专利名称：：乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片及其试剂盒的制作方法
技术领域：
：本发明属于临床检测的基因芯片
技术领域：
，具体地说涉及一种乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片及其试剂盒。
背景技术：
：我国是世界上乙肝病毒感染最严重的国家。通常对乙肝进行两对半检测是临床诊断与血液筛查的重要内容。乙肝e抗原是检测中的一项重要指标。e抗原来源于乙型肝炎病毒的核心。查出e抗愿，其意义就等于査出核心抗原，表示病毒复制活跃，并且传染性较强。要了解HBsAg阳性的人有没有传染性，比较常用而又可靠的检测方法就是验e抗原和e抗体。乙肝e抗原免疫逃避可引起临床血清学对乙肝e抗原的漏检，从而不利于判断病人的传染性及治疗愈后情况。目前临床上还没有针对乙肝e抗原漏检采取专门诊断方法。
发明内容为了提供一种检测乙肝e抗原漏检的方法，提供了一种乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片及其试剂盒。本发明采用下述技术方案提供一种乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片，在固相载体上固定检测乙肝e抗原免疫逃避的特异DNA探针，所说的探针序列可以为probe1WGATTAGGTTAAAGGTCTTprobe1MGATTAGGTTAATGGTCTTprobe2WGGTTAAAGGTCTTTGTACprobe2MGGTTAAAGATCTTTGTACprobe3WACCAGCACCATGCAACTTprobe3MACCAGCACCCTGCAACTTprobe4WTTGGGTGGCTTTGGGGCATprobe4MTTGGGTGGCTTTAGGGCATprobe7C1TTGGAGCTTCTGTGGAGT所述的固相载体是NC膜，尼龙膜，硅胶片，或玻片，固相载体是经过化学修饰的，固相载体可以是经过醛基化修饰的玻片。本发明还提供一种如上所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片试剂盒，由乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片和配套使用的试剂组成；配套使用的试剂包括对血清样本进行处理的处理液，对处理样本进行扩增标记的扩增液，与微阵列进行杂交反应的杂交液，洗涤液，酶标工作液，和检测液；在血清样本的检测过程中配套试剂盒与乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片是联合使用的。所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片的试剂盒，其特征在于，所述的配套使用的试剂可以扩增标记引起乙肝e抗原免疫逃避的突变DNA基因片断，所述的样本扩增液由乙肝e抗原免疫逃避的突变DNA基因片断扩增引物和聚合酶链式反应液组成，所述的引物有生物素标记，所述的引物序列可以是Primer5，-B1735aggagttgggggaggagattaPrimer3，-B1965tcagaaggcaaaaatcagagt所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片的试剂盒，其特征在于，所述的与微阵列进行杂交反应的杂交液，和用于洗涤的洗涤液主要成分是SSC和SDS。所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片的试剂盒，其特征在于，所述的酶标工作液由辣根过氧化物酶标记的亲和素组成，所述的检测液由发光物和过氧化氢二种试剂组成，使用前混合，所述的发光物为鲁米诺、异鲁米诺或其衍生物。综上所述，本发明提供了一种经济简便的方法，用于对乙肝e抗原免疫逃避的检测，避免临床血清学对乙肝e抗原的漏检，从而判断病人的传染性及治疗愈后情况。图1为检测乙肝e抗原免疫逃避基因的探针矩阵示意图具体实施方式本发明的目的，是这样实现的，将设计的特异性探针固定于玻片、膜、硅片、高分子材料载体表面上，形成具有微阵列的基因检测芯片。将待测样本经过处理，用专门设计的引物扩出所需片断，与载体表面探针微阵列经过杂交，再用发光仪进行检测得到结果。探针设计probe1WGATTAGGTTAAAGGTCTTprobe1MGATTAGGTTAATGGTCTTprobe2WGGTTAAAGGTCTTTGTACprobe2MGGTTAAAGATCTTTGTACprobe3WACCAGCACCATGCAACTTprobe3MACCAGCACCCTGCAACTTprobe4WTTGGGTGGCTTTGGGGCATprobe4MTTGGGTGGCTTTAGGGCATprobe7C1TTGGAGCTTCTGTGGAGT引物设计-Primer5'-B1735aggagttgggggaggagattaPrimer3'-B1965tcagaaggcaaaaatcagagt实施例1:按以下方法对各测试血请样品进行检测1.按照产品说明书对血清样本进行处理，提取病毒核酸。2.加入PCR扩增液，对处理得到的核酸样品进行扩增标记，用带BIOTIN标记的引物给产物标记上生物素。3.加入反应区域，10-20ul。4.42'C保温保湿反应60分钟。5.用洗液洗涤4-6次，每次2分钟，振动。6.加入亲和反应液，10-20ul。7.在42'C反应15-20min。8.用洗液洗涤4-6次，每次2分钟，晃动。9.加检测液20ul/孔，使检测液均匀分布于反应区域。10.CCD检测，视发光信号强度曝光30-60秒。实施例2:按以下方法对各测试血请样品进行检测1.按照产品说明书对血清样本进行处理，提取病毒核酸。2.加入PCR扩增液，对处理得到的核酸样品进行扩增标记，用带荧光标记的引物给产物标记上荧光。3.加入反应区域，10-20ul。4.42'C保温保湿反应60分钟。5.用洗液洗涤4-6次，每次2分钟，振动。6.用共聚焦荧光显微镜或荧光扫描仪检测获得结果。结果判定依据不同指标的CutOff值，参考标准品梯度曲线，判定样品血清的阴阳性。与此同时，用常规方法对测试的血清样品进行常规检测。结果表明，用本发明的试剂盒得出的测试结果与常规方法相同。序列表<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>权利要求1.一种乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片，其特征在于固相载体上固定有带有乙肝e抗原免疫逃避相关核酸序列的DNA探针，所说的探针的核酸序列可以为如下一组序列probe1WGATTAGGTTAAAGGTCTTprobe1MGATTAGGTTAATGGTCTTprobe2WGGTTAAAGGTCTTTGTACprobe2MGGTTAAAGATCTTTGTACprobe3WACCAGCACCATGCAACTTprobe3MACCAGCACCCTGCAACTTprobe4WTTGGGTGGCTTTGGGGCATprobe4MTTGGGTGGCTTTAGGGCATprobe7C1TTGGAGCTTCTGTGGAGT2.如权利要求l所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片，其特征在于，所述的固相载体是硝酸纤维素膜，尼龙膜，硅胶片，或玻片，固相载体是经过化学修饰的，固相载体可以是经过醛基化修饰的玻片。3.—种包含如权利要求l所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片的试剂盒，'由乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片和配套使用的试剂组成；配套使用的试剂包括对血清样本进行处理的处理液，对经过处理的样本进行扩增标记的扩增液，与微阵列进行杂交反应的杂交液，洗涤液，酶标工作液，和检测液。4.如权利要求3所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片的试剂盒，其特征在于，所述的扩增液由乙肝e抗原免疫逃避突变基因片段的扩增引物和聚合酶链式反应液组成，所述的引物有生物素标记，所述的引物序列可以是-Primer5'-B1735aggagttgggggaggagattaPrimer3、B1965tcagaaggcaaaaatcagagt5.如权利要求3或4所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片的试剂盒，其特征在于，所述的与微阵列进行杂交反应的杂交液，和洗涤液的主要成分是SSC和SDS。6.如权利要求3或4所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片的试剂盒，其特征在于，所述的酶标工作液由辣根过氧化物酶标记的亲和素组成，所述的检测液由发光物和过^化氢二种试剂组成，所述的发光物为鲁米诺、异鲁米诺或其衍生物。全文摘要本发明提供一种乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片及其试剂盒，属于临床检测的基因芯片
技术领域：
，包括固相载体上固定有检测乙肝e抗原免疫逃避的特异DNA探针的基因芯片和配套使用的试剂；配套使用的试剂包括对血清样本进行处理的处理液，对处理样本进行扩增标记的扩增液，与微阵列进行杂交反应的杂交液，洗涤液，酶标工作液，和检测液；在血清样本的检测过程中配套试剂与乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片是联合使用的。本发明可用于乙肝e抗原免疫逃避的检测，避免临床上乙肝e抗原漏检，从而有利于判断乙肝病人的传染性及治疗愈后情况。文档编号C12Q1/68GK101333559SQ20071004322公开日2008年12月31日申请日期2007年6月29日优先权日2007年6月29日发明者汪宁梅,穆海东,罗芳英,飒黎申请人:上海裕隆生物科技有限公司