中的细胞介导的免疫应答的方法，所述方法包括:在其中样品的形状包括至少6毫米 (mm)至约12mm的高度的条件下使样品与抗原一起孵育。在该观测特别有用的应用中，本发 明提供检验来自受试者的样品的方法，其中样品体积是受限的或其中需要低样品体积。根 据使用血液样品实施的本发明的一种实施方式，使用少至约20iU至约200iU的血液样品，其 中孵育期间样品的形状包括在其最高点至少约6毫米(mm)的高度，至在其最高点约12 mm的 最大高度。
[0054] 因此，一方面本发明提供在来自受试者的样品上进行细胞介导的免疫应答检验的 方法，其中所述方法避免使用针(needles)，该方法包括使用毛细管取样装置收集血液，以 获取小体积的血液。在另一相关方面，本发明包括实施本文所述的检验，包括使用小体积的 样品例如约20yl至低于但约lmL的样品的一种或多种。在其它实施方式中，使用针对细胞检 验技术的标准血液取样，并使用较大的样品体积，典型的lmL至5mL，但包括大至约10至 200mL或以上的体积。在优选的实施方式中，全血的总孵育体积在约50yl至低于约500yl的 范围内。
[0055] 本发明提供用于测定受试者样品中细胞介导的免疫(CMI)应答的方法，包括在样 品的形状包括已被优化的尺寸的条件下将样品与试剂一起孵育。在某些实施方式中，细胞 样品与抗原一起孵育约4或5至约50小时。
[0056] 在某些实施方式中，该方法基于测定通过免疫系统的细胞应答于抗原性刺激的免 疫效应子分子的产生。在其它实施方式中，免疫效应子分子为由效应子T细胞应答于抗原刺 激产生的即时效应子分子（immediate effector molecules)。在其它实施方式中，测定下 游效应子。例如，IFN-y或其它即时效应子分子引起测定其产生的其它效应子分子的产生。 在另一实施方式中，免疫效应子的产生通过测定能够产生免疫效应子的核酸分子的水平或 存在来测定。因此，在某些实施方式中，免疫效应子可以使用配体或结合分子例如对效应子 特异的抗体或通过测定编码效应子的基因的表达水平来检测。因此，本发明提供确定受试 者细胞应答性的方法，而且，提供用于诊断感染性疾病、病理条件、免疫状况、免疫活性水平 和T细胞对内源性或外源性抗原的应答性的标记的方法。
[0057]因此，在另一实施方式中，本发明涉及用于测定在受试者中的CMI应答的方法，所 述方法包括：i)将来自受试者的流体样品收集到收集容器，其中所述样品包括被试剂刺激 后产生免疫效应子分子的免疫系统的细胞。在某些实施方式中，所述收集容器包括抗凝血 剂，例如肝素。在其它实施方式中，所述收集容器包括试剂。在某些实施方式中，该方法进一 步包括使试剂与收集容器中的样品接触。该方法进一步包括i i i)在样品的形状包括已被优 化的尺寸的条件下使所述样品与抗原一起孵育。在某些实施方式中，该方法任选的包括iv) 检测免疫效应子分子或能够产生这些中任一的核酸分子的存在，其中效应子分子或能够产 生效应子分子的核酸分子的存在或水平的升高指示受试者建立细胞介导的应答的能力。在 其它实施方式中，免疫效应子为细胞因子、细胞毒素或趋化因子。在示例性的实施方式中， 免疫效应子为IFN-y。
[0058] 在某些实施方式中，通过测定在具有一系列尺寸的样品中效应子细胞功能以及选 择与效应子细胞功能的最敏感测定相关的形状来优化样品的形状。在优选的实施方式中， 样品的高度是变化的。在示例性的实施方式中，样品的高度从最大高度约12mm，最小高度约 6mm而变化。
[0059] 根据优选的实施方式，本发明提供用于测定人类受试者中的CMI应答的方法，所述 方法包括:使用毛细管取样装置将来自所述人类受试者的样品收集到收集容器中。在某些 实施方式中，所述样品包括被抗原、有丝分裂原或半抗原刺激后能够产生免疫效应子分子 的免疫系统的细胞。在某些实施方式中，该方法包括使所述样品与抗原一起孵育，然后测定 免疫效应子分子的存在或水平的升高，其中所述免疫效应子分子的存在或水平指示所述人 类受试者建立细胞介导的免疫应答的能力。
[0060] 因此，在另一优选的实施方式中，本发明提供用于测定受试者中CMI应答的方法， 所述方法包括将来自所述受试者的样品收集到收集容器中，其中所述样品包括被抗原刺激 后能够产生IFN-y分子的免疫系统的细胞，将所述样品与抗原一起孵育，然后测定IFN-y 分子的存在或水平的升高，其中所述IFN-y分子的存在或水平指示所述受试者建立细胞介 导的免疫应答的能力。
[0061] 从受试者收集的样品通常保存在血液收集容器中。尽管未稀释的全血是优选和极 方便的样品，本发明扩展到包含免疫细胞的其它样品，例如淋巴液、脑脊液、组织液和呼吸 系统液体包括鼻和肺液。
[0062] 在从受试者抽血后延长一段时间（extended periods)后，CMI系统的细胞丧失建 立全血中CMI应答的能力，并且抽血后24小时未干预（intervention)的应答经常是严重地 降低或缺失。在本发明中人工和对专门设备需要的降低允许使用抗原的CMI刺激在护理地 点（care location)例如医生办公室、诊所、门诊设备和兽医诊所或在农场进行。一旦抗原 刺激完成，对新鲜和活性细胞的需要不再存在。IFN- y和其他细胞因子或免疫效应子分子 在血浆中是稳定的，这样，样品可以被储存或输送，而不需要与用于其它感染疾病或其他疾 病诊断的标准血清样品类似的方式的特定的条件或快速时间要求。
[0063] 孵育步骤可以从约4或5小时至50小时，更优选约5小时至40小时，更优选约8至24 或约16至24小时，或之间的时间阶段。在某些实施方式中，任选的起始混合步骤以将抗原分 布到整个样品后，进行样品孵育而无需进一步混合。
[0064]因此，本发明另一优选的实施方式涉及用于测定包括人类受试者的受试者中CMI 应答的方法，所述方法包括:通过毛细管取样从所述受试者收集全血的样品，将所述全血样 品与抗原一起孵育，然后测定免疫效应子分子例如IFN-y的存在或水平的升高，其中所述 免疫效应子分子的存在或水平指示所述受试者建立细胞介导的免疫应答的能力。
[0065]测定CMI的能力对于评估受试者的以下能力是重要的：应答由病原性试剂例如微 生物或病毒或寄生虫引起的感染、建立例如在糖尿病中的自体免疫应答以防止癌症或其它 肿瘤条件或测试对环境抗原的敏感性(过敏测试）。因此，提到"测定在受试者中的CMI应答" 包括和包含感染性和自体免疫疾病的免疫诊断、免疫活性的标记和对内源性和/或外源性 抗原(包括测定疫苗的效力）的T-细胞应答的检测以及用于过敏、炎性疾病和癌症的标记。
[0066] 以小体积血液进行该测试的能力对于儿童和其它血液可能受限的样品而言是重 要的。在纯化淋巴细胞方面任何处理步骤的不存在在小血液体积方面增加优点，这是因为 来自小体积的淋巴细胞的纯化和计数有实际上的困难，如在无菌环境中添加温暖的无菌培 养基和反应试剂。通过调整孵育容器或样品的相对比例(例如，形状、宽度和高度）以小体积 获得最佳CMI应答的能力提供有价值的优点。术语容器(vessel)、容器(container)、隔室 (compartment)可相互交换地使用，并且包括容纳任何体积的任何容器(receptacle )，例如 孔、液体采样器(dip)、管、艾芬道夫(eppendorf)等。
[0067] 本文涉及的自体免疫疾病还特别包括斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、自体免 疫愛迪生疾病多发性硬化(Autoimmune Addison's Disease Multiple Sclerosis)、肾上 腺的自体免疫疾病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、自身免疫性卵巢炎和睾丸 炎、白塞氏病(Behcet ' s Disease)、大疱性类天疱疮、心肌病、乳糜泻皮炎(Celiac Sprue-Dermatitis)、慢性疲劳症候群(CFIDS)、慢性炎症(Chronic Inf lam)、脱髓鞘、慢性炎症 (Chronic Inf lam)多神经病、变应性肉芽肿性血管炎(Churg-Strauss Syndrome)、瘢痕性 类天疱疮(Cicatricial Pemphigoid)、肢端硬皮综合征(CREST Syndrome)、冷凝集素病、克 罗恩氏病、疱疹样皮炎、盘状狼疮、特发性混合性冷球蛋白血症、纤维肌痛、肾小球肾炎、甲 状腺机能充进(Grave ' s Disease)、格林-巴利综合征(Gui 1 lain-Barre)、桥本甲状腺炎、特 发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜（ITP)、IgA肾病胰岛素依赖型糖尿病（IgA Nephropathy Insulin Dependent Diabetes)(I型）、扁平苔藓、狼疮、梅尼埃尔氏病、混合 性结缔组织病、多发性硬化、重症肌无力、心肌炎、寻常型天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉 炎、多软骨炎、多内分泌腺综合征、风湿性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、原发性无丙种球蛋白血 症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺氏现象、赖特尔综合症、风湿热、类风湿性关节炎、结 节病、硬皮病、干燥综合征(Sjogren ' s Syndrome)、全身肌强直综合征、全身性红斑狼疮、大 动脉炎、颞动脉炎/巨细胞性动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎和白癜风。
[0068] 通常评估在这些个体中潜在或实际的CM1应答性是重要的。
[0069] 涉及的其它疾病状况包括炎性疾病状况。
[0070] 本发明涉及的炎性疾病的实例包括但不限于导致在特定区域发红(redness)、肿 胀、疼痛和感觉发热的那些疾病或失调，这意味着保护组织免受损伤或疾病的影响。可以使 用本发明方法治疗的炎性疾病包括但不限于:痤疮、心绞痛(angina)、关节炎、吸入性肺炎、 疾病、积脓症、胃肠炎、炎症、肠道流行性感冒、NEC、坏死性小肠结肠炎、盆腔炎疾病、咽炎、 PID、胸膜炎、嗓子发炎疼痛(raw throat)、发红(redness)、发红病(rubor)、咽喉痛、胃流感 和尿路感染、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病（Chronic Inf lammatory Demy el inating Po 1 yneuropa thy )、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病（Chron i c Inf lammatory Demy el inating Polyradiculoneuropathy )、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病（Chronic Inflammatory Demy el inating Polyneuropathy )、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病 (Chronic Inflammatory Demyelinating Polyradiculoneuropathy)〇
[0071] 癌症治疗还某种程度上依赖于CMI。本文涉及的癌症包括:特征在于不受控的细胞 生长(例如形成肿瘤)而这些细胞没有任何分化成特异和不同的细胞的疾病和紊乱。此类疾 病和紊乱包括ABL1原癌基因、AIDS相关癌症、听神经瘤、急性淋巴细胞白血病、急性髓系白 血病、囊性腺样癌、肾上腺皮质癌、特发性髓样化生(Agnogenic myeloid metaplasia)、脱 发、腺泡状软组织肉瘤(Alveolar soft-part sarcoma)、肛门癌、血管肉瘤、再生障碍性贫 血、星形细胞瘤、共济失调毛细血管扩张、基底细胞癌(皮肤）、膀胱癌、骨癌、肠癌、脑干胶质 瘤、脑和CNS瘤、乳腺癌、CNS肿瘤、类癌肿瘤、子宫颈癌、儿童脑瘤、儿童癌症、儿童白血病、儿 童软组织肉瘤、软骨肉瘤、绒毛膜癌、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓系白血病、结直肠癌 (Colorectal Cancers)、皮肤T细胞淋巴瘤、隆突性皮肤纤维肉瘤(Dermatofibrosarcoma-provesselrans)、促结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、导管癌、内分泌癌、子宫内膜癌、室管膜 瘤、食管癌、尤文氏肉瘤、肝外胆管癌、眼癌、眼黑素瘤、成视网膜细胞瘤、输卵管癌 (Fallopian Vessel cancer)、范可尼贫血、纤维肉瘤、胆囊癌、胃癌、胃肠癌、胃肠类癌肿 瘤、泌尿生殖器癌、生殖细胞肿瘤、妊娠滋养细胞疾病、神经胶质瘤、妇科癌、血液恶性肿瘤、 毛细胞白血病、头和颈癌、肝细胞癌、遗传性乳腺癌、组织细胞增多病、霍奇金病、人类乳头 状病毒、葡萄胎、高钙血症、下咽癌、眼内黑色素瘤、胰岛细胞癌、卡波西肉瘤、肾癌、朗格汉 斯细胞组织细胞增生症、喉癌、平滑肌肉瘤、白血病、利弗劳梅尼（Li-Fraumeni)综合征、唇 癌、脂肪肉瘤、肝癌、肺癌、淋巴水肿、淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、男性乳腺癌、 肾恶性横纹肌样瘤、髓母细胞瘤、黑色素瘤、梅克尔细胞癌、间皮瘤、新陈代谢癌、口腔癌、多 发性内分泌瘤病、蕈样肉芽肿病、骨髓增生异常综合征、骨髓瘤、骨髓增生性疾病、鼻癌、鼻 咽癌、肾胚细胞瘤、神经母细胞瘤、神经纤维瘤病、奈梅亨断裂综合征、非黑色素瘤皮肤癌、 非小细胞肺癌(NSCLC)、眼癌(Ocular Cancers)、食道癌、口腔癌(Oral cavity Cancer)、口 咽癌、骨肉瘤、造口卵巢癌(Ostomy Ovarian Cancer )、胰腺癌、鼻窦癌、甲状旁腺癌、腮腺 癌、阴茎癌、外周神经