一种大豆dna的提取方法
【专利摘要】本发明属于生物【技术领域】，涉及一种大豆DNA的提取方法。一种大豆DNA的提取方法，主要步骤包括：首先将大豆粉碎成粉末状，与CTAB裂解缓冲液充分混合裂解，然后加入酚：氯仿：异戊醇抽提蛋白，离心后上清液加入氯仿：异戊醇进行抽提，离心后上清液加入等体积的异丙醇进行沉淀30min，离心弃上清，保留沉淀，再用无水乙醇溶液洗涤沉淀，离心后的沉淀干燥后用TE溶解，加入RNAse酶37℃孵育30min，所得溶液即为大豆DNA溶液，-20℃贮存备用。本发明的大豆DNA的提取方法的有益效果是：可以从大豆干种子中提取到高质量的适宜于PCR检测的基因组DNA，操作简单、耗时短、利于快速检测。
【专利说明】一种大豆DNA的提取方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，涉及一种大豆DNA的提取方法。
【背景技术】
[0002]大豆是我国乃至全世界重要的经济与粮食作物，是食用油和植物蛋白最丰富、最廉价的来源。为了提高大豆的产量，满足人们对大豆的需求量，科研人员采用基因工程与分子辅助育种方法，培育了一些高产、优质和抗逆以及适合农场机械化种植的转基因大豆品种。2010年国际农业生物技术应用服务组织(ISAAA)的数据显示:2010年转基因大豆仍然是最主要的转基因作物，种植面积约7330万公顷，占全球转基因作物种植面积的50%左右。中国从上世纪末开始进口耐除草剂转基因大豆，各种与转基因大豆相关的产品越来越多地进入市场。为保障广大消费者的知情权和选择权，满足国际贸易的需要，建立准确、快速、高效的转基因成分检测技术至关重要。核酸检测技术，尤其是常规聚合酶链式反应(PCR)和实时荧光PCR法，核酸检测的关键因素是提取到高质量的DNA。在做PCR试验时，首先面临的一个问题即是模板DNA的提取。对于大豆来说，一般实验室都是利用幼苗叶片为材料，经液氮研磨提取DNA。此过程必须要经过浸种催芽、幼苗培养、液氮研磨等过程，一般要用两周左右的时间才能进行DNA的提取并进一步开展实验。常规提取方法耗费时间长，步骤繁琐，并且提取的DNA纯度不高，质量差等。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是建立简单、高效、稳定的一种提取大豆DNA的方法。
[0004]为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是:一种大豆DNA的提取方法，包括以下步骤:(I)首先将大豆粉碎成粉末状，分别称取0.1g制备好的样品，加入到两支2ml离心管中；(2)加入2%CTAB裂解缓冲液，震荡混匀，65°C孵育30min。(3)加入酚:氯仿:异戊醇，震荡均勻，12000r/min离心20min。(4)吸取上清液,放入1.5ml离心管中，加入氯仿:异戊醇，震荡均匀，12000r/min离心15min。(5)吸取上清液，放入另一 1.5ml离心管中，力口入等体积的异丙醇，沉淀30min, 12000r/min离心lOmin。(6)弃去上清,加入无水乙醇溶液洗漆，12000r/min,离心lmin。(7)弃去上清,沉淀室温干燥,加入50ul TE溶液溶解沉淀。
(8)加入5ulRNAse酶溶液，37°C孵育30min，-20°C贮存备用。
[0005]步骤(I)中所述的样品为大豆干种子经粉碎后，直径小于0.1mm的颗粒。
[0006]步骤(2)中2%CTAB 裂解缓冲液的配方为:CTAB 4g,50mmoITris-HCL ΡΗ8.0、0.7molNaCl、1mmolEDTA PH8.0、20mmol 2-巯基乙醇。
[0007]本发明的大豆DNA的提取方法的有益效果是:可以从大豆干种子中提取到高质量的适宜于PCR检测的基因组DNA，操作简单、耗时短、利于快速检测。用本发明的方法得到的DNA 浓度为 118.15ngM, OD260/ OD280 的值为 1.85。
【具体实施方式】
[0008]本发明的一种提取大豆干种子DNA方法，包括以下步骤:
(O首先将大豆粉碎成粉末状，达到直径小于0.1mm的颗粒；分别称取0.1g制备好的样品，加入到两支2ml尚心管中；
(2)加入600ul2%CTAB裂解缓冲液，震荡混匀，65°C孵育30min ；2%CTAB裂解缓冲液:CTAB 4g、50mmolTris-HCL PH8.0,0.7moINaCIUOmmolEDTA PH8.0、20mmol 2-巯基乙醇；
(3)加入500ul酹:氯仿:异戍醇，震荡均勻，12000r/min离心20min,酹、氯仿、异戍醇的体积比为25:24:1 ；
(4)吸取上清液，放入1.5ml离心管中，加入250ul氯仿:异戊醇，震荡均匀，12000r/min离心15min ;氯仿、异戍醇的体积比为24:1 ;
(5)吸取上清液，放入另一1.5ml离心管中，加入等体积的异丙醇，沉淀30min，12000r/min 离心 1min ；
(6)弃去上清,加入无水乙醇溶液洗漆，12000r/min,离心Imin；
(7)弃去上清，干燥，加入50ulTE溶液溶解沉淀；
(8)加入5ulRNAse酶溶液，37°C孵育30min;-20°C贮存备用。
【权利要求】
1.一种大豆0嫩的提取方法，包括以下步骤:(1)首先将大豆粉碎成粉末状，分别称取0.18制备好的样品，加入到两支21111离心管中；(2)加入2%^1八8裂解缓冲液，震荡混匀，65。〇孵育 30111111 ； (3)加入酹:氯仿:异戍醇，震荡均勻，120001-/111111离心20111111； (4)吸取上清液，放入1.51111离心管中，加入氯仿:异戊醇，震荡均匀，1200017111111离心15111111 ； (5)吸取上清液，放入另一1.51111离心管中，加入等体积的异丙醇，沉淀30111111，120001-/111111 离心 10111111 ； (6)弃去上清，加入无水乙醇溶液洗漆，120001-/111111,离心1111111； (7)弃去上清，沉淀室温干燥，加入5011112溶液溶解沉淀； (8)加入51111？嫩86酶溶液，371孵育30111111，-201贮存备用。
2.根据权利要求1所述的大豆0嫩的提取方法，其特征在于:步骤(1)中所述的样品为大豆干种子经粉碎后，直径小于0.1皿的颗粒。
3.根据权利要求1所述的大豆0嫩的提取方法，其特征在于:步骤(2)中2%^1仙裂解缓冲液的配方为刃了仙 4^,501111110111-18-1101 ^118.0,0.711101^01,101111110121)1^ ？肋』、20臟012-巯基乙醇。
【文档编号】C12N15/10GK104450677SQ201410609628
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月4日 优先权日:2014年11月4日
【发明者】刘曼, 逄淑梅, 牟特 申请人:青岛康大分析检测有限公司