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【主权项】
1. 一种用于在体外获得人类视网膜祖细胞的方法，包括以下步骤： (i) 将人类多能干细胞的贴壁培养物放置于促神经培养基中；以及 (ii) 使所述培养物保持在所述促神经培养基中，直至出现色素细胞和/或神经上皮样 结构。2. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述促神经培养基缺乏以下分化因子中的至少一 种：头蛋白、Dkk-Ι和IGF-1。3. 根据权利要求2所述的方法，其中，所述促神经培养基缺乏头蛋白、Dkk-Ι和IGF-1。4. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，在步骤（i)中，所述多能干细胞形成 达到至少80 %细胞覆盖的集落型单层。5. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，步骤(ii)进行至少7天。6. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，用于获得视网膜色素上皮细胞(RPE细胞）， 其中，所述方法进一步包括以下步骤： (iiiRPE)从在步骤(ii)中获得的培养物收集至少一个色素细胞；以及 (iVRPE)培养在步骤(iiiRPE)中获得的色素细胞。 7 .根据权利要求6所述的方法，其中，在贴壁培养系统中进行步骤(iVRPE)中的培养。8. 根据权利要求1至5中任一项所述的方法，用于获得神经视网膜细胞，其中，所述方法 进一步包括以下步骤： (iiiNR)从在步骤（ii)中获得的培养物，收集来自至少一个神经上皮样结构的细胞；以 及 (iVNR)培养在步骤（iiiNR)中获得的细胞。9. 根据权利要求8所述的方法，其中，在步骤(iiiNR)中收集至少一个神经上皮样结构。10. 根据权利要求8或9所述的方法，其中，在非贴壁培养系统中进行步骤（ivNR)中的培 养。11. 根据权利要求8至10中任一项所述的方法，其中，在步骤(ivNR)中，在至少5天中向培 养基中补充FGF2。12. 根据权利要求8至11中任一项所述的方法，其中，在摇动的条件下进行步骤(ivNR)中 的培养。13. 根据权利要求8至12中任一项所述的方法，用于获得光感受器前体，其中，步骤 (ivNR)进行至少21天。14. 根据权利要求13所述的方法，其中，在步骤（ivNR)中，在至少1天至5天中，向培养基 中添加缺口抑制剂。15. 根据权利要求13或14所述的方法，进一步包括以下步骤:通过细胞表面标记物CD73 的结合，对光感受器前体进行细胞分选。16. 根据前述权利要求中任一项所述的方法，用于获得RPE细胞和神经视网膜前体，其 中，权利要求6或7中限定的步骤(iiiRPE)和步骤(ivRPE)与权利要求8至14中任一项限定的步 骤(iiiNR)和步骤Qvnr)平行进行。
【专利摘要】本发明涉及一种用于在体外获得人类视网膜祖细胞的方法，该方法包括以下步骤：(i)将人类多能干细胞的贴壁培养物放置于促神经培养基中；以及，(ii)使所述培养物保持在所述促神经培养基中，直至出现色素细胞和/或神经上皮样结构。有利地，可进行额外的步骤，以获得RPE细胞和/或神经视网膜前体。
【IPC分类】C12N5/079, C12N5/071, C12N5/0793
【公开号】CN105492596
【申请号】CN201480029524
【发明人】萨夏·赖奇曼, 奥利维尔·古瑞奥, 约瑟-阿兰·萨赫尔
【申请人】皮埃尔-玛丽-居里大学(巴黎第六大学), 国家科学研究中心
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年4月25日
【公告号】CA2909851A1, EP2796545A1, EP2989200A1, US20160060596, WO2014174492A1