方法、组合物及其用途的制作方法

专利名称：方法、组合物及其用途的制作方法
方法、组合物及其用途 本发明涉及在中枢神经系统(CNS)中单胺传递的作用机制，具体地说涉及鉴定用
于治疗与单胺神经传递功能异常相关的疾病或病症的候选化合物的方法。 从古柯灌木(古柯树(erythroxylon coca))的叶片中提取的可卡因，是一种
滥用的强力精神剌激性毒品。可卡因可以通过各种方法进行滥用，包括食入、吹入以及
吸入，它的滥用在全世界的许多发达和发展中国家中成为主要问题。美国白宫的国家麻
醉品控制政策办公室(Office of NationalDrug Control Policy)估计在1988年和
1995年之间美国人在非法购买这种精神兴奋剂上花费约380亿美元，这对社会的负担是
极其巨大的。该数字既没有考虑可卡因滥用的间接费用，包括涉及法律执行、医疗入院
(medicaladmissions)、社会支持、康复和金融生产力的浪费的费用，也不包括与非法提供
和使用可卡因有关的犯罪活动对社会的危害。 可卡因的精神兴奋性作用被认为是来自它增加脑中的单胺神经递质、多巴胺功能 的能力，并且认为它在脑边缘区(limbic region)的作用负责它在人体中的活化、精神愉 快、补强性能(reinforcing)和奖赏作用(rewardingproperty) (Di Chiara等人，1993)。 在本发明之前，假说认为通过竞争性封闭多巴胺能神经元上的多巴胺重摄取转运蛋白 (DAT)位点，从而被动防止多巴胺从突触间隙中运出并运回突触前的多巴胺能神经末梢，可 卡因因此提高中枢神经系统中的多巴胺能作用。Iversen(1973)最初描述了可卡因对于神 经元单胺重摄取转运蛋白(最初称为摄取l)的这种作用方式。然而，这种假定机理并不 能解释为什么其它多巴胺重摄取抑制剂如，安非他酮和西布曲明(通过其药理学活性代谢 物)通常作为多巴胺重摄取抑制剂比可卡因更有效，但不具有人体中类似的精神兴奋性精 神愉悦的效应(Griffith等，1983 ;Miller Griffith， 1983 ;Schuh等，2000)。重要的是，使 用所述的试剂并不能有效治疗可卡因成瘾和戒除(Gorelick等，2004 ;Sofuoglu & Kosten， 2005)。

图1举例说明多巴胺胞吐释放的生理机制以及DAT在多巴胺能神经传递中的调节 作用的示意图。多巴胺能神经元发放的增长速率可导致多巴胺从含多巴胺的神经末梢中胞 吐释放到突触间隙中。然后这种化学信使通过位于突触间隙的受体将信号传递给受体(突 触后)神经元。用于终止多巴胺能信号传导的初级生理机制是通过钠/氯离子通道DAT的 活化重摄取方法，从突触间隙除去神经递质(图2)。如图3所示，竞争性重摄取抑制剂，如， 西布曲明(通过其活性代谢物)和安非他酮，可阻断该过程，并引起突触间隙中的多巴胺浓 度逐步的、适中的以及延长的增加，从而逐步的和适中的增强多巴胺能神经传递。竞争性 重摄取抑制剂对多巴胺能神经传递没有直接效应，它仅仅强化和延长胞吐释放多巴胺的作 用。 相反，如图4所示，可卡因和药理学相关的化合物(例如引起人体中可卡因样精神 兴奋性和精神愉悦的效应的哌醋甲酯(Rush & Baker，2001))作用于DAT上的单独位点，即 "可卡因结合位点"，Edvardsen & Dahl， 1994)，以增强多巴胺能的神经传递。尽管很久以前 知道可卡因结合该位点，但是通常相信可卡因仅仅作为竞争性DAT抑制剂(参看西布曲明 代谢物和安非他酮)，通过这些转运蛋白，被动地阻止多巴胺从神经突触的清除。
竞争性DAT底物-释放剂，例如d-苯丙胺、去氧麻黄碱(methamphetamine)、甲基 苯丙胺(methylamphetamine)、亚甲基二氧苯丙胺(MDA)和亚甲二氧基去氧麻黄碱(MDMA)， 都是中枢神经系统中的多巴胺能神经传递的强力兴奋剂(表l)。这些分子的大小和3维结 构与多巴胺相似。如图5所示，这些释放剂是DAT复合物的竞争性底物，所述DAT复合物将 它们泵入含多巴胺的神经末梢。 一旦进入突触前末梢，它们从"可释放型"(新合成)和泡 状存储池(vesicular storage pool)迁移多巴胺，并通过迁移作用驱使该神经递质进入突 触间隙中。因为释放剂是DAT复合物的底物，它们还通过与多巴胺竞争输送到突触前神经 末梢中而延迟多巴胺从突触间隙的清除。竞争性DAT底物释放剂主要从神经末梢内部产生 药理作用，另外它们对多巴胺能神经传递的作用与神经元发放无关。 表2概要显示了在这些各种不同的DAT配体的药理学特征之间的相似性和关键区 别。 针对该背景，发明人令人惊讶地发现可卡因不是常规的竞争性多巴胺重摄取抑制 剂，反而作为DAT复合物上的"可卡因结合位点"的反激动剂。这种更加强力的、可逆转了 多巴胺的输送以致于其被泵出多巴胺能神经末梢的动力学药理学机理，解释了为什么可卡 因和相药物具有严重的精神兴奋性滥用倾向。 Pole等人(1982)在80年代首先创造了术语"反激动剂"，以描述苯丙二氮杂萆配 体的新类别的作用，如FG-7142。已知苯丙二氮杂萆激动剂结合Y-氨基丁酸(GABA)A型 氯离子通道受体上的调节位点，其中所述激动剂可促进氯离子流动到神经细胞中，并因为 该机理而成为抗惊厥药和抗焦虑药。通过拮抗剂如Ro 15-1788可阻止它们的作用，其中它 们本身对氯离子流没有作用，并因此被描述为药理学上的"沉默"。另一方面，观察到配体如 FG-7142的作用与苯丙二氮杂萆激动剂的作用是相反的，它们使得神经元中氯离子流减少， 因此它们是助惊厥剂(proconvulsant)和深度致焦虑剂(anxiogenic)。由于它们的作用是 反向苯丙二氮杂罩激动剂，因此逻辑上将它们描述为"反激动剂"。现在已知存在许多其它 的受体系统的反激动剂，包括G蛋白偶联受体。然而，在这种情况下，本发明首先描述了转 运蛋白钠/氯离子DAT的"反激动剂"，其中该钠/氯离子DAT存在于脑中的含多巴胺的神 经元中，并在调节多巴胺能神经传递中发挥关键作用。 本文中的证据表明DAT上的"可卡因结合位点"是该转运蛋白上变构的调节位点， 并且本文中的可卡因和相关化合物作为反激动剂来使得多巴胺分子从神经末梢运出并运 进突触间隙。通过该动力学机理，可卡因极大地增加脑中的多巴胺能神经传递。可卡因和 相关化合物在多巴胺能神经末梢外部发挥这种作用，并依赖于整体的多巴胺能神经发放。
这对于可卡因和相关"可卡因结合位点"配体而言是令人惊讶的药理学作用机理 特征，表明可卡因通过作用为多巴胺重摄取转运蛋白(DAT)的反激动剂而产生其精神兴奋 性和精神愉悦效应。 尽管大多数研究集中于可卡因对DAT的作用，跨膜转运蛋白的单胺家族还包括 5-羟色胺(SERT)和去甲肾上腺素(NET)转运蛋白(Amara和Arriza， 1993)。这些三分子 都是具有高氨基酸同源性的依赖Na7Cl-的单胺重摄取位点(Blakely等人，1991 ;Giros等 人，1991， 1992 ;Pacholczyk等人，1991 ;Ramamoorthy等人，1993)。可卡因能高亲合性结合 DAT、NET和SERT(Hyttel， 1982 ;Richelson & Pfenning, 1984 ;参见表3)。
本发明和实现其所用的实验方法，可应用为其它可卡因结合位点配体即反激动剂、部分反激动剂、激动剂、部分激动剂和拮抗剂的筛选和药理学表征的方法，作为用于处 理可卡因过量、可卡因渴求(cocaine craving)、可卡因成瘾以及戒除可卡因滥用而产生的 生理和心理综合症的新药物(图7)。此外，本发明具有治疗性用途，来研制新的可卡因结合 位点配体，即反激动剂、部分反激动剂、激动剂、部分激动剂以及拮抗剂，以作为用于治疗与 精神兴奋剂滥用相关的临床疾病的药物，和用于治疗由脑中的多巴胺能功能的障碍或过度 引起的精神病和神经系统疾病以及病症的药物(图7)。 本发明还可应用于发现和研制用于治疗由其它滥用的精神兴奋性药品产生的过 量、渴求、成瘾以及停药综合征的新药物，所述的药品包括，但不限于苯丙胺、去氧麻黄碱、 MDA和MDMA及其异构体和同源物。本发明的其他优点在于提供用于以双向方式(即上调和 下调)药理学调控脑中的多巴胺能神经传递，同时还维持多巴胺能神经元发放的生理速率 的方法。这种模式可用于研制治疗由多巴胺能神经传递的不足或过量引起的精神病和神经 系统疾病的新药物。由多巴胺能神经传递不足引起的病症的实例包括但不限于注意涣散 多动症(ADHD)和认知、冲动、注意力和攻击行为的相关CNS病，以及嗜眠症和帕金森病。由 多巴胺能神经传递过量引起的病症的实例包括但不限于精神分裂症、分裂情感性精神障 碍和相关的精神病(psychoses)。 因此，本发明的第一个方面提供鉴定用于治疗与中枢神经系统中单胺神经传递的
功能异常相关的疾病或病症的候选化合物的方法，所述方法包括以下步骤 a)提供待测试的化合物； b)测试该化合物结合单胺重摄取转运蛋白的可卡因结合位点的能力；禾口 c)测试该化合物通过单胺重摄取转运蛋白来调节单胺神经递质的向内或向外的
转运的能力； 其中，如果该测试化合物能够结合单胺重摄取转运蛋白的可卡因结合位点并调节 其活性，该测试化合物被鉴定为用于治疗与单胺神经传递功能异常相关的疾病或病症的候 选化合物。 因此，本发明第一个方面的方法中的步骤(c)包括测试单胺重摄取转运蛋白的活 性，具体地说通过测试单胺神经递质的向内或向外的转运。 在一个实施方案中，步骤(c)包括测试化合物调节单胺重摄取转运蛋白的可卡因 结合位点的活性的能力。因此，步骤(c)可以包括测试化合物调节可卡因对单胺重摄取转 运蛋白的作用的能力。 因此本发明提供用于鉴定和药理学辩别新药的筛选策略，其中所述的药物是DAT 复合物上的可卡因结合位点的反激动剂、部分反激动剂、拮抗剂、部分激动剂以及完全激动 剂(图6，表4和5)。 如表2中详述，DAT复合物上的可卡因结合位点配体具有独特的药理学特征，其可 鉴别竞争性DAT重摄取抑制剂和竞争性DAT底物释放剂。鉴于可卡因是DAT复合物的反 激动剂的意外发现，因此显而易见的是作为其对该钠/氯离子转运蛋白的动力学作用的结 果，这些化合物可以表现出从反激动剂(逆转了DAT转运蛋白的方向)到沉默拮抗剂(对 DAT转运蛋白的功能不具有药理学作用)直到完全激动剂(可显著增强多巴胺从突触间隙 上的清除速率)的药理学作用的范围。然而，本发明证明了药物对可卡因结合位点的作用 依赖于多巴胺能神经元的神经元发放的生理速率。因此，常规的功能筛选技术，如抑制[3H]多巴胺摄取突触小体，不可应用于检测和药理学表征具有这些动力学特征的分子。这是因 为在突触小体(synaptosomal)和细胞系制品中，缺少完整神经解剖的和生理性多巴胺能 神经发放，这些作用对可卡因结合位点配体在DAT复合物上的可卡因结合位点配体的动力 学作用是必不可少的。如所附的实施例所述，在有知觉或麻醉的大鼠中的脑内微量透析和 伏安测量法以及电剌激的神经元快速循环伏安测量的体内技术，带了意想不到的发现可 卡因结合位点是位于DAT复合物上的变构的调节亚基，当可卡因结合该位点时，它作为反 激动剂来逆转多巴胺转运的正常方向。由于这种相互作用的动力学性质和其依赖于完整的 多巴胺能神经元发放，因此所述的实验技术需要用于所有可卡因结合位点配体的发现和药 理学表征中。图6显示常规的筛选分析，如放射性配体受体结合，目前如何被用于确定稳定 表达DAT复合物的组织或细胞系中可卡因结合位点的配体的亲合性。然而，所述的技术不 能确定所述的化合物的功能，如反激动剂、部分反激动剂、拮抗剂、部分激动剂或激动剂。如 表4和5所述，通过使用上述的体内技术可实现该目的，其中对用于定义新的可卡因结合位 点配体的药理学特征的相关结果进行了限定。 优选地，本发明提供其中单胺重摄取转运蛋白选自由多巴胺、去甲肾上腺素和/ 或5-羟色胺(5-HT)的重摄取转运蛋白组成的组的方法。 因此，在一个实施方案中，单胺重摄取转运蛋白是多巴胺重摄取转运蛋白。 例如，本发明可以提供其中疾病或病症与中枢神经系统中多巴胺神经传递的不足
有关的方法；具体地说，疾病或病症选自由下列各项组成的组帕金森病、嗜眠症、注意涣
散多动症(ADHD)、边缘人格障碍(borderlin印ersonality disorder)、间歇性暴发性精神
障碍、反社会人格障碍、精神作用物质滥用(substance abuse)、偷窃狂和纵火狂。 或者，疾病或病症可以与中枢神经系统中的多巴胺神经传递过量相关，例如所述
疾病或病症选自包括精神分裂症、分裂情感性精神障碍、精神分裂症样精神障碍、精神作用
物质滥用_感应性精神障碍、妄想性精神障碍(delusional disorder)、躁狂和共有精神病
性精神障碍的组。 在另外的实施方案中，单胺重摄取转运蛋白是去甲肾上腺素重摄取转运蛋白。
例如，本发明可以提供其中疾病或病症与中枢神经系统中去甲肾上腺素神经传递 的不足有关的方法，例如疾病或病症选自包括冲动型、注意型和攻击型障碍，例如注意涣散 多动症(ADHD)、边缘人格障碍、间歇性暴发性精神障碍、反社会人格障碍、精神作用物质滥 用、偷窃狂和纵火狂以及抑郁症，精神作用物质滥用、偷窃狂、纵火狂和抑郁症的组，或由其 组成的组。 或者，疾病或病症可以与中枢神经系统中去甲肾上腺素神经传递过量相关，例如 疾病或病症选自包括恐慌发作、创伤后精神紧张性精神障碍、焦虑、恐怖症和强迫性障碍 (obsessive compulsive disorders)的组，或由其组成的组。 在另外的实施方案中，单胺重摄取转运蛋白是5-羟色胺重摄取转运蛋白。 例如，本发明可以提供其中疾病或病症与中枢神经系统中5-羟色胺神经传递的
不足有关的方法，例如疾病或病症选自包括冲动型、注意型和/或攻击型障碍，例如边缘人
格障碍、间歇性暴发性精神障碍、反社会人格障碍、精神作用物质滥用、偷窃狂、纵火狂、进
食障碍(eating disorder)(如暴食症、贪食症、厌食症)、焦虑、恐怖症、强迫性障碍和抑郁
症的组，或由其组成的组。
或者，本发明提供其中疾病或病症与中枢神经系统中5-羟色胺神经传递过量有 关的方法，例如偏头痛。 在本发明的优选实施方案中，通过使用合适放射性配体的体外受体结合来实施 步骤(b)，如[3H]WIN35， 428 (如Aloyo等人，1995 ;Chen等人，1996 ;Katz等人，2000)，和 通过下列来实施步骤(c):使用组织切片、细胞或突触小体的体外神经递质释放或重摄取， (如de Langen & Mulder, 1980 ;Pristupa等人，1994 ;Pifl等人，1995 ;Heal等人，1996 ; Sershen等人，1996 ;Rowley等人，2000)，体外电生理学法(如Jones等人，1996 ;Cragg等 人，2000)，体内微量透析法(如Rowley等人，2000)，体内伏安测量法(如Wu等人，2001)， 体外生物传感器或体内植入的生物传感器(如Crespi等1990 ;Allen 1997)
对于本领域技术人员而言可以理解的是，本发明方法的步骤(c)可以包括测试化 合物被动和/或主动调节单胺重摄取转运蛋白活性的能力。 在一个实施方案中，本发明提供的方法中，步骤(c)包括测试化合物被动调节单 胺重摄取转运蛋白(和/或其可卡因结合位点)的活性的能力。 例如，步骤(c)可以包括测试化合物作用为单胺重摄取转运蛋白(和/或其可卡 因结合位点)拮抗剂的能力。 在一个实施方案中，本发明提供这样的方法，其中，步骤(c)包括测试化合物主动 调节单胺重摄取转运蛋白(和/或其可卡因结合位点)的活性的能力。
例如，步骤(c)可以包括测试化合物作用为单胺重摄取转运蛋白反激动剂(完全 或部分)的能力。通过以下特征可表征单胺重摄取阻断剂(blocker)的可卡因结合位点的 所述反激动性 (i)化合物能诱导和/或增加依赖于神经元细胞发放的单胺释放；禾口
(ii)化合物对单胺的重摄取率没有作用。 通过体内微量透析测量单胺的流出(efflux)，可确定依赖细胞发放的单胺释放。
例如，通过用河豚毒素或EGTA进行微量透析探针的灌注，可抑制细胞发放。 通过测量转运到突触小体中的标记单胺，可测定单胺的重摄取率。 或者，或另外，步骤(c)可包括测试化合物作用为单胺重摄取转运蛋白的激动剂
(完全或部分)的能力。 或者，或另外，步骤(c)可包括测试化合物拮抗单胺重摄取转运蛋白(和/或其可 卡因结合位点)的激动剂或反激动剂的作用的能力。 对于本领域技术人员而言可以理解的是，步骤(c)可包括或者由体外和/或体内 测试化合物调节单胺重摄取转运蛋白活性的能力组成。 在优选的实施方案中，步骤(c)包括或者由测试化合物在单胺重摄取转运蛋白上 的可卡因结合位点作用的能力组成。例如，步骤(c)可包括或者由测试化合物作用为在多 巴胺重摄取转运蛋白上的可卡因结合位点的激动剂(完全或部分)的能力而组成。
可使用各种体外和体内技术，评价药物对多巴胺(关于它们对该神经递质的突触 浓度的作用的替代物)的神经元外(extraneuronal)浓度的作用，包括例如，通过表面灌流 从预负载的脑切片中测量[3H]多巴胺的体外释放、通过脑内微量透析联同高效液相色谱法 (HPLC)外加电化学检测或体内脑内快速循环伏安测量法，测量自由活动的大鼠脑中的神经 元外多巴胺浓度。根据这种联合技术获得的数据显示，可卡因和相关的化合物不用作竞争性DAT重摄取抑制剂、参看西布曲明(通过其活性代谢物)和安非他酮、或竞争性底物释放 剂、参看苯丙胺和去氧麻黄碱；相反，它们具有独特的药理学作用方式，所述方式与在DAT 复合物上的变构、调节位点的反激动性一致，其中该位点是可卡因结合位点。因此总之，可 卡因与竞争性DAT重摄取抑制剂不同，因为在高浓度下它从预负载的脑切片释放[3H]多巴 胺，并且当通过体内脑内微量透析进行测量时，它在发作和较短时期内可极快地激发神经 元外多巴胺浓度的极大增加。可卡因在药理学上不同于竞争性底物释放剂，因为虽然如脑 内微量透析实验所示，两种化合物都可体内激发神经元外多巴胺浓度的极大增加，但可卡 因的作用依赖于多巴胺能神经元发放，而竞争性底物释放剂的作用并非如此。最后，体内伏 安测量法实验显示可卡因提高了由电剌激激发的多巴胺的释放速率和释放的神经递质最 大量，但这种药物并不延迟多巴胺从突触间隙的清除速率。从这两项观察已经推导出本申 请的创造性，即可卡因结合位点不仅是DAT复合物上的、可卡因被动结合以遏制多巴胺摄 取的部位，而且它是调控多巴胺转运进出多巴胺能神经元的速率和方向的变构、调节位点。 而且，本文中显示可卡因可作为DAT上的可卡因结合位点的反激动剂，以增强发放激发的 多巴胺流出。如果通过附着到可卡因结合位点上，可卡因作用为重摄取抑制剂，它将降低神 经递质的清除速率，但是数据显示并非如此。 通常，步骤(c)包括测试化合物调节单胺重摄取转运蛋白的活性的能力，可使用 以下一种或多种方法，但不限于 (A)通过表面灌流(superfusion)，体外测量来自含有单胺重摄取转运蛋白位点 的组织切片、细胞(或其亚细胞部分)的自发单胺释放(如deLangen & Mulder， 1980 ; Pristupa等人，1994 ;Pif 1等，1995 ;Heal等人，1996); (B)通过表面灌流，体外测量来自含有单胺重摄取转运蛋白位点的组织切片、细胞 (或其亚细胞部分)的单胺重摄取(如de Langen & Mulder， 1980 ;Pristupa等人，1994 ; Pif 1等人，1995 ;Heal等人，1996); (C)通过表面灌流，体外测量来自含有单胺重摄取转运蛋白位点的组织切片、细胞 (或其亚细胞部分)电诱发的单胺释放(如Sershen等人，1996); (D)通过电生理学技术，体外测量来自含有单胺重摄取转运蛋白位点的组织切片、 细胞(或其亚细胞部分)的自发和/或电诱发的单胺流出(如Jones等人，1996 ;Cragg等 人，2000); (E)使用一种或多种生物传感器，体外和/或体内测量自发和/或电诱发的单胺流 出(如Crespi等人1990 ;Allen 1997); (F)通过在动物上进行微量透析，体内测量依赖细胞发放的和不依赖细胞发放的 单胺流出(如Rowley等人，2000); (G)通过伏安测量法，体内测量动物中的自发和/或电诱发的单胺流出(如Wu等 人，2001)。 在优选的实施方案中，(A) 、 (B)和(c)包括体外测量标记的单胺的释放。 在另一优选实施方案中，将(E)的生物传感器用例如酶、抗体和/或神经递质受体包被。 对于本领域技术人员而言可以理解的是，本发明的方法可包括一种或多种以下技 术选项/组合
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单独A，单独B，单独C，单独D，单独E，单独F，单独G， A+B、 A+C、 A+D、 A+B+C、 A+B+C+D 、 A+B+D 、 B+C 、 B+D 、 C+B 、 C+D 、 A+C+E (体外)、A+C+E (体内)、A+C+F 、 A+C+G 、 A+B+C+E (体 外)、A+B+C+E (体内)、A+B+C+F、 A+B+C+G、 A+D+E (体外)、A+D+E (体内)、A+D+F、 A+D+G、 A+B+D+E (体外)、A+B+D+E (体内)、A+B+D+F、 A+B+D+G。 还可理解的是，本发明的方法可使用含有单胺重摄取转运蛋白位点的任何组织、 细胞或亚细胞部分。例如，含有单胺重摄取转运蛋白位点的细胞可位于或来自组织切片，例 如脑切片(如基底神经节区)。 优选地，本发明提供其中组织切片来自于脑(例如脑的多巴胺能区)的方法。
还可以在培养物中维持含有单胺重摄取转运蛋白位点的细胞。因此，细胞可选 自由初级细胞和无限增殖化细胞(即细胞系)组成的组，其已进行了遗传修饰以表达单 胺重摄取转运蛋白。用于遗传修饰细胞的合适方法可参见Sambrook & Russell， 2001， Molecular Cloning :A LaboratoryMa皿al (分子克隆实验室手册)，Cold Spring Harbor Press (冷泉港实验室)。 在一个实施方案中，含有单胺重摄取转运蛋白位点的细胞是血细胞。 或者，含有单胺重摄取转运蛋白位点的细胞位于或来自于肾血管。 或者，可在亚细胞部分，如突触小体中测量单胺的释放或重摄取。 含有单胺重摄取转运蛋白位点的细胞可来自任何合适的来源，例如人源或非人源
(如啮齿动物，例如小鼠或大鼠)。 在本发明的包括体内评价单胺重摄取转运蛋白功能的方法中，优选在脑中实施所 述测量。例如，在富含包含单胺重摄取转运蛋白细胞的脑区中实施体内测量。通常，可以在 脑的多巴胺能区(如基底神经节)中进行体内测量单胺重摄取转运蛋白的功能。
优选地，在人或非人物种(如啮齿动物，例如小鼠或大鼠)中实施体内测量。
适于检测单胺释放和重摄取的技术是本领域中已知的。优选地，本发明的方法 可使用放射性配体计数、放射自显术、HPLC(例如，联合了荧光检测、电检测、质谱分析法检 测)、免疫测定法、荧光检测、电检测、质谱分析法检测以及酶测定。 在一个实施方案中，本发明方法的步骤(c)包括测试待测化合物以不同剂量调节 单胺重摄取转运蛋白活性的能力。例如，可以使用大剂量的测试化合物(如10—5M)和小剂 量的测试化合物(如10—7M)，通过表面灌流进行体外测量单胺自组织的释放。
优选地，本发明的方法还包括对测试化合物的不利或不合乎需要的性能(例如潜 在的毒性和/或滥用)进行反向筛选。 有利的是，方法还包括将化合物制备成药物组合物的步骤(d)，所述化合物被鉴定 为用于治疗与中枢神经系统中的单胺神经传递功能异常相关的疾病或病症的候选化合物。
在另一方面中，本发明提供根据本发明方法所鉴定的化合物。 例如，化合物可以是单胺重摄取转运蛋白的可卡因结合位点的完全或部分反激动 剂。或者，化合物可以是单胺重摄取转运蛋白的可卡因结合位点的完全或部分激动剂。在 另外的实施方案中，化合物是作为单胺重摄取转运蛋白的可卡因结合位点的反激动剂的配 体(例如可卡因)拮抗剂。 在另一方面中，本发明提供包含本发明的化合物和药用载体或赋形剂的药物组合 物。
可使用可注射的、持续释放的药物递送系统来递送本发明的化合物、药剂和药物 组合物。对这些进行专门设计以减少注射频率。所述系统的实例是重组生长激素缓释剂 (Nutropin D印ot)，它将重组人生长激素(rhGH)包封在生物可降解的、注射后可在延长时 间内缓慢释放rhGH的微球体中。 本发明的化合物、药剂和药物组合物的备选递送方法是热敏感的ReGel可注射系 统。低于体温时，ReGel是可注射的液体，而在体温时，它立刻形成胶状容器，其可缓慢地融 蚀和溶解为已知安全的可生物降解的聚合物。当生物聚合物溶解时，可随时间递送活性物 质。 优选地，本发明的药剂和/或药物组合物是单位剂量，其含有日剂量或单位日亚 剂量或其合适部分的活性成分。 通常在药用剂型中，以包含活性成分的药物组合物的形式，通过口服或任何肠胃 外的路径来施用本发明的化合物、药剂和药物组合物，所述活性成分任选以非毒性的有机 酸或无机酸或碱、加成盐的形式存在。可以根据待治疗的病症和患者以及给药途径，以不同 剂量进行施用组合物。 在人的治疗中，以单独形式施用本发明的化合物、药剂和药物组合物，但通常与适
合于预定给药途径和标准药物实践的药物赋形剂、稀释剂或载体混合进行给药。 例如，以可包含增香剂或着色剂的片剂、胶囊剂、ovule、酏剂、溶液剂或混悬剂的
形式，通过口服、颊含或舌下进行施用本发明的化合物、药剂和药物组合物，从而用于立即、
延迟或控制释放的应用。还可通过海绵体内(intracavernosal)注射进行施用本发明的化
合物、药剂和药物组合物。 所述片剂含有赋形剂如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙和甘氨酸， 含有崩解剂如淀粉(优选玉米、马铃薯或木薯淀粉)、淀粉羟乙酸钠、交联羧甲基纤维素钠 和一些复合硅酸盐，以及含有颗粒粘合剂如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙甲基纤维素(HPMC)、羟丙 纤维素(HPC)、蔗糖、明胶以及阿拉伯胶。另外，可包含润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸、甘油
二十二烷酸酯以及滑石。 还可使用相似类型的固体组合物作为明胶胶囊中的填充剂。在这方面优选的赋形 剂包括乳糖、淀粉、纤维素、乳糖(milk sugar)或高分子量聚乙二醇。对于水性混悬剂和/ 或酏剂，可将本发明的化合物结合各种甜味剂或增香剂、色素或染料，结合乳化剂和/或悬 浮剂，结合稀释剂如水、乙醇、丙二醇以及甘油，及其组合。 本发明的化合物、药剂和药物组合物还可通过肠胃外途径，例如静脉内注射、动脉 内注射、腹膜内注射、鞘内注射、气管内注射、室内注射、胸骨内注射、颅内注射、肌内注射或 皮下注射进行给药，或它们可以通过输注技术进行给药。最好以无菌水性溶液的形式进行 使用，其中所述的无菌水性溶液可含有其它物质，例如足够的盐或葡萄糖以使得溶液与血 液等渗。如果需要，可对水性溶液进行适当地缓冲处理(优选pH为3至9)。通过本领域技 术人员熟知的标准药物方法，可容易地在无菌条件下进行适宜的肠胃外制剂的制备。
适于肠胃外给药的药剂和药物组合物包含水性和非水性的无菌注射溶液，所述溶 液可含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂以及保持制剂与预定受体血液等渗压的溶质；以及可以 包含悬浮剂和增稠剂的水性和非水性的无菌混悬液。在单位剂量或多剂量容器中，药剂和 组合物可以呈现为例如密封的安瓿瓶和小瓶，并可贮存在冻干(冷冻干燥)条件下，在使用之前仅仅需要直接加入无菌液体载体(例如注射用水)。从前述种类的无菌粉末、颗粒和片 剂，可制备临时注射溶液和混悬液。 对于口服和肠胃外给药于人患者，以单剂量或分剂量的形式，进行给药本发明的 化合物、药剂和药物组合物的日剂量水平。 因此，例如，本发明的化合物的片剂或胶囊剂根据需要可含有足够的、用于在一定 时间单次或两次或多次给药的活性剂。在任何情况下医生确定最适于任何个体患者的实际 剂量，该剂量根据具体人患者的年龄、体重和反应变化。上述剂量是普通病例的典型。当然， 存在更高或更低的剂量范围是有用的个别情况，这也在本发明的范围之内。
本发明的化合物、药剂和药物组合物还可通过鼻内或吸入进行给药，并以干粉吸 入器或气雾剂喷雾工具(presentation)的形式，通过使用适宜的推进剂，从增压的容器、 泵、喷雾器或雾化器进行便利的给药，所述的推进剂例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二 氯四氟乙烷、氢氟烷，如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134A3或1， 1， 1， 2， 3， 3-七氟丙烷(HFA 227EA3) 、二氧化碳或其它适宜的气体。对于增压的气雾剂，通过提供可递送计量值的阀来 确定剂量单位。增压的容器、泵、喷雾器或雾化器可以含有活性剂的溶液或混悬液，如使用 乙醇与作为溶剂的推进剂的混合物，其中可另外含有润滑剂，如脱水山梨糖醇三油酸酯。可 以将吸入器或吹入器中使用的胶囊剂和药筒(例如，由明胶所制备)，配置成含有本发明的 试剂和适宜的粉末基质，如乳糖或淀粉的粉末混合物。 优选使用气雾剂或干粉制剂，使得每个计量的药剂量或药团(puff)含有用于递
送给患者的本发明的化合物。可以理解的是，对于气雾剂的总日剂量在患者和患者之间是
有差别的，并且在全天中是以单剂量或更通常是分剂量的形式进行给药。 或者，本发明的化合物、药剂和药物组合物可以以栓剂或阴道栓剂的形式进行给
药，或它们可以以洗齐U、溶液齐U、乳膏齐U、软膏剂或扑粉的形式进行局部施用。本发明的化合
物、药剂和药物组合物还可透过皮肤进行给药，例如通过使用皮肤贴剂。 出于局部皮肤应用的目的，将本发明的化合物、药剂和药物组合物配制成含有活
性剂的合适软膏剂，其中活性剂悬浮或溶解于具有下列一种或多种物质的混合物中矿物
油、液体石蜡、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯试剂、乳化蜡和水。或者，可以将它们
配制成悬浮或溶解在例如下列一种或多种的混合物中的适宜洗剂或乳膏剂矿物油、脱水
山梨醇单硬脂酸酯、聚乙二醇、液体石蜡、聚山梨酯60、十六烷基酯蜡、十六烷醇(cetearyl
alcohol) 、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。 适于口中局部给药的制剂包括锭剂，其在调味基质(flavoured basis)(通常是蔗 糖和阿拉伯胶或黄芪胶)中包含活性成分；软锭剂，其在惰性基质(如明胶和甘油，或蔗糖 以及阿拉伯胶)中包含活性成分；以及漱口剂，其在适宜的液体载体中包含活性成分。
通常，在人中，口服或肠胃外给药本发明试剂的化合物、药剂和药物组合物是优选 和最便利的途径。 对于兽医用途，根据常规的兽医实践，将本发明的化合物、药剂和药物组合物作为 合适可接受的制剂进行给药，并且兽医师会确定最适于具体的动物的剂量给药方案和给药 途径。 适当的，制剂是药物制剂。
有利的是，制剂是兽医用制剂。
本发明还提供如本文所述的药物中所用的化合物。因此，本发明提供根据本发明 的化合物用于制备药物的应用，所述药物用于治疗与中枢神经系统中单胺神经传递的功能 异常有关的疾病或病症。 例如，疾病或病症可以与多巴胺、去甲肾上腺素和/或5-羟色胺(5-HT)的重摄取 转运蛋白的功能异常有关。 因此，在一个实施方案中，单胺重摄取转运蛋白是多巴胺重摄取转运蛋白。 例如，本发明可以提供其中疾病或病症与中枢神经系统中多巴胺神经传递的不足
有关的治疗方法；具体地说，所述疾病或病症选自包括帕金森病、嗜眠症、注意涣散多动症
(ADHD)、边缘人格障碍、间歇性暴发性精神障碍、反社会人格障碍、精神作用物质滥用、偷窃
狂和纵火狂的组，或由其组成的组。 或者，疾病或病症可以与中枢神经系统中的多巴胺神经传递过量相关，如所述疾 病或病症选自包括精神分裂症、分裂情感性精神障碍、精神分裂症样精神障碍、精神作用物 质滥用_感应性精神障碍、妄想性精神障碍、躁狂和共有精神病性精神障碍的组，或由其组 成的组。 在另外的实施方案中，单胺重摄取转运蛋白是去甲肾上腺素重摄取转运蛋白。
例如，本发明可以提供其中疾病或病症与中枢神经系统中去甲肾上腺素神经传递 的不足有关的治疗方法，如疾病或病症选自包括冲动型、注意型和攻击型障碍，例如注意涣 散多动症(ADHD)、边缘人格障碍、间歇性暴发性精神障碍、反社会人格障碍、精神作用物质 滥用、偷窃狂、纵火狂以及抑郁症，精神作用物质滥用、偷窃狂、纵火狂和抑郁症的组，或由 其组成的组。 或者，疾病或病症可以与中枢神经系统中去甲肾上腺素神经传递过量相关，如疾 病或病症选自包括但不限于恐慌发作、创伤后精神紧张性精神障碍、焦虑、恐怖症和强迫性 障碍的组。 在另外的实施方案中，单胺重摄取转运蛋白是5-羟色胺重摄取转运蛋白。 例如，本发明可以提供其中疾病或病症与中枢神经系统中5-羟色胺神经传递的
不足有关的治疗方法，如疾病或病症选自包括冲动型、注意型和/或攻击型障碍，例如边缘
人格障碍、间歇性暴发性精神障碍、反社会人格障碍、精神作用物质滥用、偷窃狂、纵火狂、
进食障碍(暴食症、贪食症、厌食症)、焦虑、恐怖症、强迫性障碍和抑郁症的组，或由其组成的组。 或者，本发明提供其中疾病或病症与中枢神经系统中5-羟色胺神经传递过量有 关的方法，例如偏头痛。 不必将本说明书中在先出版的文件的列表或讨论视为认可了这些文件是现有技 术的一部分，或是一般常识。 现在通过参考以下表和附图来描述用于具体说明本发明某些方面的优选的、非限 制性实施例。 表l :各种DAT配体对自大鼠纹状体切片的[3H]多巴胺释放的作用。
表2 :各种类型DAT配体的分类。 表3 :比较作为放射性标记的多巴胺、去甲肾上腺素和5HT的重摄取抑制剂的可卡 因的相对功效。
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表4 :使用脑内微量透析或伏安测量功能筛选法，表征各种DAT可卡因结合位点的 配体。 表5 :使用体内电剌激、快速循环伏安测量筛选法，表征各种DAT可卡因结合位点 的配体 图1 :多巴胺能神经传递的生理过程。沿着多巴胺能神经元的轴突前进的作用电 位(神经脉冲)发生去极化，使得多巴胺通过所谓的胞吐过程从它的储存泡囊中大量释放 到突触间隙中。化学信使(多巴胺)扩散穿过突触间隙，直至到达多巴胺将其信号通过活化 突触后受体进行传递的受体神经元。主要通过离子梯度驱动的、经过突触前多巴胺能的神 经末梢上的多巴胺重摄取转运蛋白(DAT)位点的主动转运，从突触间隙除去该神经递质， 从而终止多巴胺能信号转导。 图2 :多巴胺重摄取转运蛋白(DAT)复合物的工作原理。通过涉及离子梯度的活 性转运蛋白DAT，将多巴胺泵回突触前末梢。重摄取转运蛋白结合多巴胺、2个钠离子和1 个氯离子，并将它们转移到突触前末梢中。通过钠/钾ATP酶和调节氯离子通道(如GABAA 受体)，维持为系统供能的离子梯度。 图3 :竞争性的多巴胺重摄取抑制剂的药理学机理。竞争性多巴胺重摄取抑制剂，
如西布曲明或安非他酮，竞争性结合多巴胺重摄取转运蛋白，从而防止DAT将多巴胺从突
触间隙清除。这种被动作用导致逐渐地和适中地增加突触间隙中多巴胺的浓度。 如图所示，竞争性多巴胺重摄取抑制剂增强了自神经末梢外的多巴胺能神经传
递，并且它们的作用依赖于神经元发放的速率。重摄取抑制剂没有直接的药理作用；它们仅
仅增强和延长了生理性释放的多巴胺的作用。 图4 :可卡因的药理学机理。与通过多巴胺竞争性阻断多巴胺转运到神经末梢中 的经典重摄取抑制剂，如西布曲明和安非他酮不同，可卡因结合DAT复合物上的变构位点 (可卡因结合位点)。作为反激动剂，可卡因逆转了转运蛋白的功能，即从转运蛋白将多巴 胺转运到神经末梢中的机理反向改变为将多巴胺主动运出神经末梢的机理。结果是迅速而 又极大地增加了突触中的多巴胺浓度，因此增加多巴胺能的神经传递；这种机理解释了可 卡因的极强的精神兴奋性特征。 如图所示，可卡因通过结合于神经末梢外部的DAT位点而增强了多巴胺能的神经 传递，并且其作用依赖于神经元发放。 图5 :竞争性DAT底物、释放剂的药理学机理。竞争性DAT底物释放剂，如ch苯丙
胺和去氧麻黄碱，是模拟内源性单胺递质(多巴胺)的小分子。通过DAT复合物，将它们主
动转运到突触前神经末梢中。 一旦进入神经元，通过所谓的"反向转运"或"逆向转运"的
过程，它们将多巴胺迁出存贮位点，并强迫将其释放到突触间隙中。通过与单胺转运到多巴
胺能的神经末梢中进行竞争，多巴胺释放剂还延迟了这种单胺从突触间隙的清除。 如图所示，竞争性DAT底物释放剂增强了自神经末梢内部的多巴胺能神经传递，
并且它们的作用不依赖神经元发放。 图6 :用一系列在DAT上的可卡因结合位点的激动剂和反激动剂性质，检测配体的 筛选方法。 图7 :对于各种可卡因结合位点配体的作用、滥用可能性和临床应用的范围。
图8 :西布曲明和d-苯丙胺对活动自由的大鼠伏核(皿cleusaccumbens)中的胞外多巴胺浓度的作用。各数据点表示平均值士S.E.M. (n = 8-11);垂直箭头表示西布曲 明、d-苯丙胺或盐水给药。根据ANCOVA，使用事后比较(post hoc)t检验进行多重比较^P < 0. 05、#P < 0. 01、^P < 0. 001显著地不同于盐水处理组。数据来自Rowley等人(2000)。
图9 :通过盐水、d-苯丙胺和可卡因诱导的中前额皮质(medialprefrontal cortex)中的胞外多巴胺水平的时程。通过盐水、d-苯丙胺(雌性为1.25mg/kg，雄性为 1.56mg/kg)和可卡因(20mg/kg)诱导的中前额皮质中胞外多巴胺水平的时间过程。超过 20分钟间隔就收集样品。以基线值的百分比(+SEM)表示数据。数据来自Maiso皿euve等 人(1990)。 图10 :河豚毒素对于由d-苯丙胺和可卡因诱发的伏核中的神经元外多巴胺的增 加的微分效应。在第一箭头所示的点，表示将用于透析探针的林格溶液(Ringer solution) 换成含有河豚毒素(1X10—6M : n = 4)的溶液。在第二箭头所示的点(对于使用标准林格 溶液测试的动物，n = 7)，表示对所有动物进行注射d-苯丙胺(0. 5mg/kg s. c.)或可卡因 (15mg/kg i. p.)。结果表示为在换成林格溶液之前(实心方块)或在注射d-苯丙胺或可 卡因之前(空心圆)收集的三个样品中所测的预处理值的平均值。透析液(用于通过探针 回收的未校正的)中多巴胺的基准水平是O. 062±0. 014pmol/20iil。数据来自Westerink 等人(1987)。 图11 :RTI-76对伏核中胞外多巴胺的电诱发水平的作用。显示了在不同动物中 所记录的两组诱发的信号。第一组示踪描述了在脑室内注射(intracerebroventricular injection) RTI-76(100nmo1 ;实心圆)后1天，所监测的多巴胺信号中的变化。第二组 (C0N;空心圆)数据在首次用于实验的大鼠中记录。出于比较的目的，在该图和图12中的 时间和浓度比例尺以及数据格式是相同的。数据来自Wu等人(2001)。
图12 :RTI-76对伏核中胞外多巴胺的电诱发水平的作用。显示了在不同动物中所 记录的两组诱发的信号。第一组示踪描述了在脑室内注射RTI-76(100nmo1 ;实心圆)后1 天，所监测的多巴胺信号中的变化。第二组(C0N;空心圆)数据在首次用于实验的大鼠中 记录。出于比较的目的，在该图和图12中的时间和浓度比例尺以及数据格式是相同。数据 来自Wu等人(2001)。
实施例 通过表面灌流，体外测量各种DAT配体对从大鼠纹状体切片释放的[3H]多巴胺的 作用 Heal等人(1992)详细描述了所使用的方法。简单地说，处死成年的雄性CD大鼠 (180-300g)，快速除去纹状体(striatal)，并使用McIIwain组织切片机以成90°C的2个 方向切削组织，以制备切片。然后，在37°CT，将切片在pH7. 4的、含有0. 13mM帕吉林和 60nM[3H]多巴胺(45Ci/mmol)的2ml Krebs Henseleit缓冲液(188mM NaCl、25mM NaHC03、 llmM D-葡萄糖、4. 7mM KCl、1.2mM MgS04、1.2mM KH2P04、1.3mM CaCl2，充气95% 02_5% C02) 中温育20分钟。将5mg等分试样的切片转入表面灌流装置的单个槽中，并用预热至37°C 的Krebs Henseleit缓冲液进行灌注。流速是1ml/分钟，进行灌注最初30分钟后，已经 除去切片上的神经元外[3H]多巴胺，以2分钟间隔收集组分。在灌注测试化合物的溶液 (10—7-10—5M)或单独的Krebs Henseleit缓冲液之后，收集8分钟(1-4等分试样)的[3H] 多巴胺的溢流，以设定[3H]多巴胺的溢流的基线水平。最后，将所有切片灌注额外的10分钟。通过液体闪烁计数法，测定组分和切片中的放射性。然后，将等分试样编号5-13中释 放[3H]多巴胺的累积值计算为最初存在于切片中的总放射性的分数。 Heal等人(1992和1996)描述的实验中所评价的测试化合物，包括西布曲明，其活 性代谢物，即BTS 54 354(N-(l-[l-(4-氯苯基)环丁基]-3_甲基丁基卜N-甲胺)和BTS 54 505(1-[1-(4-氯苯基)环丁基]-3-甲基丁胺)、安非他酮、可卡因d-l-苏型-哌醋甲 酷、d-苯丙胺和去氧麻黄碱。 通过脑内微量透析，测量各种DAT配体对活动自由的大鼠伏核中的神经元外多巴 胺浓度的作用 根据Rowley等人(2000)的详细描述，实施微量透析实验。简单地说，用在02/ N20混合物中的异氟烷(每个1L/分钟)，麻醉雄性Sprague-Dawley大鼠(体重范围 250-350g)。用2mm Hospal膜吸头，将同心微量透析探针(外径300 y M)立体定向植入伏 核中(坐标A :+2. 2mm ;L :相对于前囟为-1. 5mm ;相对于颅骨表面为-8. 0mm，参见Paxinos 和Watson (1986)的立体定位图解)，并使用不锈钢螺钉和牙齿粘合剂固定到颅骨。手术后， 使用连接了可确保动物自由活动的液体转轴(liquid swivel)和平衡臂(counterbalanced arm)的微量透析探针，分别安置大鼠。用人造CSF(150mMNa+、3. OmM K+、0. 8mM Mg2+、1.4mM Ca2+、1. 0P2+、155mM Cl-)，以1. 2iUL/min的流速连续灌注探针。实验中，将样品以20分钟 的间隔收集到O. 1M高氯酸中，然后贮存在4t:中，直至通过高效液相色谱法(HPLC)联同电 化学检测法进行测定多巴胺的浓度。 收集了 4X20分钟的基准样品后，通过腹膜内注射给药药物，并在接下来的4h中 收集20分钟的透析液样品。所研究的药物包括西布曲明一水合盐酸盐(2. 0或6. 0mg/kg ip)和硫酸d-苯丙胺(0. 5或1. 5mg/kg ip)。 Maiso皿euve等人(1990)描述了本申请中所包括的其它透析数据，他们比较了腹 膜内注射硫酸d-苯丙胺(1. 25mg/kg对于雌性，和1. 56mg/kg对于雄性)与注射盐酸可卡 因(20mg/kg ip)对水合三氯乙醛或戊巴比妥麻醉的Long-Evans大鼠的中前额皮质中的多 巴胺神经元外浓度的作用。此外，如Westerink等人(1987)所述，他们比较了可预防神经 元发放的钠通道阻断剂河豚毒素对由可卡因和d-苯丙胺诱发的伏核中的增加浓度的多巴 胺的作用。 通过快速循环伏安测量法，体内测量可卡因对大鼠伏核中电诱发的多巴胺胞吐作 用的作用。 在Wu等人(2001)的出版物中详细描述了这些实验。简单地说，通过注射尿烷 (1. 5g/k ip)，麻醉成年的雄性Sprague-Dawley大鼠(体重范围250_400g)。根据立体定位 的对照，植入两个工作电极，其中一个在尾状核(caudate putamen)的核心区中，另一个在 伏核的核心区中。在同侧的前脑纤维束(forebrain bundle)中植入剌激微电极。在60Hz、 2秒、300 A的剌激下，通过降低剌激电极直至记录下尾状核和伏核中的强信号，以确定多 巴胺能神经元的位置。将参考电极对侧植入表层皮质中。优化设置后，在全部记录周期中 不改变电极位置。剌激电极是具有0. 2mm尖头、间隔1. 0mm的螺旋形双极电极。除这些尖 头之外，电极的整个长度是绝缘的。计算机生成电剌激，并与伏安测量值保持同步。施用恒 流、双相方波脉冲(每相300-400 ii A和2msec)。剌激训练周期是2秒，随机应用在10和 60Hz之间的频率。使用柱状碳纤维微电极(暴露尖头半径=2. 5 m、长度二 50-100 y m)，确定神经元外的多巴胺量。计算机控制电化学法，并使用配备了 2个工作电极的稳压器。 每100msec施加三角波(-400至lOOOmV ;300v/秒扫描率)。扫描中的偏压电势(bias potential)是_400mV。所有电势可参考银/氯化银电极。体内实验后，从连续伏安图中的 多巴胺的氧化电势峰值电流(典型地500-700mV)，并根据各工作电极的体外校准值转化成 浓度，从而获得神经元外的多巴胺浓度。通过从在基线记录中收集的数据扣除剌激中收集 的伏安值(voltammogram)，获得消除本底的循环伏安值。对稳压器的模拟输出值进行数字 处理，并贮存在计算机中。 在脑室内注射RTI-76 (3 13 - ( P -氯苯基)托烷_2 13 -羧酸P -异硫氰酸根苯基甲 基酯盐酸盐；100nmol，10ii1)后1天或2天，并在注射可卡因(40mg/kgip)之后20分钟，
开始实施循环扫描伏安测量法。
结果 通过表面灌流，体外各种DAT配体对自大鼠纹状体切片的[3H]多巴胺释放的作用
表4报道了各种DAT配体对从表面灌流的大鼠纹状体切片中所释放的[3H]多巴 胺的作用。竞争性DAT重摄取抑制剂，西布曲明，其2个活性代谢物(BTS 54 354和BTS 54505)，以及安非他酮，在低浓度(10—7M)或高浓度(10—5M)下并不从纹状体切片释放[3H] 多巴胺。相反，竞争性DAT底物释放剂，即d-苯丙胺和去氧麻黄碱，从纹状体切片剂量依赖 性释放[3H]多巴胺，这种作用在低浓度和高浓度都是统计上显著的。可卡因和哌醋甲酯的 性质与其它类型的DAT配体不同，前者在低浓度(10—7M)时，对纹状体切片的[3H]多巴胺溢 流没有剌激作用，但在高浓度(10—5M)时出现统计上显著的增加(Heal等人，1992)。
将西布曲明、d-苯丙胺和可卡因对大鼠脑中的神经元外多巴胺浓度的作用进行比 较，如通过脑室内微量透析所测定的 如图8A所示，当对大鼠注射竞争性DAT抑制剂西布曲明时，其引起活动自由的 大鼠伏核中神经元外的多巴胺浓度缓慢而又渐进地增加。在该药物的较低剂量(2.0mg/ kg ip)，增加不能达到统计显著性。然而，在较高剂量(6.0mg/kg ip)，在60分钟时观察到 231±87%的最大增加(P< 0.001)。对伏核中神经元外多巴胺的这些作用，非常不同于用 竞争性DAT底物释放剂、d-苯丙胺的药理学等效剂量(0. 5和1. 5mg/kg ip)所观测的作用。 因此，如图8B所示，在40分钟时，随着开始达到该药物的两种剂量的最大值，d-苯丙胺对伏 核中神经元外多巴胺浓度的作用出现快速增长。而且，O. 5mg/kg剂量的242±89%峰值增 加和1. 5mg/kg剂量的603±319%峰值增加，显著地大于在这些早期时点(即0_40分钟和 40-80分钟)的西布曲明所观测的峰值增加(P < 0. 05)。如图8A和8B所示的这些结果， 清楚举例说明竞争性DAT抑制剂和竞争性DAT底物释放剂之间存在的、对神经元多巴胺的 作用动力学之间的区别。 如图9所示的数据，根据Maissoneuve等人(1990)公开的研究表明在作用的起 始迅速程度和强度方面，难以区分竞争性DAT底物释放剂、d-苯丙胺以及DAT可卡因结合位 点配体(可卡因)之间的作用。然而，Westerink等人(1987)还使用了微量透析技术，表明 类似于d-苯丙胺，竞争性DAT底物释放剂对神经元外多巴胺浓度的作用不依赖于多巴胺能 的神经元发放，因为通过在透析液中包含了、可切断神经元发放的钠通道封闭剂河豚毒素， 它们没有被改变(图IOA)。相反，通过在透析液含有河豚毒素防止了可卡因对突触的多巴 胺浓度的增强作用，这表明其药物学完全依赖于完整的多巴胺能神经元发放(Westerink
20等人，1987 ;图10B)。 根据快速循环伏安测量法的测定结果，比较可卡因和RTI-76对大鼠伏核中神经 元外的多巴胺浓度的作用 RTI-76是非竞争性DAT抑制剂，如图11清楚所示，当给药于大鼠(lOOnmol icv) 时，该化合物以依赖频率的方式提高了伏核中胞外多巴胺的浓度。与重摄取抑制作用及其 作用机理一致，明显延迟了 DAT对多巴胺的清除(表示为峰值后的伏安图斜率)(Wu等人， 2001)。 相反，如图12所示，可卡因对伏核中神经元外的多巴胺浓度的作用非常不同，在 全部剌激频率所观测的该神经递质的峰值浓度具有巨大增加；然而，从突触间隙的清除速 率，即峰值后的伏安图斜率，通常与那些显示可卡因通过依赖发放的释放增加作用而增加 突触的多巴胺浓度的对照的那些相似。这些数据还显示可卡因不会作为重摄取抑制剂，来 延迟多巴胺从突触的清除(Wu等人，2001)。
讨论 当汇总这些数据时，明显可知可卡因及其它DAT可卡因结合位点配体(如哌醋甲 酯)对脑中多巴胺能的功能的药理作用不同于其它药物学类别的DAT配体的那些，即经西 布曲明的代谢物和安非他酮举例证明的竞争性DAT重摄取抑制剂，以及经d-苯丙胺、MDA 和MDMA举例证明的竞争性DAT底物释放剂。因此，通过它们在高浓度下体外中度增加自预 负载的大鼠纹状体切片的[3H]多巴胺溢流的能力，可卡因结合位点反激动剂、可卡因和哌 醋甲酯可以不同于竞争性DAT重摄取抑制剂。之所以使用切片，是因为它们保持神经解剖 学的结构，并且很可能在该组织制备中出现一些生理性神经元发放现象，以便产生这些可 卡因结合位点配体对DAT的依赖发放的作用。通过Westerink等人(1987 ;图10B)的体内
微量透析实验，证明了这种对于可卡因诱发的完整多巴胺能神经元发放的依赖，可提高神 经元外的多巴胺浓度。同样地，在体外可卡因和哌醋甲酯还可不同于竞争性DAT底物释放 剂，如d-苯丙胺和去氧麻黄碱，因为后者引起自预负载的大鼠纹状体切片中的[3H]多巴胺 极度释放，并且在极低药物浓度下出现这种作用。该观测结果符合不依赖神经元发放的这 些释放剂的多巴胺释放机制。通过脑内微量透析实验已经体内证实这种假设，实验显示通 过使用透析探针来输注钠通道阻断剂(河豚毒素)，阻断多巴胺能的神经元发放不会防止 这些释放剂增强突触的多巴胺浓度(Westerink等人，1987 ;图10A)。 总之，这些体外和体内的发现说明可卡因和哌醋甲酯具有明显不同于其它DAT配 体的药理学机理。然而，这些出版物的作者，即Westerink等人(1987) 、 Maissoneuve等人 (1990) 、Heal等人1992， 1996)或Rowley等人(2000)，没有进行创造性推导过程，即可卡因 和相关化合物是DAT复合物的反激动剂；它们仅仅作为重摄取抑制剂或可能作为未指明作 用机理的释放剂。 在本专利申请观点中，包括了 Wu和同事(2001)的自体内循环伏安测量法的研 究发现，但这些作者再一次推断可卡因仅仅作为如西布曲明代谢物和安非他酮所举例证 明的常规的竞争性DAT重摄取抑制剂。在他们的报导中，Wu等人(2001)指出可卡因不影 响多巴胺从突触间隙的清除速率。[参见"该现象的一个有趣的结果是电剌激诱发的 胞外DA的清除率，即先前显示的反映多巴胺的最初摄取量的Vmax(参见Eq. 3) (Wightman 等人，1988)，不会明显受到可卡因的影响。事实上，描述了胞外DA的清除的诱发反应部分，基本上禾口高浓度(> 1 U M)的前药反应平行。(Oneinteresting result of this phenomenon was that the extracellular clearance rateof DA evoked by electrical stimulation, shown previously to reflect Vmax fordopamine uptake primarily(see Eq. 3)(Wightman et al，1988)， was notmarkedly affected by cocaine. In fact, the portion of the evoked responsedescrib ing the clearance of extracellular DA was essentially parallel to th印redrug response at high concentrations ( > 1 li M)) "Wu 等人，2001，第6340，页R/H栏，第3段，第4-6行和第6341页，LH栏，第1段第1-4行]。
这些作者还指出其它异常发现首先，可卡因对突触的多巴胺浓度的增强作用 与DAT位点数目是负相关的。[参见"图8中最清楚地显示了这种关系在抑制剂诱导 的胞外DA水平的增加与多巴胺释放的速率常数[DA]p以及V^中之间的负相关性，其中 Vmax是与DA摄取位点数目成正比的。(The relationship is best d印icted in Figure 8 that shows an inverse correlationbetween inhibitor—induced increases in extracellular DA levels and [DA]p arate constant for dopamine release,and V隨， which is proportional to the皿mber of DA uptake sites.) "Wu等人，2001，第6345 页，L/H栏，第2段，第4-8行]，其次，在可卡因对多巴胺释放的作用与其通过封闭多巴胺重 摄取转运蛋白位点而介导的竞争性抑制作用之间，存在无法解释的相关性。[Ex :"在DA释 放和摄取抑制作用之间所观测的相关性是令人惊讶的，因为通过动力学分析不能显示药物 对释放的直接作用(图5) (The observedcorrelation between DA release and uptake inhibitor effects is surprisingbecause a direct action of the drugs on release is not indicated by the kineticanalysis (Fig. 5)) "。 Wu等人，2001，第6345页，L/H 栏，第3页，第1-3行]。这是互相矛盾的发现，因为Wu等人(2001)与他们自己关于可卡 因是竞争性多巴胺重摄取转运蛋白抑制剂的假设并不一致。本专利的创造性在于已经推断 出DAT上的可卡因结合位点是用于控制多巴胺转运速率和方向的复合物的调节、变构的亚 基。其次，它推断DAT转运多巴胺的正常方向是进入突触前末梢，而作为反激动剂作用的可 卡因，则在该位点逆转了多巴胺的转运方向，即转运出而不是运进神经末梢。因此，通过依 赖于完整神经元发放的机理，如果可卡因通过DAT复合物逆转了多巴胺的转运方向，DAT位 点数目越多，可卡因增强多巴胺的胞吐释放的作用就越强。因为可卡因作用为增强多巴胺 释放的反激动剂，而不是作为竞争性多巴胺重摄取抑制剂，因此它不影响多巴胺从突触间 隙的清除。在又与更高水平的胞吐多巴胺释放有关的高发放速率下，贮存在突触前末梢的 可释放突触前池中的神经递质数量将显著地减少，其中所述的神经递质通过DAT位点上的 可卡因反激动作用而可转运到突触间隙中。因此，当在低发放速率下多巴胺的胞吐释放是 相对较小时，其通过可卡因的反激动剂的作用得到显著增强，而在高发放速率下，可卡因对 突触的多巴胺浓度的作用相对于胞吐释放是较小的；这通过Wu等人(2001)中图12的数据 可得到精确地反映。 总之，这些来自各种来源的实验数据带来意想不到的发现，即可卡因和相关的可 卡因结合位点配体的新作用机理。本发明及其研究中所用的实验方法可用于筛选和药物表 征能结合DAT复合物上可卡因结合位点的其它配体。最后，本发明具有发现和开发药物的 治疗应用，所述药物用于治疗与精神兴奋精神兴奋剂滥用相关的临床疾病以及由于脑中的 多巴胺能功能的不足或过量而引起的精神病和神经疾病。
22
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权利要求
一种鉴定用于治疗与中枢神经系统中单胺神经传递的功能异常相关的疾病或病症的候选化合物的方法，所述方法包括以下步骤a)提供待测试的化合物；b)测试所述化合物结合单胺重摄取转运蛋白的可卡因结合位点的能力；和c)测试所述化合物通过单胺重摄取转运蛋白以调节单胺神经递质的向内或向外的转运的能力；其中，如果所述测试化合物能够结合单胺重摄取转运蛋白的可卡因结合位点并调节其活性，所述测试化合物被鉴定为用于治疗与单胺神经传递功能异常相关的疾病或病症的候选化合物。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤(c)包括测试所述化合物调节单胺重摄取转 运蛋白的可卡因结合位点的活性的能力。
3. 根据权利要求1或2所述的方法，其中所述单胺选自由多巴胺、去甲肾上腺素和 5-羟色胺(5-HT)组成的组。
4. 根据权利要求3所述的方法，其中所述单胺是多巴胺。
5. 根据权利要求4所述的方法，其中所述疾病或病症与中枢神经系统中多巴胺神经传 递的不足有关。
6. 根据权利要求5所述的方法，其中所述疾病或病症选自包括帕金森病、嗜眠症、注意 涣散多动症(ADHD)、边缘人格障碍、间歇性暴发性精神障碍、反社会人格障碍、精神作用物 质滥用、偷窃狂和纵火狂或由其组成的组。
7. 根据权利要求4所述的方法，其中所述疾病或病症与中枢神经系统中多巴胺神经传 递的过量有关。
8. 根据权利要求7所述的方法，其中所述疾病或病症选自由精神分裂症、分裂情感性 精神障碍、精神分裂症样精神障碍、精神作用物质滥用-感应性精神障碍、妄想性精神障 碍、躁狂和共有精神病性精神障碍组成的组。
9. 根据权利要求3所述的方法，其中所述单胺是去甲肾上腺素。
10. 根据权利要求9所述的方法，其中所述疾病或病症与中枢神经系统中去甲肾上腺 素神经传递的不足有关。
11. 根据权利要求10所述的方法，其中所述疾病或病症选自包括冲动型、注意型和攻 击型障碍，例如注意涣散多动症(ADHD)、边缘人格障碍、间歇性暴发性精神障碍、反社会人 格障碍、精神作用物质滥用、偷窃狂、纵火狂和抑郁症的组。
12. 根据权利要求9所述的方法，其中所述疾病或病症与中枢神经系统中去甲肾上腺 素神经传递的过量有关。
13. 根据权利要求12所述的方法，其中所述疾病或病症选自包括恐慌发作、创伤后精 神紧张性精神障碍、焦虑、恐怖症以及强迫性障碍的组。
14. 根据权利要求3所述的方法，其中所述单胺是5-羟色胺(5-HT)。
15. 根据权利要求14所述的方法，其中所述疾病或病症与中枢神经系统中5-羟色胺神 经传递的不足有关。
16. 根据权利要求15所述的方法，其中所述疾病或病症选自包括冲动型、注意型和/或 攻击型障碍，例如边缘人格障碍、间歇性暴发性精神障碍、反社会人格障碍、精神作用物质滥用、偷窃狂、纵火狂、进食障碍(暴食症、贪食症、厌食症)、焦虑、恐怖症、强迫性障碍以及 抑郁症的组。
17. 根据权利要求14所述的方法，其中所述疾病或病症与中枢神经系统中5-羟色胺神 经传递的过量有关。
18. 根据权利要求17所述的方法，其中所述疾病或病症是偏头痛。
19. 根据上述权利要求中任何一项所述的方法，其中通过选自由下列各项组成的组的 方法实施步骤(b)和/或(c):体外受体结合、体外神经递质释放和/或重摄取(例如使用 脑切片或突触小体)、体外电生理法、体外或体内生物传感器、体内微量透析法或体内伏安
20. 根据上述权利要求中任何一项所述的方法，其中步骤(c)包括测试所述化合物被 动调节所述单胺重摄取转运蛋白的活性的能力。
21. 根据上述权利要求中任何一项所述的方法，其中步骤(c)包括测试所述化合物主 动调节所述单胺重摄取转运蛋白的活性的能力。
22. 根据上述权利要求中任何一项所述的方法，其中步骤(c)包括测试所述化合物作 用为所述单胺重摄取转运蛋白的拮抗剂的能力。
23. 根据上述权利要求中任何一项所述的方法，其中步骤(c)包括测试所述化合物作 用为所述单胺重摄取转运蛋白的反激动剂的能力。
24. 根据权利要求23所述的方法，其中步骤(c)包括测试所述化合物作用为所述单胺 重摄取转运蛋白的完全反激动剂的能力。
25. 根据权利要求23所述的方法，其中步骤(c)包括测试所述化合物作用为所述单胺 重摄取转运蛋白的部分反激动剂的能力。
26. 根据上述权利要求中任何一项所述的方法，其中步骤(c)包括测试所述化合物作 用为所述单胺重摄取转运蛋白的激动剂的能力。
27. 根据权利要求26所述的方法，其中步骤(c)包括测试所述化合物作用为所述单胺 重摄取转运蛋白的完全激动剂的能力。
28. 根据权利要求26所述的方法，其中步骤(c)包括测试所述化合物作用为单胺重摄 取转运蛋白的部分激动剂的能力。
29. 根据上述权利要求中任何一项所述的方法，其中步骤(c)包括测试所述化合物拮 抗所述单胺重摄取转运蛋白的激动剂或反激动剂作用的能力。
30. 根据上述权利要求中任何一项所述的方法，其中步骤(c)包括或者由测试所述化 合物体外调节所述单胺重摄取转运蛋白的活性的能力而组成。
31. 根据上述权利要求中任何一项所述的方法，其中步骤(c)包括或者由测试所述化 合物体内调节所述单胺重摄取转运蛋白的活性的能力而组成。
32. 根据权利要求20至31中任何一项所述的方法，其中步骤(c)包括或者由测试所述 化合物在所述单胺重摄取转运蛋白上可卡因结合位点作用的能力而组成。
33. 根据权利要求32所述的方法，其中步骤(c)包括测试所述化合物作用为在所述多 巴胺重摄取转运蛋白上的可卡因结合位点的反激动剂(完全或部分)，激动剂(完全或部 分)或拮抗剂的能力，或者由测试所述化合物作用为所述多巴胺重摄取转运蛋白上的可卡 因结合位点的反激动剂(完全或部分)，激动剂(完全或部分)或拮抗剂的能力组成。
34. 根据上述权利要求中任何一项所述的方法，其中步骤(c)包括使用一种或多种下列技术，测试所述化合物调节所述单胺重摄取转运蛋白活性的能力(A) 通过表面灌流，体外测量来自含有单胺重摄取转运蛋白位点的组织切片、细胞(或 其亚细胞部分)的自发单胺释放；(B) 通过表面灌流，体外测量来自含有单胺重摄取转运蛋白位点的组织切片、细胞(或 其亚细胞部分)的单胺重摄取；(C) 通过表面灌流，体外测量来自含有单胺重摄取转运蛋白位点的组织切片、细胞(或 其亚细胞部分)的单胺的电诱发释放；(D) 通过电生理学技术，体外测量来自含有单胺重摄取转运蛋白位点的组织切片、细胞 (或其亚细胞部分)的自发和/或电诱发的单胺流出；(E) 使用一个或多个生物传感器，体外和/或体内测量自发和/或电诱发的单胺流出；(F) 通过在动物上进行微量透析，体内测量依赖细胞发放的和不依赖细胞发放的单胺 流出；(G) 通过伏安测量技术，体内测量动物中的自发和/或电诱发的单胺流出。
35. 根据权利要求34所述的方法，其中(A)、(B)以及(C)包括体外测量标记的单胺的 释放或重摄取。
36. 根据权利要求34所述的方法，其中(E)的生物传感器包被了酶、抗体和/或神经递 质受体。
37. 根据权利要求34至36中任何一项所述的方法，其中步骤(c)包括一种或多种下列 技术选项/组合单独A，单独B，单独C，单独D，单独E，单独F，单独G， A+B、 A+C、 A+D、 A+B+C、 A+B+C+D、 A+B+D、 B+C、 B+D、 C+B、 C+D、 A+C+E(体夕卜)、A+C+E(体内)、A+C+F、 A+C+G、 A+B+C+E(体 夕卜)、A+B+C+E (亍本内)、A+B+C+F、 A+B+C+G、 A+D+E (亍本夕卜)、A+D+E (亍本内)、A+D+F、 A+D+G、 A+B+D+E (体外)、A+B+D+E (体内)、A+B+D+F、 A+B+D+G。
38. 根据权利要求34至37中任何一项所述的方法，其中含有单胺重摄取转运蛋白位点 的细胞位于或来源于组织切片。
39. 根据权利要求38所述的方法，其中所述组织切片来自脑，例如来自脑的多巴胺能区。
40. 根据权利要求34至39中任何一项所述的方法，其中在培养物中维持含有单胺重摄 取转运蛋白位点的细胞。
41. 根据权利要求34至40中任何一项所述的方法，其中所述细胞选自由初级细胞和无 限增殖化细胞(即细胞系)组成的组。
42. 根据权利要求34至41中任何一项所述的方法，其中对细胞进行遗传修饰，以表达 单胺重摄取转运蛋白。
43. 根据权利要求34至42中任何一项所述的方法，其中含有单胺重摄取转运蛋白位点 的细胞是血细胞。
44. 根据权利要求34至42中任何一项所述的方法，其中含有单胺重摄取转运蛋白位点 的细胞位于或来源于肾血管。
45. 根据权利要求34至40中任何一项所述的方法，其中在突触小体中测量单胺释放或重摄取。
46. 根据权利要求34至45中任何一项所述的方法，其中含有单胺重摄取转运蛋白位点 的细胞来自人。
47. 根据权利要求34至45中任何一项所述的方法，其中含有单胺重摄取转运蛋白位点 的细胞来自非人物种，例如啮齿动物，如小鼠或大鼠。
48. 根据权利要求34至37中任何一项所述的方法，其中在脑中进行体内测量。
49. 根据权利要求48所述的方法，其中在富含包含单胺重摄取转运蛋白的细胞的脑区 中实施体内测量。
50. 根据权利要求49所述的方法，其中在脑的多巴胺能区，如基底核中进行体内测量。
51. 根据权利要求48至50中任何一项所述的方法，其中在人或非人的物种，例如啮齿 动物，如小鼠或大鼠中进行体内测量。
52. 根据上述权利要求中任何一项所述的方法，其中步骤(c)包括测试待测化合物以 不同剂量调节所述单胺重摄取转运蛋白的活性的能力。
53. 根据权利要求34至47中任何一项所述的方法，其中使用高剂量的测试化合物(如 1 X 10—5M)和低剂量的测试化合物(如1 X 10—7M)，通过表面灌流进行体外测量来自组织的单 胺释放。
54. 根据上述权利要求中任何一项所述的方法，还包括对测试化合物的不利或不合乎 需要的性能进行反向筛选。
55. 根据上述权利要求中任何一项所述的方法，还包括将化合物制备成药物组合物的 步骤(d)，所述化合物被鉴定为用于治疗与中枢神经系统中的单胺神经传递功能异常相关 的疾病或病症的候选化合物。
56. —种化合物，其是通过上述权利要求中任何一项所述的方法鉴定的。
57. 根据权利要求56所述的化合物，其中所述化合物是单胺重摄取转运蛋白的可卡因 结合位点的完全或部分反激动剂。
58. 根据权利要求56所述的化合物，其中所述化合物是单胺重摄取转运蛋白的可卡因 结合位点的完全或部分激动剂。
59. 根据权利要求56所述的化合物，其中所述化合物是作用为单胺重摄取转运蛋白的 可卡因结合位点的激动剂或反激动剂的配体拮抗剂。
60. 根据权利要求59所述的化合物，其中作用为可卡因结合位点的反激动剂的配体是 可卡因或相关化合物(例如哌醋甲酯)。
61. —种药物组合物，其包含权利要求56至60中任何一项所述的化合物以及药用载体 或赋形剂。
62. 权利要求56至60中任何一项所述的化合物，其用在药物中。
63. 权利要求56至60中任何一项所述的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治 疗与中枢神经系统中单胺神经传递的功能异常有关的疾病或病症。
64. 根据权利要求63所述的用途，其中所述单胺选自由多巴胺、去甲肾上腺素和5-羟 色胺组成的组。
65. 根据权利要求64所述的用途，其中所述单胺是多巴胺。
66. 根据权利要求65所述的用途，其中所述疾病或病症与中枢神经系统中多巴胺神经传递的不足有关。
67. 根据权利要求66所述的用途，其中所述疾病或病症选自包括帕金森病、嗜眠症、注 意涣散多动症(ADHD)、边缘人格障碍、间歇性暴发性精神障碍、反社会人格障碍、精神作用 物质滥用、偷窃狂和纵火狂的组。
68. 根据权利要求65所述的用途，其中所述疾病或病症与中枢神经系统中多巴胺神经 传递的过量有关。
69. 根据权利要求64所述的用途，其中所述疾病或病症选自包括精神分裂症、分裂情 感性精神障碍、精神分裂症样精神障碍、精神作用物质滥用_感应性精神障碍、妄想性精神 障碍、躁狂和共有精神病性精神障碍的组。
70. 根据权利要求64所述的用途，其中所述单胺是去甲肾上腺素。
71. 根据权利要求70所述的用途，其中所述疾病或病症与中枢神经系统中去甲肾上腺 素神经传递的不足有关。
72. 根据权利要求71所述的用途，其中所述疾病或病症选自包括冲动型、注意型和攻 击型障碍，例如注意涣散多动症(ADHD)、边缘人格障碍、间歇性暴发性精神障碍、反社会人 格障碍、精神作用物质滥用、偷窃狂、纵火狂和抑郁症的组。
73. 根据权利要求70所述的用途，其中所述疾病或病症与中枢神经系统中去甲肾上腺 素神经传递的过量有关。
74. 根据权利要求73所述的用途，其中所述疾病或病症选自包括恐慌发作、创伤后精神紧张性精神障碍、焦虑、恐怖症以及强迫性障碍的组。
75. 根据权利要求64所述的用途，其中所述单胺是5-羟色胺(5-HT)。
76. 根据权利要求75所述的用途，其中所述疾病或病症与中枢神经系统中5-羟色胺神 经传递的不足有关。
77. 根据权利要求76所述的用途，其中所述疾病或病症选自包括冲动型、注意型和/或 攻击型障碍，例如边缘人格障碍、间歇性暴发性精神障碍、反社会人格障碍、精神作用物质 滥用、偷窃狂、纵火狂、进食障碍(暴食症、贪食症、厌食症)、焦虑、恐怖症、强迫性障碍以及 抑郁症的组。
78. 根据权利要求75所述的用途，其中所述疾病或病症与中枢神经系统中5-羟色胺神 经传递的过量有关。
79. 根据权利要求78所述的用途，其中所述疾病或病症是偏头痛。
80. 基本上如本文所述参考说明书和实施例的方法或用途。
81. 基本上如本文所述参考说明书和实施例的化合物或药物组合物。
全文摘要
本发明涉及鉴定用于治疗与中枢神经系统中单胺神经传递的功能异常相关的疾病或病症的候选化合物的方法，所述方法包括以下步骤(a)提供待测试的化合物；(b)测试该化合物结合单胺重摄取转运蛋白的可卡因结合位点的能力；和(c)测试该化合物通过单胺重摄取转运蛋白来调节单胺神经递质的向内或向外的转运的能力，其中，如果所述测试化合物能够结合单胺重摄取转运蛋白的可卡因结合位点并调节其活性，该测试化合物被鉴定为用于治疗与单胺神经传递功能异常相关的疾病或病症的候选化合物。本发明还涉及使用本发明方法所鉴定的化合物、及其用途，组合物和药物。
文档编号G01N33/94GK101720437SQ200880017577
公开日2010年6月2日 申请日期2008年3月28日 优先权日2007年3月29日
发明者戴维·约翰·希尔 申请人:雷纳西咨询有限公司