专利名称：：用于热疗的可注射的超顺磁性纳米粒子及其形成热疗植入剂的用途的制作方法用于热疗的可注射的趟侦磁^^xa立子及其形成热疗档入剂的用途发明领域本发明涉及一种热疗可注射制剂，所述可注射制剂包含液体载体和产热的纳米粒子，所述注射型制剂用于在接触体液和组织时形成原位热疗档入体的用途，所述热疗档入体和用于所述注射制剂的含纳米离子4的制备方法。
背景技术：
：增生性疾病，例如肿瘤，对^:护理系,加了巨大的负担。癌症，典型特征为不可控制的大量细胞的分化，^f主导致固体或半固体肿瘤的形成，以MI^产生一个或多个^H立的转移。除了外科治疗外，传统的癌症治疗方法包^Mj"性疗法，其使恶性细胞面对有效的物理损伤，使其不能细胞^ft，或/和化学疗法，其通常包括全身给予具有细月^^素的改变DNA正常结构、功能和复制的化学治疗药物。但是，这些方法的问H放疗时的放射'hi^化疗时的化疗药物对正常组织"^"毒f生，并Ji至常ii^^可;IA^命的副作用'一个非常有前途的可单独或与放疗和/或化疗联^vf吏用的抗癌方法为热疗，如近期临床实l^显示(M.H.Falk，R.D.lssel，"Hyperthermiainoncology",17:1-18(2001);P.Wust，B.Hildebrandt，G.Sreenivasa，B.Rau，J.Gelleraann，H.Riess，R.Felix-P.Schlag，"Hyperthermiaincombinedtreatmentofcancer"，7ZzeLs/7C"ft7c0/0g/，3:487-497(2002);A.Jordan,T.Rheinlander等."Increaseofthespecificabsorptionrate(SAR)bymagneticfractionationofmagneticfluids"，/our加/o/"tooparf/c/e/esearc力5(5-6):597—600(2003);A.Jordan,W.Schmidt等，"Anewmodelofthermalinactivationanditsapplicationtoclonogenicsurvivaldataforhumancolonicadenocarcinomacells，，，A3c^a〃0/2Wese"c力154(5):600—607(2000);A.Jordan,RSchlolz等，"Pesentationofanewmagneticfieldtherapysystemforthetreatmentofhumansolidtumorswithmagneticfluidhyperthermia"，/ow"a/o尸a/7d胞卵Wc淑er油225(1-2):118-126(2001).热疗可定义为一种用提高癌症感染才/M^或组织的温度于41-46。C之间来诱导肿瘤细胞凋亡的治疗过程。热疗，当与放疗联^fM时，已知f诚高对肿瘤细胞的錄性损伤，当与化疗^i^应用时，已知育缺高化疗*。更进一步，已知甚至e^i的温度升高^^加强放疗和化疗的疗效。这种联合治疗形式的结果是ii^给^t果的化疗剂量更少或放疗》i^t量更少，因而导致更少的毒性。因此，热疗应用被视为有利的治疗形式，可以减少放疗和化疗所致的可危M命的副作用。在为ii^需M高温度而提出的^t技术中，可引用例如以下文献中详述的那些冲支术P.Wust，B.Hildebrandt，G.Sreenivasa,B.Rau，J.Gellermann，H.Riess，R.Felix,P.Schlag，"Hyperthermiaincombinedtreatmentofcancer"inZa"c"0腳/柳3:487-497(2002)和P.Moroz，S丄Jones和BruceN.Gray,"StatusofHyperthermiaintheTreatmentofAdvancedLiverCancer"，/,5Vrg.ft7co人77:259-269(2001)。但是，目前应用的这些不同的引起热疗的^^仍有一些M的限制，M要的限制是对肺瘤的热传递控制性弱，对肿瘤内容物的控制性弱，并且对热疗效果的精确定位的控制性不够。因此，提^-"种热疗技^ii^可控的适宜的温度于P艮定的靶向肿瘤^M立是仍在研究絲中的技賴战。一些用产热纳米津立子iii'J定位和乾向热疗的方法被提出。W0-A-0158458提供了一种通过传递纳米壳层结构的纳米粒子来定位热疗革巴向细胞或组织的方法，该壳层结构具有离散电介质或半导^^圭掺有^#土金属或硫化金的核心部分，核心部分周围环绕着金的金属传导壳层，靶向所述细胞或组织并将所i^内ija立子暴露于电^^中，其环境可^^斤^^内^^立子在暴露于电^^时》i^热能。核心和壳层所组成的纳米粒子能用生物可降解材料连接，生物材^K列如多羟基^^^在体内水解降解，目的是让粒子在一段时间后易于转移。WO-A-03055469揭示了一种^Alt瘤细胞的定4立耙向热疗的方法，通过铁靶向，壳层结构的纳米粒子，具有趟顷磁性的核心包括氧化铁和至少两个环绕着所述核的壳层，更M而言是一个阳离子内壳和一个阴离子外壳，将所iii内>)^立子_^露于电^^射中，所述纳^ia立子在所述电磁^^H牛下放射热能。US专利n。6514481揭示了称为"nanoclinics"的存在于硅壳中的含氧化纟AMiiai子并围绕着耙向试剂，并^ii包^"种ii^宗染料。恒定磁场的应用相A.Jordan及^#者的US专利n°6541039揭示了氧化纟A^立子，至少植入两个壳层。夕卜层壳具有中4沐/或阴离子团使其肯化肿瘤组织内适当分布。内壳层呈阳离子团促违了细胞吸附/吸收。纳术农子作为混悬液("磁性液体")用于注射继而暴露于交变》兹场中用于热疗。但是，这些方法不能使限定的靶区iiJU可控的适宜的温度，并不肯化不需要重复施用^内^J^立子制剂的情况下继续加热过程。JP-A-10-328314揭示了成型材料;felA体，须创伤^骨用于热疗，所M型材料^i^体包含氧化铝粉，和在包含直径大于50nm的Fe3(X的交变磁场中产热的铁^嫩，和一种聚合的聚甲基丙烯酸单体。在似门研究U^T热疗技术的^A过程中，本发明人令人惊讶^JUiit^^，别i殳计的包^^^7^液的可注射制剂，其溶液包^^产热纳米净立子混悬液，以Ait过直接向前面存在的肺瘤部位组织或热敏的病损部位注射所述制剂，可获得病损核心的原位洗铸体，并JL^^于聚，基质的包^内^Ma子的才i^体育LSJ^kitit^露于夕h^磁场^^口热。在这些研究结果的基5出上，本发明A^A了一种新的热疗档入体，该#^M过直接在肺瘤或热敏部位刺孔注射形成，一种用于肿瘤或热敏病损的微创影^4旨导疗法的新的液体制剂，限制了细^4"效应在肿瘤、热敏病损上或它们旁边，并ibf目比常规的栓塞或高热方式而言增加了治疗方法的有效性和安全l"生。术形A^t比的是本发明人提供的热疗植入体传导了一种温和的热能比典型温度高5。C-10。C。该新热疗才1A体也不同与所谓的"》兹性液体"因为津立子可净皮一种可注射的聚*^I导从而保i^斤有粒子精确定位于肿瘤部位。发明概述依照第一方面，本发明提供了用于热疗的可注射制剂剂，其包含液体栽体和平均直径不超过20nm的产热氧^^^顷磁性纳^M立子，所述可注射制剂肯t^接触体;组织时形成原位热化固体或半固体才i^体。^Li^T案中，产热趟'顷氧化铁磁h4i内iMa子可具有5-15nm的平均直径。更^案中，产热的氧化4嫩顷磁性纳>|^立子^^为l或更小，所述径跨定义为径跨=(190%-(110%/(150%，其中d90%，(110%和(150%是纳>^立子的直径大小，并，出的百分数^ji粒子小于所述大小的百分数。产热趟顷磁性氧化4^内i(^立子^^磁赤4AM^)a立子，》翁i^广納il^立子或其"^^。产热氧化4柳顷磁性纳^4i子M非球型，其中较大直径和较小直径的直径比M范围从1至3。产热氧化4，'顷磁'1^内子淑^1物相容性聚*^_。可选的，产热氧化4^l;顷磁l4i内iia立子肯^皮固定^"才;^U4^中。在一个特别的M方案中，产热氧化4，顷磁性纳^ia立子能陂固定^^沐中，珪珠^i^平均直^^v20nm至ljum，更^Lii^300nm至800nm。包含氧化4B内iia立子的石沐能进一步用生物相容性聚^^。液体载体^4于^-"在水〉'^^溶剂中^i定聚^4勿溶液，一种原位聚合或交联^^f勿，一种热硬^(^^和一种7K^,并且更^^il^于在水、;^^溶剂中沉^定的聚^^溶液，其在于有4>^:剂中预形成的聚*溶液，该溶液能,剂与周围生理水交换而在组织上沉淀，这样能形成填^i且织的聚，浇铸物。可注射制剂可包括不透,物质，或可选的液体载体可基于不透Wt聚合物。可注射制剂能进一步包括药物或生物药物。按照第二方面，本发明提供了可按照本发明第一方面来制备的原位热化固体或半固体才i^体的注射制剂的用途，优选的是一种热化固体或半固体才i^体用于治疗肺瘤或推间盘退行性疾病。才^居第三方面，本发明提^"种热化固^Ml半固^fi^体，所述才i/v体为原位按第一方面制备的可注射制剂在注射入体内时接触体液或组织后所形成的。才Nt第四方面，本发明提供了用于第一方面的可注射制剂的包含氧化4B内>|^立子的>^^制备方法，所^法包括在可控制量的聚(乙烯醇)(PVA)存在时絮凝^/f匕4^内^^立子，将氧化寺^内iM(i子聚^M^并且将所述聚集的氧化铁纳米粒子与硅的前^^质^来制备包括氧化4AM^^立子的硅珠的步骤。才娥第五方面，本发明提供了肺瘤热疗方法，包括将第一方面制备的可注射制剂施于哺乳动物肿瘤部位，允许可注射制剂的液体载体产生相转变形成原位热4^1^体，并JIit用夕卜部磁场来引起^^体温度的增加。本发明的优点呈现于下面的描述中。本发明将更详细的描述如下。附图简^i兌明图1显示施于人体，于频度的最^l用磁场强度。图2说明了制^^氧化4AMiM立子的^^Mr法中的不同步骤。图3示意图描绘(a)肿瘤斧f立的经皮途径(b)适宜的针注射并^D定液体才ix体导iy中瘤软化；及(c)产生当相入体在夕卜部磁场作用下产生额外的温和热化雌。图4绘制的图表显示了船内i)^立子j^l增加不透,性增加。图5栓塞的鼠肺瘤截面扫描片显示热疗tt/v^肿瘤内部的分布。图6填充有不透辐射的热疗tt/^体的狗前列腺的荧光图。图7描述图表显示热疗相入体上的模型药物(BSA)的本发明详细描述才M居本发明的热疗可注射制剂包含液体载体和平均直径不超过20nm的产热氧化4，侦磁性纳米粒子，所述注射型制剂育化4妄触体液或组织时形成原位热化固M半固^fei/v体。平均直^^过20nm的氧化纟衫内i^立子是不适宜的，因为似门不育^出具有10000J/n^至50000J/n^的范围内高磁^'l"沐高的磁各向异性的趟顷磁性，因而在适宜人类治疗的交变磁场中不能产生温和热。人体可接受的最大应用磁场强度应当选##导涡流产热量小于25W/I的。如果交变场的频率可控&i可能的。作为例子，图l显示最大运用磁场强度^l负于人体用频率(直径40cm)并且假定人体电传导率0.4S/m，正如Jordan,P.Wurst，R.Scholz，H，Faehling,J，Krause，LFelix,in"ScientificandClinicalApplicationofMagneticcarriers"编辑U.Haefeli，W.Schutt，J.Teller,MZborowsld，户/e/咖户re^，NewYork,1997，第569-595页中/^f的。例如，50kHz频率，允i情大磁场强度10kA/m，更高频率导致更低的场强。氧^4AMif^立子^it平均直私^5到15nm并具有窄的粒径分布度，表达为^i^值为1或更少。所述4:^^值可定义为(dlO%-d90%)/d50%，dlO。/。f^J:径大小，其中10%的粒子小于这个大小，(190%^^—个直径的大小，其中90%的粒子小于这个大小，d50。/"^4一个直径的大小，其中50%的粒子小于这个大小。#4^发明，径跨值为1或更低可确保有效的产热，当应用^^充量密度在3-30mT(相应于2,388kA/m至28kA/m)，频率在100-500kHz之间时。最终大小依赖所用交变磁场的频率。;^发明目的，所^^化4烧^^立子^t磁赤4i^内^ia立子，磁4W户纳^4立子或其混合物。伊逸实施方案中，所ii^化^Miia立子可具有非球型，更优选大直径与小直径的比率在1-3之间，目的U现更高的各向异性常数。本发明所用氧化铁纳^ia立子斜U备氧化4^内米粒的传统湿化学方法制备，例如参考A,Bee和R.Massart在/o"i7a/。/*他^zze"础Wl柳e〃c#"er/a/s，Vol122，1，(1990)中公开的方法，包括在含7JC溶液中氯化铁和亚铁的碱性同沉淀步骤、清洗、热化学处理、和离心。本发明一^H^方案，所述氧化4衫内^a立子可^a^物相容性聚^4勿錄高其生物相容性。可通过包覆一种已知的生物相容t生聚合物传统方法，获得所述M的氧化舰棘子。可选择地，本发明另一实施方案，所述氣化4^i内i^立子可^"才^X4琳中被固定，允许基于Neel，s豫弛的热产生，其又保证可再生的热产生。有才A^可基于水不溶性聚合物或7JC溶性聚合物。所ii7K不溶性聚^7或水溶性聚^包括，例如，乙烯基聚^如聚(乙烯醇)或聚(乙烯醋酸酯)，纤维素及^Jf生物如纤维素醋酸S旨，纤维素醋酸丁酸酯，纤维素醋酸丙酸酯，甲基纤维素，羟丙基纤维素，羟乙基纤维素，羟丙甲M维素，或羧甲基纤维素；丙烯酸树脂如聚(乙基异丁烯酸酯)，聚(甲基异丁烯酸酯)，Eudragit"或聚(羟乙基异丁烯酸酯)，聚氨酯，聚碳酸酯，聚乙烯，聚丙稀,，聚(),生物可降解聚合物如聚(羟基酸)或聚原酸酯；及絲聚緣W琳可基于硅，鳅钾(包括羟基磷A^5，磷t4丐)，碳麟或硫酸钩，还有生物相容性IU膽如氧^^，氧^4^或氧化铝，或iL^L璃(如生物玻璃本发明特别M的实施方案中，所述氧化4^内iia立子可固定^f沐中。所述固定氧化纟AM;M立子的棘，处秘述为"含氧化纟规^^立子的硅珠"平均直径^^20nm至lnm，更i^300nm至800nm。用于本发明所述包含氧化4AM^)a立子的石i^可依照新的方法^^化铁纳米粒子制备，该方法组成了本发明的一部分。所述新的制备包含氧化《AM^f^立子的^K的方法包紛。下步骤-在可调整量的聚(乙烯醇)(PVA)存在下絮^^化4AMif^立子，从而形成氧化4^内i^立子聚集体，-所述氧化铁納米粒子聚集体与硅前体反应产生含氧化铁纳米粒子的硅更详细的说，如图2阐明的，实现氧化4衫内iM立子1的絮^1通过包含可调量的聚(乙烯醇)(PVA)的混悬液中产生氧化4^内iia立子聚集体如图2a)中说明的，其中每个最初的氧化4i^Ma立子1包葭PVA2，如图2b)中阐明的。氧化牵jy内il^立子的絮凝受存^介质中的PVA的强烈的影响，因为PVA吸附在氧化4衫内ifa立子表面Ji^而稳定了粒子，阻碍其絮凝。调整包含于悬浮液中的PVA的量能调整最初的氧化4衫内米粒子的聚集体的大小。加入悬浮液中的PVA的量按不同的例子^it择，考虑到相对氧化铁而言低浓度的PVA可导致大团凝聚，大小超过800nm并i^目对氧化铁而言高泉复的PVA可导致小的凝集，大小低于50nm。但是，在优选的方案中，PVA对氧化铁的重量比优选范围在O.Ol-l之间，更舰O.1-0.43。用于才娥本发明的所述新方法中的PVA，^量Ml0kD至100kD，更优选从12kD到20kD并JM^7K解度从50%至100%，更^A83%至89%。在一愤别舰的实施方案中，氧化铁纳if^立子絮絲其中的混悬液，包含水、乙醇、^PVA的;^^。水、乙醇和氨的^1^别舰25.7，8.0及0.9M，但是乙醇^1可在1-16M之间变4匕，^i^l可在0.1-2M间变H于是，将氧化铁纳米粒子的凝聚体与硅的前体反应，例如四乙IUj^(TEOS),来得到包含氧化4A^iM立子的硅珠，而不使其结构或大小松弛，如图2c)所描绘的那样。在这步骤中，石錄氧化4姚^*立子表面形成，导致了许多^M^氧化4规>1^立子的高度开;^构，^4皮硅"桥"连接在^。这方法的优点导致^""个最初的纳米粒子1被硅3完全的包覆，i^其磁性是重要的，因为每个聚集体中纳^ia立子的分离保证了仍为聚集形态纳iMti子的舰磁性特性。硅的前体加yNj^L^E^0.01-2M，并且更舰的从0.03-0.06M。^J^f^MW下进行，温度优选范围从室温至60X:，时间^A30min至300min。本发明包含氧化4^内>)^立子的石^1常4>入#^本发明的可注射型制剂之前将进一步进树规清#透析步骤。在特别的实施方案中，所述包含氧化4&内il^立子的硅珠可进一步^t生物相容性聚合物来改善其生物相容性。所述被M的含氧化4i^内i^立子的^^Mr通过已知的生物相容性聚^^的传统^^r法^^得。本发明可注射制剂的液体载体作为氧化牵衫内^a立子或含氧化^^^4i子硅珠的载体，并且能够在接触体液或组织时形成保留氧化4i^内米粒子的原位固体或半固体才l/v体。注射本发明注射制剂后，在接触体液或組织时形成的原位固体或半固体植入体，能,递产热氧化4^i内米粒子到把向部位病理组织从而通过软化病理组织和保留产热氧化4iU内i^立子在耙部f立的保留而利于发挥治疗效果。本发明注射制剂的液体载体当注射入体内时育tM妾触的体M组织上形成原位固体或半固体才i^体，并且该载体能结合氧化4AM米粒子或含氧化4AM米粒子的》M,可f睡于(i)在水;^^溶剂中^定聚*溶液，(ii)原位聚合或交联^^，(iii)热石更4匕的^^,(iv)亲7jc^。在-HM^的本发明实施方案中，本发明注射型制剂的液体载体基于7jc混合溶剂的縱聚邮溶液。在更m的实施方案中，液体载体在于有才;ii^剂中的预先形成的聚合物溶液，其在组织中^溶剂与周围生理7jor嫂交换而;^定，这样产生了填^i且织的聚綠緣这样的液体栽^下面仍描述为"沉淀的聚^^M"。因为在聚合物和生理液体的界面更易于^A沉淀，这些沉淀剂往往比，系统减少^^條漏的危险。液体载^"有适宜注射的粘度，能够通过聚M浓度改变或聚^分子量的改变*制。所用的有枳溶剂^^具有临床或药学上的先例，比如二曱^JW(DMS0)，乙醇，乙酸7JCi^,二曱基异山梨醇酉旨(DMI)，他咯烷酮如N-曱基-比咯烷酮(NMP)或2-p比咯烷酮，四氬吹喃聚乙二醇醚(glycofurol)，异亚丙基脊油(Solketal)，乳酸乙酯，甘油，聚乙烯二醇，丙二醇或聚乙二醇，也可为亲水溶剂如柠檬酸三乙酯，苯甲醇或苯甲酸千酯。也可用前面提到的有才;U^剂的含水溶^;^^液。^i^的，<MNMP或DMS0。溶解于前面所提到的溶剂中的聚M包括纤维素及期汙生物，如纤维素醋酸酯，纤维素醋酸丁酸酯，纤维素醋酸丙酸酯，丙烯酸树脂如聚(甲基丙烯酸甲酯)，聚(甲基丙烯酸乙酯)，聚(甲基丙烯酸幾基乙基酯)，聚乙烯，乙烯聚合物如聚(乙烯醇)或聚(乙烯醋酸酯)，乙烯-乙烯基Sf^"聚物(EVAL)，聚氨酯，聚碳酸酯，聚丙烯腈，聚(#)和絲聚物。生物可降解聚合物也淑皮应用，包括聚(羟基酸)，聚(原酸酯)，基于癸二酸iy^i酸共聚物的聚(酐)。聚合物如Dunn等在US-A-4938763中公开的那些也能使用。优选的聚合物有临床的先例，比如纤维素醋酸酯，公开于K.Sugiu，K.Kinugasa，S.Mandai，K.Tok函ga&T，Ohmoto"Directthrombosisofexperimentalaneurysmswithcelluloseacetatepolymer(CAP):technicalaspects,angiographicfollowup,andhistologicalstudy",/.Afewrow/^83，531—538(1995)和^f于K.C.Wright,R.J.Greff&R.E.Price"ExperimentalevaluationofcelluloseacetateNFandethylene-vinylalcholcopolymerforselectivearterialembolization，，，/Kasc/"teiTAs力'o/10,1207-1218(1999))或聚(乙烯乙烯醇)，錄于W，Taki等."Anewliquidmaterialforembolizationofarteriovenousmalformations",AmericanJournalofNeuroradiology11，163-168(1990);于R.Jahan等，"EmbolizationofarteriovenousmalformationswithOnyxClinicopathologicalexperiencein23patients",Neurosurgery48，984-995(2001)和于A.Komemushi等"A證liquidembolicmaterialforlivertumors",As力'o743，186-91(2002))，或生物可降解的聚(羟M)。将聚^^勿^MEi^剂中^1^3%—6()0/。w/w时，絲5%—20。/。W/W得到縱的聚*溶液。另一实施方案中，本发明可注射制剂液体栽体基于原位聚合的或交联的化賴(ii)。原位聚合或交联的4t^的实例可包括^^，预聚物和最终引发剂。例如，这样原位聚合或交联的^^物可包括氰基丙烯酸S旨^^'J及，生物(例如^^氰基丙烯酸酯)，基于丙烯酸的聚合物例如用于整形外科的粘^'J(如甲基丙烯酸S旨及其丙烯酸衍生物)，或通过Michael加成交联的4t^物如W0-A-03080144中7/Hf的。在另一个实施方案中，本发明可注射制剂液体栽体基于热固化化合物(iii)。可用于传递和固化氧化4衫内^^立子的热固^M^^的实例包括泊洛沙#poloxamines，琼脂糖，N-异丙基丙烯縱(NIPAAM)或壳^T唐絲的热固化舰如US-A-6344488或PCT/EP04/002988(Pseudothermosettingneutralizedchitosancompositionforminganhydrogelandaprocessforproducingthesame)中所述。基于三嵌段生物可降解聚合物的注射型制剂也可用于制备产热植入剂，如那些在WO-A-9921908中所述的。在另一个本发明实施方案中，氧化铁纳iia立子或^内^a立子的珠可并入亲所述亲7jO^制剂包括能絲粒子^1或PH改变而凝固的^^(例如具有二价阳离子的海藻酸盐或聚醋酸乙烯乳胶，公开于Sadato，A.等(Experimentalstudyandclinicaluseofpoly(vinylacetate)emulsionasliquidembolizationmaterial)inNeuroradiology36,634-641(1994)。)。所述亲7j^M/ft^也包^^些用于病损^fi^塞的如2000年9月5日公开的US专利n。6113629"Hydrogelforthetherapeutictreatmentofaneurysms")。#4^发明可注射制剂因为氧化4，^(^立子的存絲一些絲不逸性。但是，也需要另外的辐射不it性，并且所述的附加的不透絲性可通雄可注射制剂中添加;^支术领g员已知的不透，物质;5M^得。为了iiS,j这个目的，可能添加金属，包含重金属(如钽，鵠，钡，铋，碘或锆)的脉盐或有拟^l勿。更特别地，硝酸钡，氧化铋，扭盼，鵠粉或氧化锆能用于该目的，同样的还有F.Mottu，D.A.Rufenacht和E，Doelker(Radiopaquepolymericmaterialsformedicalapplications~Currentaspectsofbiomaterialsresearch)在/"k34，323-335(1999)中7/Hf的材料。还可选择的，驗不逸性的获得可通过^^I絲透不过的聚^/作物液体栽体，如文献中公开的0.Jordan,J.Hilborn，O.Levrier，P.H.RollandP.H，D.A.Riifenacht和E，Doelker(Novelradiopaquepolymerforinterventionalradiology)，the7thWorldBiomaterialsCongressProceedings,Sydney,p.706(2004);F.Mottu,D.A.Rufenacht，A.Laurent&E.Doelker(lodine-containingcellulosemixedestersasradiopaquepolymersfordirectembolizationofcerebralaneurysmsandarteriovenousmalformations)，"/o/77"er/a^23，121-131(2002);和C.A.Maurer等(Hepaticarteryembolisationwithanovelradiopaquepolymercausesextendedlivernecrosisinpigsduetoocclusionoftheconcomitantportalvein),/鄉"o/32,261—168(2000)。为了获得附加的治疗g可运用已知热疗和放疗或化疗之间的协同作用，才娥本发明的可注射制剂，可进一步包括药物或生物药物。更特别地，才鹏本发明可注射制剂可进一步包拾活性物质如药物或生物药物(肽，蛋白，核苷，遗传基因物质)，^i^抗癌或絲染物质，这些活性物质可以以游离物质、聚，衍生物质、或包^AMiMl孩^^体中(纳^(^立子，孩姊，脂质体，等)的形式，并入可注射制剂中。^v体由所述包括药物或生物药物的可注射制剂形成，因此可用于幹故药物或传递生物药物，具有有益^^是:药物#^/生物药物传递可随产热而提高或引发，能产生定位，可控的治疗^。才娥本发明可注射制剂可用于形成原位热化固体或半固体^v体来治疗肿例如，才財居本发明的可注射制剂可用于形^f、位热化固M半固^iX体来治疗肺瘤，^D微创捧ft的过程说明于图3第一，适宜的针4用于直^4十刺《LitA^t瘤核心5，如图3a)说明的。第二，##本发明的可注射制剂通过针4注射，填M瘤内部的肿瘤核5入体6,如图3b)中描述。与传统的血管栓勤目反，其为"软化"损伤并JUfei^t瘤的坏死没有继续^_^。才1^^#携产热想侦》兹性氧化4^内>(^立子用于温和的热疗。形成原位热化4i/v(^后，相入体部位周围其余的肺瘤组织肖t(MiA体4UiJ交变磁场作用后净W口热，导致温和的热疗M导!Ot瘤周围边界7内细M亡,如图3c)所描述。加热过程可重复，来获得期望的M。最终，结合肿瘤内部空间的填充和定位的加热导致了肿瘤细胞的死亡。空间，相反，才財居本发明的热化^v^f^递温和加热导致细胞凋亡。根据本发明档入体的创新是能将细l^^限制在肿瘤^Mi^其周围，于是相比传统的栓塞或热化过程，其增加了治疗的有效性和安全l"生。应用范围可包括不同的肿瘤，因为已，见测到直接的刺《Lit程可^^^通往许多肿瘤内部空间的*。本发明热^fet^体可有利于应用许多的肿瘤类型，例如，罕见的，高度的颅脑血管损伤，其否则需要^A性的外科暴露并意味着外利并发症的高危性，如血管,瘤；脊骨和背骨的初始的和继发的肿瘤损伤，相似于目前的丙烯酸树脂粘固剂才1^似参见J.B.Martin，等,Radiology,229:593-597(2003);D.SanMilanRuiz等，BONE25:85S-90S(1999))，^"可育y^供附加热疗；前列腺癌；肝#^多，就fit些M肠，癌引发的癌症。才緣本发明热化固体或半固体^^体可用于进一步应用，例如治疗退化性推间盘疾病。这些经常导致背痛的原因包才##间盘纤维环状韦刃带退化，渗漏的推间盘核片断导致潜在的神经节炎症。热疗用于锥盘干;^创伤^进一步的渗漏并，间盘^^体可认为能替换推间盘核。因此，在特别的实施方案中，才娥本发明的可注射制剂能用于形威源位热化固M半固^t/v体用于治疗退行寸錄间盘疾病，如推间盘突出。B可热疗的病变。可进一步预见到以夕MP可重复使用的存热垫作为物理治疗用于减轻病痛形式的加热材料的另外应用，因为表面加热已知能减少痛和减少局部肌肉痉挛，例如用于急4兌的底部背痛。下面例子旨在i兌明4^发明。但是似门无^rVf可不負fe限制本发明范围。实施例实施例1在持续搅拌下，将8.65gFeCl3'6比0(0.086M)和3,18gFeCl2-4H2O(0,043M)溶解于370ml超纯水。30ml氨水(25vol%)—^口入同时强力撒泮。立即形成黑色沉淀。这些沉淀沉积P在永久的磁场上并去除上清液。黑色沉淀每次用超纯水400ml清洗三次。最^f^L体加A^纯水形成300ml体积。这样获得的分散g移到离心塑管中以5000g离心5^l中。离心的固体放于圓，fe中。加入60ml0.35M的Fe(N03)39H20水溶液和40ml2M硝酸。〉'^^/回流1小时。该步骤中黑色^t体变褐色。；^^转入大口烧瓶中，》U于永't^兹场上并降温。上清液丢弃JLi口入100ml超纯水。这样获得的分散体在适宜的透析管中(SigmaDialysisTubing,Cellulosemembrane,cut-ofD12000)用确'酸(l(T2M隨析2天。用于透析的硝酸每天换2次。最终产物转入塑料离心管并于30000g离心15^#。收ILL清液，并称屏为"纟^^充体"。W定将被称为"絲的铁磁流体"。所述"铁》彰危体"和"^i^^f彰危体"包括平均粗^^5到15nm的氧化铁纳i^立子，标示加权的平均值9±lnm，用TEM，AFM，XRD和BET确定。氧化4AM^)Oi"fi皮轻孩啦长(椭圆型)，较长直径H^M直径的直径率为1.3±0.3。跨奴O.66。实施例2f賴必舰雞子^U实例1的^^成a)聚^勿溶液^^^溶液的制备，将干燥的^^物(PVA,Mowiol⑧3-83，Clariant)于水中溶解，在90。C'tfe^口热溶液15^^中。聚^溶液中聚^^^1从0到0.2%wt。超纯水(SeralpurdeltaUV/UFsetting,0.055^S/cm)用于所有合成步骤。b)在圆底中将3.3ml4i^^体^^于6.6ml聚*溶液。混合物室温下搅拌5分钟。将10ml乙醇和1.5ml浓^7K加入并强力搅拌。烧并緣移至恒温器中，调至50。C。,的同时向〉V^^勿中^^250ml四乙^JJ拔。该系乡^5(TC撒泮1小时，然后加入25ml超纯水，冷却至室温。如此生成的氧化铁石沐的大小是50nm。纯化M于原始PVA浓度，如》b^得的^t物a)在恒定磁场中沉淀(^^^f勿浓度)或者b)离心(高聚"^M)例如，初始聚*就0.2%wt(实例1的合成)需要在30000g离心30，。除上清并ib^A^纯水。该程序重复至少3次。最终^l通ii^纯水调整。实例2的^^成将lml"浓缩的铁磁流体，，*于20ml乙醇中。加入O.lwtQ/。聚合物(PVA，"Mowiol"，Clariant，3-83，Mw:14000g/mol，水解度83%)。按照前述的实例1的^^成步骤"^成。生成的珠大小200nm。实例3的^^成将lml的"浓缩的铁》澎充体"^t于20ml乙醇中。不加聚合物。按照前述的实例1的合成步骤合成。生成的珠大小600nm。实施例3广賴化麵絲f辆錄賴緣椒琳,44%乙烯的乙烯-乙烯躲聚物(EVALE-105B,EVALEurope,Belgium)溶于DMSO中(8g聚^^/100mlDMSO)。通过彻底的涡旋和超声将氧化纟^内^*立子(NP,直径〈15nm)(包埋于石i^中(珠直径〈lMm))悬浮于聚，溶液中。含量5%-30%的NP通过18G注射器形成可注射制剂。在pH7.2磷酸緩冲液中沉淀，得到柔软的块状物适用于肿瘤软化。接下来1个月在^i组冲液中培育，视觉观测不到纳米粒子的棒改。分光ibl计测上清皿示释故的氧化4^i内iM立子低于1%(数錄测*^差内)。因此，体外观测不到納>^立子的#^。实施例4缀絲賴颠椒絲容/"实施例3的4l7v^ii过计^^脉层摄影扫描(CT-扫描);^则知则定其,不透性。其在X-射线成像下为可视的。可JML随NP衬增加而增加，如图4所描绘。为了改44|#不透性，加入10%的确酸钡，得到高不透辐射的化^(2800Hounsfield度)。后者提供了一种不均匀的絲不透性，在荧光^it^见检查下显示逸泉，可显示注射液^Al且织。可她，》制膝团接枝的聚^^(44。/o碘w/w)可用于增进骑不透性(2300Hounsfield度)。实施例5:(^^化^^^f^不^^的^i射^^和^A^U#4^兹流体冻干并以此制备成氧化铁纳米粒子(NP，直径〈15nm)通过涡旋和超声混悬于DMS0中。然后将含44%乙烯的乙烯-乙烯Sf-^聚物溶于该混悬液中(8g聚合物/100mlDMS0)。舍量5%-30%的NP通过18G注射器得到注鄉制剂。在pH7.2磷酸緩冲液中;^定，产生柔软的块状物适用于肿瘤软化。在沉淀緩冲液中继续培育1个月，视觉或分it^A计观测不到纳米粒子的释放。辐5.7.2制剂本发明所用的药物组合物可以使用一种或多种生理学上可接受的载体或赋形剂以常规方式配制。因此，本发明的EphA4激发性抗体或其他抗EphA4试剂(例如，反义和其他核酸)及其生理学上可接受的盐和溶剂化物可配制成通过吸入或吹入(通过口腔或鼻子)、或口服、肠胃外或粘膜(如口腔，阴道，直肠，舌下)给药。在优选实施方案中，使用局部或系统性肠胃外给药。对于口服给药而言，上述药物组合物例如可以通过用常规方式与药物学上可接受的赋形剂一起制成片剂或胶嚢，该赋形剂如结合剂(例如，预凝固的玉米淀粉，聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如，乳糖，微晶纤维素或磷酸氬钩)；润滑剂(例如，硬脂酸镁，滑石或氧化硅)；崩解剂(例如，土豆淀粉或淀粉乙醇酸钠)；或润湿剂(例如，月桂基琉酸钠)。可以用本领域公知的方法包被片剂。口服给药用的液体制剂可以是例如溶液，糖浆或悬浮液，或它们以干产物的形式存在以在使用之前与水或其他适合载体組合。这种液体制剂可以通过用常规方法用药物学上可接受的添加剂制备，该添加剂如悬浮剂(例如，山梨醇糖浆，纤维素衍生物或氬化食用脂肪)；乳化剂(例如，卵磷脂或阿拉伯树胶)；非水性载体(例如，杏仁油，油状酯，乙醇或分镏的植物油)；和防腐剂(例如，甲基或丙基-p-幾基苯甲酸酯或山梨酸)。在需时，该制剂也可以含有緩冲盐、调味剂、着色剂和甜味剂。口服给药用的上述制剂可以配制成使活性化合物可控制地释放。对于口腔给药，上述组合物可以以常规方式配制成片剂或止咳糖的形式。的纳^M立子。粘固剂通过18G针可注射并同4it粘固剂一样变硬。体外M^不到纳iia立^W。实施例IO,(^f絲翻絲f蔣《郝断么備,依先有技术(PCT/EP2004/002988"Pseudothermosettingneutralizedchitosancompositionformingahydrogelandaprocessforproducingthesame")制^—种壳緣制剂。简述之，将脱乙酰度47%的壳聚糖溶于3ml的0.03N的盐酸中。溶液^ip至4。C。在,时加入lml3:7比例的丙二醇或1，3-丙二醇与水的濕^。溶液于A^口入10%到20%w/w的包埋于4的纳>|^立子，通过加入O.1M的NaOH将pH调整到6.8。最if^积用7JC调至5ml。溶液于是通过21G针注射入新鲜的猪输尿管的夕卜植物(^#在37'C盐水中)。30min内，见测到形成坚固的皿。实施例ll:"絲歸鰣聰椒W基于羟基磷^5粉末的生物活性的粘固剂，碳酸磷灰石粘固剂，磷酸钩粘固剂和玻璃陶f^末仍在研究或通过商iJi^得(例如Norian,。结合了生物活性成#聚^#相的粘固剂^一种有希望的选择(例如Cortoss)。我们选择了两种商业粘固剂，Noriar^和CortossW承载高达20。/。w/w包iE^^中的氧化纟Al内^JOi子或20%的氧4匕4AMi(a立子。粘固剂能够通过18G4朽主射并#非承栽粘固剂同样被固化。实施例12.-(^颠辨絲，椒絲趟微,选择的才l/^Nfcj经频率140kHz和场强4.77kA/m交变磁场中。用差示量热器测量温度升高，计算热的产生和物质能量的损失(J."C.Barci等，inScientificandClinicalApplicationofMagneticCarrie,PlenumPress,1997)。结絲下面表l中给出。t,(MOi子(NP)和包iE^5i^t(珠)中的纳米粒子的能量损失，显示出硅的包埋提供了更有效的加热。硅包SI内米粒子在10-37W/g范围内损失能量，显示的数值导致了体内升温的效力。进一步，才1^体M显著影响了能量损失，显示了选賴宜的4lA体M用于热疗的重要性。表l:升温的样品的能量损失<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>实施例13;f斜初,微，实施例3的制剂，包括10%包埋于^^(珠)中的氧化4^fM^立子，注射入鼠的皮下结肠肺瘤T380异种移植物。注射体积比肿瘤体积的比例是40%。图5显示了热^^i^体的肿瘤内分布，通it^卜部轮廓区显示。i^期的，液体在固化前实际上填充了肺瘤的空间。实施例14;广岸糸《發前列腺癌作为升温才1^体的潜在的目标，切除的狗的前列腺在N-曱基p比咯烷酮中被50/。聚氨酯溶液栓塞(Tecothane75，Thermedics，USA)，其包含10%10%包含^fi^t(珠)中的氧化4iyiMM^子。如图6的荧光图像显示，直接的穿刺导致完全的前列腺的填充。实施例15;W#^A^#^U我们制备了在N-曱基p比咯烷酮中的15%w/wTecogel(Thermedics,USA)溶液，力口入10%w/w包埋于石iM(珠)中的氧化纟i^内i^立子和作为模型药物的10。/。w/w牛血清白蛋白(BSA)。溶絲磷離緩冲液中^iXJ定。BSA的#^文通过分iU6^计在270nm;^则。如图7所示，17小时内80%的BSA#^L。BSA的#^文和小分子如抗生素的#^文也育化低药物^1情况下^^长。权利要求1.一种用于热疗的可注射制剂，包括液体载体和平均直径不超过20nm的产热超顺磁氧化铁纳米粒子，所述注射制剂能在接触体液或组织时形成原位高热的固体或半固态植入体。2.才M居权利要求1的可注射制剂，其中产热的趟侦磁氧化4^内i^立子具有5-15nm的平均直径。3.才娥权利要求2的可注射制剂，其中产热的^'顷磁氧化4i^内il^立子具有l或更少的径跨，所述^^定义为^^=(190%-dl0%/d50%，其中d90Q/。，d10%和(150%为纳米粒子直径大小，给出的百分数值是小于该大小的粒子的百分数。4.^^权利要求l-3的^f可一项的可注射制剂，其中产热的趟'顷磁氧化铁纳^^立子为磁赤4奵,纳;5l^立子，^^r纳^l^立子或其》'^^。5.才权利要求1-4的<树一项的可注射制剂，其中产热的趟'顷磁氧化铁纳^4i子具有非^求型。6.才財居权利要求5的可注射制剂，其中产热的趟'顷磁氧化4衫内^M立子具有较大直径与较小直径的直径比为1至3。7.才^居权利要求l-6的^^可一项的可注射制剂，其中产热的趟'顷磁氧化铁纳iM^fi^物相容性聚杨^^。8.才权利要求1-6的^(可一项的可注射制剂，其中产热的趟顷磁氧^4失纳^IOi子固定^"才/^X44中。9.才M居权利要求8的可注射制剂，其中产热的趟顷磁氧化4^内^4i子固定知沐中。10.才M居权利要求9的可注射制剂，其中固定产热的趟侦磁氧化4AMiia立子的磁^K具有20nm至1jam的平均直径。11.才財居权利要求10的可注射制剂，其中固定产热的趟顷磁氧化4AMiJ^立子的砝珠具有300nm至800nm的平均直径。12.才財居权利要求9-11的《^f可一项的可注射制剂，其中含氧化4衫内米粒子的^Mi—步M^物相容性聚^4勿。13.才財居权利要求l-12的^f可一项的可注射制剂，其中液体载体基于任意的—种在水混合落济4中的沉淀聚合物溶液、热固化合物和—种水凝胶。14．根据权利要求13的可注射制剂，其中液体举体基于—种在水混合溶剂中的沉淀聚合物溶汽其在于有蝴0中预形成的聚合物溶液，能够随着溶剂与周围生理性水的交换而沉淀在细织上，因此能产生填越亥组织的聚合物填充体。15．根据权利要求卜14的任何一项的可注射制剂，进·步包含不透辐射物质。16．根据权利要求13或14的可注射制剂，其中液体载体基于—种辐射透不过的聚合物。17．根据权利要求卜16的任何一项的可注射制剂，进一步包含药物或生物药物。18．如权利要求1—17所定义的可注射制剂的用途，用于形成原位高热化固体或半固体植入体。19．根据权利要求18的可注射制剂的用途，其形威原位用于肘’瘤治疗的高热化固体或半固体植入体。20．根蝴Ij要求18的可注射制剂的用途，其形成原位高热化固体或半固体植入体，用于退行}绯间盘疾病的治疗。21．—种高热化固体或半固俐盘入体，所述摧螂是通，过书听Ij要求1—17的任何一项所定义的可注射制剂，当所述可注射制剂被注射入体内时，与体液或组织接触后原位形成的。22．用于根据权利要求9的可注射制剂的含氧化锹纳米粒予幽朱的制备方法，所述方法包括步骤一在可调量的聚(乙烯醇)(PVA)存在的情况下将氧化铁纳米粒子絮牦得到霸化铁纳米粒子的聚集体，一将所述氧化铁纳米粒子聚集体与硅的前体物反应，得到含氧化铁纳米粒子的硅殊。全文摘要用于热疗的注射型制剂包含液体载体和产热的超顺磁氧化铁纳米粒子，其平均直径不超过20nm。所述注射型制剂能在接触体液或组织后形成原位热固体或半固体植入剂。所述热固体或半固体植入剂可通过高热治疗肿瘤或腰椎间盘退变性疾病。文档编号A61K41/00GK101227925SQ200580049862公开日2008年7月23日申请日期2005年5月23日优先权日2005年5月23日发明者A·彼得里-芬克,D·吕费纳赫特,E·德尔克,H·霍夫曼,M·沙特兰,O·约尔丹申请人:日内瓦大学;洛桑聚合联合学院;日内瓦大学医院