一株解淀粉芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一株解淀粉芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用。解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）SIP0902菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC?NO：M2014323。本发明的解淀粉芽孢分离自凡纳滨对虾的肠道，是一种内源性菌株，该菌株对包括副溶血弧菌、鳗弧菌、溶藻弧菌等7种水产动物致病弧菌均具有较强的拮抗效果。该菌株制备的解淀粉芽孢杆菌粉剂，可明显增强凡纳滨对虾非特性免疫功能，提高对虾抗病原菌感染能力。
【专利说明】一株解淀粉芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物工程【技术领域】，具体涉及一株解淀粉芽孢杆菌及其在水产养殖 中的应用。
【背景技术】
[0002] 水产养殖在我国农业经济中具有举足轻重的地位。但随着集约化、规模化、工厂 化等高密度养殖模式的迅猛发展及整个养殖环境的持续恶化，水产养殖病害频繁爆发每年 给水产养殖造成了巨大的经济损失；抗生素的使用在早期的水产养殖生产中发挥了重要作 用，是人们防止水产动物病害的首选方案；但病原微生物耐药性的不断增强以及人们对抗 生素滥用、水产品药物残留等关系人类健康问题的关注，迫使抗生素以及一些化学药品的 在水产养殖的应用都将受到严格限制；因此开发环境友好及可持续发展战略的病害防控技 术及产品是水产养殖业亟需解决的问题。
[0003] 生物拮抗是自然界普遍存在的现象，某些种类的微生物通过竞争营养成分、产生 抑菌物质、降解信号分子等不同方式以达到抑制其他微生物生长的目的。微生物防控技术 就是基于这种自然法则，通过在饲料或养殖环境施加有益微生物控制肠道或水环境中致病 微生物的数量，维持养殖动物肠道健康及良好的养殖环境。作为抗生素的一种替代方案，益 生菌的使用在保证养殖动物生产性能及健康状况的同时，也能避免药物残留等潜在的水产 品安全风险，可以创造较好的经济和社会效益。
[0004] 现有的益生菌产品种类繁多，主要包括光合细菌、酵母菌、乳酸菌及芽孢杆菌。其 中芽孢杆菌属于芽孢杆菌科，广泛分布于养殖环境及动物肠道，因为具有较强的胞外酶分 泌能力以及容易生产、保存等优点，在水产养殖中具有非常广泛的应用。同时由于芽孢杆菌 种类繁多，不同种属甚至同一种属不同菌株之间，其特性(如胞外酶分泌能力、拮抗物质的 种类及效果)可能也千差万别。因此在众多的芽孢杆菌中筛选到具有广谱抗菌效果，来源于 对虾肠道、适用于水产养殖的独特菌株尤为重要。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一株解淀粉芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用。
[0006] 本发明所采取的技术方案是： 解淀粉芽抱杆菌(ifeciBiAs 已于 2014 年 7 月 4 日保藏 于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO :M 2014323。
[0007] 解淀粉芽孢杆菌SIP0902在制备抑菌制剂中的应用。
[0008] 解淀粉芽孢杆菌SIP0902在制备水产免疫增强剂中的应用。
[0009] 解淀粉芽孢杆菌SIP0902在制备养殖水体改善剂中的应用。
[0010] 一种抑菌制剂，其含有解淀粉芽孢杆菌SIP0902。
[0011] 一种水产免疫增强剂，其含有解淀粉芽孢杆菌SIP0902。
[0012] 一种水产养殖调水剂，其含有解淀粉芽孢杆菌SIP0902。
[0013] 一种解淀粉芽孢杆菌SIP0902菌粉的制备方法，包括如下步骤： (1) 将解淀粉芽孢杆菌SIP0902菌种划线于种子固体培养基中进行种子培养； (2) 种子培养结束后，从平板挑取一个单菌落接种于解淀粉芽孢杆菌发酵液中发酵培 养，培养温度控制在28-37°C ; (3) 当发酵液0D600值达到1. 5-2. 0时，停止发酵，取发酵液离心，弃上清液获得湿 菌泥，并在菌泥中加入冷冻干燥保护剂，混合均匀后进行冷冻干燥既得解淀粉芽孢杆菌 SIP0902 粉剂。
[0014] 步骤（1)所述种子固体培养基的组成为：葡萄糖1.0%，蛋白胨0.5%，酵母膏 1. 〇%，琼脂粉1. 5%，pH 7. 0, ％表示质量百分比。
[0015] 步骤（2)所述解淀粉芽孢杆菌发酵液的组成为：酵母膏0.1%，蛋白胨0.5%，淀 粉1. 0%，硫酸亚铁0. 001%，余量为水，％表示质量百分比。
[0016] 本发明的有益效果是： 本发明的解淀粉芽孢杆菌SIP0902分离自凡纳滨对虾的肠道，是一种内源性菌株，该 菌株对包括副溶血弧菌、鳗弧菌、溶藻弧菌等7种水产动物致病弧菌均具有较强的拮抗效 果。该菌株制备的解淀粉芽孢杆菌粉剂，可明显增强凡纳滨对虾非特性免疫功能，提高对虾 抗病原菌感染能力。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
[0018] 实施例1解淀粉芽孢杆菌SIP0902 解淀粉芽抱杆菌(ifeciBiAs SIP0902 已于 2014 年 7 月 4 日保藏 于中国典型培养物保藏中心（CHINA CENTER FOR TYPE CULTURE COLLECTION，CCTCC)，地址 为中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO :M 2014323。
[0019] 菌株信息如下： 1、来源：解淀粉芽孢杆菌SIP0902分离自健康凡纳滨对虾的肠道，经肌肉注射实验证 明对凡纳滨对虾无致病性。
[0020] 2、解淀粉芽孢杆菌SIP0902的菌种形态特征： 菌落特征：在TSA培养基表明，菌落扁平、圆形，边缘整齐，表面灰白色，干燥，不透明， 中间具有典型的白色圆圈。不能在TCBS培养基生长。
[0021] 细胞特征：革兰氏染色阳性，短杆状，无荚膜，可形成中生芽孢，大小0. 6-0. 7 μιηΧΟ. 8-1. 0 触。
[0022] 芽孢特征：中生，孢囊不膨大，方形。
[0023] 生理生化特征：见表1。
[0024] 表1解淀粉芽孢杆菌生理生化特征
【权利要求】
1. 解淀粉芽孢杆菌) SIP0902,保藏于中国典型培养物 保藏中心，保藏编号为CCTCC N0:M 2014323。
2. 权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌SIP0902在制备抑菌制剂中的应用。
3. 权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌SIP0902在制备水产免疫增强剂中的应用。
4. 权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌SIP0902在制备养殖水体改善剂中的应用。
5. -种抑菌制剂，其含有权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌SIP0902。
6. -种水产免疫增强剂，其含有权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌SIP0902。
7. -种水产养殖调水剂，其含有权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌SIP0902。
8. -种解淀粉芽孢杆菌SIP0902菌粉的制备方法，包括如下步骤： (1) 将解淀粉芽孢杆菌SIP0902菌种划线于种子固体培养基中进行种子培养； (2) 种子培养结束后，从平板挑取一个单菌落接种于解淀粉芽孢杆菌发酵液中发酵培 养，培养温度控制在28-37°C ; (3) 当发酵液0D600值达到1. 5-2. 0时，停止发酵，取发酵液离心，弃上清液获得湿 菌泥，并在菌泥中加入冷冻干燥保护剂，混合均匀后进行冷冻干燥既得解淀粉芽孢杆菌 SIP0902 粉剂。
9. 根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)所述种子固体培养基的组成 为：葡萄糖1. 〇%，蛋白胨0. 5%，酵母膏1. 0%，琼脂粉1. 5%，pH 7. 0, ％表示质量百分比。
10. 根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)所述解淀粉芽孢杆菌发酵 液的组成为：酵母膏0.1%，蛋白胨0.5%，淀粉1.0%，硫酸亚铁0.001%，余量为水，％表示 质量百分比。
【文档编号】C12N1/20GK104195067SQ201410319443
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年7月7日 优先权日:2014年7月7日
【发明者】王芸, 林黑着, 牛津, 王珺, 陈素文, 周传朋 申请人:中国水产科学研究院南海水产研究所