专利名称：一种桉烷型倍半萜类化合物的应用的制作方法
技术领域：
本发明属医药技术领域，具体涉及一种从植物川陕风毛菊中分离得到的桉烷型倍 半萜类化合物Encelin的应用。白血病是一种恶性血液病，其特征是造血干/祖细胞恶性克隆性增生并广泛浸润 全身各组织，正常造血受抑，导致贫血、出血、感染及组织和器官浸润的表现。白血病按细胞 学分类主要有髓系白血病和淋巴细胞白血病；根据细胞的分化程度、自然病程的长短，分为 急性白血病和慢性白血病两大类。白血病是十大高发恶性肿瘤之一，严重危害人类生命。白 血病的化学治疗一直是医学和药学研究的重点领域。从传统的细胞毒类药物至近年来新的 抗白血病药物的应用，白血病的治疗疗效有了长足的进步，使部分患者得以治愈。但白血病 的总体疗效仍不理想，尤其是白血病的耐药和复发问题严重困扰着白血病的化疗效果。因 此，新型抗白血病药物的研发成为白血病治疗的研究热点和迫切任务。jl|KMii^ (Saussurea licentiana Hand-Mazz. )(Compositae)
属(Saussurea)植物，分布在陕西，四川，生于山顶，山坡旁。本属植物全世界约有400余种， 主要分布于欧洲和亚洲，是菊科中较大的一个属，风毛菊属植物在我国约有264种，主要分 布在西南和西北的青藏高原、天山等高海拔、高纬度地区。风毛菊属植物中的许多种类是非 常有价值的药用植物，是各少数民族常用的中草药，在我国的中药、藏药、蒙药中有其独特 的作用。其广泛用于治疗风湿性关节炎、各类妇科疾病、心血管疾病、肺寒咳嗽、中风，具有 消炎镇痛、壮阳、抗早孕、治疗心血管系统疾病等多方面功效。国内外研究表明，本属植物含 有倍半萜类、生物碱、黄酮类、木脂素类、糖类、香豆素、醌类和挥发油等化学成分，但至今未 见将桉烷型倍半萜类化合物应用于治疗白血病的药物中。本发明的目的在于提供一种具有治疗白血病作用的桉烷型倍半萜类化合物的应用。本发明的目的通过如下技术方案实现一种桉烷型倍半萜类化合物的应用，所述 的化合物为 Encelin，其化学命名为(3aR, 4aR, 8aS, 9aR) -8a-methyl-3, 5-dimethylidene -4, 4a, 9, 9a-tetrahydro-3aH-benzo [f] [l]benzofuran_2, 6-dione,分子式为 C15H16O3,化学 结构式如下
其特征在于所述的化合物应用于制备治疗白血病药物中。
本发明所述的桉烷型倍半萜类化合物Encelin对急慢性髓系白血病及淋巴细胞
背景技术：
发明内容
3白血病细胞均具有显著的增殖抑制作用。
具体实施例方式下面通过实施例对本发明内容进行详细说明
本发明所述的桉烷型倍半萜类化合物的提取、分离及结构鉴定 1.提取取10 kg川陕风毛菊干燥全草，粉碎后经95%乙醇室温浸泡提取4次，每次7 天。减压浓缩去醇后，得浸膏900g。浸膏用水悬浮后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行 萃取，得到石油醚部分122g，乙酸乙酯部分153g和正丁醇部分261 g。2.分离乙酸乙酯层用等量硅胶拌样上硅胶柱层析，用氯仿-甲醇(1 :(Γ0 1)极 性梯度洗脱，最后用甲醇冲柱，合并成分相同部分后共得10个组分(Fr I ^Fr X ) 0 Fr II 过硅胶柱，石油醚_乙酸乙酯极性梯度，得到3个流分洗脱(Fr II A^Fr II C)。Fr II C过 Sephadex LH-20柱，氯仿-甲醇极性梯度洗脱，经TLC检测，取有淡黄色斑点的组分，用等量 硅胶拌样，上硅胶小柱(200-300目)，用石油醚-乙酸乙酯极性梯度洗脱，待溶剂挥发后有 白色粉末析出。白色粉末用甲醇溶解后经制备型高效液相色谱仪，以甲醇_水为洗脱剂分 离得该化合物纯品。3.结构鉴定本发明所述的桉烷型倍半萜类化合物的理化性质和光谱数据如下 ⑴本品为无色针晶(乙酸乙酯)，mp :195 196°C，5%硫酸乙醇溶液显淡黄色。
EI-MS(m/z) :244[M+]。13CNMR, DEPT 和1HNMR 谱显示有 4 个 CH2，其中两个末端双键 CH2, δ η5· 70 (brs, Η-13 α )，6. 22 (brs, Η-13 β ) ,5. 22 (d, J=2. 0 Hz, H-15 α ) ,6. 13 (d, J=2. 0 Ηζ，Η-15β)，1 个 CH3，5 个 CH，其中一对为双键质子-CH=CH-, δ Η6. 82 (d，J=IO. 2 Hz, H-l)，6.01(d，J=IO. 2 Hz，H-2)，5 个季 C，一个酯羰基 δ。188.46，一个 α β 不饱和酮羰基 δ c169. 74，126. 60，159. 30 ； δ Η6· 82 (d)，6· 01 (d)。由 CH3 的 1HNMR 禾口 13CWR 数据 δ Η1· 03 (s)， δ c19. 25可推测此化合物为桉烷型倍半萜内酯。⑵本发明所述的桉烷型倍半萜类化合物的波谱学数据如下EI-MS(m/z) 244 [M+]，229 [M-CH3], 171，105，91，69 (Bas 印 eak)。1H-WR(CDCl3) δΗ 6. 82 (1Η, d, J=IO. 2 Hz, Η-1)，6· 01 (1Η, d, J=IO. 2 Hz, Η_2)，2. 61 (1Η, dd, J=12. 3,2. 4 Hz, H_5)，1. 58 (1H, ddd, J=13. 5，12. 3，12. 3 Hz, H_6 α )，2. 04 (1H，ddd, J=9. 3，7. 2，2. 4 Hz, H_6 β )，3. 08 (1H，m, H-7)，4. 61 (1H，m, H_8)，1. 79 (1H，dd, J=15. 3,4. 8 Hz, H_9 α )，2. 41 (1H，dd, J=15. 3，1.2 Hz, H-9 β ), 5. 70 (1H, brs, Η_13α)，6. 22 (1H, brs, H—13 β )，1. 03 (3H，s, H_14)，5. 22 (1H, d, J=2. 0 Hz, H-15a),6. 13 (1H, d, J=2. 0 Ηζ，Η_15β) ；13C-NMR (CDCl3) : δ c159. 30 (C-I), 126. 60 (C-2),188. 46 (C_3),144. 19(C_4) , 44. 60 (C_5),28. 61 (C_6),39.94 (C_7)， 76. 01 (C-8)，37· 34(C-9)，35· 98 (C-10)，141. 02 (C-Il)，169. 74(C_12)，121. 17(C_13)， 19. 25(C-14)，119. 01(C-15)。以上光谱数据与文献报道(Zdero L, Bohlmann F, King RM. Eudesmane derivatives and other constituents from Apalochlamys spectabilis and Cassinia species. Phytochemistry, 1990, 29(10) : 3201-3206.)的数据一致，因此鉴定该化合物 为 Encelin0实施例1
本发明所述的桉烷型倍半萜类化合物抗急性髓系白血病活性实验(MTT法)
4方法分别取对数生长期的人急性髓系白血病细胞系HL-60细胞和NB4细胞，接种于 96孔培养板上，每孔接种量分别为6000/150μ 、12000/150μ 。实验设药物实验组、阴性对 照组和空白对照孔。药物实验组每孔加不同浓度的本发明所述的桉烷型倍半萜类化合物溶 液50μ (化合物母液用营养液稀释)，每个浓度做3个复孔；阴性对照组每孔加营养液50μ ， 共设6个复孔；空白对照孔只加营养液200μ ，用于仪器调零。在常规培养条件下，作用72h 后，每孔加入20μ MTT溶液(浓度为5mg/mL，用PBS配制，pH=7. 4)，继续培养4h，离心弃上 清，每孔加二甲基亚砜(DMSO) 150μ ，震荡5min，待结晶完全溶解后，用酶标仪(BI0-RAD产 品)在570nm波长处测定每个小孔的吸光度值(為7(|)，各组取平均值，计算抑制率IR = (1 — 实验组Ato /对照组Ato) X 100%。用SPSS12.0进行统计学分析，并计算IC5(1。实验重复一 次。结果见表1和表2。实施例2:
本发明所述的桉烷型倍半萜类化合物抗慢性髓系白血病活性实验(MTT法) 方法取对数生长期的人慢性髓系白血病细胞系K-562细胞，接种于96孔培养板上，每 孔接种量为6000/150μ 。实验设药物实验组、阴性对照组和空白对照孔。药物实验组每孔 加不同浓度的本发明所述的桉烷型倍半萜类化合物溶液50μ (化合物母液用营养液稀释)， 每个浓度做3个复孔；阴性对照组每孔加营养液50μ ，共设6个复孔；空白对照孔只加营养 液200μ ，用于仪器调零。在常规培养条件下，作用72h后，每孔加入20μ MTT溶液(浓度为 5mg/mL，用PBS配制，pH=7. 4)，继续培养4h，离心弃上清，每孔加二甲基亚砜(DMSO) 150μ , 震荡5min，待结晶完全溶解后，用酶标仪(BI0-RAD产品)在570nm波长处测定每个小孔的 吸光度值U57Q)，各组取平均值，计算抑制率=IR = Cl 一实验组A7tl /对照组Ato) X 100%。 用SPSS12. 0进行统计学分析，并计算IC5(I。实验重复一次。结果见表1和表2。实施例3:
本发明所述的桉烷型倍半萜类化合物抗淋巴细胞白血病活性实验(MTT法) 方法取对数生长期的人淋巴细胞白血病细胞系M0LT-4细胞，接种于96孔培养板上， 每孔接种量为12000/150μ 。实验设药物实验组、阴性对照组和空白对照孔。药物实验组 每孔加不同浓度的本发明所述的桉烷型倍半萜类化合物溶液50μ (化合物母液用营养液 稀释)，每个浓度做3个复孔；阴性对照组每孔加营养液50μ ，共设6个复孔；空白对照孔 只加营养液200μ ，用于仪器调零。在常规培养条件下，作用72h后，每孔加入20μ MTT 溶液(浓度为5mg/mL，用PBS配制，pH=7. 4)，继续培养4h，离心弃上清，每孔加二甲基亚砜 (DMSO) 150μ ，震荡5min，待结晶完全溶解后，用酶标仪(BI0-RAD产品)在570nm波长处测 定每个小孔的吸光度值(為7(|)，各组取平均值，计算抑制率IR = (1 —实验组為/对照组 A7tl) X 100%。用SPSS12.0进行统计学分析，并计算IC5(1。实验重复一次。结果见表1和表2。表1不同浓度的Encelin对白血病细胞的增殖抑制作用
糸与对照组义7。比较，7X0.05。
表2 Encelin对白血病细胞的半数抑制浓度
上述实验结果表明，本发明所述的桉烷型倍半萜类化合物Encelin对急性髓系白血 病、慢性髓系白血病及淋巴细胞白血病等多种人白血病的细胞系(HL-60、ΝΒ4、Κ-562和 M0LT-4)均具有显著的增殖抑制作用，并呈剂量依赖性；作用72h的IC5tl分别为0. 10、 0. 20、0. 35和0. 17mg/L，说明Encelin具有抗人白血病作用。因此，本发明所述的桉烷型倍 半萜类化合物Encelin可用于制备抗白血病药物。
权利要求
一种桉烷型倍半萜类化合物的应用，所述的化合物为Encelin，其化学命名为 (3aR,4aR,8aS,9aR) 8a methyl 3,5 dimethylidene 4,4a,9,9a tetra hydro 3aH benzo[f][1]benzofuran 2,6 dione，分子式为C15H16O3，化学结构式如下；其特征在于所述的化合物应用于制备治疗白血病药物中。2010102731427100001dest_path_image002.jpg
2.根据权利要求1所述的桉烷型倍半萜类化合物的应用，其特征在于所述的化合物 应用于制备治疗急性髓系白血病药物中。
3.根据权利要求1所述的桉烷型倍半萜类化合物的应用，其特征在于所述的化合物 应用于制备治疗慢性髓系白血病药物中。
4.根据权利要求1所述的桉烷型倍半萜类化合物的应用，其特征在于所述的化合物 应用于制备治疗淋巴细胞白血病药物中。
全文摘要
本发明涉及一种桉烷型倍半萜类化合物的应用，所述的化合物为Encelin，其化学命名为(3aR,4aR,8aS,9aR)-8a-methyl-3,5-dimethylidene-4,4a,9,9a-tetrahydro-3aH-benzo[f][1]benzofuran-2,6-dione，分子式为C15H16O3，其特征在于所述的化合物应用于制备治疗白血病药物中。本发明所述的桉烷型倍半萜类化合物Encelin对急慢性髓系白血病及淋巴细胞白血病细胞均具有显著的增殖抑制作用。
文档编号A61P35/02GK101919841SQ20101027314
公开日2010年12月22日 申请日期2010年9月6日 优先权日2010年9月6日
发明者张永红, 谢捷明, 陈永胜 申请人:福建医科大学