一种检测铜绿假单胞菌中信号分子的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属化学分析测试技术领域，具体涉及一种检测铜绿假单胞菌中信号分子的 方法，它是一种新的检测方法。
【背景技术】
[0002] 铜绿假单胞菌(Pseudomonase aeruginosa，PA)，属革兰氏阴性杆菌，在水、空气、 土壤及生命有机体的皮肤、呼吸道和肠道等中广泛分布，据调查，该菌是医院内感染的主要 病原菌之一，感染后可引发皮肤病、肺炎、肠道疾病、脑膜炎和败血症等，严重时可导致死 亡。研究表明，铜绿假单胞菌群体效应（quorum sensing，QS)系统的信号分子.（3-oxododecanoyl )homoserine lactone(30Ci2-HSL)在调控铜绿假单胞菌绝大部分毒力因子 的表达中起重要作用，而铜绿假单胞菌产生的各种严重感染与其毒力因子的释放密切相 关。当铜绿假单胞菌数目较低时，仅产生基础水平的信号分子，随着铜绿假单胞菌在局部不 断生长，信号分子可在局部环境达到一定的浓度，当其浓度达到阀值时，便激活铜绿假单胞 菌中相关毒力因子的表达，增强铜绿假单胞菌的致病性，导致生命体感染。因此，开发快速 和灵敏的准确检测铜绿假单胞菌的方法对生命体的健康具有重要意义。
[0003] 目前，在铜绿假单胞菌的检测方面，需要纯培养和生化鉴定等多个步骤，操作繁 琐、检测周期长、灵敏度低，且不能满足快速检测的需求。信号分子的浓度与铜绿假单胞菌 的数目相关，通过对铜绿假单胞菌中信号分子浓度的测定，可以达到监测铜绿假单胞菌生 长数量的目的。铜绿假单胞菌中信号分子具有多个金属离子结合位点（如〇、N)，根据信号分 子与金属离子的结合，从而检测铜绿假单胞菌中信号分子的研究还未见报道。
[0004] 基于上述问题，本发明致力于开发简便、快速和灵敏的检测铜绿假单胞菌中信号 分子的方法。通过紫外-可见吸收光谱，利用铜离子溶液，实现对铜绿假单胞菌中信号分子 的定量检测。本发明不仅方法简便，而且在灵敏度、响应时间以及生物应用等方面均有突出 优点。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种检测铜绿假单胞菌中信号分子的方法。
[0006] 本发明的技术方案如下：
[0007] 1 · 一种检测铜绿假单胞菌中信号分子N_(3-oxododecanoyl)homoserine lactone (30C12-HSL)的新方法，铜绿假单胞菌中信号分子与Cu2+配位结合后，具有如下结构式：
[0008]
[0009] 2.-种检测铜绿假单胞菌中信号分子的方法，包括下列步骤：
[0010] 在DMS0与H2〇体积比例为4:1的混合溶剂中，加入初始浓度为1 .OmM的CuCl2 · 2H2〇， 然后，依次加入不同量的初始浓度为l.OmM的铜绿假单胞菌中信号分子，使得溶液中Cu2+的 浓度为5.0xl(T4M，铜绿假单胞菌中信号分子的浓度分别为1.0μΜ、2.0μΜ、5.0μΜ、10.0μΜ、 20.0μΜ、50. ΟμΜ、100μΜ、200μΜ、300μΜ、400μΜ、500μΜ，不加入信号分子作为对照，静置 30min 体系达到平衡，用紫外-可见吸收光谱仪测试不同浓度铜绿假单胞菌信号分子条件下的紫 外-可见吸收光谱，以紫外-可见吸收光谱中277nm和280nm处吸收峰强度明显改变的方式检 测铜绿假单胞菌中信号分子;所述DMS0与H 20混合溶剂的pH值通过滴加盐酸和氢氧化钠调 节检测体系的pH至6.5。
[0011] 上述一种检测铜绿假单胞菌中信号分子的方法，应用于Cu2+的ch3〇h/h 2〇溶液中铜 绿假单胞菌中信号分子的检测，以紫外-可见吸收光谱中277nm处吸收峰强度明显改变的方 式检测铜绿假单胞菌中信号分子。
[0012] 上述一种检测铜绿假单胞菌中信号分子的方法，应用于Cu2+的dmf/h2〇溶液中铜绿 假单胞菌中信号分子的检测，以紫外-可见吸收光谱中280nm处吸收峰强度明显改变的方式 检测铜绿假单胞菌中信号分子。
[0013] 本发明中，上述Cu2+的DMS0/H20、CH 30H/H20和DMF/H20溶液中能够定量检测铜绿假 单胞菌中信号分子，该Cu2+的溶液本身在280nm左右处没有紫外-可见吸收峰，当与信号分子 结合后，在280nm左右处的紫外-可见吸收峰显著增强。
[0014]本发明的有益效果：
[0015] 1.本发明的检测铜绿假单胞菌中信号分子的新方法，在生命科学和分析领域具有 广阔应用前景。
[0016] 2.本发明的新方法对铜绿假单胞菌中信号分子的检测现象明显，便于铜绿假单胞 菌中信号分子的定量识别。
[0017] 3.本发明的检测铜绿假单胞菌中信号分子的新方法操作简便、快速、成本低。
【附图说明】
[0018] 图1为本发明实施例1中铜绿假单胞菌中信号分子对不同金属离子响应的紫外-可 见吸收光谱图。
[0019] 图2为本发明实施例2中Cu2+与不同浓度铜绿假单胞菌中信号分子条件下的紫外-可见吸收光谱图。
[0020] 图中，所用的溶剂为DMS0/H20(4/l，v/v)，Cu2+的浓度为5.0X10- 4M;最下面的曲线 为不加入信号分子30C12-HSL的吸收曲线，曲线从下往上信号分子30C 12-HSL的浓度依次增 加。
[0021] 图3为本发明实施例2中277nm处的吸收强度与铜绿假单胞菌中信号分子浓度的关 系图。
[0022]图中，所用的溶剂为DMS0/H20(4/1，v/v)，Cu2+的浓度为5.0 X 10-4M。
[0023]图4为本发明实施例3中Cu2+与不同浓度铜绿假单胞菌中信号分子条件下的紫外-可见吸收光谱图。
[0024]图中，所用的溶剂为CH30H/H20(4/1，v/v)，Cu2+的浓度为5.0 X 1 0-4Μ;最下面的曲线 为不加入信号分子30C12-HSL的吸收曲线，曲线从下往上信号分子30C12-HSL的浓度依次增 加。
[0025]图5为本发明实施例3中277nm处的吸收强度与铜绿假单胞菌中信号分子浓度的关 系图。
[0026]图中，所用的溶剂为CH30H/H20(4/1，v/v)，Cu2+的浓度为5.0 X 10-4M。
[0027]图6为本发明实施例4中Cu2+与不同浓度铜绿假单胞菌中信号分子条件下的紫外-可见吸收光谱图。
[0028]图中，所用的溶剂为DMF/H20 (4/1^八），&12+的浓度为5.0\10、;最下面的曲线为 不加入信号分子30C12-HSL的吸收曲线，曲线从下往上信号分子30C12-HSL的浓度依次增加。
[0029] 图7为本发明实施例4中280nm处的吸收强度与铜绿假单胞菌中信号分子浓度的关 系图。
[0030] 图中，所用的溶剂为DMF/H20(4/1，v/v)，Cu2+的浓度为5.0X 10-4M。 具体实施方案
[0031] 下面通过具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明不限于实施例。
[0032]实施例中所用原料，如无特殊说明均为常规市购产品。
[0033] -种检测铜绿假单胞菌中信号分子N-(3_oxododecanoyl)homoserine lactone (30C12-