专利名称：利用游动放线菌制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法
技术领域：
本发明涉及ー种利用生物催化方法制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，特别涉及一种游动放线菌(Actinoplanes sp.) ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烧甲酸的方法。
(ニ)
背景技术：
反式-4-氨甲基-环己烷甲酸(I)又称氨甲环酸、止血环酸，是ー种作用于纤维蛋白溶解酶系统的止血药，临床上主要用于急性或慢性、局限性或全身纤维蛋白溶解亢进所致的各种出血。也能够竞争性地抑制酪氨酸与酪氨酸酶结合，减少黑色素的生成，而被用于黄褐斑的治疗。添加于化妆品中能阻断消弭紫外线照射导致的黑色素恶化的进程。加入牙膏可以防止牙龈出血。目前反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的规模化生产均采用化学法:1.环己烯法合成反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的エ艺路线(式(I))
权利要求
1.ー种利用游动放线菌ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，其特征在所述的方法以游动放线菌(Actinoplanes sp.) ZJB-08196经发酵培养后获得的湿菌体为催化剂，以顺反式-4-氨甲基-环己烷甲酸为底物，在pH 6.5~8.5的水或缓冲液构成的转化体系中进行转化反应，反应完全后，将转化液离心，取上清液即获得含反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的反应液，将反应液分离纯化，获得所述反式-4-氨甲基-环己烷甲酸。
2.如权利要求1所述利用游动放线菌ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，其特征在所述转化体系中底物初始浓度为0.2~20 g/L。
3.如权利要求1所述利用游动放线菌制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，其特征在所述转化体系中湿菌体添加量为10~200 g/L，所述湿菌体的含水量为80~90%。
4.如权利要求1所述利用游动放线菌ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，其特征在所述转化反应是在20 40°C下转化反应2 48小吋，反应完全后，将转化液离心，取上清液即获得含反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的反应液。
5.如权利要求1所述利用游动放线菌ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，其特征在所述反应液分离纯化的方法为:将反应液加入活性炭，煮沸脱色，过滤，滤液浓缩，取浓缩液加入无水こ醇至こ醇体积终浓度95%析晶，冷却、过滤，晶体用无水こ醇洗涤、过滤，干燥，获得所述反式-4-氨甲基-环己烷甲酸。
6.如权利要求1所述利用游动放线菌ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，其特征在所述催化剂按如下步骤制备: (1)斜面菌种培养:将游动放线菌ZJB-08196接种于斜面培养基，于20~37℃下培养至菌落长出，获得斜面活化菌种；所述斜面培养基终浓度组成为:蔗糖5 30g/L，蛋白胨.1 5 g/L，酪氨酸 0.5 2 g/L, K2HPO4*3H20 0.5 2 g/L, KCl 0.5 2 g/L, MgSO4*7H20 0.5 2 g/L，FeSO4*7H20 0.1 1 g/L，琼脂 15 20 g/L，溶剂为水，初始 pH 6.0 7.5 ； (2)种子培养:从斜面活化菌种挑取一接种环接种于种子培养基，在摇床转速15(T250rpm、20~37℃条件下培养48~60小时，得到种子液；所述的种子培养基的终浓度组成为:玉米淀粉5 20 g/L，黄豆饼粉20 60 g/L，甘油5 20 g/L，碳酸钙1 5 g/L, CaCl2 1 10 g/L,K2HPO4*3H20 0.5 2 g/L，溶剂为水，初始 pH 6.0 7.5 ； (3)发酵培养:将种子液按照体积比广15%接入发酵培养基中，在20~37℃、摇床转速.150 250 rpm条件下培养1 7天,取发酵液于4000 12000 rpm离心,弃上清液,收集湿菌体；所述发酵培养基的终浓度组成为:麦芽糖10 120 g/L，葡萄糖10 50 g/L，黄豆饼粉5 25 g/L，碳酸钙2 10g/L，甘油I 10 g/L，谷氨酸钠2 10 g/L，溶剂为水，初始pH 6.0 7.5。
7.如权利要求1所述利用游动放线菌ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，其特征在所述方法按如下步骤进行:将游动放线菌ZJB-08196经发酵培养后获得的湿菌体和顺反式-4-氨甲基-环己烷甲酸混合，用pH 7.0~8.2水或缓冲液构成的转化体系，在25 37°C下转化反应2~36h，反应完全后，将转化液离心，取上清液即获得含反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的反应液，将反应液加入活性炭，煮沸脱色，过滤，滤液浓缩，取浓缩液加入无水こ醇至こ醇体积终浓度为95%析晶，冷却至0°C、过滤，晶体用无水こ醇洗涤、过滤，干燥，获得所述反式-4-氨甲基-环己烷甲酸；所述转化体系中底物初始浓度为.0.2~20 g/L，所述转化体系中湿菌体添加量为10~200 g/L，所述湿菌体的含水量为80~90%。
全文摘要
本发明公开了一种利用游动放线菌ZJB-08196制备反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的方法，所述的方法以游动放线菌ZJB-08196经发酵培养后获得的湿菌体为催化剂，以顺反式-4-氨甲基-环己烷甲酸为底物，在pH为6.5~8.5的水或缓冲液构成的转化体系中进行转化反应，反应完全后，将转化液离心，取上清液即获得含反式-4-氨甲基-环己烷甲酸的反应液，将反应液分离纯化，获得所述反式-4-氨甲基-环己烷甲酸；本发明合成反应条件温和，环境友好、操作流程简单，具有良好的应用前景。
文档编号C12P41/00GK103114122SQ20121059372
公开日2013年5月22日 申请日期2012年12月31日 优先权日2012年12月31日
发明者郑裕国, 孙丽慧, 王远山, 王元平 申请人:浙江工业大学, 扬州天和药业有限公司