CA215检测试剂盒及其制备方法和使用方法与流程

本发明涉及属于癌症体外临床检测
技术领域：
，尤其涉及CA215检测试剂盒及其制备、使用方法与应用。
背景技术：
：近半个世纪以来，肿瘤的发病率和死亡率逐年升高，成为医学界热点中的热点。20世纪70年代，美国提出的向“肿瘤进军”反映了社会对肿瘤死亡率居高不下的焦虑，同时，在过去的几十年中，肿瘤标志在技术上和定义上有了突破，这一切都促使了肿瘤标志研究的快速发展。CA215是肿瘤相关抗原，该抗原是1987年对从培养的卵巢癌细胞提取的单克隆抗体RP215发现的。RP215被证明与位于主要由大多数癌细胞中表达的免疫球蛋白重链(一般称为CA215)碳水化合物相关的表位发生反应。由于CA215是高度与癌细胞或癌组织相关联的，且一般不能在正常人组织中发现，除了在增生上皮细胞或组织，例如皮肤、食道、子宫颈以及几个免疫特殊部位，包括神经，眼睛和睾丸。CA215作为一个泛癌生物标志物具有潜在应用价值，并且可以与其它已知的癌症生物标志物的并行比较来记录CA215的在人类许多不同类型的癌症的免疫诊断的临床应用。发现癌症患者和正常人血清CA215水平是显著差异(P<0.001)。由于临床分期，在卵巢癌的情况下，相比正常个体其阳性率范围从58-86％不等。对于宫颈癌患者，在癌症晚期的阶段阳性率分别高达66-94％。宫颈癌和卵巢癌这些临床研究的结果还表明，平均血清CA215水平在术前阶段并在一周外科手术或化疗或放疗之前之内维持在相当高的水平。相反，当手术操作或化疗或放疗七天后测定，血清CA215水平显著下降。基于这些研究，可以得出结论认为，癌症患者的子宫颈和卵巢癌之间的手术切除或化学治疗导致在CA215水平在统计学上显著减少。结果表明，CA215在癌症患者最可能从肿瘤部位产生，且该肿瘤负荷可由癌症患者的血清CA215水平充分地反映检测到。因此，癌症患者的血清CA215水平的例行检测对监测癌症发展的计划之后治疗或手术治疗的状态是有益的。作为一个泛癌标志物，CA215比癌胚抗原(carcino-embryonicantigen，CEA)或β2微球蛋白更好，在大多数癌症中具有更高的显示阳性检出率。对于大多数人类癌症CA215阳性检出率都比较高，包括卵巢癌。然而，在子宫颈癌的情况下，使用CA215组合检测比单独用CA125有更高的检出率，检出率从13％提升至81％。然而，对于卵巢癌用CA215和CA125的组合也有更好的检出率，检测率从59％提升至82％。对于肺癌，CA215和CYFRA21-1组合检测也具有较好的阳性检出率。对于肝癌，CEA或甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)与CA215的组合似乎有更高的阳性检出率。总之，其他癌症生物标志物与CA215的组合可以提高在常规临床诊断癌症中的阳性检出率。上世纪70年代中期Arakawe首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。目前，这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临床医学的常规检测手段。化学发光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放射免疫(Radioimmunoassay，RIA)和酶免疫((enzymeimmunoassay，EIA)相似，不同之处是以发光物质作为底物，并借助其自身的发光强度直接进行测定。在化学发光免疫分析中包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光分析系统。免疫反应系统，其基本原理同酶联免疫技术(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)。化学发光分析系统的原理在于免疫反应中的酶作用于发光底物。发光底物在酶的作用下，底物发生化学反应并释放出大量的能量，产生激发态的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成正比。由此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。化学发光免疫分析既具有放射免疫的高灵敏度，又具有酶联免疫的操作简便、快速的特点，易于标准化操作。且测试中不使用有害的试剂，试剂保持期长，应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。技术实现要素：本发明提供一种CA215检测试剂盒，可以定量检测人类癌症标志物CA215的浓度，具有准确性高、特异性高、精密度好、灵敏度高和稳定性能好的优点。一种CA215检测试剂盒，其包括抗CA215抗体包被的微孔反应板、酶结合物、化学发光底物A、化学发光底物B以及校准品；其中，所述酶结合物为酶标记的抗CA215抗体，所述酶结合物的标记酶为辣根过氧化物酶；所述化学发光底物A含有鲁米诺，所述化学发光底物B含有过氧化氢；所述校准品采用CA215纯品配制，其标示浓度分别为0AU/ml、5AU/ml、10AU/ml、20AU/ml、50AU/ml、100AU/ml；所述抗CA215抗体包被的微孔反应板按照以下方法制备：包被：抗CA215抗体采用包被液稀释后，取微孔反应板，将稀释的抗CA215抗体加入到所述微孔反应板的微孔中，每个微孔的加入量为l00μl，室温(18～25℃)放置12～24小时；封闭：弃去包被液，在吸水纸上拍干，再加入封闭液250μl/孔，室温(18～25℃)放置6～24小时；稳定：弃去封闭液，再加入稳定液250μl/孔，室温(18～25℃)放置4～24小时；封袋：弃去稳定液，在吸水纸上拍干，室温下真空干燥箱中抽真空16～24小时，然后立即进行真空封袋，贴上标签后于2～8℃保存。优选的，所述微孔反应板材料为不透明的聚苯乙烯或聚乙烯。优选的，所述包被液的配制方法如下：取lmol/L的Na2HPO477.4ml和lmol/L的Na2HPO422.6ml混匀，加去离子水定容至1000ml，再稀释10倍使用。优选的，所述封闭液为含有质量分数为3％的BSA、1％的酪蛋白和0.05％的防腐剂的磷酸盐缓冲液，所述防腐剂为Proclin-300，所述磷酸盐缓冲液的pH为7.4。优选的，所述稳定液为含有质量分数为4％的蔗糖和0.05％的防腐剂的磷酸盐缓冲液，所述防腐剂为Proclin-300，所述磷酸盐缓冲液的pH为7.4。优选的，所述校准品根据如下方法制备：用pH7.4的磷酸盐缓冲液将CA215纯品稀释成不同浓度点，并定标得到各种标示浓度的校准品，所述磷酸盐缓冲液包括质量分数为3％的BSA、0.5％的CreamophprEL和0.05％的防腐剂，其中防腐剂为Proclin-300。优选的，所述CA215检测试剂盒还包括浓缩洗涤液，所述浓缩洗涤液为pH7.0～8.0的磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液包括质量分数为17％的氯化钠和2.5％的吐温-20。本发明同时提供一种CA215检测试剂盒的制备方法，所述CA215检测试剂盒包括抗CA215抗体包被的微孔反应板、酶结合物、化学发光底物A、化学发光底物B、校准品以及浓缩洗涤液，其制备方法包括如下步骤：1)制备抗CA215抗体包被的微孔反应板：包被：抗CA215抗体采用包被液稀释后，取微孔反应板，将稀释的抗CA215抗体加入到所述微孔反应板的微孔中，每个微孔的加入量为l00μl，室温(18～25℃)放置12～24小时；封闭：弃去包被液，在吸水纸上拍干，再加入封闭液250μl/孔，室温(18～25℃)放置6～24小时；稳定：弃去封闭液，再加入稳定液250μl/孔，室温(18-25℃)放置4～24小时；封袋：弃去稳定液，在吸水纸上拍干，室温下真空干燥箱中抽真空16～24小时，然后立即进行真空封袋，贴上标签后于2～8℃保存；2)制备酶结合物：抗CA215抗体与用于标记的辣根过氧化物酶采用过碘酸盐氧化法交联，通过梯度稀释确定所述酶结合物的使用浓度，用包含质量分数为0.85％的氯化钠、3％的BSA、0.05％的EDTA和0.05％的防腐剂的pH7.4磷酸盐缓冲液保存酶结合物，其中防腐剂为Proclin-300；3)分装化学发光底物A和化学发光底物B；直接将采购的化学发光底物A和化学发光底物B分装，其中，所述化学发光底物A含有鲁米诺，所述化学发光底物B含有过氧化氢；4)配制校准品系列：采用pH7.4磷酸盐缓冲液稀释CA215纯品，得到校准品，所述磷酸盐缓冲液包括质量分数为3％的BSA、0.5％的CreamophprEL和0.05％的防腐剂，其中防腐剂为Proclin-300，所述校准品系列的标示浓度分别为0AU/ml、5AU/ml、10AU/ml、20AU/ml、50AU/ml和100AU/ml；5)配制浓缩洗涤液：称取28g磷酸氢二钠，170g氯化钠，量取25ml吐温-20，用水定容至1000ml，调节pH7.0～8.0；6)将抗CA215抗体包被的微孔反应板、酶结合物、化学发光底物A、化学发光底物B、校准品以及浓缩洗涤液组装成所述CA215检测试剂盒。优选的，所述封闭液为含有质量分数为3％的BSA、1％的酪蛋白和0.05％的防腐剂的磷酸盐缓冲液，所述防腐剂为Proclin-300，所述磷酸盐缓冲液的pH为7.4。本发明同时提供上文所述的CA215检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：取出CA215检测试剂盒，将所述CA215检测试剂盒平衡至室温，并将所述检测试剂盒中的试剂取出备用；稀释浓缩洗涤液：将所述浓缩洗涤液用新鲜的纯化水稀释50倍后备用；配制发光底物：将化学发光底物A和化学发光底物B按1:1的体积比混匀后配制成发光底物；取出待测的血清样本平衡至室温；取出抗CA215抗体包被的微孔反应板，往微孔反应板的每个微孔内分别加入100μl校准品和待测的血清样本，混合均匀，置37℃恒温箱孵育60分钟；洗涤：弃去所述微孔反应板的微孔内的液体，采用稀释后的浓缩洗涤液冲洗所述微孔反应板，然后拍干；往所述微孔反应板的每个微孔内加入100μl酶结合物，充分混匀，置37℃恒温箱孵育60分钟；洗涤：弃去所述微孔反应板的微孔内的液体，采用稀释后的浓缩洗涤液冲洗所述微孔反应板，然后拍干；每个孔内加入100μl发光底物，充分混匀后立刻加入至化学发光免疫分析仪中检测；直接从化学发光免疫分析仪上读取发光值或根据预设于化学发光免疫分析仪中的CA215检测剂量-反应标准曲线获得待测血清样本的浓度值并导出。相较于现有技术，本发明提供的CA215检测试剂盒及其制备方法和使用方法，具有以下有益效果：一、CA215作为一个泛癌症生物标志物可用于诊断人类癌症的潜在风险，本发明提供的CA215检测试剂盒可以定量检测出病人血清CA215的含量，也可与其它癌症标志物联合用于癌症的辅助诊断及相关病人治疗效果的监测，如与AFP、CEA、CA125、CA19-9、CA15-3或Cyfra21-1联合用检测，相比于单独检测单一生物标志物，可以观察到更高的癌症检测率，在临床上具有广泛的应用前景。二、本发明提供的CA215检测试剂盒具有高特异性、高灵敏度和良好的精密度，而且操作简便、快速、稳定性好和检测结果准确。三、本发明提供的抗CA215抗体包被微孔反应板的步骤中封闭和稳定分开进行，增强了包被板的稳定性。四、本发明提供的抗CA215抗体包被微孔反应板的步骤中，包被、封闭和稳定的时间范围比常用时间宽，给实验操作者带来极大的方便，且包被过程在室温环境下进行，与常用的37度和4度不同，减少了仪器的使用。五、本发明提供的封闭液配方，封闭效果更好，减少了非特异性结合。六、本发明提供的用于配制校准品的磷酸盐缓冲液包括质量分数为3％的BSA、0.5％的CreamophprEL和0.05％的防腐剂，使配制的校准品稳定性优于常规的缓冲液。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图，其中：图1为本发明提供的CA215检测试剂盒CA215检测剂量-反应标准曲线；图2为本发明提供的CA215检测试剂盒的制备方法步骤流程图；图3为本发明提供的CA215检测试剂盒的使用方法步骤流程图。具体实施方式下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。本发明的技术原理如下：本发明采用化学发光免疫分析技术检测泛癌标志物CA215的浓度值，提供的CA215检测试剂盒用CA215单克隆抗体包被微孔反应板，在微孔反应板中加入CA215校准品或待测血清样本，微孔反应板上包被的CA215单克隆抗体与CA215抗原分子结合，再加入辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)标记的CA215单克隆抗体进行反应，微孔反应板上包被的CA215单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的CA215单克隆抗体分别与CA215抗原分子的不同表位结合，形成“三明治”结构。没有结合的辣根过氧化物酶标记的CA215单克隆抗体在洗涤步骤中被除去。加入发光底物，在发光仪上读取发光值(RLU)，发射的光的强度与样品中的CA215浓度成正比，通过CA215检测剂量-反应标准曲线即可定量获得CA215的浓度值，CA215检测剂量-反应标准曲线如图1所示。实施例中用于包被的抗CA215抗体和用于标记辣根过氧化物酶的抗CA215抗体均由GregoryLee，Ph.D.赠予。配制校准品中的CA215纯品购于chemux公司，化学发光底物A、化学发光底物B均购自北京科跃中楷生物技术有限公司，直接分装即可使用。实施例一CA215检测试剂盒所述CA215检测试剂盒包括抗CA215抗体包被的微孔反应板、酶结合物、化学发光底物A、化学发光底物B、校准品以及浓缩洗涤液，其中微孔反应板中包被的抗CA215抗体为CA215单克隆抗体。所述微孔反应板材料为不透明的聚苯乙烯或聚乙烯。所述酶结合物为酶标记的抗CA215抗体，所述酶结合物的标记酶为辣根过氧化物酶，所述抗CA215抗体和所述辣根过氧化物酶采用过碘酸盐氧化法交联得到，其中，所述抗CA215抗体为CA215单克隆抗体。所述发光底物A含有鲁米诺，所述发光底物B含有过氧化氢，其为商业采购，分装即可。所述校准品采用CA215纯品配制，在本实施例中，共配制了6种标示浓度的校准品，其标示浓度分别为0AU/ml、5AU/ml、10AU/ml、20AU/ml、50AU/ml、100AU/ml。所述浓缩洗涤液为pH7.0～8.0的磷酸盐缓冲液，包括质量分数为17％的氯化钠和2.5％吐温-20。请参阅图2，为本发明提供的CA215检测试剂盒的制备方法步骤流程图。实施例二CA215检测试剂盒的制备方法所述CA215检测试剂盒的制备方法包括如下步骤：1)制备抗CA215抗体包被的微孔反应板：包被：抗CA215抗体采用包被液稀释后，取微孔反应板，将稀释的抗CA215抗体加入到所述微孔反应板的微孔中，每个微孔的加入量为l00μl，室温(18～25℃)放置12～24小时，其中所述包被液的配制方法如下：取lmol/LNa2HPO477.4ml和lmol/LNaH2PO422.6ml混匀，加入去离子水定容至l000ml，使用时需再稀释10倍；封闭：弃去包被液，在吸水纸上拍干，再加入封闭液250μl/孔，室温(18～25℃)放置6～24小时，其中，所述封闭液为含有质量分数为3％的BSA、1％的酪蛋白和0.05％的防腐剂的磷酸盐缓冲液，所述防腐剂为Proclin-300，所述磷酸盐缓冲液的pH为7.4；稳定：弃去封闭液，再加入稳定液250μl/孔，室温(18～25℃)放置4～24小时，其中所述稳定液为含有质量分数为4％的蔗糖和0.05％的防腐剂的磷酸盐缓冲液，所述防腐剂为Proclin-300，所述磷酸盐缓冲液的pH为7.4；采用该封闭液进行封闭，效果好，减少了非特异性结合。封袋：弃去稳定液，在吸水纸上拍干，室温下真空干燥箱中抽16～24小时，立即进行真空封袋，贴上标签后于2～8℃保存；在真空封袋后需检查有无漏气，如漏气，需重新封袋再贴上标签保存。该包被方法将封闭和稳定分开进行，增加了包被板的稳定性，同时包被、封闭和稳定的时间范围比常用时间长，给实验操作者带来了极大的方便，且包被过程在室温环境下进行，与常用的37度和4度不同，减少了仪器的使用。2)制备酶结合物：抗CA215抗体与用于标记的辣根过氧化物酶采用过碘酸盐氧化法交联，通过梯度稀释确定所述酶结合物的使用浓度，用包含质量分数为0.85％的氯化钠、3％的BSA、0.05％的EDTA和0.05％的防腐剂的pH7.4磷酸盐缓冲液保存酶结合物，其中防腐剂为Proclin-300。3)分装化学发光底物A、化学发光底物B：直接采购化学发光底物A和化学发光底物B，然后分装，其中，所述化学发光底物A含有鲁米诺，所述化学发光底物B含有过氧化氢；4)配制校准品：采用pH7.4磷酸盐缓冲液稀释CA215纯品，将CA215纯品稀释成不同浓度点，并定标得到校准品，所述磷酸盐缓冲液包括质量分数为3％的BSA、0.5％的CreamophprEL和0.05％的防腐剂，其中防腐剂为Proclin-300，所述校准品的标示浓度分别为0AU/ml、5AU/ml、10AU/ml、20AU/ml、50AU/ml和100AU/ml。采用包括0.5％的CreamophprEL的磷酸缓冲液稀释CA215纯品配制样准品，相对于常规的缓冲液，稳定性更好。5)配制浓缩洗涤液：所述浓缩洗涤液为pH7.0～8.0的磷酸盐缓冲液，包含质量分数为17％的氯化钠和2.5％吐温-20，其配制方法如下：称取28g磷酸氢二钠，170g氯化钠，量取25ml吐温-20，用水定容至1000ml，调节pH7.0～8.0。6)将抗CA215抗体包被的微孔反应板、酶结合物、化学发光底物A、化学发光底物B、校准品以及浓缩洗涤液组装成所述CA215检测试剂盒。请参阅图3，为本发明提供的CA215检测试剂盒的使用方法步骤流程图。实施例三CA215检测试剂盒的使用方法CA215检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：S1、取出CA215检测试剂盒，将所述CA215检测试剂盒平衡至室温，并将所述检测试剂盒中的试剂取出备用：具体地，将所述CA215检测试剂盒置室温(18～25℃)下平衡30分钟；S2、稀释浓缩洗涤液：将所述浓缩洗涤液用新鲜的纯化水稀释50倍后备用；S3、配制发光底物：将化学发光底物A和化学发光底物B按1:1的体积比混匀后配制成发光底物，现用现配；S4、取出待测的血清样本平衡至室温：具体地，将待测的血清样本置室温(18～25℃)平衡30分钟。S5、取出抗CA215抗体包被的微孔反应板，往微孔反应板的每个微孔内分别加入100μl校准品和待测的血清样本，混合均匀，置37℃恒温箱孵育60分钟；具体地将微孔反应板放置于微孔架上，微孔内分别加入浓度为0AU/ml、5AU/ml、10AU/ml、20AU/ml、50AU/ml和100AU/ml的六个校准品以及待测的血清样本；S6、洗涤：弃去所述微孔反应板的微孔内的液体，采用稀释后的浓缩洗涤液冲洗所述微孔反应板，然后拍干：洗涤方法如下：用稀释后的浓缩洗涤液加满微孔反应板的微孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干；或者用洗板机洗涤：每孔加入300μl稀释后的浓缩洗涤液，重复4次，洗涤后拍干；S7、往所述微孔反应板的微孔内分别加入100μl/孔的所述酶结合物，充分混匀，置37℃恒温箱孵育60分钟；S8、洗涤：弃去所述微孔反应板的微孔内的液体，采用稀释后的浓缩洗涤液冲洗所述微孔反应板，然后拍干；洗涤方法同步骤S6；S9、往每个孔内加入100μl发光底物，充分混匀后立刻加入至化学发光免疫分析仪中进行检测；S10、获取检测结果：直接从化学发光免疫分析仪上读取发光值或根据预设于化学发光免疫分析仪中的CA215检测剂量-反应标准曲线获得待测血清样本的浓度值并导出。实施例四CA215检测试剂盒的分析性能评价首先利用化学发光免疫分析仪对CA215标准品进行检测，绘制检测剂量-反应标准曲线，参见图1所示，所述标准曲线内置于电脑软件中，接着测试已知含量样品和校准品等，读取发光值或根据剂量-反应标准曲线计算出发光值对应的浓度，对所述CA215检测试剂盒进行准确性、特异性、精密度、最低检测限和稳定性的评价。1)准确性CA215定量检测试剂盒的方法学鉴定按照本领域中常规的制造及鉴定规程对实施例1的CA215检测试剂盒进行检定结果如下：将已知含量样品用本发明实施例1中制备的试剂盒进行检测，计算回收率(回收率＝回收量/加入量×100％)，结果如下表所示：加入量AU/ml222526314053回收量AU/ml21.9223.5824.9532.5840.3651.95回收率％99.6494.3295.96105.10100.9098.022)特异性将已知含量类似物用本发明实施例1中的CA215检测试剂盒进行检测，结果如下表所示：3)精密度检测质控品1和质控品2的发光值，质控品1和质控品2分别做10个平行孔重复测定其发光值，计算CV值(CoefficientofVariance，离散系数，为标准偏差与平均值比值的百分比)，结果如下表所示：名称CV％质控品14.17质控品25.64)最低检测限重复测定标示浓度为零的校准品(或样本稀释液)10次，计算出发光值的均值和标准差(SD)，将的反应量代入CA215检测剂量-反应曲线，计算出相应浓度值，即为最低检测限，结果如下表所示：5)稳定性试剂盒中各组分置37℃7天后测试准确性、精密度、最低检测限和曲线相关系数，结果如下：将以上结果汇总得出：检测项目检验标准检验结果准确性回收率在85％～115％符合标准特异性本试剂盒测定结果应不大于1AU/ml符合标准精密度CV(％)小于15％(n＝10)符合标准最低检测限小于1AU/ml符合标准稳定性试剂盒中各组分置37℃至少7天符合标准从上述汇总表可以看到说明所述CA215检测试剂盒各项性能指标均合格，且具有准确性高、特异性高、精密度好、灵敏度高和稳定性好的优点。实施例五：正常人的CA215的含量和临界值的确定随机抽取120例健康人血清用实施例1中的CA215检测试剂盒进行测定，汇总所有测定值，以百分位数法确定其临界值(95％位数的参考限)，最终确定临界值为6.3AU/ml。实施例六：随机抽取60例卵巢癌患者血清，用实施例1中的制备的CA215定量试剂盒进行测定，汇总所有测定值，平均浓度为51.016AU/ml，显著高于健康人血清测值。实施例七：随机抽取60例宫颈癌患者血清，用实施例1中的制备的CA215定量试剂盒进行测定，汇总所有测定值，平均浓度为70.143AU/ml，显著高于健康人血清测值。本发明提供的CA215检测试剂盒及其制备方法和使用方法，具有以下有益效果：一、CA215作为一个泛癌症生物标志物可用于诊断人类癌症的潜在风险，本发明提供的CA215检测试剂盒可以定量检测出病人血清CA215的含量，也可与其它癌症标志物联合用于癌症的辅助诊断及相关病人治疗效果的监测，如与AFP、CEA、CA125、CA19-9、CA15-3或Cyfra21-1联合用检测，相比于单独检测单一生物标志物，可以观察到更高的癌症检测率，在临床上具有广泛的应用前景。二、本发明提供的CA215检测试剂盒具有高特异性、高灵敏度和良好的精密度，而且操作简便、快速、稳定性好和检测结果准确。三、本发明提供的抗CA215抗体包被微孔反应板的步骤中封闭和稳定分开进行，增强了包被板的稳定性。四、本发明提供的抗CA215抗体包被微孔反应板的步骤中，包被、封闭和稳定的时间范围比常用时间宽，给实验操作者极大的方便，且包被过程在室温环境下进行，与常用的37度和4度不同，减少了仪器的使用。五、本发明提供的封闭液配方，封闭效果更好，减少了非特异性结合。六、本发明提供的用于配制校准品的磷酸盐缓冲液包括质量分数为3％的BSA、0.5％的CreamophprEL和0.05％的防腐剂，使配制的校准品稳定性优于常规的缓冲液。以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页1 2 3