一种柑橘生物复合防霉保鲜剂及制备和使用方法
【专利摘要】本发明的柑橘生物复合防霉保鲜剂由下列质量、体积份原料组成：冰醋酸1份，壳聚糖2-3份，解淀粉芽孢杆菌HRH.317发酵液1.5-2份，吐温-801.5-2份，NaCl0.3-0.5份，蒸馏水93份。该保鲜剂的制备方法是：首先在蒸馏水中加入冰醋酸制成醋酸溶液；然后在醋酸溶液中分别加入壳聚糖、解淀粉芽孢杆菌HRH317发酵液、吐温-80和NaCl，搅拌均匀即可。该保鲜剂的使用方法是：将无损伤、无病害的柑橘用自来水清洗后浸入0.1%的次氯酸钠溶液中消毒1-2min，取出后用无菌水清洗挂果的次氯酸钠并晾干，然后将柑橘完全浸入该保鲜剂浸泡30-40秒钟，捞出完全晾干后用PE保鲜袋分装，每袋25-40个果实，放入塑料筐内置于室温18-23℃和室内相对湿度70%-80%的条件下或置于贮藏温度4-6℃、相对湿度70%-80%的条件下贮藏。
【专利说明】一种柑橘生物复合防霉保鲜剂及制备和使用方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及柑橘保鲜【技术领域】，具体涉及到采用生物防霉保鲜剂对柑橘进行保鲜及防霉保鲜剂的制备和使用方法。
【背景技术】
[0002]果蔬是人类的主要食物之一，但是果蔬受区域性和季节性的影响，容易发生腐败变质。果蔬的腐败变质会造成不必要的金钱损失，并且造成果蔬品质的降低，其中食源性病菌可产生大量的毒素，使人们引发消化道疾病、免疫疾病和炎症等疾病。传统的化学防霉保鲜液有毒性大，容易引起人的过敏和中毒，而新型的生物保鲜液仅是蛋白、多肽、某些脂质和有机酸等，对人体没有毒副作用或者是毒副作用非常小。生物保鲜液是从生物中直接分离提取的一类具有抑菌作用的物质，根据来源可以分为三种类型，即动物源天然保鲜液、植物源天然保鲜液和微生物源天然保鲜液。因此，新型安全有效的果蔬生物防霉保鲜液的研发迫在眉睫。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是针对现有技术对生物保鲜液研究与开发的不足，提供一种柑橘生物复合防霉保鲜剂及制备和使用方法。
[0004]本发明的柑橘生物复合防霉保鲜剂由下列质量、体积份原料组成:冰醋酸I份，壳聚糖2-3份,解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloli quefaci ens) HRH.317发酵液1.5-2份,吐温-80 1.5-2 份，NaCl 0.3-0.5 份，蒸馏水 93 份。
[0005]本发明的柑橘生物复合防霉保鲜剂的制备方法包括如下步骤:
(1)在93份蒸馏水中加入I份(V/V)的冰醋酸制成醋酸溶液；
(2)在(I)制备的醋酸溶液中分别加入2-3份(W/V)的壳聚糖、1.5-2份(V/V)的解淀粉芽孢杆菌HRH317发酵液、1.5-2份(W/V)的吐温-80和0.3-0.5份(W/V)的NaCl，搅拌均匀即可。
[0006]本发明的柑橘生物复合防霉保鲜剂为无色或略带浅黄色透明的液体。
[0007]所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) HRH.317菌株已由山西农业大学在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏并申请专利，保藏号为CGMCC JL/0136,专利申请号为 201310187052.X。
[0008]所述的解淀粉芽孢杆菌HRH.317发酵液的制备方法包括如下步骤:
(1)制备液体培养基在100份蒸馏水中加入0.5份牛肉膏、I份蛋白胨和0.5份NaCl，调节pH至7.2后，121°C、20分钟灭菌，制成培养液备用；
(2)解淀粉芽孢杆菌HRH317的活化在无菌条件下，将解淀粉芽孢杆菌HRH.317以接种环接种于(I)制备的培养液中，在37°C条件下，转速为150 r/min的恒温摇床中振荡培养24h，作为种子液备用；
(3)将(2)活化好的种子液，以1%(V/V)接种量接入⑴制备的液体培养基中，在转速为150 r/min的恒温摇床中振荡培养24 h，获得解淀粉芽孢杆菌HRH.317基础发酵液；
(4)将(3)制备的基础发酵液接入⑴制备的液体培养基中，在36-38°C、160 r/min条件下，培养20-24 h，扩大培养得到发酵液，发酵液活菌数为IO7 — 108cfu/mL。
[0009]解淀粉芽孢杆菌HRH.317发酵液经过实验动物急毒实验证明是安全的。
[0010]本发明的柑橘生物复合防霉保鲜剂的使用方法包括如下步骤:
(1)将无干枯、无损伤、无病害的柑橘，用自来水清洗后浸入0.1%的次氯酸钠溶液中消毒1-2 min，取出后用无菌水清洗挂果的次氯酸钠，并晾干；
(2)将晾干后的柑橘完全浸入本发明的生物复合防霉保鲜剂，浸泡30-40秒钟，捞出完全晾干后用厚度为0.2-0.4 mm的PE (聚乙烯)保鲜袋(事先在袋上每间隔15 cm处打孔，孔直径为I cm)分装，每袋25-40个果实，留1/4袋口空间，放入塑料筐内置于室温18-23°C和室内相对湿度70%-80%的条件下或置于贮藏温度4-6°C、相对湿度70%-80%的条件下贮藏。
[0011]本发明的柑橘生物复合防霉保鲜剂的防霉保鲜效果试验 I试验方法
1.1试验材料:外皮完好的柑橘400个。
[0012]1.2处理方法:A用本发明的生物复合防霉保鲜剂处理外皮完好的柑橘，处理方法同上述使用方法对照I为外皮完好的柑橘；C用本发明的生物复合防霉保鲜剂处理人工刺破外皮完好的柑橘外皮接种青霉孢子，处理方法同上述使用方法；D对照2为人工刺破外皮完好的柑橘外皮接种青霉孢子；处理量各100个果实。
[0013]由于目前对于在柑橘上是否可以使用化学防霉剂还没有统一的定论，同时销售商对市场上销售的柑橘使用了化学防霉剂都采取回避或不表态，因此，在不知道具体的化学防腐霉剂种类及使用浓度的前提下很难确定出一个合适的化学防霉剂对照。
[0014]1.3贮藏条件及时间:A贮藏条件为温度4_6°C、相对湿度70%_80%，时间60天；B贮藏条件为18-23°C、相对湿度70%-80%，时间20天；C贮藏条件为温度18-21 °C、相对湿度70%-80%，时间 15 天。
[0015]1.4:柑橘的霉变率，过氧化物酶含量，丙二醛含量，失重率，可溶性固形物含量，可滴定酸含量，抗坏血酸含量。
[0016]2试验结果
2.1贮藏条件为温度4-6°C、相对湿度考察指标70%-80%，贮藏60天时，经本发明防霉保鲜剂处理柑橘的霉变率为9%，而对照I的柑橘霉变率为28%，处理比对照I使柑橘霉变率降低了 19个百分点；贮藏条件为18-23°C、相对湿度70%-80%，贮藏20天时，经本发明防霉保鲜剂处理柑橘的霉变率为14%，而对照I的柑橘霉变率为40%，处理比对照I使柑橘霉变率降低了 26个百分点。
[0017]2.2贮藏条件为温度18-21 °C、相对湿度70%_80%，时间15天时，C处理的柑橘霉变率为35%，而对照2的柑橘霉变率为100%，处理比对照2使柑橘霉变率降低了 65个百分点。并且处理C柑橘的过氧化物酶含量12.2 Δ OD470/g.Fw.min,丙二醛含量21.5 mmol/g Fw,失重率2.2%，可溶性固形物含量9.6%，可滴定酸含量0.61%，抗坏血酸含量13.7 mg/100g ;而对照2柑橘的过氧化物酶含量7.7 Δ OD470/g.Fw.min,丙二醛含量25.4mmol/g Fw,失重率
4.1%，可溶性固形物含量8.8%，可滴定酸含量0.53%，抗坏血酸含量11.6 mg/100g。其中，高含量的过氧化物酶代表柑橘的高抗逆性，低含量的丙二醛代表柑橘腐败程度低，柑橘可贮藏更长的时间；低值的失重率，高值的可溶性固形物、可滴定酸抗、坏血酸含量代表柑橘更新鲜。
[0018]由此可见，本发明柑橘生物复合防霉保鲜剂的防霉保鲜具有极其显著的效果。
[0019]本发明的有益效果
上述试验结果表明，使用本发明柑橘生物复合防霉保鲜剂处理柑橘，可以显著降低柑橘在贮藏过程中的霉变率，同时还可以提高果实的过氧化物酶含量、可溶性固形物含量、可滴定酸含量和抗坏血酸含量，并可以降低丙二醛含量和失重率，增强果实的抗逆性，保持果实的鲜度，降低损耗，延长贮藏期。而且避免了化学防腐剂的危害，提高了食用的安全性。
【具体实施方式】
[0020]实施例1
采用下列质量、体积份原料制备本发明的柑橘生物复合防霉保鲜剂:冰醋酸I份，壳聚糖2份,解淀粉芽孢杆菌{Bacillus amyloli quefaci ens) HRH.317发酵液1.5份,吐温-801.5份，NaCl 0.3份，蒸馏水93份。
[0021]解淀粉芽孢杆菌HRH.317发酵液的制备方法是:
(1)制备液体培养基在100份蒸馏水中加入0.5份牛肉膏、I份蛋白胨和0.5份NaCl，调节pH至7.2后，121°C、20分钟灭菌，制成培养液；
(2)解淀粉芽孢杆菌HRH317的活化在无菌条件下，将解淀粉芽孢杆菌HRH.317以接种环接种于(I)制备的培养液中，在37°C条件下，转速为150 r/min的恒温摇床中振荡培养24h，作为种子液；
(3)将(2)活化好的种子液，以1%(V/V)接种量接入⑴制备的液体培养基中，在转速为150 r/min的恒温摇床中振荡培养24 h，获得解淀粉芽孢杆菌HRH.317基础发酵液；
(4)将(3)制备的基础发酵液接入⑴制备的液体培养基中，在36-38°C、160r/min条件下，培养20-24 h，扩大培养得到发酵液，发酵液活菌数可达到IO7 — 108cfu/mL。
[0022]柑橘生物复合防霉保鲜剂的制备方法是:在93份蒸馏水中加入I份(V/V)的冰醋酸制成醋酸溶液；在醋酸溶液中分别加入2份(W/V)的壳聚糖、1.5份(V/V)的解淀粉芽孢杆菌HRH317发酵液、1.5份(W/V)的吐温-80和0.3份(W/V)的NaCl，搅拌均匀即可。
[0023]柑橘生物复合防霉保鲜剂的使用方法包括如下步骤:
(1)将无干枯、无损伤、无病害的柑橘，用自来水清洗后浸入0.1%的次氯酸钠溶液中消毒1-2 min，取出后用无菌水清洗挂果的次氯酸钠，并晾干；
(2)将晾干后的柑橘完全浸入本发明的生物复合防霉保鲜剂，浸泡30-40秒钟，捞出完全晾干后用厚度为0.2-0.4 mm的PE(聚乙烯)保鲜袋(事先在袋上每间隔15 cm处打孔，孔直径为I cm)分装，每袋25-40个果实，留1/4袋口空间，放入塑料筐内置于室温18-23°C和室内相对湿度70%-80%的条件下或置于贮藏温度4-6°C、相对湿度70%-80%的条件下贮藏。
[0024]实施例2
采用下列质量、体积份原料制备本发明的柑橘生物复合防霉保鲜剂:冰醋酸I份，壳聚糖3份,解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloli quefaci ens) HRH.317发酵液2份,吐温-80 2份，NaCl 0.5份,蒸懼水93份。
[0025]解淀粉芽孢杆菌HRH.317发酵液的制备方法同实施例1。
[0026]柑橘生物复合防霉保鲜剂的制备方法是:在93份蒸馏水中加入I份(V/V)的冰醋酸制成醋酸溶液；在醋酸溶液中分别加入3份(W/V)的壳聚糖、2份(V/V)的解淀粉芽孢杆菌HRH317发酵液、2份(W/V)的吐温-80和0.5份(W/V)的NaCl，搅拌均匀即可。
[0027]柑橘生物复合防霉保鲜剂的使用方法同实施例1。
[0028]实施例3
采用下列质量、体积份原料制备本发明的柑橘生物复合防霉保鲜剂:冰醋酸I份，壳聚糖2.5份,解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloli quefaci ens) HRH.317发酵液1.8份，吐温-80 1.7份，NaCl 0.4份，蒸馏水93份。
[0029]解淀粉芽孢杆菌HRH.317发酵液的制备方法同实施例1。
[0030]柑橘生物复合防霉保鲜剂的制备方法是:在93份蒸馏水中加入I份(V/V)的冰醋酸制成醋酸溶液；在醋酸溶液中分别加入2.5份(W/V)的壳聚糖、1.8(V/V)的解淀粉芽孢杆菌HRH317发酵液、1.7份(W/V)的吐温-80和0.4份(W/V)的NaCl，搅拌均匀即可。
[0031]实施例4
采用下列质量、体积份原料制备本发明的柑橘生物复合防霉保鲜剂:冰醋酸I份，壳聚糖2份,解淀粉芽孢杆菌{Bacillus amyloli quefaci ens) HRH.317发酵液1.5份,吐温-80
1.5份，NaCl 0.3份，蒸馏水93份。
[0032]解淀粉芽孢杆菌HRH.317发酵液的制备方法同实施例1。
[0033]柑橘生物复合防霉保鲜剂的制备方法是:在93份蒸馏水中加入I份(V/V)的冰醋酸制成醋酸溶液；在醋酸溶液中分别加入2份(W/V)的壳聚糖、1.5份(V/V)的解淀粉芽孢杆菌HRH317发酵液、1.5份(W/V)的吐温-80和0.3份(W/V)的NaCl，搅拌均匀即可。
[0034]实施例5
采用下列质量、体积份原料制备本发明的柑橘生物复合防霉保鲜剂:冰醋酸I份，壳聚糖3份,解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloli quefaci ens) HRH.317发酵液2份,吐温-80 2份，NaCl 0.5份,蒸懼水93份。
[0035]解淀粉芽孢杆菌HRH.317发酵液的制备方法同实施例1。
[0036]柑橘生物复合防霉保鲜剂的制备方法是:在93份蒸馏水中加入I份(V/V)的冰醋酸制成醋酸溶液；在醋酸溶液中分别加入3份(W/V)的壳聚糖、2(V/V)的解淀粉芽孢杆菌HRH317发酵液、2份(W/V)的吐温-80和0.5份(W/V)的NaCl，搅拌均匀即可。
【权利要求】
1.柑橘生物复合防霉保鲜剂，其特征是由下列质量、体积份原料组成:冰醋酸I份，壳聚糖2-3份,解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) HRH.317发酵液1.5-2份,吐温-80 1.5-2 份，NaCl 0.3-0.5 份，蒸馏水 93 份； 柑橘生物复合防霉保鲜剂的制备方法包括如下步骤: (1)在93份蒸馏水中加入I份(V/V)的冰醋酸制成醋酸溶液； (2)在(I)制备的醋酸溶液中分别加入2-3份(W/V)的壳聚糖、1.5-2份(V/V)的解淀粉芽孢杆菌HRH317发酵液、1.5-2份(W/V)的吐温-80和0.3-0.5份(W/V)的NaCl，搅拌均匀即可。
2.根据权利要求1所述的柑橘生物复合防霉保鲜剂，其特征是所述的解淀粉芽孢杆菌HRH.317发酵液的制备方法包括如下步骤: (1)制备液体培养基在100份蒸馏水中加入0.5份牛肉膏、I份蛋白胨和0.5份NaCl，调节pH至7.2后，121°C、20分钟灭菌，制成培养液； (2)解淀粉芽孢杆菌HRH317的活化在无菌条件下，将解淀粉芽孢杆菌HRH.317以接种环接种于(I)制备的培养液中，在37°C条件下，转速为150 r/min的恒温摇床中振荡培养24h，作为种子液； (3)将(2)活化好的种子液，以1%(V/V)接种量接入⑴制备的液体培养基中，在转速为150 r/min的恒温摇床中振荡培养24 h，获得解淀粉芽孢杆菌HRH.317基础发酵液； (4)将(3)制备的基础发酵液接入⑴制备的液体培养基中，在36-38°C、160r/min条件下，培养20-24 h，扩大培养得到发酵液，发酵液活菌数为IO7 — 108cfu/mL。
3.根据权利要求1所述的柑橘生物复合防霉保鲜剂，其特征是柑橘生物复合防霉保鲜剂的使用方法是: (1)将无干枯、无损伤、无病害的柑橘，用自来水清洗后浸入0.1%的次氯酸钠溶液中消毒1-2 min，取出后用无菌水清洗挂果的次氯酸钠，并晾干； (2)将晾干后的柑橘完全浸入本发明的复合防霉保鲜剂，浸泡30-40秒钟，捞出完全晾干后用厚度为0.2-0.4 mm的PE保鲜袋分装，每袋25-40个果实，留1/4袋口空间，放入塑料筐内置于室温18-23°C和室内相对湿度70%-80%的条件下或置于贮藏温度4_6°C、相对湿度70%-80%的条件下贮藏。
【文档编号】A23B7/155GK103999930SQ201410242839
【公开日】2014年8月27日 申请日期:2014年6月4日 优先权日:2014年6月4日
【发明者】郝林, 杨宇, 郝利平 申请人:山西农业大学