专利名称：一种用于提高恩拉霉素产量的发酵培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及微生物发酵领域，具体地说，涉及一种用于提高恩拉霉素产量的发酵培养基及其优化方法。
背景技术：
恩拉霉素(Enramycin)，又名恩来霉素、恩霉素、持久霉素，是由土壤中分离出来的杀真菌素链霉菌(Sti^ptomyces fungicidious CGMCC NO. 4113)发酵产生的一种多肽类抗生素，主要由恩拉霉素A和恩拉霉素B组成。该药于1966年由日本武田药品工业株式会社研发，1974年在日本正式注册，其后在许多国家被注册和广泛使用。1993年，我国农业部批准该药在我国注册。恩拉霉素能改变肠道内的细菌群落分布，有利于饲料营养成分的消化吸收，促进动物增重和提高饲料利用率。恩拉霉素是目前饲料添加剂中广泛使用的抗生素之一，具有广谱、无残留、不产生耐药性等优点。作为肽类抗生素，即使在胃液的低PH条件下恩拉霉素也表现出很高的稳定性，能抑制革兰氏阳性菌的活性，而且具有抑制梭状芽孢杆菌和杆菌类菌属形成芽孢的能力。由于恩拉霉素独特的优点，使其具有良好的社会效益和环境效益，成为新型抗生素的重要来源，具有广阔的市场前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于提高恩拉霉素产量的发酵培养基。本发明的另一目的是提供上述发酵培养基的优化方法。为了实现本发明目的，本发明的一种用于提高恩拉霉素产量的发酵培养基，其配方为(g/L)葡萄糖2. 0-5. 0w/v%、玉米淀粉1. 0-3.、玉米蛋白粉2. 0-5.、棉籽饼粉 0. 5-2. 5w/v%、尿素 0. 1-0. 5w/v%、磷酸二氢钾 0. 01-0. 2w/v%、氯化钠 0. 1-0. 5w/
和碳酸 丐 0. 5-1. 5w/v%，其余为水，ρΗ6· 5-7. 0。本发明还提供上述发酵培养室的优化方法，其包括以下步骤1)确定常规培养基的最适配方1在常规培养基的基础上，选择葡萄糖和玉米淀粉为碳源，玉米蛋白粉为氮源，以磷酸二氢钾和氯化钠为无机盐，通过四因素三水平的正交实验，观察恩拉霉素的产量，确定常规培养基的最适配方1 ； 2)确定棉籽饼粉培养基最佳配方2在配方1的基础上，以棉籽饼粉部分替代玉米蛋白粉，确定棉籽饼粉的最适添加量，分别以0. 1%、0. 3%、0. 5%、1. 0%、1. 5%、2. 0%和2. 5%共7个水平的棉籽饼粉替代玉米蛋白粉，观察随着棉籽饼粉比重在配方中的变化对恩拉霉素产量的影响，确定棉籽饼粉培养基最佳配方2 ；3)确定尿素培养基最佳配方3
在配方1的基础上，以尿素部分替代玉米蛋白粉，确定尿素的最适添加量，分别以
0.1%,0. 3%,0. 5%U. 0%U. 5%,2. 0%和2. 5%共7个水平的尿素替代玉米蛋白粉，观察随着尿素比重在配方中的变化对恩拉霉素产量的影响，确定尿素培养基最佳配方3 ；4)确定在配方1中同时添加棉籽饼粉和尿素的培养基最佳配方4参照配方2和配方3的过程中棉籽饼粉和尿素各自对恩拉霉素产量的影响，设计 L9(34)正交试验，4个影响因素分别为棉籽饼粉(因素Α)、尿素(因素B)、葡萄糖(因素 C)、玉米淀粉(因素D)，每个因素设3个添加量水平，从正交实验结果观察恩拉霉素产量最高的发酵培养基，确定最佳配方4。。其中，步骤1)中所述的常规培养基配方为葡萄糖3.0-5.0W/V%，玉米淀粉
1.0-3. Ow/ν %，玉米蛋白粉 3. 0-5. Ow/ν %，磷酸二氢钾 0. 01-0. 05w/v %，氯化钠 0. I-Iw/ v%，碳酸钙 0. l_lw/v%，其余为水，ρΗ6· 5-7. 0。本发明还提供所述发酵培养基在恩拉霉素发酵生产中的应用，其是以链霉菌作为发酵菌株，进行恩拉霉素发酵生产。优选链霉菌为菌株FYFJ03，保藏号CGMCC No. 4113。本发明提供的发酵培养基，大大提高了以链霉菌作为发酵菌株，生产恩拉霉素的能力，对于恩拉霉素产量的提高效果明显，适用于大规模发酵生产恩拉霉素。本发明提供的发酵培养基的优化方法简单有效，可快速、准确地确定用于提高恩拉霉素产量的发酵培养基的最佳配方。
具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。以下实施例中培养基配方中的各组分均为市售商品。实施例实验菌种为杀真菌素链霉菌突变菌株FYFJ03，其保藏号CGMCC No. 4113，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2010年8月25日。(一 )确定常规培养基的最适配方1在常规培养基(葡萄糖3.0-5.0W/V%，玉米淀粉1.0-3.(^/ν%，玉米蛋白粉 3. 0-5. 0w/v%，磷酸二氢钾 0. 01-0. 05w/v%，氯化钠 0. l_lw/v%，碳酸钙 0. l_lw/v%，其余为水，pH6. 5-7.0)的基础上，选择葡萄糖和玉米淀粉为碳源，玉米蛋白粉为氮源，以磷酸二氢钾和氯化钠为无机盐，通过四因素三水平的正交实验，观察恩拉霉素的产量，进行常规培养基配方选择。发酵条件为500ml三角瓶中装液量50ml，接种量10%，在转速220r/min，温度为的恒温摇床中培养7天，测定恩拉霉素的含量。四因素三水平正交试验完成后，确定常规的培养基配方1各组分最适百分含量为(g/L):葡萄糖4.0%，玉米淀粉2.0%，玉米蛋白粉4.5%，磷酸二氢钾0.02%，氯化钠 0.5%，碳酸钙0.5%，其余为水，ρΗ6· 5-7. 0。用配方1进行发酵，恩拉霉素产量为415U/ml。( 二)确定棉籽饼粉培养基最佳配方2在配方1的基础上，以棉籽饼粉部分替代玉米蛋白粉，确定棉籽饼粉的最适添加
4量，分别以0. 1 %、0· 3 %、0· 5 %、1. 0 %、1. 5 %、2. 0 %、2. 5 %等7个水平的棉籽饼粉替代玉
米蛋白粉，观察随着棉籽饼粉比重在配方中的变化对恩拉霉素产量的影响，最后确定当棉籽饼粉添加量为1. 0%时，恩拉霉素产量最高，达到823U/ml。因此，配方2各组分百分含量为(g/L)葡萄糖4.0%，玉米淀粉2.0%，玉米蛋白粉3. 5 %，棉籽饼粉1.0%，磷酸二氢钾0. 02 %，氯化钠0. 5 %，碳酸钙0. 5 %，其余为水， pH6. 5-7. O0(三)确定尿素培养基最佳配方3在配方1的基础上，以尿素部分替代玉米蛋白粉，确定尿素的最适添加量，分别以 0. 1%、0. 3%、0. 5%、1. 0%、1. 5%、2. 0%、2. 5%等7个水平的尿素替代玉米蛋白粉，观察随着尿素比重在配方中的变化对恩拉霉素产量的影响，最后确定当尿素添加量为0. 3%时， 恩拉霉素产量最高，达到807U/ml。因此，配方3各组分百分含量为(g/L)葡萄糖4.0%，玉米淀粉2.0%，玉米蛋白粉4. 2 %，尿素0. 3 %，磷酸二氢钾0. 02 %，氯化钠0. 5 %，碳酸钙0. 5 %，其余为水， pH6. 5-7. O0(四)确定在配方1中同时添加棉籽饼粉和尿素的培养基最佳配方4参照配方2和配方3的过程中棉籽饼粉和尿素各自对恩拉霉素产量的影响，设计 L9(34)正交试验表，4个影响因素分别为棉籽饼粉(因素A)、尿素(因素B)、葡萄糖(因素C)、玉米淀粉(因素D)，它们的添加量水平分别如表1所示。表1四因素L9 (34)正交试验表
权利要求
1.一种用于提高恩拉霉素产量的发酵培养基，其特征在于，所述培养基配方为葡萄糖 2. 0-5. 0w/v%、玉米淀粉 1. 0-3. 0w/v%、玉米蛋白粉 2. 0-5. 0w/v%、棉籽饼粉 0. 5-2. 5w/、尿素0. 1-0. 5w/v%、磷酸二氢钾0.01-0. 2w/v%、氯化钠0. 1-0. 5 八％和碳酸钙 0. 5-1. 5w/v%，其余为水，ρΗ6· 5-7. 0。
2.权利要求1所述的培养基在恩拉霉素发酵生产中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其是以链霉菌作为发酵菌株，进行恩拉霉素发酵生产。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述链霉菌为菌株FYFJ03，保藏号CGMCC No. 4113。
全文摘要
本发明提供了一种用于提高恩拉霉素产量的发酵培养基新配方，其为葡萄糖2.0-5.0w/v％、玉米淀粉1.0-3.0w/v％、玉米蛋白粉2.0-5.0w/v％、棉籽饼粉0.5-2.5w/v％、尿素0.1-0.5w/v％、磷酸二氢钾0.01-0.2w/v％、氯化钠0.1-0.5w/v％和碳酸钙0.5-1.5w/v％，其余为水，pH6.5-7.0。本发明提供的发酵培养基，大大提高了以链霉菌作为发酵菌株，生产恩拉霉素的能力，对于恩拉霉素产量的提高效果明显，适用于大规模发酵生产恩拉霉素。
文档编号C12P21/04GK102154419SQ20101060921
公开日2011年8月17日 申请日期2010年12月20日 优先权日2010年12月20日
发明者李荣杰, 杨金环 申请人:安徽丰原发酵技术工程研究有限公司