级饲料添加剂的离心稳定参数Ke值几乎没有影响。
[0061] 2. 1.2振摇试验
[0062] 各取10毫升纳米级饲料添加剂即维生素％和磷酸氢钙复合纳米乳，充氮、密封于 25毫升试管中，于25°C恒温水浴振荡器里lOOrpm振摇，分别在12h、24h、48h、72h取样，测 定各取样时间下纳米级饲料添加剂的离心稳定参数Ke。结果见表2。
[0063] 表2不同振摇时间下的纳米级饲料添加剂的稳定性参数
[0064]
[0066] 试验表明，连续振摇对纳米级饲料添加剂的离心稳定参数Ke值影响不大。
[0067] 2. 1. 3高温试验
[0068] 将纳米级饲料添加剂充氮、密封，分别于40°C、60°C、70°C的条件下放置10天，分 别于0天、5天、10天考察纳米级饲料添加剂的粒径及分布。试验结果见表3。
[0069] 表3不同温度对纳米级饲料添加剂粒径的影响
[0070]
[0071] 试验表明，不同温度下对纳米级饲料添加剂粒径无明显变化，但长时间储存应避 免高温。
[0072] 2. 1. 4加速试验
[0073] 将纳米级饲料添加剂在温度40°C的条件下放置6个月，考察1个月、2个月、3个 月、6个月的纳米级饲料添加剂的粒径分布。试验结果见表4。
[0074] 表4加速试验对纳米级饲料添加剂粒径的影响
[0075]
[0076]~试验表明，在加速试验条件下，纳米级饲料添加剂的粒径无明显变化。
[0077] 2. 2化学稳定性试验
[0078] 2. 2.1影响因素试验
[0079] 将纳米级饲料添加剂充氮、密封，分别于40°C、60°C、70°C的条件下放置10天，分 别于0天、5天、10天考察纳米级饲料添加剂中维生素D3的含量变化。试验结果见表5。
[0080] 表5不同温度条件下纳米级饲料添加剂中维生素D3的含量变化
[0081]
[0082] 试验结果表明，纳米级饲料添加剂在上述实验条件下放置，维生素D3的含量在储 存期内无明显变化。
[0083] 2. 2. 2加速试验
[0084] 纳米级饲料添加剂在温度40°C的条件下放置6个月，考察1个月、2个月、3个月、 6个月的纳米级饲料添加剂中维生素D3的含量变化。试验结果见表6。
[0085] 表6加速试验对纳米级饲料添加剂含量的影响
[0086]
[0087] 试验表明，在加速试验条件下，纳米级饲料添加剂中维生素％的含量无明显变化。
[0088] 对比试验：
[0089] 对比例1 :
[0090] 为了得到较好的纳米级饲料添加剂，我们分别从阴离子表面活性剂、两性离子表 面活性剂、非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂中选取由代表性的表面活性剂，进行了对 比试验。实验结果见表7。
[0091] 表7几种表面活性剂对纳米级饲料添加剂的影响
[0092]
[0093] 除非离子表面活性剂PEG-60氢化蓖麻油能形成纳米乳外，其它均无法形成纳米 乳，因此选择非离子表面活性剂PEG-60氢化蓖麻油作为表面活性剂。
[0094] 对比例2 :
[0095] 为了得到更好的纳米级饲料添加剂，我们进行了助表面活性剂的筛选，以对纳米 级饲料添加剂的稳定性影响和助表面活性剂用量为指标进行筛选试验。试验结果见表8。
[0096] 表8不同助表面活性剂对纳米级饲料添加剂的影响试验
[0097]
[0098] 由此可见，不采用任何助表面活性剂时，PEG-60氢化蓖麻油自身也能形成纳米乳， 但其用量为20克。使用PEG-400作为助表面活性剂时，PEG-60氢化蓖麻油形成的纳米乳 时用量最小，既节约了表面活性剂的用量，又避免了环境污染和对畜禽机体的不良刺激。
[0099] 对比例3 :
[0100] 为了得到更好的纳米级饲料添加剂，我们进行了助表面活性剂复配比例对纳米级 饲料添加剂的影响试验。试验结果见表9。
[0101] 表9助表面活性剂复配比例对纳米级饲料添加剂的影响试验
[0102]
[0103] 由此可见，PEG-60氢化蓖麻油/PEG-400的比例为2:1时，形成的纳米乳平均粒径 最小，纳米级饲料添加剂中维生素D3的含量最高。
[0104] 总之，上述一系列试验表明，纳米级饲料添加剂的物理化学指标无明显变化，稳定 性良好。
[0105] 临床试验1:
[0106] 临床实验动物选用250日龄罗曼蛋鸡。将实验鸡隔离单独饲养，饲喂全价饲料，并 随机分为3组，每组500只，3组饲养环境完全相同，实验时间共进行10天；空白对照组不做 任何处理，对照组用所对照产品按其说明书使用；本发明组合物组可将本发明产品（本发 明实施例2所制得的组合物）喂食，用法用量为：本品按每1000ml饮水2000kg，每日1~ 2次。计算方法：蛋壳破损率％ =破损蛋壳数量/总产蛋数量X100%。下表10是实验第 10天时的结果。
[0107] 评定标准：
[0108] 蛋壳破损：主要指蛋壳破损、薄壳蛋、软壳蛋等。
[0109] 表10是本发明与其它药物对减少蛋鸡蛋壳破损率的应用情况对比：
[0110]
[0111] 临床结果经纟i计分析i本发明组合物组与纟生素d3混悬、i组相比差异极显著(P <0?01)〇
[0112] 临床试验2:
[0113] 临床实验动物选用15日龄AA肉鸡。将实验鸡隔离单独饲养，饲喂全价饲料，并随 机分为3组，每组500只，3组饲养环境完全相同，实验时间共进行30天；空白对照组不做 任何处理，对照组用所对照产品按其说明书使用；本发明组合物组可将本发明产品（本发 明实施例2所制得的组合物）喂食，用法用量为：本品按每1000ml饮水2000kg，每日1~ 2次。计算方法：软骨病率％ =软骨病发生数量/肉鸡总数量X100%。下表11是实验第 30天时的结果。
[0114] 评定标准：
[0115] 软骨病：主要临床上生长不良、腿部无力、步态不稳、骨骼柔软或肿大、喙爪弯曲变 形、肋骨椎骨肿大、患鸡呈蹲坐姿势等。
[0116] 表11是本发明与其它药物对减少肉鸡软骨病发生率的应用情况对比：
[0117]
[0118] 临床结果经统计分析，本发明组合物组与维生素D3混悬液组相比差异极显著(P <0?01)〇
[0119] 临床试验3 :
[0120] 临床实验动物选用30日龄肉羊，将实验羊隔离单独饲养，饲喂全价饲料，并随机 分为3组，每组100只，3组饲养环境完全相同，实验时间共进行30天；空白对照组不做任何 处理，对照组用所对照产品按其说明书使用；本发明组合物组可将本发明产品（本发明实 施例2所制得的组合物）喂食，用法用量为：本品按每1000ml饮水1500kg，每日1~2次。 计算方法：软骨病率％ =软骨病发生数量/肉羊总数量X100%。下表12是实验第30天 时的结果。
[0121] 评定标准：
[0122] 软骨病：主要临床上生长不良、腿部无力、步态不稳、骨骼柔软或肿大、肋骨椎骨肿 大等。
[0123] 表12是本发明与其它药物对减少肉羊软骨病发生率的应用情况对比：
[0124]
[0125] 临床结果经统计分析，本发明组合物组与维生素D3混悬液组相比差异显著(P < 0? 05) 〇
[0126] 安全性试验一：
[0127] 选取70日龄健康罗曼蛋鸡60只，依照本发明实施例2所制组合物推荐剂量的5 倍拌料或饮水饲喂10天，用药期间，观察到实验鸡没有任何不良或异常行为表现，采食饮 水正常。
[0128] 安全性试验二：
[0129] 选取60日龄健康山羊100只，依照本发明实施例2所制组合物推荐剂量的5倍拌 料或饮水饲喂10天，用药期间，观察到实验羊没有任何不良或异常行为表现，采食饮水正 常。
[0130] 上述参照实施例对纳米级饲料添加剂的制备方法进行的详细描述，是说明性的而 不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下 的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种纳米级饲料添加剂，其特征在于：包括维生素〇3油3. 5~6. 5 X 10 6IU、磷酸氢钙 0? 25 ~0? 45kg、PEG-60 氢化蓖麻油 7 ~13g、PEG-4003. 5 ~13g、蒸馏水 0? 25 ~0? 75kg。2. -种根据权利要求1所述的纳米级饲料添加剂的制备方法，其特征是按如下步骤进 行： (1) 按质量向容器中加入维生素D3油和PEG-60氢化蓖麻油及PEG-400,搅拌均匀； (2) 取稀醋酸15毫升加入0. 25~0. 75kg蒸馏水中，使其微显酸性，PH值为6. 0~6. 5， 再加入磷酸氢钙，搅拌均匀； ⑶将⑵缓慢滴加入⑴中，不断搅拌，直至得澄清透明的纳米级饲料添加剂。
【专利摘要】本发明提供了一种纳米级饲料添加剂及其制备方法，该纳米级饲料添加剂的组分包括维生素D3油3.5～6.5×106IU、磷酸氢钙0.25～0.45kg、PEG-60氢化蓖麻油7～13g、PEG-4003.5～13g、蒸馏水0.25～0.75kg。本发明工艺简单，条件温和，制备时间短，设备要求低。制备的纳米级饲料添加剂为水溶性佳、稳定性好的澄清透明液体。该纳米级饲料添加剂粒径分布范围在15nm～75nm之间，平均粒径为55nm，符合纳米级材料的基本特征。具有生物利用度高。
【IPC分类】A23K1/16
【公开号】CN105053561
【申请号】CN201510455590
【发明人】汪安国, 刘文利, 王尚明
【申请人】山东迅达康生物科技有限公司, 山东派森药业有限公司, 山东迅达康兽药有限公司
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年7月29日