专利名称：松乳菇菌丝深层发酵培养基及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及到一种培养液，具体是松乳菇菌丝深层发酵的一种培养基。同时，本发明还涉及利用该培养基培养松乳菇后所获得的产物的应用。
背景技术：
液体深层发酵是食(药)用菌菌丝培养的一种常用方法。它是将菌种接种于发酵罐或锥形瓶的培养液中，在自动控制理化调节下，通过不断同期搅拌或振荡，使菌种在液体深层处快速繁殖的方法。在液体深层培养中，菌丝细胞能在反应器内处于最适宜的温度、酸碱度、氧气和碳氮比等环境中生长，呼吸作用所产生的代谢废气又能及时排放，因此新陈代谢旺盛，菌丝生长分裂迅速，能在短时间内产生大量的菌丝体。液体深层发酵是获取大量松乳菇多糖的有效途径。与其它发酵研究一样，食用菌的发酵培养基包括碳源、氮源、无机盐、 生长因子等，国内学者对松乳菇的发酵条件与工艺进行了研究，但结果很不一致。多数研究表明松乳菇菌丝在以葡萄糖、蔗糖、糊精、甘露醇等为碳源、以玉米浆、牛肉膏、硝酸铵等为氮源的培养基上生长好，矿质盐MgSO4和NaCl使菌丝启动加快，磷酸二氢钾使菌丝产量提高；VB1、VB6、烟酸对菌丝的生长有促进作用，适宜的培养温度25 27°C，pH6 7. 5。目前常用松乳菇基础培养基成分为玉米浆1.5%，硝酸铵0. 15%，羧甲基纤维素钠0.4%，葡萄糖 1. 5%, PH6. 5。以上研究为松乳菇的开发利用提供了基础，但目前液体深层发酵技术得到的松乳菇菌丝量少，多糖的分离纯化技术不成熟，多糖得率很低。
发明内容
本发明对松乳菇菌丝深层发酵培养基进行改进优化，通过在发酵液体培养液中添加中药材进行深层发酵，提高菌丝及胞内多糖产量，同时改善多糖成份，增强多糖的药理活性。本发明提供的松乳菇菌培养基是在基础培养基的基础上，加入一种或多种中草药。上述中药材中优选白术、甘草、天花粉、大枣、玉竹、麦冬、党参、粉葛、百合、当归、 淮山。根据本发明的实施例，更优选麦冬、淮山、大枣、玉竹。本发明根据生物体生物酶作用机制和产物的累积作用，在普通培养基中添加中药材，提高松乳菇菌丝及其多糖的生物产量，并改善多糖成份，增强药理活性。经对添加14种中草药的初筛试验表明，培养基添加多糖类中药材可促进松乳菇菌丝生长，提高多糖产量。 进而挑选麦冬、淮山、大枣三种促进作用强的中药材进行重复试验，再次发现菌丝生长量及多糖含量均显著高于基础培养基的产量；同时经组分分析发现添加这三种中药材菌丝多糖组分明显改变，经抗菌和抗病毒的药理试验证明药理作用增强。中药材最好以均浆的形式加入，以扩大中草药与松乳菇菌丝的接触面积，产生的菌丝体或菌丝体中多糖的含量与加入中草药的量成正比。但是，加入到液体培养基中中草药的比例有一定的限制，量过多，则培养液容易成团或凝固，不利于菌丝充分发酵。对于麦冬、淮山、大枣优选其占培养基的重量体积浓度为0. 5-5%，更优选2-3%。本发明的优点和积极效果本发明从中药材中筛选出14种富含糖类的中草材，添加到松乳菇发酵液中，能提高松乳菇菌丝及其胞内多糖的产量，并增强其多糖的药理(抑菌等)活性。本发明所选择的中药材本身富含多糖，松乳菇菌丝在生长过程中可能对这些多糖直接吸收利用或通过修饰改造后整合到松乳菇菌丝胞内多糖的组分中，使得松乳菇菌丝胞内多糖含量从提高到48. 5% ；本发明使松乳菇多糖的药理功能也发生相应的改变。如原松乳菇胞内多糖对大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌和巴氏杆菌的MIC分别为25mg/ml、12. 5mg/ml、3. 175mg/ml、25mg/ ml，添加了麦冬、淮山和大枣所得到的菌丝胞内多糖对四种细菌的MIC除了对链球菌有所提高或相同外，其余均有所降低，表明通过添加中草药，可以提高松乳菇菌丝胞内多糖的抗菌能力。经鸡胚鸡新城疫病毒和鸡法氏囊病毒感染抑制试验证明添加麦冬、淮山或大枣发酵的松乳菇多糖与未添加中药发酵的松乳菇多糖比，显著提高感染鸡胚的存活时间，且有约30%的鸡胚存活。这种药效提高可能是松乳菇菌丝体一方面同化吸纳了中药中的药理活性成分，即药效叠加；另一方面菌丝体异化作用对中药成份进行修饰，将非活性多糖成分改造成活性成份，将低活性成份改造成高活性成份。本发明筛选出的添加中药材来源广，产量高、价格低，为大规模地生产高活性松乳菇多糖提供技术和物质保障。本发明利用富含糖类的中药材添加发酵松乳菇，既提高了松乳菇菌丝多糖的含量，也提高了松乳菇菌丝多糖的药理活性。
具体实施例方式本发明中，按照加入物质的形态来区分百分比，本发明培养基是液态，一般来说加入是干物质，百分比即重量/体积；加入的是液体物质，百分比即体积/体积。实例1 中药发酵对松乳菇菌丝生长及胞内多糖产量的影响1 材料松乳菇菌种由湖南民康生物技术研究所保存。普通培养基玉米浆1. 5%，硝酸铵0. 15%，羧甲基纤维素钠0. 4%，葡萄糖1. 5%, 蒸馏水定容至100ml，pH6. 5真菌发酵液体培养基各组分都是用百分比表示，参见朱戎，陈向东，兰进“药用真菌液体发酵研究进展”中草药购自湖南养天和大药房，将中草药洗净，干燥箱内60°C烘干，粉碎后放入勻浆机勻浆，最后经冷冻干燥机干燥，备用。中草药改良培养基中草药2 %，玉米浆1%，硝酸铵0. 15%，羧甲基纤维素钠 0. 4%，葡萄糖1. 5%，蒸馏水定容至100ml, PH6. 52 方法将斜面培养基上的菌种接种于固体培养基进行一次活化，然后挑选2cm大小长势好的圆形菌丝块接入装有普通培养基的三角瓶中，于恒温培养摇床上(转速12Orpm08°C 培养5d得普通培养基，再将普通培养基按15 %的接种量接入中草药改良培养基中，按前述
4条件培养5d，每天观察菌丝生长情况并记录。5d后将发酵液抽滤，所得菌丝干燥称重，粉碎过60目筛，超声提取后测量多糖含量。比较添加不同单味中草药的发酵液中菌丝干重以及多糖含量，以此探讨添加中草药对松乳菇菌丝生长及其胞内多糖含量的影响。松乳菇菌丝胞内多糖超声提取松乳菇菌丝干燥后粉碎过60目筛，料液比 1 2500，超声功率400W，一次超声9s，间隔3s，超声30min。吸取超声提取液Iml至IOOml 容量瓶中，加水至100ml，摇勻，测多糖含量。3 结果表1 添加14种中草药的发酵液菌丝生长情况
权利要求
1.松乳菇菌培养基，在普通培养基的基础上，加入一种或多种中草药，尤其是多糖类中草药。
2.根据权利要求1所述的松乳菇培养基，其特征在于上述中药材选自白术、甘草、天花粉、大枣、玉竹、麦冬、党参、粉葛、百合、当归、淮山中的一种或多种。
3.根据权利要求2所述的松乳菇培养基，其特征在于中药材选自麦冬、淮山、大枣、玉竹中的一种或多种。
4.根据权利要求3所述的松乳菇培养基，其特征在于中药材麦冬、淮山或大枣在培养基中的重量体积百分浓度为0. 5-5%。
5.根据权利要求4所述的松乳菇培养基，其特征在于药材麦冬、淮山或大枣在培养基中的重量体积百分浓度为2-3%。
6.一种松乳菇菌丝体制备方法，其特征在于采用权利要求1-5所述的培养基。
7.一种松乳菇菌丝体中提取的多糖，其特征是采用权利要求6的方法制备松乳菇菌丝体。
8.权利要求7所述的松乳菇菌丝体中提取的多糖在制备抗菌兽药中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于所说的抗菌兽药，为抗沙门氏菌、链球菌及巴氏杆菌的兽药。
10.权利要求7所述的松乳菇菌丝体中提取的多糖在制备抗病毒药物中的应用，其中所述的病毒是新城疫病毒和鸡法氏囊病毒。
全文摘要
本发明涉及到一种培养液，具体是松乳菇菌丝深层发酵的一种培养基。同时，本发明还涉及利用该培养基培养松乳菇后所获得的产物的应用。所述松乳菇菌培养基，在普通培养基的基础上，加入一种或多种中草药，尤其是多糖类中草药。本发明对松乳菇菌丝深层发酵培养基进行改进优化，通过在发酵液体培养液中添加中药材进行深层发酵，提高菌丝及胞内多糖产量，同时改善多糖成份，增强多糖的药理活性。本发明筛选出的添加中药材来源广，产量高、价格低，为大规模地生产高活性松乳菇多糖提供技术和物质保障。
文档编号C05G3/00GK102267833SQ20101018993
公开日2011年12月7日 申请日期2010年6月2日 优先权日2010年6月2日
发明者李益, 王慧明 申请人:湖南民康生物技术研究所