专利名称：一种转座载体及其构建方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，具体的说是涉及一种转座载体及其构建方法。
背景技术：
转座子，又称转座因子，是转座元件中的一种，具有完整转座元件的功能特征，并能携带内外源基因组片段(单基因或多基因)，在基因组内移动或在生命体之间传播并可表达出新的表型。转座子的转座会使基因组结构和功能改变上有所改变，因而在进化中扮演重要角色。自Mc Clintock在玉米中发现第一个转座子以来，随着对转座子研究的不断深入和技术的日臻完善，转座子已经作为一种重要的基因工程工具，用于多物种的基因组功能和遗传学分析。人类基因组计划(Human Genome Project,HGP)揭示人类基因组中大约有45%源于转座子，足见转座子在人类基因组进化过程中的影响。然而，长期以来，哺乳动物中由于缺少高效的转座子，其基因操作方面受到很大限制。目前发现的能够在哺乳动物中转座反应的元件有hAT样Tol2转座子、Tcl样转座子和PB (PiggyBac)转座子家族，其中Tcl样转座子包括SB (Sle印ing Beauty) ^P FP (Frog Prince)。这其中SB和PB是目前在哺乳动物应用最为广泛的两种DNA转座子。SB是通过与Tcl家族转座子序列比对，并从鲑鱼(salmanoid)基因组分离重建出的一种Tcl/mariner样转座子，它是第一个能够在哺乳动物细胞中转座的DNA转座元件。 SB转座系统主要包括转座酶合成基因和一能够被转座酶识别的具有反向重复序列的转座元件。SB发生转座时须2个组成部分同时存在。PB分离于甘蓝蠖度尺蛾(Callage Iooper moth Trichoplusia ni)，各方面明显不同于已发现的转座子类型，属于一新转座子家族。 最初PB发现能够在果蝇和昆虫中转座，通过序列比对和功能重建，发现PB还能够在哺乳动物细胞以及生殖细胞转座。PB转座系统的转座也需要转座子序列和转座酶同时存在。SB和PB作为DNA转座子，具有相似的转座机制，但由于来源不同及本身的特性不同，二者之间也存在多方面差异。与PB相比，SB转座酶和转座识别序列的分离构建二元转座系统，提高了转座的安全性。同时SB具有转座子的整合偏好性，更容易插入到供体附近位置，如Kokubu等发现SB转座插入到供体临近的8kb区域内频率更大；Liang等通过 SB和PB的活性比较，发现SB25%的重新整合位点位于次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase,Hprt)供体位置白勺4Mb 内，而PB贝Ij 未能表现出这种偏好性。而与SB相比，PB具有更高的转座活性，且转座后供体位置处不留任何足迹，不会造成供体处遗传物质的改变。
发明内容
有鉴于此，本发明目的是提供一种融合了 SB和PB两种DNA转座子特性的、用于哺乳动物小鼠、大鼠、猪等基因突变的新型转座载体及其构建方法。为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案
一种转座载体，包含以下元件a) PB转座酶识别序列PBL和PBR ；b)原核生物抗性基因；c)复制起始位点序列；d) SB转座酶识别序列SBL和SBR ；e)基因捕获框，所述基因捕获框包括剪接受体、报告基因与真核生物抗性基因的融合基因和SV40的多聚腺苷酸信号序列；所述与报告基因融合的抗性基因与所述转座载体所含抗性基因不同。其中，所述PB转座酶识别序列PBL和PBR分别位于转座子的两端；PB转座酶识别序列PBL与PBR之间依次为原核生物抗性基因、复制起始位点序列、SB转座酶识别序列 SBL、剪接受体、报告基因与真核生物抗性基因的融合基因、SV40的多聚腺苷酸信号序列和 SB转座酶识别序列SBR。本发明所述转座载体包含PB转座酶识别序列PBL和PBR和SB转座酶识别序列SBL 与SBR，融合了 PB和SB两种DNA转座子的特性，兼具了 PB的高转座活性和SB近距离转座偏好性，保证转座载体能够在PB转座酶和SB转座酶条件下转座。其中，所述PB转座酶识别序列PBL具有SEQ ID NO :1所示核苷酸序列，所述PB转座酶识别序列PBR具有SEQ ID NO :2所示核苷酸序列，所述SB转座酶识别序列SBL具有SEQ ID NO :3所示核苷酸序列，所述SB转座酶识别序列SBR具有SEQ ID NO 4所示核苷酸序列。复制起始序列为原核生物基因质粒的复制起始位点，是四个高度保守的19bp组成的正向重复序列，本发明所述转座载体中包含复制起始序列，用于功能载体的原核生物内的扩增。其中，所述复制起始序列具有SEQ IDNO :5所示核苷酸序列。抗性基因可赋予宿主细胞对某些物质的抗性，直接用于选择转化子。本发明所述原核生物抗性基因用于转化子的筛选，可以为本领域技术人员熟知的任意一种抗性基因， 所述抗性基因可以为抗生素抗性基因、重金属抗性基因或代谢抗性基因，其中，以抗生素抗性基因使用最广泛。因此，本发明所述原核生物抗性基因。优选为抗生素抗性基因。抗生素抗性基因常常赋予宿主细胞对抗生素产生抗性，而抗生素往往对宿主细胞是致死的。抗生素抗性基因包括原核生物中的氨苄青霉素抗性基因(Ampr)、四环素抗性基因(Tcr)、氯霉素抗性基因(Cmr)、卡那霉素抗性基因(Kanr)等。在具体实施方式
中，所述原核生物抗性基因为具有SEQ ID NO :6所示核苷酸序列的氨苄青霉素抗性基因。在一些实施例中，氨苄青霉素抗性基因也可为其他抗性基因如氯霉素抗性基因所代替。在一些实施例中，氨苄青霉素抗性基因也可为其他具有可筛选特点的基因片段所代替，如铜抗性基因 (Cur)，胸苷激酶基因(TK)。本发明所述转座载体中还整合了包括剪接受体、报告基因与抗性基因的融合基因和SV40的多聚腺苷酸信号序列的基因捕获框，可以实现在高效转座，并且在转座过程中插入基因内部，实现基因的插入突变。本发明所述与报告基因融合的真核生物抗性基因可用于插入突变的筛选和插入基因启动子驱动报告基因的表达，保证载体插入宿主基因内部的细胞克隆在G418存在下被筛选保留，可以为本领域技术人员熟知的任意一种真核生物抗性基因，如潮霉素抗性基因(Hygr)、新霉素抗性基因(Neor)等。在具体实施方式
中，本发明所述与报告基因融合的真核生物抗性基因为新霉素抗性基因。在一些实施例中，新霉素抗性基因也可为潮霉素抗性基因所代替。报告基因(importer gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达，筛选得到转化体。报告基因已被广泛应用于动、植物基因表达调控的研究。目前在动物基因工程研究领域，常用的报告基因有半乳糖苷酶基因(LacZ)、氯霉素乙酰转移酶基因(cat)、二氢叶酸还原酶基因、荧光酶基因等。在具体实施方式
中，本发明所述报告基因为所述半乳糖苷酶基因，半乳糖苷酶基因与新霉素抗性基因融合得到具有SEQ ID NO :7所示核苷酸序列的β-geo基因，表达β-半乳糖苷酶基因与新霉素抗性基因的融合蛋白，同时具有两种蛋白质的特性，可用G418进行筛选，也可用X-gal染色鉴定阳性克隆。剪接受体(splice acc印tor，SA)，是指RNA剪接过程中，在切断和重接位点处内含子3'端的剪接位点序列。在具体实施方式
中，本发明所述剪接受体具有SEQ ID N0:8所示核苷酸序列。多聚腺苷酸加尾序列(polyA，pA)，通常位于mRNA上的150-200个腺苷酸残基，又称为特殊的尾巴结构。在真核生物中，多聚腺苷酸化是一种机制，令mRNA分子于它们的3' 端中断。多聚腺苷酸尾(或聚A尾)保护mRNA，免受核酸外切酶攻击，并且对转录终结、将 mRNA从细胞核输出及进行翻译都十分重要。在基因捕获过程中，当报告基因整合到内源性基因内含子，经过mRNA前体的剪接，报告基因可以在活性启动子作用下表达，通过协同多聚腺苷酸加尾序列，诱捕基因表达终止。在具体实施方式
中，所述SV40的多聚腺苷酸加尾序列具有SEQ ID NO 9所示核苷酸序列。本发明所述转座载体还包括两个Cre-IoxP组件的Ioxp位点序列和两个Flp-Frt 组件的Frt位点序列，用于PB进行一次转座和SB 二次转座后，在Cre和Flp重组酶作用下， 邻近转座位点间大片段DNA序列的条件性敲除，以实现转座后近距离DNA片段的条件性敲除研究。其中，所述第一 Ioxp位点序列和第一 Frt位点序列位于复制起始位点序列与SBL 之间，且第一 Ioxp位点序列位于第一 Frt位点序列的上游；所述第二 Ioxp位点位于SBL与基因捕获框之间；所述第二 Frt位点序列位于基因捕获框与SB转座酶识别序列SBR之间， 且第二 Frt位点序列与第一 Frt位点序列反向互补。LoxP (locus of X-over Pl)位点序列来源于Pl噬菌体，是有两个13bp反向重复序列和中间间隔的8bp序列共同组成，8bp的间隔序列同时也确定了 LoxP的方向。Cre重组酶在催化DNA链交换过程中与DNA共价结合，13bp的反向重复序列是Cre重组酶的结合域。Cre重组酶能介导两个LoxP位点(序列)之间的特异性重组，使LoxP位点间的基因序列被删除或重组。在具体实施方式
中，本发明所述第一 LoxP位点与第二 Ioxp位点序列方向相同，具有SEQ IDNO 10所示核苷酸序列，Cre重组酶能有效切除两个LoxP位点间的序列，导致两个Ioxp位点间的序列缺失。Frt (Flp recognition target)位点序列与IoxP位点相似，由两个长度为13bp的反向重复序列和一个长度为8bp的核心序列构成。与Cre-LoxP重组酶系统相似。在具体实施方式
中，本发明所述Frt位点具有SEQ ID NO 11所示核苷酸序列，但第一 Frt位点与第二 Frt位点序列反向互补，用以实现二次转座DNA序列的邻近倒置插入时，Flp重组酶重组酶能够识别两个Frt位点间的序列，导致两个Frt位点间的序列缺失。在具体实施实施方案中，本发明提供了具有SEQ ID NO :12所示所示核苷酸序列的转座载体。本发明所述转座载体融合了 PB和SB两种DNA转座子的特性，能够在PB转座酶和 SB转座酶条件下转座，同时整合了包括剪接受体、报告基因与抗性基因的融合基因和SV40 的多聚腺苷酸加尾序列的基因捕获阅读框，用以在转座过程中实现基因的插入突变，可广泛应用于小鼠、大鼠、猪等哺乳动物的基因突变模型的建立及基因组内大规模基因功能筛选。本发明所述转座载体还包括Ioxp位点和Frt位点序列，可以实现转座后近距离DNA片段的条件性敲除，应用于小鼠、大鼠、猪等哺乳动物的大片段DNA序列的条件性缺失模型建立。目前利用基因工程技术获得DNA片段的方法有很多种，包括利用限制性内切酶酶切具有目的分子的载体或以具有目的分子的载体为模板PCR扩增，此外还有化学合成方法。本发明还提供了一种转座载体的制备方法，包括步骤1、用连接酶将PB转座酶识别序列PBL和PBR、原核生物抗性基因、复制起始位点序列、SB转座酶识别序列SBL和SBR、两个Ioxp位点序列、两个Frt位点序列、剪接受体、报告基因与真核生物抗性基因的融合基因和SV40的多聚腺苷酸加尾序列连接，步骤2 转化宿主细胞，用原核生物抗性基因对应的抗生素筛选，限制性内切酶酶切验证阳性克隆；其中，所述PBL和PBR分别位于转座子的两端；PBL与PBR之间依次为原核生物抗性基因、复制起始位点序列、SBL、剪接受体、报告基因与真核生物抗性基因的融合基因、 SV40的多聚腺苷酸加尾序列和SBR ；所述第一 Ioxp位点序列和第一 Frt位点序列位于复制起始位点序列与SBL之间，且第一 Ioxp位点序列位于第一 Frt位点序列的上游；所述第二 Ioxp位点位于SBL与SV40的多聚腺苷酸加尾序列之间；所述第二 Frt位点序列位于SV40 的多聚腺苷酸加尾与SBR之间，且第二 Frt位点序列与第一 Frt位点序列反向互补。在具体实施方案中，本发明所述制备方法，步骤1为用连接酶将具有SEQ ID NO 13 16所示核苷酸序列的Biol-Bglll片段、BglII-ClaI片段、Cla I-SphI片段和Sph I-Xho I片段连接，其中所述 ιοΙ-BglII片段包括PB转座酶识别序列PBL和PBR、原核生物抗性基因、复制起始位点序列、SB转座酶识别序列SBL和SBR、两个Ioxp位点序列、两个 Frt位点序列和剪接受体，所述BglII-ClaI片段包括报告基因IacZ前部分序列，所述Cla I-SphI片段包括报告基因IacZ序列，所述SphI-B10 I片段包括报告基因IacZ与新霉素抗性基因的融合基因的末端和SV40的多聚腺苷酸加尾序列。在具体实施方案中，本发明所述制备具有SEQ ID NO :13所示核苷酸序列的 XhoI-BglII片段的方法为先化学合成包括PB转座酶识别序列PBL和PBR、原核生物抗性基因、复制起始位点序列、SB转座酶识别序列SBL和SBR、两个Ioxp位点序列和两个Frt位点序列的DNA片段，测序验证后与以HindIII/BglII限制性内切酶双酶切自载体EGFP β geo 的剪切受体片段连接。在一个实施方案中，本发明所述制备具有SEQ ID NO :14所示核苷酸序列的BglII-ClaI片段的方法为以pU21质粒为模板，用具有SEQ ID NO :17所示的核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO :18所示的核苷酸序列的下游引物扩增。在一个实施方案中，本发明所述制备具有SEQ ID NO 15所示核苷酸序列的Cla I-SphI片段的方法为提取pU21质粒，用Cla I/Sph I限制性内切酶酶切，回收大小为 2800bp 片段。在一个实施方案中，本发明所述制备具有SEQ ID NO :16所示核苷酸序列的 SphI-Xho I片段的方法为以pU21质粒为模板，用具有SEQ ID NO :19所示的核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO :20所示的核苷酸序列的下游引物扩增。本发明所述制备方法步骤2所述宿主细胞可以为本领域人员技术人员熟知的任意一种宿主细胞，如大肠杆菌系列菌株，包括DH5 α、W3110、HBlOU JM83、JMlOl和JM109 等生长迅速，培养简单，重组子稳定的菌株。在一个优选实施方案中，宿主细胞为Eco. Ii JM109菌株。本发明所述制备方法步骤2所述限制性内切酶酶切验证阳性克隆为分别通过限制性内切酶 I、BglII/Cla I,Hind ΙΙΙ/Xho I,Hind ΙΙΙ/BglII 和 SphI 酶切验证。其中，所述限制性内切酶切后的理论大小分别为Sal I酶切产生9398bp片段；Bglll/Clal酶切产生829bp和8569bp两个片段；Hind ΙΙΙ/Xho I酶切产生3303bp和6095bp两个片段； Hind ΙΙΙ/BglII酶切产生1721bp和7677bp两个片段；SphI酶切产生1503bp和7895bp两个片段。
图1示实施例1 4中各片段酶切后的琼脂糖凝胶电泳图，泳道1为DL15000DNA 分子量标志物，泳道2为实施例1酶切后的片段，泳道3为实施例2酶切后的片段，泳道4 为实施例3酶切后的片段，泳道5为实施例4酶切后的片段，泳道6为DL2000DNA分子量标志物；图2示实施例5不同的限制性内切酶酶切后的琼脂糖凝胶电泳图，泳道1为 DL15000DNA分子量标志物，泳道2为对照，泳道3为限制性内切酶Ml I酶切后的片段，泳道4为限制性内切酶Bgl II/Cla I酶切后的片段，泳道5为限制性内切酶HindIIlAho I 酶切后的片段，泳道6为限制性内切酶Hindlll/Bglll酶切后的片段，泳道7为限制性内切酶SphI酶切后的片段，泳道8为DL2000DNA分子量标志物；图3示本发明所述转座载体的质粒谱图；图4示实施例6本发明所述转座载体分别与PB和SB两种转座酶共转染H印G2细胞后，捕获内源基因驱动报告基因表达的统计结果图，其中横坐标为实验组别，纵坐标为蓝色斑点数量。
具体实施例方式本发明实施例公开了一种转座载体及其构建方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。实施例1 本发明所述转座载体中B10I-Bgl II片段的制备由中美泰和生物技术有限公司人工合成不含剪切受体片段的Hind III-XhoI片段，片段大小3327bp，包括PB和SB的转座酶识别序列，复制起始位点，氨苄青霉素抗性基因，两个IoxP位点序列和两个Frt位点序列，并测序验证。提取EGFP β geo质粒，用HindIII和Β ο I限制性内切酶双酶切EGFP β geo质粒和化学合成的片段，反应体系如下A管中加入以下成分
EGFPPgeo质粒2飓
Hindlll(\5UI\il,)IpL
Xho I (15U^L)
IOxKbuffer2μΙ
加入灭菌蒸馏水补足体系总量至20汕。B管中加入以下成分
化学合成片段2飓
Η η ΙΙΙ(\5υ/μ^IpL
Sg/II(15U^L)IpL
IOxKbuffer2μΙ
加入灭菌蒸馏水补足体系总量至20汕。将Α，B两管放入37°C恒温水浴池进行酶切消化，然后将酶切产物进行凝胶电泳并通过胶回收试剂盒OiIAGEN)进行DNA凝胶回收，回收长度为6905bp的剪切受体片段和长度为3303bp的化学合成片段。回收片段在T4DNA连接酶(购自Takara公司)的作用下 4°C连接过夜(8 12h)。连接反应体系
酶切后的A片段
酶切后的化学合成B片段IpL
T4DNA连接酶IpL
连接酶buffer2μL
加入灭菌蒸馏水补足体系总量至20汕。将连接产物转化入Eco. Ii JM109感受态细胞(Takara公司)，经含有氨苄抗生素的固体培养板筛选14-16小时获得的阳性克隆，提质粒鉴定(小提质粒试剂盒，Axgen公司)，Hind III-XhoI酶切鉴定(具体过程同上)，获得6905bp和3303bp片段的为正确的克隆，正确的克隆通过Bgl IIAho I双酶切获得50Mbp的Bi0I-BglII片段，结果见图1。
实施例2 本发明所述转座载体中Bgl II-ClaI片段的制备以pU21质粒为模板，用具有SEQ ID No :17所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID No :18所示核苷酸序列的下游引物，进行PCR扩增，得到BglII-ClaI片段。PCR扩增反应体系
Taq DNA polymerase0.2μLIOxbuffer (Mg2+ free)2\\LdNTP mix (IOmM)0单Mg2+IpL50μΜ上游引物0.2μL50μΜ上游引物0.2μL质粒 pU21 (5 lOng/μΙ)IpL加入灭菌蒸馏水补足体系总量至20pL。
权利要求
1.一种转座载体，其特征在于，包含以下元件a)PB转座酶识别序列PBL和PBR ；b)原核生物抗性基因；c)复制起始位点序列；d)SB转座酶识别序列SBL和SBR ；e)基因捕获框，所述基因捕获框包括剪接受体、报告基因与真核生物抗性基因的融合基因和SV40的多聚腺苷酸加尾序列；所述与报告基因融合的抗性基因与所述转座载体所含抗性基因不同；其中，所述PB转座酶识别序列PBL和PBR分别位于转座子的两端；PB转座酶识别序列 PBL与PBR之间依次为原核生物抗性基因、复制起始位点序列、SB转座酶识别序列SBL、剪接受体、报告基因与真核生物抗性基因的融合基因、SV40的多聚腺苷酸加尾序列和SB转座酶识别序列SBR。
2.根据权利要求1所述转座载体，其特征在于，所述原核生物抗性基因抗性基因为氨苄青霉素抗性基因。
3.根据权利要求1所述转座载体，其特征在于，所述与报告基因融合的真核生物抗性基因为新霉素抗性基因。
4.根据权利要求1所述转座载体，其特征在于，所述报告基因为半乳糖苷酶基因。
5.根据权利要求1所述转座载体，其特征在于，所述SV40的多聚腺苷酸加尾序列具有 SEQ ID NO :9所示核苷酸序列。
6.根据权利要求1 5所述任意一项转座载体，其特征在于，还包括两个Ioxp位点序列和两个Frt位点序列，其中，所述第一 Ioxp位点序列和第一 Frt位点序列位于复制起始位点序列与SBL之间，且第一 Ioxp位点序列位于第一 Frt位点序列的上游；所述第二 Ioxp 位点位于SBL与基因捕获框之间；所述第二 Frt位点序列位于基因捕获框与SB转座酶识别序列SBR之间，且第二 Frt位点序列与第一 Frt位点序列反向互补。
7.根据权利要求6所述转座载体，其特征在于，具有SEQID NO: 12所示核苷酸序列。
8.一种转座载体的制备方法，其特征在于，包括步骤1、用连接酶将PB转座酶识别序列PBL和PBR、原核生物抗性基因、复制起始位点序列、SB转座酶识别序列SBL和SBR、两个Ioxp位点序列、两个Frt位点序列、剪接受体、报告基因与真核生物抗性基因的融合基因和SV40的多聚腺苷酸加尾序列连接，步骤2 转化宿主细胞，用原核生物抗性基因对应的抗生素筛选，限制性内切酶酶切验证阳性克隆；其中，所述PBL和PBR分别位于转座子的两端；PBL与PBR之间依次为原核生物抗性基因、复制起始位点序列、SBL、剪接受体、报告基因与真核生物抗性基因的融合基因、SV40的多聚腺苷酸加尾序列和SBR ；所述第一 Ioxp位点序列和第一 Frt位点序列位于复制起始位点序列与SBL之间，且第一 Ioxp位点序列位于第一 Frt位点序列的上游；所述第二 Ioxp位点位于SBL与SV40的多聚腺苷酸加尾序列之间；所述第二 Frt位点序列位于SV40的多聚腺苷酸加尾与SBR之间，且第二 Frt位点序列与第一 Frt位点序列反向互补。
9.根据权利要求8所述制备方法，其特征在于，步骤1为用连接酶将具有SEQID NO 13 16所示核苷酸序列的B10I-BglII片段、BglII-ClaI片段、Cla I-Sph I片段和SphI-Xho I片段连接，其中所述 ιοΙ-BglII片段包括PB转座酶识别序列PBL和PBR、原核生物抗性基因、复制起始位点序列、SB转座酶识别序列SBL和SBR、两个Ioxp位点序列、两个 Frt位点序列和剪接受体，所述Bgl II-ClaI片段包括报告基因β-半乳糖苷酶基因前部分序列，所述Cla I-Sph I片段包括报告基因β-半乳糖苷酶基因序列，所述Sph I-Xho I片段包括报告基因β -半乳糖苷酶基因与新霉素抗性基因的融合基因的末端和SV40的多聚腺苷酸加尾序列。
10.根据权利要求9所述制备方法，其特征在于，步骤2所述宿主细胞为Eco.Ii JM109菌株。
11.根据权利要求9所述制备方法，其特征在于，步骤2所述限制性内切酶酶切验证阳性克隆为分别通过限制性内切酶Ml I、Bgl ΙΙ/Cla I、Hind ΙΙΙ/Xho I、HindIII/Bgl II 和Sph I酶切验证。
全文摘要
本发明涉及生物技术领域，公开了一种转座载体及其制备方法。本发明所述转座载体融合了PB和SB两种DNA转座子的特性，能够在PB转座酶和SB转座酶条件下转座，同时整合了包括剪接受体、报告基因与真核生物抗性基因的融合基因和SV40的多聚腺苷酸加尾序列的基因捕获阅读框，用以在转座过程中实现基因的插入突变，可广泛应用于小鼠、大鼠、猪等哺乳动物的基因突变模型的建立及基因组内大规模基因功能筛选。本发明所述转座载体还包括loxp位点和Frt位点序列，可以实现转座后近距离DNA片段的条件性敲除，应用于小鼠、大鼠、猪等哺乳动物的大片段DNA序列的条件性缺失模型建立。
文档编号C12N15/64GK102286514SQ20111020335
公开日2011年12月21日 申请日期2011年7月20日 优先权日2011年7月20日
发明者全雄志, 张连峰, 王贵利, 马元武 申请人:中国医学科学院医学实验动物研究所