专利名称：一种蜂毒注射液的制备方法
技术领域：
本发明涉及药品制剂的制备方法，具体地说是一种蜂毒注射液的制备方法。
背景技术：
蜂毒是一种透明的液体，具有特殊的芳香气味，味苦，呈酸性。pH值为5. 0-5. 5。比 重为1.313。蜂毒具有抗炎和镇痛作用，可用于治疗风湿性关节炎，类风湿性关节炎，周围 神经炎及神经痛等疾病。目前临床使用的蜂毒制剂主要为蜂毒注射液。由于蜂毒溶液不稳 定，容易污染杂菌和变质，在常温下通常只能保存几天。而对蜂毒进行加热灭菌处理，其药 效则可完全丧失。因此，如何制备质量稳定可靠的蜂毒注射液，一直是医药研究人员关注的 重点问题。CN101259144公开了一种蜂毒注射液制备方法，它包括以下步骤(1)溶解取蜂 毒按一定重量比例，加水溶解，若含脂较多用50% (V/V)乙醚脱脂二次，加热，挥尽残留乙 醚，过滤，除去不溶性杂质。(2)分离提取将葡聚糖凝胶G-50用注射用水浸泡12小时后， 用注射用水反复清洗3次(除去细小微粒)，装入层析柱中，接好给水系统，用注射用水冲洗 2小时备用。( 将药液加入葡聚糖凝胶中，使药液在葡聚糖凝胶柱中进行分离提取。出液 口用紫外监测记录仪监测收集(控制流速每分钟5ml)，在波长^Onm处有吸收成份，即收集 到玻璃瓶中，至蛋白峰流尽为止。(4)将上述流出液过10万分子量超滤柱过滤。( 制剂 上述过滤液测定含量后，稀释至规定的浓度，除菌过滤，灌封灭菌即得蜂毒注射液。该方法忽略了蜂毒不稳定的特性，因此其产品质量难以控制。
发明内容
本发明的目的就是要提供一种蜂毒注射液的制备方法，以有效提高蜂毒注射液的 质量稳定性。本发明的目的是这样实现的本发明所提供的蜂毒注射液的制备方法，包括以下步骤(a)蜂毒溶于少量注射用水中，按照质量体积比1 20 30 5 7的比例，量 取蜂毒、注射用水、辛醇；(b)将蜂毒溶于注射用水中后，倒入蜂毒萃取；萃取液经葡聚糖凝胶柱分离，在波 长280nm处收集蜂毒液体；(C)将上述蜂毒液体在-10 -15°c条件下，冷冻1 2小时；(d)用水温在30°C以下的注射用水配制KH2POJl冲液，pH值控制在4. 5 5. 5，然 后，用配好的缓冲液将冷冻后的蜂毒溶液稀释至标示量；(e)蜂毒溶液经5000 10000分子量超滤设备超滤后，按照质量体积比加入 0. 05 0. 1 %的甘氨酸，搅拌均勻，加0. 1 0. 2 %活性炭，搅拌后粗滤，检验合格后，料液经 过0. 2um滤膜除菌过滤的后进行封装即得。本发明中(a)步工序所说的蜂毒、注射用水、辛醇的用量配比优选1 20 7。
本发明方法中选用辛醇(如正辛醇、仲辛醇、异辛醇)，作为萃取剂萃取蜂毒，既提 高了蜂毒的纯度，又降低成本，简化了工艺。再辅以将经葡聚糖凝胶柱进行分离收集的蜂毒 液体在-10 -15°c条件下，冷冻1 2小时再进行配制，由此进一步抑制了蜂毒活性成分 的氧化变质，提高了药品质量的稳定性。本发明方法加入稳定剂甘氨酸，不但可以防止氧化，还可以起到保护细胞，与蜂毒 一起共同起到抗炎作用。
具体实施方式
以下通过具体实施例对本发明作进一步的详述实施例1称取蜂毒5g，用注射用水IOOml将其溶解，加入500ml分液漏斗中，用35ml正辛醇 萃取2次，将水层放出。用葡聚糖凝胶柱进行分离，在波长280nm处收集得到蜂毒液体，将 其放置在-10 -15°C冷冻2小时待用；再用30°C以下注射用水配制0. 2mol/L KH2PO4缓冲 液200ml，pH值控制在4. 5-5. 5。然后用配好的缓冲液将冷冻后的蜂毒溶液溶解，加入注射 用水约至20000ml，用5000分子量超滤设备超滤，滤液中加入IOg甘氨酸，加20g活性炭，除 热源，充分搅拌后粗滤，检验合格后，料液经过0. 2um滤膜除菌过滤的后进行封装即得。配料、分装生产过程要求在百级洁净环境下进行，并充氮气保护。制剂规格2ml:0.5mg。实施例2称取蜂毒5g，用注射用水200ml将其溶解，加入500ml分液漏斗中，用25ml异辛醇 萃取2次，将水层放出。用葡聚糖凝胶柱进行分离(葡聚糖凝胶G-IO (40 120m)，流动相A 0. lmol/L磷酸盐缓冲液(pH7. 0)，流动相B水，流速1. 5ml/min)，在波长280nm处收集得到 蜂毒液体，将其放置在_15°C冷冻1小时待用；再用30°C以下注射用水配制0. 2mol/L KH2PO4 缓冲液200ml，pH值控制在5. 2。然后用配好的缓冲液将冷冻后的蜂毒溶液溶解，加入注射 用水约至20000ml，用10000分子量超滤设备超滤，滤液中加入20g甘氨酸，加40g活性炭， 除热源，充分搅拌后粗滤，检验合格后，料液经过0. 2um滤膜除菌过滤的后进行封装即得。配料、分装生产过程要求在百级洁净环境下进行，并充氮气保护。实施例3 (按照CN101259144公开的蜂毒注射液制备方法制备)(1)溶解取蜂毒5g，加IOOml水注射用水溶解，加50% (V/V)乙醚脱脂二次，力口 热，挥尽残留乙醚，过滤，除去不溶性杂质。(2)分离提取将葡聚糖凝胶G-50用注射用水浸泡12小时后，用注射用水反复清 洗3次，装入层析柱中，接好给水系统，用注射用水冲洗2小时备用。(3)将药液加入葡聚糖凝胶中，使药液在葡聚糖凝胶柱中进行分离提取。出液口用 紫外监测记录仪监测收集(控制流速每分钟5ml)，在波长280nm处有吸收成份，即收集到玻 璃瓶中，至蛋白峰流尽为止。(4)将上述流出液过10万分子量超滤柱过滤。(5)制剂上述过滤液测定含量后，稀释至规定的浓度，除菌过滤，灌封灭菌即得 蜂毒注射液。实施例4强光照射、高温对不同方法所制蜂毒注射液的影响。
根据中国药典2005年版的有关要求，选择光照、高温60°C作为影响因素对样品进
行考察。取实施例1、2、 3所制样品置于烘 箱内，控制温度60士2°C，于0天、5天、10天取样
考察；取实施例1、2、3所制样品置于光橱内，控制光度4500士500LX，于0天、5天、10天
取样考察。结果详见表1、表2、表3。表1 实施例1产品测试结果。
权利要求
1.一种蜂毒注射液的制备方法，其特征在于它包括以下步骤(a)蜂毒溶于少量注射用水中，按照质量体积比1 20 30 5 7的比例，量取蜂 毒、注射用水、辛醇；(b)将蜂毒溶于注射用水中后，倒入蜂毒萃取；萃取液经葡聚糖凝胶柱分离，在波长 280nm处收集蜂毒液体；(c)将上述蜂毒液体在-10 -15°C条件下，冷冻1 2小时；(d)用水温在30°C以下的注射用水配制KH2PO4缓冲液，pH值控制在4.5 5. 5，然后， 用配好的缓冲液将冷冻后的蜂毒溶液稀释至标示量；(e)蜂毒溶液经5000 10000分子量超滤设备超滤后，按照质量体积比加入0.05 0. 1 %的甘氨酸，搅拌均勻，加0. 1 0. 2 %活性炭，搅拌后粗滤，检验合格后，料液经过 0. 2um滤膜除菌过滤的后进行封装即得。
2.根据权利要求1所述的蜂毒注射液的制备方法，其特征在于(a)步工序所说的蜂毒、 注射用水、辛醇的用量配比为1 20 7。
全文摘要
本发明公开了一种蜂毒注射液的制备方法，它包括以下步骤(a)按照质量体积比1∶20～30∶5～7的比例，量取蜂毒、注射用水、辛醇；(b)将蜂毒溶于注射用水中后，倒入辛醇萃取；萃取液经葡聚糖凝胶柱分离。(c)蜂毒液体在-10～-15℃条件下，冷冻1～2小时；用配好的缓冲液将冷冻后的蜂毒溶液稀释至标示量；经超滤设备超滤后，按照加入0.05～0.1％的甘氨酸，搅拌，粗滤、精滤封装。本发明方法所制蜂毒注射液，质量稳定，产品合格率高。
文档编号A61P19/04GK102038710SQ20091007577
公开日2011年5月4日 申请日期2009年10月23日 优先权日2009年10月23日
发明者梁凤林 申请人:华北制药集团制剂有限公司