专利名称：一种il-23r基因多态性检测特异性引物和液相芯片的制作方法
技术领域：
本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种IL-23R基 因多态性检测特异性引物和液相芯片。
背景技术：
人白细胞介素-23 受体(human interleukin_23rec印tor，hIL_23R，IL-23R)是一 个由IL-23pl9和IL-12p40组成的异二聚体细胞因子，主要由活化的树突细胞和巨噬细胞 分泌，属IL-12炎症因子家族成员，并通过Jak/Mat途径传递活性信号。IL-23R的编码基 因定位于1号染色体1ρ31. 2 32. 1的位置上，编码区含有^lcb个碱基，由11个外显子组 成。研究表明，IL-23R的基因多态性与多种肺部疾病的免疫应答及疾病的形成有关， 如肺结核、肺炎克雷白杆菌性肺炎、百日咳等感染性疾病及肺部纤维化；此外还与多种自 身免疫性疾病及肿瘤的免疫有关。本发明目标检测的IL-23R基因突变位点，如表所示
权利要求
1.一种IL-23R基因多态性检测液相芯片，其特征在于，主要包括有A.针对IL-23R基因的不同多态性位点分别设计的野生型和突变型特异性ASPE引物， 每种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端的针对目的基因多态性位点的特异性引物序列 组成，所述特异性引物序列选自针对C214T的SEQ ID NO. 9及SEQ ID NO. 10、针对C235T 的 SEQ ID NO. 11 及 SEQ ID NO. 12、针对 T82G 的 SEQ ID NO. 13 及 SEQ ID NO. 14、针对 C53T 的SEQ ID NO. 15及SEQ ID NO. 16中的一对以上；所述tag序列选自SEQ ID NO. 1 SEQ IDN0. 8中的序列；B.分别包被有特异的anti-tag序列的、具有不同颜色编码微球，所述anti-tag序列 选自SEQ IDN0. 17 SEQ ID NO. 24中的序列，且所述anti-tag序列能相应地与A中所选 tag序列互补配对，所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；C.用于扩增具有C214T、C235T、T82G和C53T中的一个以上多态性位点的目标序列的 引物。
2.根据权利要求1所述的IL-23R基因多态性检测液相芯片，其特征在于，所述扩增引 物选自针对 C214T 的 SEQ ID NO. 25 和 SEQ ID NO. 26、针对 C235T 的 SEQ ID NO. 27 和 SEQ IDN0. 28、针对 T82G 的 SEQ ID NO.四和 SEQ ID NO. 30、针对 C53T 的 SEQ ID NO. 31 和 SEQID NO. 32中的一对以上。
3.根据权利要求1所述的IL-23R基因多态性检测液相芯片，其特征在于，所述特异 性ASPE引物选自针对C214T的由SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 9组成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQID NO. 10组成的序列、针对C2!35T的由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 11组成的 序列及由SEQID NO. 4和和SEQ ID NO. 12组成的序列、针对T82G的由SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO. 13组成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 14组成的序列、针对C53T的由SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 15组成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQ ID NO. 16组成的序列中的 一对以上。
4.根据权利要求1所述的IL-23R基因多态性检测液相芯片，其特征在于，A.所述ASPE引物为针对C214T的由SEQID NO. 1和SEQ ID NO. 9组成的序列及由 SEQ IDN0. 2 和 SEQ ID NO. 10 组成的序列、针对 C235T 的由 SEQ ID N0. 3 和 SEQ ID NO. 11 组成的序列及由SEQ ID N0. 4和和SEQ ID N0. 12组成的序列、针对T82G的由SEQ ID N0. 5 和SEQ ID N0. 13组成的序列及由SEQ ID N0. 6和SEQ ID N0. 14组成的序列、和针对C53T 的由SEQ ID N0. 7和SEQ ID N0. 15组成的序列及由SEQ ID N0. 8和SEQ ID N0. 16组成的 序列。B.分别包被有特异的anti-tag序列的、具有不同颜色编码微球，所述anti-tag序列 选自SEQ IDN0. 17 SEQ ID N0. 24中的序列，且所述anti-tag序列能相应地与A中所选 tag序列互补配对，所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；C.所述扩增引物为针对C214T的SEQID N0. 25和SEQ ID N0.沈、针对C235T的SEQ ID N0. 27 和 SEQ ID N0.沘、针对 T82G 的 SEQ ID N0. 29 和 SEQ ID N0. 30、和针对 C53T 的 SEQ ID N0. 31 和 SEQ ID N0. 32。
5.根据权利要求1-4任一项所述的IL-23R基因多态性检测液相芯片，其特征在于，所 述间隔臂序列为5-10个T。
6.一种用于IL-23R基因多态性检测的特异性引物序列，其特征在于，所述特异性引物序列选自针对 C214T 的 SEQ ID NO. 9 及 SEQ ID NO. 10、针对 C235T 的 SEQ ID NO. 11 及 SEQ ID NO. 12、针对 T82G 的 SEQ ID NO. 13 及 SEQ ID NO. 14、针对 C53T 的 SEQ ID NO. 15 及 SEQ ID NO. 16中的一对以上。
全文摘要
本发明公开了一种IL-23R基因多态性检测特异性引物和液相芯片，该液相芯片主要包括有由5’端的tag序列和3’端的特异性引物组成的ASPE引物，所述特异性引物序列选自针对C214T的SEQ ID NO.9及SEQ ID NO.10、针对C235T的SEQ ID NO.11及SEQ ID NO.12、针对T82G的SEQ ID NO.13及SEQ ID NO.14、针对C53T的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16中的一对以上；微球；扩增引物。所述的IL-23R基因多态性检测液相芯片具有非常好的信号-噪声比，并且所设计的探针以及anti-tag序列之间基本上不存在交叉反应，tag标签序列、anti-tag标签序列的选取以及tag标签序列与具体ASPE引物的结合，能够避免交叉反应，实现多个多态性位点的并行检测。
文档编号C12Q1/68GK102146482SQ20111011125
公开日2011年8月10日 申请日期2011年4月29日 优先权日2011年4月29日
发明者刘志明, 许嘉森, 郭婧 申请人:广州益善生物技术有限公司