anol). 4 NMR (400 MHz, CDCh)， δ: 1.08 ~1.12 (m， 6H， CH3), 1.87 (s， 2H， NH2)， 2.88~3.11 (m， 2H， OfeAr), 3.84~3.95 (m， 4H， 0CH2)， 4.60(s， 1H， NCH)， 6.01 (dd， 1H， J=8 Hz PCH)， 6.90~7.33 (m， 9H， Ar-H); 13C 匪R (100 MHz, CDCh)， δ: 16.2， 16.3， 37.7， 54.4， 63.3， 63.4， 71.4, 115.5, 126.8, 128.1, 128.8, 129.3, 129.6, 135.6, 135.9, 155.0, 161.5, 170.7. IR ( KBr ) v: 3301， 2958， 2855， 1672， 1539， 1208， 1031 cm-1 。
[0026] 实施例4: 二乙基-α-(4_氟苯基)-α- (D-2-氨基苯丙酰氧基）甲基膦酸酯（I d)的制备。
[0027] 将10 m mol D-苯丙氨酸溶于50 mL四氢咲喃，冰水浴至0°C左右，加入三乙胺20 m mol。然后将12 m mol (Boc)20缓慢滴入至上述溶液。0°C左右，反应40 min，再室温反应15 h，反应完毕。反应液用乙酸乙酯萃取2 -3次，弃去上层，用酸调节pH，再用二氯甲烷萃取2-3次。合并下层有机相，用无水硫酸钠干燥，浓缩溶剂，得中间体1; 将2 mmol亚磷酸二乙酯与2 mmol对氟苯甲醛加入50ml三颈瓶中，充分混合，然后将1.5 mmol三乙胺逐滴加入混合液中。10 min后，升高温度，在80°C搅拌反应1.5 h。再在室温搅拌 反应24 h。反应完毕，减压除去三乙胺，用乙醚:石油醚=1:1重结晶，得中间体2。
[0028] 取中间体1(4 mmoL)和中间体2(4 mmol)，加入到50 mL三口瓶中，再加入EDCI (4.1 mmol)，以无水二氯甲烷（15 mL)为溶剂，搅拌溶解，冰盐浴(-5~0 °C)下，用恒压滴液 漏斗缓慢滴加 DMAP (4.1 mmol，无水二氯甲烷15 mL溶解），30 min滴加完毕，室温反应12 h，过滤，除去不溶物，浓缩溶剂，柱层析法(乙酸乙酯:石油醚=1:1)分离纯化，得中间体3。 [0029] 在反应瓶中加入无水乙酸乙酯(4 mL)，冰盐浴(-5~0 °C)下充分搅拌，依次加入甲 醇（1 mmoL)和乙酰氯（1 mmoL)，维持该温度，反应约3 h。然后将中间体3(0.5 mmoL，用5 mL 无水乙酸乙酯溶解），缓慢加入反应体系中，TLC跟踪，冰水浴下搅拌反应10 h，减压浓缩，得 粘稠液体，柱层析法(氯仿：甲醇=9:1)分离纯化，真空干燥，得到化合物（Id)，产率49.7 %。
[0030]
(c= 0.01g/mL， methanol). 4 NMR (400 MHz, CDCh)， δ: 1.08 ~1.10 (m， 6H， CH3)， 1.87 (s， 2H， NH2)， 288~3.12 (m， 2H， OfeAr)， 3.86~4.03 (m， 4H， 0CH2)， 4.61 (s， 1H， NCH)， 6.03 (dd， 1H， J=12 Hz PCH)， 6.92~7.36 (m， 9H， Ar-H); 13C 匪R (100 MHz, CDC13)， δ: 16.1， 16.3， 37.8， 54.4， 63.2， 63.5， 65.2, 115.2, 115.3, 124.4, 126.8, 128.3, 128.4, 129.0, 129.2, 129.5, 130.6, 135.8, 135.9, 158.5, 161.0, 170.3. IR ( KBr ) v: 3300, 2915, 2854, 1690, 1461， 1201， 1028 cnT1。
[0031] 实施例5: 二乙基-a-(4_氟苯基)-a- (L-2-四氢吡咯甲酰氧基）甲基膦酸酯 (I e)的制备。
[0032] 中间体1与中间体2的制备同实施例4方法。
[0033] 取中间体1(4 mmoL)和中间体2(4 mmol)，加入到50 mL三口瓶中，再加入EDCI (4.5 mmol)，以无水二氯甲烷(20 mL)为溶剂，搅拌溶解，冰盐浴(-5~0 °C)下，用恒压滴液 漏斗缓慢滴加 DMAP (4.5 mmol，无水二氯甲烷20 mL溶解），30 min滴加完毕，室温反应12 h，过滤，除去不溶物，浓缩溶剂，柱层析法(乙酸乙酯:石油醚=1:2)分离纯化，得中间体3。 [0034] 在反应瓶中加入无水乙酸乙酯(4 mL)，冰盐浴(-5~0 °C)下充分搅拌，依次加入甲 醇（11111]1〇〇和乙酰氯（11111]1〇1^)，维持该温度，反应2 11。然后将中间体3(0.8 1]11]1〇1^，用5 11^无 水乙酸乙酯溶解），缓慢加入反应体系中，TLC跟踪，冰水浴下搅拌反应10 h，减压浓缩，得粘 稠液体，柱层析法(氯仿：甲醇=8:1)分离纯化，真空干燥，得到化合物（Ie)，m.p. 85-87°C， 产率44.1 %。
[0035]
(c= 0.01g/mL， methanol). 4 NMR (400 MHz, CDCh)， δ: 1·〇6 ~1.13 (m， 6H， CH3)， 1.79~1.81 (m， 2H， CH2)， 1.96 (s， 1H， NH)， 2.14 (s， 1H， CCH2)， 2.43 (s， 1H， CCH2)， 3.27~3.43 (m， 2H， NCH2)， 3.88~4.03 (m， 2H， NCH2)， 4.23~4.36 (m， H， CH2CO)， 6.35 (dd， 1H， J=12 Hz PCH)， 6.94~7.48 (m， 4H， Αγη);1% 匪R (100 MHz, CDC13)， δ: 16.1， 16.2， 27.7， 30.5， 46.1， 58.5， 62.7， 62.8, 64.5, 115.1, 115.3, 120.7, 124.2, 128.9, 161.0, 171.1. IR ( KBr ) v: 3425, 2960, 2843, 1675, 1600, 1523, 1452, 1201, 1035 cm_1〇
[0036] 实施例6: 二乙基-a-(4_氟苯基)-a- (D-2-四氢吡咯甲酰氧基）甲基膦酸酯 (I f)的制备。
[0037] 中间体1与中间体2的制备同实施例4方法。
[0038] 取中间体1(4 mmoL)和中间体2(4 mmol)，加入到50 mL三口瓶中，再加入EDCI (4.2 mmol)，以无水二氯甲烷(20 mL)为溶剂，搅拌溶解，冰盐浴(-5~0 °C)下，用恒压滴液 漏斗缓慢滴加 DMAP (4.2 mmol，无水二氯甲烷20 mL溶解），30 min滴加完毕，室温反应12 h，过滤，除去不溶物，浓缩溶剂，柱层析法(乙酸乙酯:石油醚=1:1)分离纯化，得中间体3。 [0039] 在反应瓶中加入无水乙酸乙酯(4 mL)，冰盐浴(-5~0 °C)下充分搅拌，依次加入甲 醇（1 mmoL)和乙酰氯（1 mmoL)，维持该温度，反应2 h。然后将中间体3(0.6 mmoL，用5 mL无 水乙酸乙酯溶解），缓慢加入反应体系中，TLC跟踪，冰水浴下搅拌反应10 h，减压浓缩，得粘 稠液体，柱层析法(氯仿：甲醇=10:1)分离纯化，真空干燥，得到化合物（If)，m.p. 66-68°C， 产率45.8 %。
[0040]
(c= 0.01g/mL， methanol). 4 NMR (400 MHz, CDC13)， δ: 1·〇4 ~1.19 (m， 6H， CH3)， 1.71~1.82 (m， 2H， CH2)， 1.96 (s， 1H， NH)， 2.12 (s， 1H， CCH2)， 2.48 (s， 1H， CCH2)， 3.24~3.47 (m， 2H， NCH2)， 3.89~4.03 (m， 2H， NCH2)， 4.23~4.34 (m， H, CH2CO)， 6.34 (dd， 1H， J=8 Hz PCH)， 6.97~7.48(m, 4H， Ar-H) ;13C NMR (100 MHz, CDCb), δ： 16.1, 16.3, 27.8, 30.3, 46.1, 58.9, 63.2, 63.3, 64.5, 115.2, 115.4, 120.7, 124.2, 129.3, 158.4, 171.1. IR ( KBr ) v: 3421, 2955, 2850, 1653, 1598, 1462, 1208, 1022 cm_1〇
[0041] 抗肿瘤活性测试： 采用MTT法，以顺铂为对照，测定目标化合物对肿瘤细胞A-549、SGC-7901和EC-109的增 殖抑制作用，两点法（Reed and Muench法）计算其IC5Q值，上述各组实施例目标物的抗 肿瘤活性数据如下表：
从上表可以看出，该类化合物对肿瘤细胞A-549、SGC-7901、EC-109有潜在的增殖抑制 作用。部分化合物呈现显著抗肿瘤活性，与对照药顺铂接近。可作为抗肿瘤先导化合物研 究。
[0042]同时，相同结构目标化合物(I)的L构型较D构型氨基酸衍生物有显著抗肿瘤活性。 [0043]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此， 任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其 发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种含氨基酸片段的麟酸醋衍生物的制备方法，其特征反应式如下：反应条件a.化OH，b.化3N，c.抓CI和DMAP，d.邸3細和CH3C0C1 ;其中，R为1-5个碳 的烷基或1-5原子的烷氧基，化为H或面素或硝基1-3个碳的烷基或1-3个原子的烷氧基， R2为H或1-5碳的烷基或苯甲基或吗I噪-2-甲基或径甲基或琉甲基或对径基苯甲基或氨基 甲酯甲基或氨基甲酯乙基或C出C出C出或册CH(C出），与化直接相连的碳原子为R或S构型。2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征是:制备步骤为： 1) 制备中间体1:将氨基酸溶于四氨巧喃中，冰水浴，加入1- 3倍氨基酸量的碳酸氨钢 或=乙胺，然后加入1-2倍量的（Boc)2〇,冰水浴反应30-60 min,再室溫反应15-20 h，反应 液用乙酸乙醋萃取，弃去上层，用酸调节抑，再用二氯甲烧萃取，合并下层有机相，用无水硫 酸钢干燥，浓缩溶剂，即得； 2) 制备中间体2 :将亚憐酸醋与芳香醒（1:1.5摩尔比投料)加入S颈瓶中，然后加入1-2倍量的S乙胺，40-80°C反应1.5 h，再在室溫反应24 h，除去S乙胺，重结晶，即得； 3) 制备中间体3:取中间体1和中间体2(1:1摩尔比投料），加入反应瓶中，冰盐浴加入1 倍量的缩合剂(DCC/DMAP、EDCI/DMAP或皿TU/DIPEA)，W二氯甲烧为溶剂，溶解缩合剂，室溫 反应10-12 h，除去不溶物，浓缩溶剂，柱层析法分离纯化，即得； 4) 制备目标化合物（I):取反应瓶，加入乙酸乙醋作为溶剂，依次加入1倍量的甲醇和1 倍量的乙酷氯，反应3-5 h，然后将0.5-1倍量的中间体3溶于乙酸乙醋中，加入反应瓶，冰水 浴下反应8-10 h，减压浓缩，得粘稠液体，柱层析法分离纯化，真空干燥，即得目标化合物 (I)。3. 根据权利要求1或2所述制备方法制备的含氨基酸片段的麟酸醋衍生物作为抗肿瘤 先导化合物的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种含氨基酸片段的膦酸酯衍生物（I）的制备方法及其抗肿瘤应用，属于抗肿瘤药物研究领域。采用基于片段的药物发现方法，对前期研究的膦酸酯化合物进行优化，寻找抗肿瘤先导化合物。本发明设计了系列全新结构的膦酸酯衍生物，其制备方法：以氨基酸为原料，通过Boc保护，得中间体，再与羟基膦酸酯中间体发生成酯反应，最后脱Boc保护，制得（I）所示膦酸酯衍生物。该类衍生物对肿瘤细胞有不同增殖抑制作用。其中部分化合物对肿瘤细胞A-549、SGC-7901及EC-109有显著抗增殖作用，与对照药顺铂接近，可作为抗肿瘤先导化合物应用。
【IPC分类】C07F9/572, C07F9/40, A61P35/00
【公开号】CN105503947
【申请号】CN201511015744
【发明人】杨家强, 杨旋, 曾发奎, 黎鹏
【申请人】遵义医学院
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2015年12月31日