半枝莲总黄酮及其在制备抗流感病毒药物中的用途的制作方法

专利名称：：半枝莲总黄酮及其在制备抗流感病毒药物中的用途的制作方法
技术领域：
：本发明属中药领域，涉及一种抗流感病毒药物,具体涉及半枝莲总黄酮及其在制备抗流感病毒药物中的新用途.
背景技术：
：半枝莲为唇形科黄芩属植物Scutellariabarbate的干燥全草，主产于我国的江苏、江西、福建、广东等地，资源比较丰富。其主要成分为黄酮类化合物、二萜及二萜内酯类化合物、多糖，还有丰富的人体必须的微量元素等。传统中医认为半枝莲性辛、苦、寒，入肺、肝、肾，功效清热解毒、化瘀利尿，主治虫蛇咬伤、疮肿肿毒、传染性肝炎、肝硬化腹水、肾炎水肿、跌打损伤。半枝莲在中医中已被广泛应用，有关半枝莲的成分以及药理活性有了较为深入的研究。研究发现半枝莲在解热、抗癌、护肝、免疫调节、抑菌、抗衰老等方面显示了一定的作用。王刚等采用小鼠腋下接种肿瘤细胞法测定了半枝莲醇提物的抗肿瘤活性，表明半枝莲醇提物对移植性肿瘤具有显著的抑制作用，并有较好的剂量依赖关系(王刚，董玫，半枝莲醇提物抗肿瘤活性的研究[J]，现代中西医结合杂志，2004,12:9)。谢珞琨等研究表明半枝莲乙醇提取物能明显抑制人髓系白血病K562细胞增殖，使K562细胞出现凋亡所具有的形态学及生物化学特征，同时对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用具有一定的浓度依赖性(谢珞琨，邓涛，半枝莲提取物诱导白血病K562细胞凋亡[J]，武汉大学学报(医学版)，2004,25(2))。国外研究者发现，从半枝莲中分离得到的黄酮类物质能有效抑制抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。综观国内外的报导，均未见半枝莲(Scutellariabarbate)的干燥地上部分的总黄酮提取物抗流感病毒药效及用其制备的药物。
发明内容本发明的目的是提供半枝莲总黄酮及其在制备抗流感病毒药物中的新用途.本发明所述的半枝莲总黄酮是从我国产的唇形科黄芩属植物半枝莲的干燥地上部分(药材中文名称半枝莲，Scutellariaebarbatae,Herba)分离提取得到总黄酮提取物，经质谱和"C、'H测定，证实所述的半枝莲总黄酮提取物含有效化学成分5,7,4'-三羟基黄酮(芹菜素)，其化学结构如下所述总黄酮提取物经体外细胞模型和体内动物模型试验后，证实其具有很强的抗流感病毒活性。所述总黄酮提取物可进一步制备抗流感病毒药物，制成胶囊，片剂，颗粒和针剂等剂型。所述有效组分芹菜素也可制成胶囊，片剂，颗粒和针剂等剂型。具体实施方式实施例l1)提取半枝莲总黄酮取中药材半枝莲，用50—80%酒精提取，浓缩，石油醚萃取，水相部分上D-101大孔树脂，用水和酒精梯度洗脱，收集洗脱液，经镁粉/盐酸检测，收集黄酮含量高的部分，浓縮至干得固形物即有效部位产物，有效部位产物收率达1%以上，其中总黄酮含量超过50%。经生物活性检测，所述的总黄酮具有明显的抑制流感病毒的活性。具体提取及结果涉及浸提生药重量1000克浸膏131克大孔树脂分离重量17.7克总黄酮含量57.5%2)结构鉴定经质谱和"C、'H测定，证实本发明提取物半枝莲总黄酮含有化学成分5，7，4'羟基黄酮(芹菜素)，其化学结构如下收率13.1%收率1.77%总黄酮收率1.0%经生物活性检测，所述的芹菜素具有良好的体外抑制流感病毒的生物活性。3)半枝莲总黄酮对流行型感冒病毒抑制实验(1)实验采用96孔板，细胞系为狗肾传代细胞(MDCK)，病毒为HiNi甲型流感病毒(来自中国医学科学院)，每孔加100TCID5o病毒，5%C0237。C吸附2小时后，加入所述的总黄酮提取物，72小时后观察细胞病变效应(CPE)。结果显示TC5。=150^g/ml，EC5。=37.5Mg/ml，TI=4。(2)芹菜素体外对流行型感冒病毒具有抑制作用，结果显示TC50=50Mg/ml，EC5。=8.5Pg/ral，TI=5.88。(3)半枝莲总黄酮体内抗流感病毒活性动物试验采用17-18g的昆明小鼠(复旦大学实验动物部)，设置病毒对照组、利巴韦林组(100mg/kg)、大剂量组(45mg/kg)、中剂量组(11.5mg/kg)、小剂量组(2.8mg/kg)，每组雌雄各半。病毒采用FM毒株(购自中国医学科学院)，lOTCIDso浓度的病毒用滴鼻法感染，病毒感染2小时后口服给药。每天记录小鼠死亡情况，连续记录14天。另外，于感染第5天每组解剖4只小鼠，用肉眼观察其肺病变程度。实验结果表明(1)半枝莲总黄酮能有效减少流感病毒感染后的肺病变面积。与病毒对照组相比，大剂量组(45mg/kg)、中剂量组(11.5mg/kg)、小剂量组(2.8mg/kg)减少肺病变面积为63.16%、46.28%和27.27%;而利巴韦林组(100mg/kg)减少肺病变面积50.41%。大剂量组的半枝莲总黄酮能有效减少病毒感染后肺病变面积。表1是半枝莲总黄酮对小鼠肺病变面积减少的影响。(2)半枝莲总黄酮具有对小鼠生命的保护作用。与病毒对照组相比，大剂量组(45mg/kg)、中剂量组(11.5mg/kg)、小剂量组(2.8mg/kg)使病毒感染小鼠的生命延长74.51%、41.18%和35.29%;而利巴韦林(100mg/kg)使病毒感染小鼠的生命延长73.52%。表明所述的半枝莲总黄酮提取物具有很强的对小鼠生命的保护作用。表2是半枝莲总黄酮对小鼠生命的保护作用。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表2<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>实施例2取所制得的半枝莲总黄酮提取物50克，粉碎过100目筛，加入淀粉3克混合均匀，再加入10%淀粉浆适量制成软材，20目筛网制粒，60-7(TC干燥，过30目筛整粒，加入羟丙基纤维素3克和硬脂酸镁1克充分混匀，压片，薄膜包衣，制得IOOO片。每片含总黄酮提取物50mg。实施例3取所制得的半枝莲总黄酮提取物50克，粉碎过100目筛，加入淀粉3克，微晶纤维适量，用稀乙醇制粒，20目筛网制粒，60-70°(:干燥，整粒，加入硬脂酸镁适量，充分混匀，填入胶囊即得，1000粒。实施例4取所制得的半枝莲总黄酮提取物30克，粉碎过100目筛，加入淀粉300克，加入10%淀粉浆适量制成颗粒，60-7(fC干燥，分装。实施例5取所制得的半枝莲总黄酮提取物50克，加适量注射用水，加热溶解，再加入0.5%活性炭充分搅拌，煮沸20分钟，过滤，冷却至室温，冷库过夜，加注射用水至1000ml，用碳酸氢钠调节pH至7，过滤除菌，灌装，封口，灭菌即得注射剂。规格调2ml，10ml,100ml。权利要求1、半枝莲总黄酮提取物在制备抗流感病毒药物中的用途。2、按权利要求1的所述的用途，其特征是所述的半枝莲总黄酮提取物，通过下述方法制备取中药材半枝莲Scutellariaebarbatae的干燥地上部分，用50—80%酒精提取，浓縮，石油醚萃取，水相部分上D-101大孔树脂，用水和酒精梯度洗脱，收集洗脱液，经镁粉/盐酸检测，收集黄酮含量高的部分，浓縮至干，得有效部位，其中总黄酮含量超过50%。3、按权利要求l的所述的用途，其特征是所述的半枝莲总黄酮提取物中含有化学成分5,7，4'-三羟基黄酮，其化学结构如下4、按权利要求1的用途，其中所述的半枝莲总黄酮提取物制成胶囊、片剂、颗粒或针剂。全文摘要本发明属中药领域，涉及半枝莲总黄酮及其在制备抗流感病毒药物中的新用途，本发明所述的半枝莲总黄酮是从我国产的唇形科黄芩属植物半枝莲的干燥地上部分分离提取得到总黄酮提取物，经质谱和¹³C、¹H测定，证实所述的提取物半枝莲总黄酮的含有如上化学结构的有效化学成分5，7，4′-三羟基黄酮(芹菜素)。所述总黄酮提取物经体外细胞模型和体内动物模型试验，证实其具有很强的抗流感病毒活性。所述总黄酮提取物及其有效组分芹菜素可进一步制备抗流感病毒药物，制成胶囊，片剂，颗粒和针剂等剂型。文档编号A61K36/185GK101167799SQ20071004725公开日2008年4月30日申请日期2007年10月19日优先权日2007年10月19日发明者珮周,李幸慰,李继扬,盛德鑫,海黄申请人:复旦大学