醇，反复抽 干3次；加入乙醚3次，抽干，得到213mg(82. 5% )四氢异喹啉-3-羧酸甲酯，为无色粉末。 ESI-MS(m/e) :192[M+H]+〇
[0026] 实施例3制备异喹啉-3-羧酸甲酯
[0027] 用无水DMF将四氢异喹啉-3-羧酸甲酯213mg溶解，加入蒸馏水溶解的高锰酸钾 溶液，在冰浴下缓慢加入，室温下反应24小时。反应结束后，将DMF吹干，用甲醇将黑色粉 末溶解后过滤，滤液旋干。柱层析分离纯化。得到77mg(37%)异喹啉-3-羧酸甲酯，为微 黄色固体。Rf = 0.25(二氯甲烷：甲醇，20 : 1) ;ESI-MS(m/e) dSSDM+Hr/HNMlUDMSO-df；， 500MHz) δ/ppm = 9.421 (s，lH)，8.666 (s，lH)，8.258 (d，J = 4Ηζ，1Η)，8.22 (d，J = 4Hz， 1H)，7. 897 (m，2H)，3. 944 (s，3H)。
[0028] 实施例4制备异喹啉-3-羧酸
[0029] 将lg异喹啉-3-羧酸甲酯用甲醇溶解，调PH值为12,室温下反应。反应4小时 结束后，调PH值为7,旋除甲醇，调PH值为4,有固体析出，过滤，得到370mg(40% )异喹 啉-3-羧酸，为无色固体。Mp231-232°C ;ESI-MS(m/e) :172[M-H]。
[0030] 实施例 5 制备 Boc-Arg (N〇2) -Phe-OBzl
[0031] 将Boc-Arg (N02) 3g溶于无水DMF中，冰浴下加入HOBt和DCC的无水DMF溶液，冰浴 搅拌20min，得到活泼酯溶液A待用。将Phe-0Bzl2. 4g溶于无水DMF中，NMM调节PH为8-9， 得到溶液B。将B倒入A中，室温反应12小时。反应结束后，将反应液减压浓缩至干，用乙酸 乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠、饱和氯化钠水溶液各洗3遍。分出酯层， 无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化，得到2. 8g(57% )Boc-Arg(N02)_Phe-0Bzl， 为无色固体。Rf = 〇.25(二氯甲烷：甲醇，20 : 1) ;ESI-MS(m/e) :557[M+H]+。
[0032] 实施例 6 制备 Arg (NO〗) -Phe-OBzl
[0033] 称取 Boc-Arg (N02)-Phe-OBzllg 于茄瓶中，加入 3N HC1 EtOAc 约 10mL。TLC 监测 反应进度，反应4小时反应结束。水泵抽干液体，加入乙酸乙酯溶解，反复3次；再用无水乙 醚磨洗抽干3次，得到0. 89mg (99% ) Arg (N02)-Phe-OBzl，为无色粉末。
[0034] 实施例 7 制备异喹啉-3-甲酰-Arg (NG_N02) -Phe-OBzl
[0035] 将异喹啉-3-羧酸0. 31g溶于无水DMF中，冰浴下加入HOBt和DCC的无水DMF溶 液，冰浴搅拌20min，得到活泼酯溶液A待用。将Arg (N02) -Phe-OBzlO. 9g溶于无水DMF中， NMM调节PH为8-9,得到溶液B。将B倒入A中，室温反应14小时。反应结束后，将反应液 减压浓缩至干，用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。滤液依次用饱和碳酸氢钠、饱和氯化钠水溶 液各洗3遍。分出酯层，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化，得到0. 54g (45. 7 % ) 异喹啉-3-甲酰-Arg(NG_N02)-Phe-0Bzl，为无色固体。ESI-MS(m/e) :612[M+H]+ ;mp : 89-90 °C ；[α]〇 = -1.6(c = 0.49, CH30H) ；IR(KBr) :3294.42,3062.96,3032. 10,2935.66, 2870. 08,1743. 65,1654. 92,1624. 06,1593.20,1516.05,1454.33,1438.90,1388.75, 1261. 45,1111. 00,906. 54,748. 38,698. 23 /HNMlUDMSO-df；，300MHz) δ /ppm = 9. 39 (s，1H)， 8. 78(d，J = 6Hz，lH)，8. 71(d，J = 6Hz，lH)，8. 58(s，lH)，8. 265(d，J = 9Hz，lH)，8. 21(d， J = 6Hz，1H)，7. 86 (m，3H)，7. 23 (m，10H)，5. 09 (m，2H)，4. 625 (m，2H)，3. 045 (m，4H)，1. 72 (m， 2