专利名称：一种解钾菌及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及微生物技术领域，具体地说是一种解钾菌及其制备方法和应用。
背景技术：
现代农业的发展伴随着化肥的大量使用，在增产增收的同时却也导致了土壤板结，有机质含量下降，土壤中的微生物失衡，土壤酸化，重金属含量增加，同时肥料流失还会造成水体污染。目前未见一种农用微生物菌剂系列肥料解钾菌的文献报导和应用，农用微生物菌剂系列肥料不仅可以有效改善土壤品质，同时也可以增强作物的抗性，增加作物对肥料的利用率，减少环境污染，调节土壤中的微生物趋于平衡。
发明内容
本发明的目的是提供一种解钾菌及其制备方法和应用，解钾菌发酵后可作为新型多功能具有解钾能力的环保生物肥料。本发明的解钾菌分类命名为Tfo1SeateJe1S印.，其保藏登记号为CGMCC No. 5856。. 解钾菌形态特征在PDA培养基上淡乳黄色圆形菌落，表面及边缘光滑，无隔膜，菌落
半透明，较为浓稠。序列信息介于Mitsuaria chitosanitabida 和 Roseateles depolymerans | 两个种属之间，与两个种的部分16S rRNA的Blast比对后，相似性均为99%，从进化树的角度看与Roseateles属更为接近。解钾菌的制备方法按以下步骤进行
1)发酵种子的培养选取试验室中培养出的纯净、优良的目标菌进行种子罐接种，接种后进行振荡培养或搅拌培养l-3d，菌种浓度达到IOltl以上，培养基为蛋白胨5-15g、牛肉膏3_8g、氯化钠 3-8g、水 1000ml、pH7. 2-7. 4 ；
2)发酵罐及培养基灭菌先对发酵罐进行灭菌，加入培养基至发酵罐，并对培养基蒸汽灭菌，控制压力0. 1-0. 15Mpa，温度121-125°C，灭菌20min-30min，自然冷却至30°C，保压，培养基与上述的种子培养基相同；
3)发酵罐接种在无菌条件下进行接种，将种子液导入发酵罐中，在接种过程中保持发酵罐内正压0. 03-0. 05Mpa ；
4)发酵过程控制保持温度30°C，发酵罐内压强0.05Mpa,通过温度计及压力表l_2h检测一次温度、压力，通过调节无菌空气加入量调节其溶氧，通过取样口取样检测菌种纯度、含量及PH值；
5)发酵后放料观察发酵液浓度不再变化，则可以进行放料，放料保持罐内压力
0.03-0. 06Mpa，放料后产品放置于阴凉干燥处或0_4°C条件下保存。本发明的解钾菌具有较强的解钾能力，从以下可以验证
I、试验室测定菌种解钾能力
试验目的通过对解钾细菌解钾效果的测定，确定其解钾能力的强弱。
试验原理采用重量法，将菌种培养前后培养基中的钾长石粉重量进行对比，判定菌种的解钾效果。试验步骤及方法
I、样品处理
a、将保存在斜面上的目的菌种在牛肉膏蛋白胨平板上划线培养，活化3次；
b、将活化好的菌种取一环接种于IOOml的牛肉膏蛋白胨液体培养基，30°C，200r/min，摇床培养2天；
C、取3ml菌种培养液，离心取上清液2. 5ml (1%的接种量)加入含不溶性钾的250ml钾长石粉液体培养基，27°C，200 r/min,摇床培养4天，设置不加菌种的培养基作为对照，每个处理三个重复；
d、在第二天、第三天、第四天进行测定。2、重量法测定不溶性钾的分解率
(1)测定方法
a.钾长石粉称重-培养基中钾长石粉加入量记为mw。各瓶的加入量均为I. 2500g。b.滤纸称重——将干燥的定量滤纸放入60°C的烘箱中烘干，2小时后取出放置在干燥器中冷却，冷却半小时后第一次称重，然后继续烘干半小时，冷却半小时后第二次称重，两次重量之差小于0. 0003的可以备用，大于0. 0003的继续重复上述的烘干、冷却、称重过程，直至质量差小于0. 0003，滤纸质量记为nipc.过滤-将样品通过滤纸过滤,滤完后清洗三角瓶,把清洗液也并入滤液中进
行过滤,再用清水冲洗沉淀物三次,确保沉淀物中基本没有菌种残留。d.沉淀烘干一将滤纸连同过滤物放入60°C 土 2V烘箱中烘45分钟。e.再次称重-烘干后取出，在干燥器中室温冷却30分钟,称重,质量记为m2。
权利要求
1.一种解钾菌，其特征在于解钾菌分类命名为单球菌^bseateJes .577,其保藏登记号为 CGMCC No. 5856。
2.权利要求I所述的解钾菌的制备方法，其特征在于按以下步骤进行 1)发酵种子的培养选取试验室中培养出的纯净、优良的目标菌进行种子罐接种，接种后进行振荡培养或搅拌培养l-3d，菌种浓度达到IOltl以上，培养基为蛋白胨5-15g、牛肉膏3_8g、氯化钠 3-8g、水 1000ml、pH7. 2-7. 4 ； 2)发酵罐及培养基灭菌先对发酵罐进行灭菌，加入培养基至发酵罐，并对培养基蒸汽灭菌，控制压力0. 1-0. 15Mpa，温度121-125°C，灭菌20min-30min，自然冷却至30°C，保压，培养基与上述的种子培养基相同； 3)发酵罐接种在无菌条件下进行接种，将种子液导入发酵罐中，在接种过程中保持发酵罐内正压0. 03-0. 05Mpa ； 4)发酵过程控制保持温度30°C，发酵罐内压强0.05Mpa,通过温度计及压力表l_2h检测一次温度、压力，通过调节无菌空气加入量调节其溶氧，通过取样口取样检测菌种纯度、含量及PH值； 5)发酵后放料观察发酵液浓度不再变化，则可以进行放料，放料保持罐内压力0.03-0. 06Mpa，放料后产品放置于阴凉干燥处或0_4°C条件下保存。
3.权利要求I所述的解钾菌的应用，其特征在于解钾菌发酵后得到的发酵液可直接作为农用微生物解钾菌剂肥料。
全文摘要
本发明是一种解钾菌及其制备方法和应用。解钾菌分类命名为单球菌Roseateles.sp，其保藏登记号为CGMCCNo.5856。解钾菌发酵后得到的发酵液可直接作为农用微生物解钾菌剂肥料。本发明的解钾菌生产的具有溶磷、解钾等功能的微生物肥料产品，通过用于烟叶栽培的调查，由于溶磷、解钾等功能微生物的直接作用，改良了土壤品质，提高了土壤中有益微生物的数量，调节土壤中的营养平衡，释放土壤中的不易被吸收的养分，提高烟株的营养吸收。
文档编号C05F11/08GK102747006SQ20121009516
公开日2012年10月24日 申请日期2012年4月1日 优先权日2012年4月1日
发明者尚海丽, 张琪, 杨发祥 申请人:云南省微生物发酵工程研究中心有限公司