盖片沟道和底片沟道生长出氧化锌纳米棒阵列。
[0044]步骤5、将盖片和底片重叠并压紧，盖片和底片的侧边用聚二甲基娃氧烧(PDMS)封涂并在热台上烘干；盖片沟道和底片沟道之间构成捕获腔，盖片和底片紧密粘合后，制备成氧化锌纳米棒阵列衬底的微粒释放芯片，结果见图1所示。
[0045]—种氧化锌纳米棒阵列为衬底的芯片对细胞进行释放的方法，包括以下步骤: 步骤1、利用注射栗通过输入口向捕获腔内注入循环肿瘤细胞溶液，循环肿瘤细胞溶液为经过细胞筛选仪进行筛选，循环肿瘤细胞溶液内的细胞尺寸大小5~30um。控制注射栗使得的输入口的循环肿瘤细胞溶液流速为80uL/min，注入500uL循环肿瘤细胞溶液到捕获腔中；在向输入口注射循环肿瘤细胞溶液的同时流过捕获腔的循环肿瘤细胞溶液从输出口溢出；从输出口溢出的循环肿瘤细胞溶液中的细胞直径小于9um。
[0046]在捕获腔内捕获到循环肿瘤细胞，循环肿瘤细胞距离输出口的距离为整个捕获腔长度的1/4?1/3，循环肿瘤细胞直径为15~30um，在十倍镜的明场视野下，计算捕获的循环肿瘤细胞数量为256个。
[0047]步骤2、从输出口向捕获腔内注入浓度为0.0675mol/L的稀磷酸溶液，稀磷酸溶液从输出口注入的流速为80uL/min，通入的时间为12min，使得氧化锌纳米棒阵列衬底溶解，捕获的循环肿瘤细胞得到释放，释放的循环肿瘤细胞会随着稀磷酸溶液从输入口输出，在原十倍镜的明场视野下，捕获腔内残留的循环肿瘤细胞个数为26个；计算出循环肿瘤细胞的释放效率为 n= (256-26)/256=89.8%。
[0048]步骤3、将从输入口输出的带有释放出来的循环肿瘤细胞的稀磷酸溶液收集到体积1.5mL的离心管中；添加体积为0.7mL的磷酸盐缓冲溶液(磷酸盐缓冲溶液的PH=7.3，磷酸盐缓冲溶液中NaCl的摩尔浓度为137mmol/L，KCL的摩尔浓度为2.7mmol/L，他2即04的摩尔浓度为4.3mmol/L，ΚΗ2Ρ04的摩尔浓度为1.4mmol/L)，将离心管放入离心机中进行离心，离心机转速为1200r/min，时间为6min，去除上清液，并往离心管中加入体积为500uL的10% (v/v)胎牛血清的RPMI1640培养基。将离心管中的溶液转移到培养瓶，将培养瓶放入37° C 二氧化碳培养箱进行孵育，孵育时间为2天，然后进行显微镜观察循环肿瘤细胞生长情况，统计循环肿瘤细胞能够贴壁生长的细胞为193个，求得细胞存活率为η =193/(256-26) = 83.9%。
[0049]本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。
【主权项】
1.氧化锌纳米棒阵列衬底的微粒释放芯片，包括底片和盖设在底片上的盖片，其特征在于，盖片的底部设置有盖片沟道，底片的顶部设置有与盖片沟道位置对应的底片沟道，盖片沟道和底片沟道构成捕获腔，盖片的两端分别设置有与捕获腔连通的输入口和输出口，盖片沟道和底片沟道内均设置有氧化锌纳米棒阵列，盖片沟道的深度自输入口至输出口的方向依次减小，底片沟道的深度自输入口至输出口的方向依次减小或者底片沟道的深度为定值。2.根据权利要求1所述的氧化锌纳米棒阵列衬底的微粒释放芯片，其特征在于，所述的盖片沟道和底片沟道均为等腰梯形的沟道且盖片沟道和底片沟道位置上下对应一致，盖片沟道的上底边位于盖片上输入口 一端。3.根据权利要求2所述的氧化锌纳米棒阵列衬底的微粒释放芯片，其特征在于，盖片沟道居中设置在盖片上，底片沟道居中设置在底片上，盖片沟道和底片沟道的上底边均为8.5mm，下底边均为19mm，高均为61.5mm，盖片沟道上底边处的深度为30?35um，盖片沟道下底边处的深度为2.5?3um，底片和盖片的长度、宽度、厚度均分别为75mm、25mm、l.1mm，输入口和输出口的孔直径为0.6mm，输入口与等腰梯形的上底边的垂直距离为1.5mm，输出口与等腰梯形的下底边的垂直距离为5mm，底片沟道的深度均为5um ;或者底片沟道上底边处的深度为35um，底片沟道下底边处的深度为3um，底片沟道上底边处的深度至底片沟道下底边处的深度渐变。4.权利要求1或2或3所述的氧化锌纳米棒阵列衬底的微粒释放芯片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: 步骤1、盖片一端钻孔作为输入口，盖片另一端钻孔作为输出口， 步骤2、盖片和底片通过湿法刻蚀分别得到盖片沟道和底片沟道， 步骤3、盖片沟道和底片沟道分别镀了一层厚度为135?145nm的氧化锌薄膜， 步骤4、将质量为2.975g的六水合硝酸锌、质量为1.402g的六次甲基四胺以及水配置为混合溶液，混合溶液的体积为400mL，将盖片和底片放入混合溶液中，在恒定温度95 ° C下加热混合溶液，加热时间为120?180min，盖片沟道和底片沟道生长出氧化锌纳米棒阵列， 步骤5、将盖片和底片重叠并压紧，盖片和底片的侧边用聚二甲基娃氧烧(PDMS)封涂并在热台上烘干；盖片沟道和底片沟道之间构成捕获腔，盖片和底片紧密粘合后，制备成氧化锌纳米棒阵列衬底的微粒释放芯片。5.利用权利要求1或2或3所述的氧化锌纳米棒阵列为衬底的芯片对细胞进行释放的方法，其特征在于，包括以下步骤: 步骤1、利用注射栗通过输入口向捕获腔内注入循环肿瘤细胞溶液，循环肿瘤细胞溶液为经过细胞筛选仪进行筛选，循环肿瘤细胞溶液内的细胞尺寸大小5~30um，控制注射栗使得的输入口的循环肿瘤细胞溶液流速为60?80uL/min，注入500uL循环肿瘤细胞溶液到捕获腔中；在向输入口注射循环肿瘤细胞溶液的同时流过捕获腔的循环肿瘤细胞溶液从输出口溢出；在捕获腔内捕获到循环肿瘤细胞， 步骤2、从输出口向捕获腔内注入浓度为0.0675mol/L的稀磷酸溶液，稀磷酸溶液从输出口注入的流速为60?80uL/min，通入的时间为10?12min，捕获的循环肿瘤细胞得到释放，释放的循环肿瘤细胞会随着稀磷酸溶液从输入口输出， 步骤3、将从输入口输出的带有释放出来的循环肿瘤细胞的稀磷酸溶液收集到体积1.5mL的离心管中；添加体积为0.5?0.7mL的磷酸盐缓冲溶液，将离心管放入离心机中进行离心，离心机转速为1000?1200r/min，离心时间为3?6min，去除上清液，并往离心管中加入体积为500?600uL的RPMI1640培养基，将离心管中的溶液转移到培养瓶，将培养瓶放入37° C 二氧化碳培养箱进行孵育，孵育时间为2?3天。6.根据权利要求5所述的氧化锌纳米棒阵列为衬底的芯片对细胞进行释放的方法，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲溶液PH为7.3，磷酸盐缓冲溶液中NaCl的摩尔浓度为137mmol/L，KCL 的摩尔浓度为 2.7mmol/L，Na2HP04的摩尔浓度为 4.3mmol/L，ΚΗ2Ρ04的摩尔浓度为 1.4mmol/L0
【专利摘要】本发明公开了氧化锌纳米棒阵列衬底的微粒释放芯片，包括底片和盖设在底片上的盖片，盖片底面和底片顶面均设置有沟道从而构成捕获腔，捕获腔内设置有氧化锌纳米棒阵列。盖片上设置有输入口和输出口，盖片沟道的深度自输入口至输出口的方向依次减小，底片沟道的深度自输入口至输出口的方向依次减小或者底片沟道的深度为定值。本发明还公开了氧化锌纳米棒阵列衬底的微粒释放芯片的制备方法和氧化锌纳米棒阵列为衬底的芯片对细胞进行释放的方法。本发明氧化锌纳米棒阵列为柔性衬底，为滑动的微粒提供平台；可以筛选到尺寸大小符合要求的循环肿瘤细胞；从芯片中释放出的微粒有较好的活性，伤害低。
【IPC分类】C12M3/00, C12N5/09
【公开号】CN105349421
【申请号】CN201510920209
【发明人】李颂战, 高易凡, 刘侃, 张南刚, 刘松林
【申请人】武汉纺织大学
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年12月11日