专利名称：纳滤膜在利用酰基转移酶或d-氨基酰化酶拆分d,l-氨基酸的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及D，L-氨基酸的拆分，特别涉及纳滤膜在D，L-氨基酸的拆分中的应用。
背景技术：
利用酰基转移酶(Acylase，又称氨基酰化酶)或D-氨基酰化酶 (D-aminoacylase)拆分D，L-氨基酸是一种制备手性氨基酸的常用方法，常用这种方法进 行拆分的氨基酸有蛋氨酸(氨基酰化酶的固定化及其对D，L-蛋氨酸的光学拆分，韩际宏 等，离子交换与吸附，1993第9卷第2期，107-113)、茶氨酸(酶法拆分DL-茶氨酸及其分离 纯化，郭丽芸等，茶叶科学，2006年第26卷第1期，31-36)、苯丙氨酸(DL-苯丙氨酸的酶法 拆分研究，何仕国等，化学反应工程与工艺，2004年3月，64-69)、色氨酸(乙酰化酶动力学 拆分N-乙酰色氨酸，合成化学，2001年第9卷第1期，48-50)、丙氨酸(刺孢小克银汉霉氨 基酰化酶拆分DL-丙氨酸的研究，氨基酸和生物资源，2002年第27卷第2期，38-41)等，对 上述中氨基酸的拆分在氨基酰化酶裂解分离不同产物的方法主要为利用等电点沉淀法或 离子交换法，这两种方法都有成本高，消耗化学试剂多，污染大的缺点。纳滤膜(Nanofiltration)是介于反渗透膜和超滤膜之间的压力驱动膜，截留值 200-1000道尔顿。根据纳滤膜是否带电，可分为荷电纳滤膜和非荷电纳滤膜。荷电纳滤膜 整体或表面带有电荷，这些带有电荷的基团通过静电作用可产生Dorman效应，从而实现不 同价态离子的分离，根据所带电荷性质不同，荷电纳滤膜可分为荷正电纳滤膜(带有阳离 子活性基团)、荷负电纳滤膜(带有阳离子活性基团)和荷电镶嵌膜，其中荷负电纳滤膜应 用较为广泛，常见的纳滤膜主要有交联芳香聚酰胺、交联聚酰胺、交联聚哌嗪酰胺、交联聚 哌嗪酰胺、磺化聚砜、聚酰胺、芳香聚酰胺等多种材质。
发明内容
通过发明人的认真研究，惊奇的发现，在酰基转移酶选择性或D-氨基酰化酶将 N-乙酰-D，L-氨基酸水解成手性氨基酸和N-乙酰氨基酸后，通过纳滤膜将手性氨基酸、 N-乙酰氨基酸分离，可以有效的提高分离效率，提高手性氨基酸的纯度，简化工艺，降低成 本。本发明提供了纳滤膜在利用酰基转移酶或D-氨基酰化酶拆分D，L-氨基酸中的应用。所述的纳滤膜的应用为经过酰基转移酶或D-氨基酰化酶对N-乙酰-D，L-氨基酸 进行裂解后的拆分液在超滤分离酶和其它大分子物质后，再采用纳滤膜过滤将手性氨基酸 和N-乙酰氨基酸分离。所述的手性氨基酸为蛋氨酸、茶氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、丙氨酸中的一种。优选 L-蛋氨酸。所述的纳滤膜优选荷负电纳滤膜。所述的荷负电纳滤膜的材质选自交联芳香聚酰胺、交联聚酰胺、交联聚哌嗪酰胺、 交联聚哌嗪酰胺、磺化聚砜、聚酰胺、芳香聚酰胺。荷负电纳滤膜的阴离子活性基团选自磺酸基(-SO3H)或，羧基(-C00H)，优选磺化聚砜膜。所述荷负电纳滤膜的截留值优选500-1000道尔顿，特别优选800-1000道尔顿所述荷负电纳滤膜的优选截留值为1000道尔顿的磺化聚砜纳滤膜。所述纳滤膜过滤时操作压力为0. 25-1. 2Mpa。所述的酰基转移酶或D-氨基酰化酶拆分D，L-氨基酸的步骤如下1)N-乙酰氨基酸的制备；2)酰基转移酶或D-氨基酰化酶裂解N-乙酰氨基酸，所述的酶裂解反应产物进行 超滤以分离酶；3)将步骤2)得到的产物流采用纳滤膜进行过滤，得到截留液和透过液；被拆分的 手性氨基酸进入透过液，未被拆分的N-乙酰氨基酸留在截留液中；4)对步骤3)得到的透过液进行结晶并分离由此制得的手性氨基酸；5)离子交换纯化步骤3)所得的截留液；6)乙酰化步骤4)所得的结晶母液，并循环至步骤2)中进行酶解；7)外消旋步骤5)纯化的N-乙酰氨基酸，并将该外消旋产物循环至步骤2)。在下面的说明中，多以L-蛋氨酸举例，L-蛋氨酸外的其它L-氨基酸也可以采取 类似的方法进行拆分，得到L-氨基酸，除了采用的酶和酶解条件有所不同以外，D-氨基酸 的制备方法与L-氨基酸的制备方法类似，所述D-氨基酰化酶和酶裂解条件也是现有技术 中已知的(闫峰等，D-氨基酸酰化酶拆分D，L-苯丙氨酸制备D-苯丙氨酸，氨基酸和生物 资源，2008年第30卷第1期，36-38)1) N-乙酰氨基酸的制备氨基酸的乙酰化是本领域技术人员所知的。许多文献涉及从游离氨基酸通过 Schotten-Baumann 或 Einhorn-方法获得 N-乙酉先基氨基酸(Organikum, VEB Deutscher Verlag derffissenschaften, 16. Auflage, Berlin 1986，S. 407)。例如，蛋氨酸可以被乙酰 化(US6114163 ；1097/^1667)。优选采用固体形式或以30-50%的碱溶液的形式供应D，L-蛋 氨酸，采用D，L-蛋氨酸钠盐溶液。另外，也可以使用含有D，(L)-, (D)，L-或D，L-蛋氨酸 的母液。通过向D，L-蛋氨酸的水溶液中加入乙酸酐或乙酰氯，和碱(例如氢氧化钠/钾) 在20-40°C下进行乙酰化。对于接下来的酶拆分，可以直接使用来自于乙酰化步骤的N-乙 酰基-D，L-蛋氨酸的碱性盐溶液。在此情况中，不需要分离N-乙酰基-D，L-蛋氨酸。2)酰基转移酶或D-氨基酰化酶裂解N-乙酰氨基酸以L-蛋氨酸为例，反应式如下
O
O Λ ]1ρΗ 6-7,5
^X^Y^ONa L-Acytase
J11Zinc/Cobalt
Y<formula>formula see original document page 5</formula>
该步骤对于本领域技术人员来说是已知的，按照US6114163公开的方法进行。通 过将大约0. 4-2. Omol/L的N-乙酰基_D，L-蛋氨酸的碱性水溶液，优选pH值在6. O和 7. 5之间的钠盐，与酰基转移酶接触而进行。在此，N-乙酰基-L-蛋氨酸选择性地被酶拆 分成乙酸盐和L-蛋氨酸，而N-乙酰基-D-蛋氨酸不受影响。优选酶拆分之前，将pH值被 调节为7. 0-7. 5的来自于步骤7)的经过外消旋N-乙酰基-D，L-蛋氨酸盐溶液循环至待 酶裂解的混合物中，并且所述混合物可以经活性炭和过滤处理。然后将悬浮液在压滤机上 过滤，并将澄清滤液收集于罐中。可以加入痕量的氯化锌或氯化钴作为酶拆分反应的催化 齐U。用水将所述溶液稀释至N-乙酰基-D，L-蛋氨酸碱性盐的浓度为约0. 5-1. Omol/L,优选 0. 6-0. 9mol/L，并供应至用于酶裂解反应的反应器中。所述反应器可以包括具有膜的超滤 单元，所述膜具有5000-20000道尔顿，优选7500-12000道尔顿的截留值(cut-off)。用泵 将所述N-乙酰基-D，L-蛋氨酸盐溶液供入所谓的酶膜反应器(Enzyme Membrane Reactor) (EP1170277及其引用的文献)中，并混合入其中含有酰基转移酶，优选Amano 酰基转移酶 或其等价物的浓缩流(concentrate stream)(意指其中存在酶的那部分混合物)中。也可 以在酶选择性地裂解N-乙酰基-L-蛋氨酸后再通过过滤器进行过滤。所述酶选择性地裂 解N-乙酰基-L-蛋氨酸碱金属盐，优选钠盐，以形成L-蛋氨酸和碱金属乙酸盐。具有分子 量为约80000道尔顿的酰基转移酶不能透过超滤膜，因此而留在浓缩流中。所有其他更小 的化合物可以透过所述膜而进入产物流中。该酶促反应有利地在温度为20-40°C和pH值范 围为7. 0-7. 5下进行。3)将步骤2)得到的产物流采用纳滤膜进行过滤，得到截留液和透过液；被拆分的 手性氨基酸进入透过液，未被拆分的N-乙酰氨基酸留在截留液中。所述的纳滤膜优选荷负电纳滤膜。所述的荷负电纳滤膜的材质选自交联芳香聚酰胺、交联聚酰胺、交联聚哌嗪酰胺、 交联聚哌嗪酰胺、磺化聚砜、聚酰胺、芳香聚酰胺，所述荷负电纳滤膜的阴离子活性基团选 自磺酸基(-SO3H)或，羧基(-C00H)。优选磺化聚砜膜。所述荷负电纳滤膜的截留值优选500-1000道尔顿，特别优选800-1000道尔顿。所述荷负电纳滤膜的优选截留值为1000道尔顿的磺化聚砜纳滤膜。所述纳滤膜过滤时操作压力为0.25-1. 2Mpa。截留液与透过液的体积比为 1:4-1: 1，优选1 1.5-1 1。通过将步骤2)得到的产物流采用截留值500-1000道 尔顿的荷负电纳滤膜进行过滤，得到截留液和透过液，透过液为通过纳滤膜的物质，主要是 L-蛋氨酸，而截留液为不能通过纳滤膜的物质，主要是N-乙酰-L-蛋氨酸。在过滤过程中， 优选加压进行过滤。4)对步骤3)得到的透过液进行结晶并分离由此制得的手性氨基酸；以L-蛋氨酸为例，将步骤3)得到的透过液在减压条件下泵送入蒸发装置进行结晶，所述的蒸发装置可以是普通的薄膜蒸发器或降膜蒸发器等，类似工艺可以参考 US6114163。优选地，在低于会发生外消旋的温度下进行浓缩，尤其是低于90°C。可以通过活 性炭和压滤机的过滤纯化所述的透过液以在优选70-90°C之间脱色除杂质。为了得到手性 氨基酸，可以进行通过微纤维过滤器的过滤，所述过滤器具有至少0. 2μπι的截留值；也可 以通过常规的滤纸或滤布的方法得到。用于此目的优选的膜由聚醚飒或聚丙烯或本领域技 术人员已知的其它材料制成。冷却时L-蛋氨酸可以被结晶(US6114163)。随后，它可以通 过离心而过滤，经清洗并干燥。优选地，清洗溶液由甲醇水溶液(甲醇含量65-90重量％ ) 构成。清洗溶液可以被回收并且可以通过蒸馏回收甲醇。最优选的是，将获得的晶体悬浮 于甲醇溶液中以除去最后的杂质并保证微生物的质量。优选在低于40°C的温度下进行悬浮 步骤。悬浮的晶体再一次通过离心而过滤，并用上述的甲醇溶液清洗。可以通过蒸馏再一 次循环甲醇清洗溶液。作为产物的L-蛋氨酸含量可以达到98%以上。5)离子交换纯化步骤3)所得的截留液步骤3)所得的截留液包括未反应的N-乙酰氨基酸，和少量未透过纳滤膜的手性氨基酸。为了不浪费后者(非常昂贵)，必须对该材料进行进一步纯化。优选通过离子交换 方法进行该纯化。为了获得纯化的副产物，对与截留液成分组成类似的混合溶液进行离子 交换处理是本领域技术人员已知的(EP 276392 ；WO 97/21667) 0以L-蛋氨酸为例，通过将 所述截留液经受阳离子交换树脂，未保护的L-蛋氨酸和碱金属离子则被吸附至静态相，而 剩余的产物如N-乙酰基-D，(L)-蛋氨酸和乙酸盐被洗脱。在一个优选的方式中，所述溶液 被加热到45-80°C并泵送至填充有阳离子树脂的柱上。L-蛋氨酸和碱金属(优选钠)离子 被吸附，而N-乙酰基-D，(L)蛋氨酸和乙酸的酸性部分通过该柱。有利地，该过程可以通过 三个独立的离子交换柱进行。在第一柱中，来自晶体分离的母液如上述处理以分离L-蛋氨 酸和对溶液去矿化。随后，在阴离子树脂和阳离子树脂上成功处理N-乙酰基-D，(L)-蛋氨 酸和乙酸部分。阴离子树脂旨在从混合物中除去所有的阴离子，典型的，尤其是在外消旋步 骤7)中会损坏不锈钢设备的氯化物。阳离子树脂用来除去会导致步骤7)中不完全外消旋 的最后痕量的碱金属离子和L，(D)蛋氨酸。根据本领域技术人员已知的方法，离子交换树 脂可以重新载有H+或0H—。含有L-蛋氨酸的部分仍然存在于第一根阳离子柱中，通过本领 域技术人员的常识被洗脱、收集。离子交换纯化得到的L-蛋氨酸任选地可以被例如通过结 晶分离，优选加入步骤4)中进行结晶。6)乙酰化步骤4)所得的结晶母液，并将其加入步骤2)中进行酶解；结晶过程步骤4)的母液，基于生态学的原因，其有时需要被乙酰化、外消旋并重 新加入步骤2)中进行酶解。以L-蛋氨酸为例，结晶过程步骤4)的母液包括少量的D-蛋氨 酸，还有可能存在少量的N-乙酰基-D，(L)-蛋氨酸。为了提高收率，D-蛋氨酸有时需要被 乙酰化并重新结合进入所述过程。如果存在少量的N-乙酰基-D，(L)-蛋氨酸，可以直接将 其加入步骤2)进行酶解，也可以进行外消旋后加入步骤2)进行酶解。针对少量的D-蛋氨 酸，需要将母液的PH值调节至8. 0-12.0，并向此混合物加入相应量的乙酰氯或乙酸酐(已 述的Schotten-Baumarm-方法)。完成后，浓缩所得的混合物，并将其循环至步骤2)中进行 酶解。任选地，外消旋化所述的乙酰化结晶母液混合物，再将其循环至步骤2)中进行酶解。任选地，外消旋化所述的乙酰化结晶母液混合物，再将其循环至步骤2)中进行酶 解。
7)外消旋步骤5)纯化的N-乙酰氨基酸，并将该外消旋产物循环至步骤2)以L-蛋氨酸为例，反应式如下
<formula>formula see original document page 7</formula>为了提高手性氨基酸的收率，必须将分离的N-乙酰氨基酸循环至流程中。然而， 为了完成此目的，必须进行对N-乙酰氨基酸外消旋。外消旋N-乙酰氨基酸对本领域技术 人员来说是已知的(乙酰-D-蛋氨酸消旋工艺的研究，张清玉等，(化学工业与工程，2004 年 3 月，第 21 卷第 2 期，91-95 ;W0 97/21650 ；EP 175840 ；US6 114163)。优选用离子交换 过程的各自浓缩和去矿化的部分进行N-乙酰基-D，(L)-蛋氨酸的外消旋。更优选，通过加 入少量的乙酸酐外消旋所得到的N-乙酰基-D，(L)-蛋氨酸的熔融物以形成N-乙酰基-D， L-蛋氨酸。该混合物被加热至约120-150°C，并随后在稀释的碱金属(优选钠)氢氧化物 的溶液中骤冷。或者，以L-蛋氨酸为例，在本发明的另一优选的实施方式中，将步骤5)制备的纯 化的和去矿化的L-蛋氨酸溶液加入至步骤4)的结晶溶液。在结晶前，优选在活性炭处理 前，步骤5)任选被浓缩的L-蛋氨酸溶液被加入至步骤4)的溶液是有利的。本发明的另一 优选的变体涉及如下，在酶裂解前，将锌离子和/或钴离子加入至混合物。这种方法明显地 增加了酶裂解能力。有利的是，利用每升反应混合物10_3-10_5M的锌离子。在此情形中，使 用的钴离子的量可以是每单位酶10_3-10_5的钴离子。为了进一步最小化来自反应过程的 废物流，优选在纯化L-蛋氨酸晶体的过程中，收集使用的甲醇清洗溶液和蒸馏可以再利用 的甲醇。剩余的重相包括大量的L-蛋氨酸和N-乙酰基-D，L-蛋氨酸。该重相可以任选地 被循环至步骤6)的乙酰化过程中。结果是该材料被重新结合至总的L-蛋氨酸的制备过程 中。从上述描述的方法可以看出，本发明提供的L-蛋氨酸的制备方法由于其产生最小的废 物量和得到极高产率的高质量的产品，可以在技术上高度多样化地运作。方法步骤的结合 使获得L-蛋氨酸较高的总收率，这明显优于现有技术，并有助于获得上述有利的结果。术语，D，(L)-, (D)，L-或D，L-是指具有不同量的D-和L-异构体的对映异构体的 混合物。在D，(L)-混合物中，D-对映异构体是相对于L-形式主要存在的。同样，在(D)，L-混合物中，L-对于D-异构体的比例大于1。D，L-混合物是外消旋或几乎外消旋的混合 物。与现有技术不同，本发明提供的纳滤膜在氨基酸制备中的应用，通过将酶解后的 产物进过超滤滤去酶等大分子物质后，再采用纳滤膜进行进一步的过滤，将手性氨基酸与 N-乙酰氨基酸分离开，与现有技术中将酶解后产物经过超滤后再通过离子交换步骤进行回 收的工艺相比，，本发明提供的制备方法提高了手性氨基酸的回收率和质量，同时降低了后 续步骤6)中进行离子交换时所用的树脂量及相应的洗脱、再生树脂所用的化学试剂量，因 此也降低了生产的成本，降低了污染物的排放。通过循环套用步骤7)得到外消旋的N-乙酰 氨基酸至步骤2)的酶解步骤中，可以提高手性氨基酸的收率，以L-蛋氨酸为例，符合《中国 药典》2005版要求的药用级L-蛋氨酸的收率可达到95%以上(相对于N-乙酰基_D，L_蛋 氨酸的摩尔百分比收率)。
具体实施例方式所述具体实施方式
仅为以L-蛋氨酸为例的制备方法的实施举例，不能解释为对 本发明实施方式的限制，本发明提供的制备方法，可以在结合任何公知常识基础上以任何 有利的方式进行实施。本实施方式在循环运行后符合中国 药典2005版要求的L-蛋氨酸的 收率可达95%以上(相对于N-乙酰-D，L蛋氨酸的摩尔百分比收率)。 1)乙酰化D，L-蛋氨酸的消旋混合物按照US6114163所公开的方法乙酰化D，L-蛋氨酸，得到N-乙酰基_D，L-蛋氨酸。2)酶裂解该乙酰化混合物按照US6114163所公开的方法，将N-乙酰_D，L_蛋氨酸配制成pH值为7. 0-7. 5， 浓度为0.6mol/L的钠盐水溶液。按照锌离子浓度为10_3mo/L的比例向N-乙酰-D，L-蛋氨 酸钠盐水溶液中加入氯化锌。采用商品名为Amano 的酰基转移酶，酶活力为30000U/g，操 作温度为37°C，最终转化率为85%，用截留值为10000道尔顿的超滤膜对最终转化后的反 应液进行超滤以将产物流中的酶等大分子化合物除去。3)将步骤2)得到的产物流采用荷负电纳滤膜进行过滤，得到截留液和透过液；采用截留分子量为1000的磺化聚砜纳滤膜(NTR7450，Nitto Denko, Japan)对步 骤2)得到的产物流进行过滤，得到截留液与透过液，操作压力为0. 8Mpa,操作温度为35°C， 所述截留液与透过液的体积比为1 1。4)对步骤3)得到的透过液进行结晶并分离由此制得的L-蛋氨酸根据US6114163，将步骤3)和得到的透过液和步骤5)的阳离子树脂洗脱液在 70°C条件下用活性炭脱色，脱色液压滤后在减压条件下泵送入薄膜蒸发器进行浓缩结晶， 结晶温度低于90°C。所得结晶进行离心过滤，并于常温下用90%甲醇溶液清洗所得的L-蛋 氨酸结晶，再一次离心过滤，甲醇回收蒸馏后循环使用，得到L-蛋氨酸结晶减压干燥，干燥 温度110°C。得到的L-蛋氨酸含量为98.7%。5)离子交换纯化步骤3)所得的透过液将步骤3)所得的透过液按照EP276392 ；W097/21667所公开的方法进行离子交换 纯化将透过液被加热到后70°C通过阳离子树脂柱1进行处理，然后将处理过的透过液再 分别经过阴离子树脂柱和阳离子树脂柱2进行处理，洗脱阳离子树脂柱1和2，洗脱液中加 入到步骤4)活性炭脱色前的溶液中一起进行结晶，制备L-蛋氨酸。洗脱阴离子树脂柱，洗脱液为步骤7)备用。6)乙酰化步骤4)所得的结晶母液；将步骤4)得到的结晶母液进行乙酰化，用氢氧化钠将母液的PH值调至10，采用 US6114163中公开的方法用乙酸酐进行乙酰化。将酰化后的产物按照张清玉等(乙酰-D-蛋 氨酸消旋工艺的研究，化学工业与工程，2004年3月，第21卷第2期，91-95)公开的方法进 行。乙酰化后的产物可以加入步骤2)中进行酶解，也可以进行外消旋化处理，并循环至步 骤2)中进行酶解。这主要根据步骤4)得到的结晶母液中D-蛋氨酸与L-蛋氨酸之间的比 例决定，当D-蛋氨酸较多时就乙酰化后需要进行外消旋化处理，当L-蛋氨酸较多时可以乙 酰化后循环至步骤2)中进行酶解。7)外消旋步骤6)纯化的N-乙酰基-D，(L)-蛋氨酸，循环进入步骤2)。将步骤5)阴离子树脂柱中的洗脱液(含有纯化的N-乙酰基-D，(L)-蛋氨酸)按 照WO 97/21650 ；EP 175840 ；US6 114163和张清玉等(化学工业与工程，2004年3月，第 21卷第2期，91-95)公开的方法采用乙酸酐进行外消旋得到几乎外消旋的N-乙酰基-D， L-蛋氨酸。用氢氧化钠溶液和水调节N-乙酰基-D，L-蛋氨酸的浓度为0. 6-0. 9mol,pH为 7. 0-8. 0，按照锌离子浓度为10_3mO/L加入氯化锌，加入步骤2)进行酶解反应。
权利要求
纳滤膜在利用酰基转移酶或D-氨基酰化酶拆分D，L-氨基酸中的应用。
2.如权利要求1所述，其特征是纳滤膜的应用为经过酰基转移酶或D-氨基酰化酶对 N-乙酰-D，L-氨基酸进行裂解后的拆分液在超滤分离酶和其它大分子物质后，再采用纳滤 膜过滤将手性氨基酸和N-乙酰氨基酸分离。
3.如权利要求1或2所述，其特征是所述手性氨基酸为蛋氨酸、茶氨酸、苯丙氨酸、色氨 酸、丙氨酸中的一种。
4.如权利要求1至3中任一所述，其特征是所述纳滤膜优选荷负电纳滤膜。
5.如权利要求4所述，其特征是所述荷负电纳滤膜的材质选自交联芳香聚酰胺、交联 聚酰胺、交联聚哌嗪酰胺、交联聚哌嗪酰胺、磺化聚砜、聚酰胺、芳香聚酰胺，荷负电纳滤膜 的阴离子活性基团选自磺酸基(-S03H)或，羧基(-C00H)。
6.如权利要求5所述，其特征是所述荷负电纳滤膜的截留值为500-1000道尔顿。
7.如权利要求6所述，其特征是所述荷负电纳滤膜优选磺化聚砜纳滤膜。
8.如权利要求7所述，其特征是所述荷负电纳滤膜优选截留值为1000道尔顿的磺化聚 砜纳滤膜。
9.如权利要求1-8任一所述，其特征是所述的酰基转移酶或D-氨基酰化酶拆分D， L-氨基酸的步骤如下1)N-乙酰氨基酸的制备；2)酰基转移酶或D-氨基酰化酶裂解N-乙酰氨基酸，所述的酶裂解反应产物进行超滤 以分离酶；3)将步骤2)得到的产物流采用纳滤膜进行过滤，得到截留液和透过液；被拆分的手性 氨基酸进入透过液，未被拆分的N-乙酰氨基酸留在截留液中；4)对步骤3)得到的透过液进行结晶并分离由此制得的手性氨基酸；5)离子交换纯化步骤3)所得的截留液；6)乙酰化步骤4)所得的结晶母液，并循环至步骤2)中进行酶解；7)外消旋步骤5)纯化的N-乙酰氨基酸，并将该外消旋产物循环至步骤2)。
10.如权利要求9所述的制备方法，其特征是所述步骤3)中截留液与透过液的体积比 为 1 4-1 1。
全文摘要
纳滤膜在利用酰基转移酶或D-氨基酰化酶拆分D，L-氨基酸的应用，所述的纳滤膜的应用为经过酰基转移酶或D-氨基转移酶对N-乙酰-D，L-氨基酸进行裂解后的拆分液在超滤分离酶和其它大分子物质后，再采用纳滤膜过滤将手性氨基酸和N-乙酰氨基酸分离。
文档编号C12P13/04GK101831482SQ20101015039
公开日2010年9月15日 申请日期2010年4月20日 优先权日2010年4月20日
发明者林立生, 袁英, 黄凤华 申请人:天津金耀集团有限公司