专利名称：一种神经干细胞储存管的制作方法
技术领域：
本发明涉及细胞生物学领域，具体涉及一种用于神经干细胞储存的容器。
背景技术：
神经干细胞(Neural Stem Cell，NSC)是存在于胚胎或成体脑、脊髓等组织中的一种干细胞，是一类具有分裂潜能和自我更新能力的母细胞，可通过不对等的分裂方式分化成神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞等神经组织的各类细胞，也可转分化成血细胞和骨骼肌细胞。目前的科学技术已经可以在体外培养扩增神经干细胞，神经干细胞在体外培养过程中一般呈悬浮状态，不贴壁，并有形成神经球(Neurosphere)的特性。体外培养的神经干细胞可用于生命科学研究、药物筛选测试、临床应用研究等领域。神经干细胞的长期储存方式一般是添加冻存保护剂后装入冻存管冻存于_196°C 液氮罐中(一般可保存I年以上)，短期储存方式可将神经干细胞重悬于生理盐水或细胞培养液中装入保存管在4°C冰箱中暂存(一般在12小时以下)。目前常用的市售细胞冻存管一般是聚丙烯材质，并且管底垂直面与水平面交接处为死角，在将管内储存的神经干细胞取出时，冻存管的内壁残留的神经干细胞非常多，从而造成储存回收率低、损耗大，提高了神经干细胞的储存成本。另外神经干细胞离心、常温暂存常用的容器一般是聚苯乙烯或聚乙烯材质的离心管，也会因吸附等原因造成一定数量的细胞损失。而本发明提供的内壁管底或管底交界处呈圆滑弧形、内壁为白蛋白包被层的储存管，能够大大减少神经干细胞在内壁的残留，降低储存过程中的损耗，并延长细胞储存时间，提高神经干细胞储存效果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种低残留率的神经干细胞储存管。本发明的技术方案如下一种神经干细胞储存管，包括瓶盖⑴和可立瓶体(2)，瓶盖⑴外旋或外扣在可立瓶体(2)的瓶口处，所述可立瓶体(2)的内壁的垂直面(3)与水平面(4)的连接处呈圆滑的弧形(5)，或者内壁整个底部呈弧形(7)，并且所述可立瓶体(2)的内壁表面为白蛋白包被层(6)。上述神经干细胞储存管在用于保存人类神经干细胞时，所述的白蛋白包被层优选使用人血白蛋白包被。上述神经干细胞储存管的瓶盖和可立瓶体的基本材质可使用任何具有一定机械强度、耐低温并对细胞无毒害的高分子材质，在低温储存时优选使用聚丙烯材质，常温储存时优选使用聚苯乙烯或聚乙烯材质。白蛋白(又称清蛋白，Albumin)属于球蛋白，是血衆中含量最多的蛋白质,具有维持血浆胶体渗透压、血浆物质载运、保护血细胞、提供营养、结合重金属离子和毒素等功能，在生物学实验中常添加于细胞培养液中。此外因其能够与免疫反应板上的蛋白结合位点结合，也常在免疫实验中用作封闭液，以阻止后续操作步骤中的抗原或抗体与反应板结合。人血白蛋白(Human Albumin)是人体产生的白蛋白，可从健康人的血液中提取,能够直接静脉注射到病人体内，主要用于失血创伤、烧伤弓I起的休克,脑水肿及损伤弓I起的颅压升高，肝硬化及肾病引起的水肿或腹水，癌症术后恢复等方面的治疗，是一种临床药品， 国内多家生物医药企业有生产销售。本发明中的白蛋白包被层可以通过物理吸附或共价交联等多种方式附着在神经干细胞储存管的内壁上。本发明通过在储存管底部引入呈圆滑弧形的表面避免了神经干细胞在死角处的残留，通过在内壁表面添加一层白蛋白包被层减少了储存管内壁对神经干细胞的吸附，从而极大降低了神经干细胞在储存管的残留率。此外，本发明用于4°C储存神经干细胞时可达到48小时而活细胞数量无明显降低，极大延长了神经干细胞在4°C的储存时间。本发明的有益效果是，能够降低神经干细胞在储存过程中的损耗，降低储存成本， 延长神经干细胞在4°C的储存时间，提高神经干细胞储存效果。
图I :本发明一个实施例的纵切面。图2 :普通细胞冻存管的纵切面。图3 :本发明另一个实施例的纵切面。
具体实施例方式本发明可以通过以下手段制造或实现(I)使用模具和高分子聚合物材料如聚丙烯制作成所需形状；(2)将5%白蛋白溶液加入管内，放置于水平摇床上4°C反应12个小时，形成白蛋白包被层；(3)用超纯水洗涤、晾干。实施例I(I)使用模具和高分子聚合物材料聚丙烯制作成所需形状(图I) ; (2)将5%人血白蛋白溶液加入管内，放置于水平摇床上4°C反应12个小时，形成人血白蛋白包被层(图 I)。从ICR鼠脑组织皮层获取的神经干细胞(经免疫荧光鉴定表达神经干细胞标志物巢蛋白nestin)进行培养扩增后取其中I. 2X 10~7个，重悬于一定体积的冻存液(含10% DMS0，0. lg/ml BSA)，使细胞悬液的最终浓度为I. OX 10~6个细胞/ml，分装到6支本发明制作的神经干细胞储存管(实验组)和6支普通细胞冻存管(对照组)中，每管lml，放入程序降温仪，以_1°C /min的速度降温，然后转入液氮中冻存。I周后将液氮中的冻存细胞取出，在37°C水浴锅中温育复融，加入5倍体积的 DMEM培养液重悬，离心去上清；重复该洗涤步骤；然后加入I倍体积的DMEM培养基(购自 Invitrogen公司)重悬,经自动细胞计数仪计数,实验组和对照组的计数结果如下实验组(单位10~5个细胞/ml) :7. 5,7. 8,7. 2,7. 6,8. 1,7. 7 ；对照组(单位10~5个细胞/ml) 5. 5,5. 8,5. 7,6. 1,5. 5,5. 9
统计分析表明实验组与对照组差异显著(P < O. 001)，说明本发明能够改善细胞冻存复苏率。实施例2(I)使用模具和高分子聚合物材料聚丙烯制作成所需形状(图I) ; (2)将5%人血白蛋白溶液加入管内，放置于水平摇床上4°C反应12个小时，形成人血白蛋白包被层(图 I)。从ICR鼠脑组织皮层获取的神经干细胞(经免疫荧光鉴定表达神经干细胞标志物巢蛋白nestin)进行培养扩增后取其中I. 2X 10~7个，重悬于生理盐水中，使细胞悬液的最终浓度为1.0X10~6个细胞/ml，分装到6支本发明制作的神经干细胞储存管(实验组)和 6支普通细胞冻存管(对照组)中，每管lml，放入4°C冰箱。12小时后将冷藏的细胞从冰箱中取出，经自动细胞计数仪计数，实验组和对照组的计数结果如下实验组(单位10~5个细胞/ml) 9. 8,9. 5,9. 7,9. 6,9. 9,9. 4 ；对照组(单位10~5个细胞/ml) 8. 3,8. 2,8. 4,7. 9,8. 5,8. 2 统计分析表明实验组与对照组差异显著(P < O. 001)，说明本发明能够改善细胞冷藏效果。
权利要求
1.一种神经干细胞储存管，包括瓶盖(I)和可立瓶体(2)，瓶盖(I)外旋或外扣在可立瓶体(2)的瓶口处，其特征在于，所述可立瓶体(2)的内壁的垂直面(3)与水平面(4)的连接处呈圆滑的弧形(5)，或者内壁整个底部呈弧形(7)，并且所述可立瓶体(2)的内壁表面附有白蛋白包被层￠);其中白蛋白包被层以物理吸附或共价交联的方式附着在可立瓶体的内壁上。
2.权利要求I所述的一种神经干细胞储存管，其特征在于，所述的白蛋白包被层为人血白蛋白包被层。
全文摘要
本发明公开了一种神经干细胞储存管，涉及细胞生物学领域。本发明对神经干细胞储存管内壁底部的形状进行了改进，并在内壁添加了一层白蛋白包被层，能够大大减少神经干细胞在内壁的残留，降低储存过程中的损耗，延长神经干细胞在4℃储存时间，提高神经干细胞储存效果。
文档编号A01N1/02GK102599145SQ20121003461
公开日2012年7月25日 申请日期2012年2月16日 优先权日2012年2月16日
发明者杨立敏, 郑佳威, 金宜强, 马晓春 申请人:上海安集协康生物技术有限公司