专利名称：药物组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及中药领域，具体地涉及药物组合物及其用途。更具体地，本发明提供了药物组合物、药物组合物在制备药物中的用途、制备药物的方法、药物以及对药物组合物或药物进行检测的方法。
背景技术：
尖锐湿疣(CA)又称为性病疣、生殖器疣或肛门生殖器疣，是一种人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的主要发生在男女性外生殖器和肛门部位皮肤粘膜的疾病。这种疣表现为与众不同的乳头状或鸡冠样肿瘤，而且有积累和多发的倾向。尖锐湿疣的发病率高，患者人 数也在迅速增加，此病发病率现居我国性传播疾病的第二位。目前，CA的治疗主要有两种方式物理治疗和药物治疗。物理治疗方案主要为CO2激光治疗、液氮冷冻治疗、高频电治疗或液氮冷冻微波治疗。对于大体积尖锐湿疣或对药物或CO2激光的治疗表现较为顽固且短期内反复发作的疣体可考虑外科手术切除，再进行药物治疗。对于小体积疣体患者自己用药治疗方案主要药物为0.5%足叶草毒素酊(或0. 15%足叶草毒素霜)和5%咪喹莫特(imiquimod)霜。但事实上，0.5%足叶草毒素酊(或0. 15%足叶草毒素霜)临床用药的复发率高，对受损皮肤刺激性强，常伴有灼痛、红肿、糜烂及坏死等副作用，进而有导致局部感染的风险，另外此药有致畸作用。5%咪喹莫特霜治疗尖锐湿疣的疣体清除率平均仅为56%，同时伴有较强局部刺激作用。物理疗法优点为去疣效果快速明显，但缺点是复发率高，疼痛明显，皮下组织疏松部位治疗后可至明显水肿。作为女性生殖系统最常见的恶性肿瘤，宫颈癌的发生与人类乳头瘤病毒(HPV)感染密切相关。HPV感染生殖道是一个长期的过程，可潜伏在细胞内若干年，一旦机体免疫力降低，潜伏的病毒可恢复活力。HPV感染过程通常分为潜伏感染期、亚临床感染期、临床症状期和HPV相关的肿瘤期。宫颈感染高危HPV (HR HPV)，各亚型产生E6、E7两种癌蛋白，可与宿主细胞的细胞周期调节蛋白(抑癌蛋白如P53、RB等)相结合，导致细胞周期控制失常，造成细胞增殖异常，异形性变，发展为CIN(宫颈癌前病变或宫颈上皮内瘤变的简称)。根据严重程度CIN分成三级宫颈上皮内轻、中、高度瘤变，即CINI、CINII、CINIII，由这些癌前病变进一步发展为原位癌和浸润癌。目前认为，从CIN发展到宫颈癌，是一个较长时间(大约10年)连续发展的过程。对CIN的早期筛查和合理干预，清除女性生殖道HPV持续感染，阻断CIN的形成，是有效降低宫颈癌发病率的关键。人类是HPV的唯一宿主，因而无法在体外和动物模型中进行培养扩增实验，这使得预防或治疗HPV感染的药物研发受到极大限制，造成在全世界范围内尚无疗效确切的预防和治疗HPV感染的药物，因此所谓治疗主要是针对由HPV引起的宫颈或外生殖器的局部病变。宫颈癌前病变由于病位特殊，目前临床上以局部治疗为主。现代医学治疗主要采用物理治疗和手术治疗，物理疗法包括激光、冷冻、红外线、微波、电灼和聚焦超声等，但治疗后常出现阴道分泌物增多、水样排液及阴道不规则出血，还可能引起宫颈管狭窄、黏连甚至不孕等副作用，宫颈锥切术、宫颈广泛切除、子宫全切除等手术治疗病灶消除快，但手术切除对人体的创伤重，痛苦大，治疗费用高，且存在易感染，易复发，对病变时间较长的患者治愈率偏低，CIN复发在治疗后平均2. 5年之内。
另外HPV感染还能引起的疾病有宫颈糜烂，女阴上皮内瘤变，疣病，如扁平疣、寻常疣、掌跖疣、尖锐湿疣和免疫功能低下引起的传染性软疣，以及皮肤癌前病变如角化棘皮瘤、日光性角化病、溢脂性角化病等。目前对治疗由HPV感染引起的宫颈疾病、女阴上皮内瘤变、疣病及皮肤癌前病变的药物，仍有待进一步研究和改进。
发明内容
本发明是基于发明人的下列发现而完成的近几十年来，利用中医药治疗女性生殖道HPV感染取得了一定的成效，但使用的大多是多味中药组成的复方，成分复杂，目前仍没有成分简单、疗效确切的药物组合物应用于临床来预防或治疗HPV感染以及其诱发的良性或恶性病变，特别是针对致湿疣的低危型HPV感染，以及致宫颈癌前病变及宫颈癌的高危型HPV感染。中药金荞麦微辛、涩、凉，归肺经，主要功效为清热解毒、排脓祛瘀，可用于肺痈吐脓、肺热喘咳、乳蛾肿痛等病症。现代研究表明，金荞麦具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗突变等药理作用。金荞麦具有抗癌作用的活性成分是一类原花色素缩合性单宁物质的混合物(简称金荞麦c)，其主要由表儿茶素及其二聚体组成，包含表儿茶素、原花色素B2、原花色素Cl等成分。文献报道对金荞麦中该类成分的提取指标多以其中表儿茶素和原花色素B2的含量为指标，方法比较繁琐，成本较高。吴茱萸辛、苦、热；有小毒。归肝、脾、胃、肾经。具有散寒、止痛、燥湿助阳等功效，近年来在丰富传统用药的基础上对吴茱萸现代药理作用有了深入研究，发现其具有杀虫、抗菌、抗病毒、抗炎镇痛等作用，对其抗肿瘤研究开展较晚，但已有研究发现吴茱萸碱具有很强的抗肿瘤活性，并能诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡。吴茱萸主要有效成分为吴茱萸碱、吴茱萸次碱、羟基吴茱萸碱、柠檬苦素、辛弗林、吴茱萸烯等。发明人在前期对大量药材及不同药物组合初步药效筛选及综合评价的基础上，对上述两种药材的组合物治疗尖锐湿疣和宫颈癌前病变的药效进行了深入研究。发明人在药理药效学实验研究中惊奇的发现，将金荞麦吴茱萸这两味中药组合而制成的药物组合物，对HPV-DNA有明显的破坏作用，对HPVE7基因有明显的抑制作用，可显著抑制宫颈癌Hela细胞的体外增殖，抑制宫颈上皮异型细胞增生，金荞麦吴茱萸药物组合物可用于对感染人乳头瘤病毒(HPV)的治疗，目前国内外有关中药金荞麦与吴茱萸药物组合物在制备治疗HPV感染的药物中的应用未见报道。本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。本发明提供了一种可以有效地用于治疗HPV感染的药物组合物及其用途，该药物组合物可用于制备治疗由HPV感染引起的宫颈疾病如宫颈糜烂、宫颈癌前病变、宫颈癌；由HPV感染引起的女阴上皮内瘤变；以及由HPV感染引起的疣病，如扁平疣、寻常疣、掌跖疣、尖锐湿疣和免疫功能低下引起的传染性软疣；以及由HPV感染引起的皮肤癌前病变如角化棘皮瘤、日光性角化病、溢脂性角化病的药物。根据本发明的一个方面，本发明提供了一种药物组合物。根据本发明的实施例，该药物组合物包含金荞麦提取物和吴茱萸提取物作为活性成分。根据本发明的实施例，优选金荞麦提取物和吴茱萸提取物的重量比例为I 6 1，更优选金荞麦提取物与吴茱萸提取物的重量比例为1.5 4 1，最优选金荞麦提取物与吴茱萸提取物的重量比例为2. 5 I。根据本发明的一个方面，本发明提供了一种药物组合物。根据本发明的实施例，该药物组合物包含金荞麦和吴茱萸。根据本发明的实施例，按提取物是药材经提取纯化得到的换算，优选金荞麦和吴茱萸的重量比例为0.28 1.67 I，更优选金荞麦提取物与吴茱萸提取物的重量比例为0.42 I. 12 1，最优选金荞麦与吴茱萸的重量比例为0.69 I。本发明的一个方面，提供了一种药物组合物，根据本发明的实施例，该药物组合物包括金荞麦提取物和吴茱萸提取物，其中，所述金荞麦提取物是醇提取物；所述吴茱萸提取物是醇提取物。利用该药物组合物，能够有效地治疗HPV感染引起的疾病，能够对HPV感染引起的宫颈糜烂、宫颈癌前病变、宫颈癌、女阴上皮内瘤变，扁平疣、寻常疣、掌跖疣、尖锐湿疣和免疫功能低下引起的传染性软疣及皮肤癌前病变如角化棘皮瘤、日光性角化病、溢脂 性角化病进行有效地治疗。另外，发明人发现，该药物组合物可以有效地抑制HPV E7基因(在本文中有时也简单称为“E7基因”)的表达。并且进一步发现利用该药物组合物还能够有效用于使宫颈癌前病变细胞向良性转化。此外，发明人惊奇地发现，该药物组合物能够治疗炎症。根据本发明的实施例，炎症的类型并不受特别限制。在本发明的实施例中，采用二甲苯处理的小鼠作为炎症的动物模型，证明了本发明药物组合物能够有效治疗炎症。二甲苯处理的小鼠是医药领域中公知认可的炎症的动物模型，关于其应用的具体实例，可以参见湖北中医学院学报，2005年第7卷第3期，31-33页(关于接触性皮炎)；辽宁中医杂志，2010年第37卷增刊，第227-230页(关于宫颈炎)；辽宁中医杂志，2009年第36卷第7期，第1193-1194页(关于肺炎)。广东药学院学报，2009年6月，25(3)，第295-298页(关于鼻炎)，在此通过参照将这些文献并入本文。根据本发明的实施例，本发明的药物组合物中金荞麦提取物与吴茱萸提取物优选的重量比例为1-6 I,优选重量比例为I. 5 4 I,最优选重量比例为2. 5 I。根据本发明的实施例，从金荞麦制备金荞麦提取物即金荞麦的醇提取物的方法，并不受特别限制。根据本发明的实施例，金荞麦提取物是通过下列步骤制备的将金荞麦进行加醇提取，以便获得金荞麦提取液；以及将金荞麦提取液进行纯化、干燥，以便获得金荞麦提取物。根据本发明的实施例，将金荞麦进行加醇提取可以进一步包括将金荞麦用8-12倍重量的30-60%乙醇，在50-70摄氏度下回流提取2_3次，每次0. 5-2小时，并合并提取液，以便获得金荞麦提取液，优选地，将金荞麦用8倍重量的50%乙醇，在60摄氏度下回流提取3次，每次I小时，并合并提取液，以便获得金荞麦提取液。根据本发明的实施例，将金荞麦提取液进行纯化、干燥可以进一步包括首先，将金荞麦提取液进行过滤，以便获得金荞麦提取液滤液。其次，利用大孔吸附树脂对金荞麦提取液滤液进行纯化，以便获得经过纯化的金荞麦提取液。根据本发明的实施例，大孔树脂的类型不受特别限制，根据本发明的一些示例，大孔树脂可以采用例如D101、DM-130、或者HPD-600大孔树脂。根据本发明的具体示例，利用非极性大孔吸附树脂对金荞麦提取液滤液进行纯化，可以进一步包括将金荞麦提取液滤液上样至DlOl大孔吸附树脂；使用除杂洗脱剂进行除杂；以及使用洗脱溶剂进行洗脱，以便获得经过纯化的金荞麦提取液。其中，所述金荞麦提取液滤液的上样浓度为
0.02-0. 20g/ml优选0. 08g/ml，其上样速度为0. 5-4树脂柱体积/小时优选2树脂柱体积/小时；除杂洗脱剂为水，其洗脱流速为3-6树脂柱体积/小时优选4树脂柱体积/小时；洗脱溶剂为60-90%乙醇优选70%乙醇，该洗脱溶剂的洗脱速度为1-3树脂柱体积/小时优选2树脂柱体积/小时。然后，将经过纯化的金荞麦提取液进行减压浓缩和真空干燥，以便获得金荞麦提取物，其中减压浓缩是在50-60摄氏度下进行的。根据本发明的实施例，减压浓缩采用60摄氏度减压浓缩。根据本发明的实施例，从吴茱萸制备吴茱萸提取物即吴茱萸的醇提取物的方法，并不受特别限制。根据本发明的实施例，吴茱萸提取物是通过下列步骤制备的将所述吴茱萸用8-12倍重量的pH值为2-4的盐酸乙醇，加热回流提取2-3次，每次1_2小时，合并提 取液，获得吴茱萸提取液。根据本发明的实施例，将吴茱萸进行加醇提取可以进一步包括将吴茱萸用10倍重量的pH值为3的盐酸乙醇，加热回流提取3次，每次I. 5小时，合并提取液，获得吴茱萸提取液。根据本发明的实施例，将吴茱萸提取液进行纯化、干燥可以进一步包括首先，将吴茱萸提取液进行过滤，获得吴茱萸提取液滤液。接下来，利用强酸性阳离子交换树脂对吴茱萸提取液滤液进行纯化，获得纯化后的吴茱萸提取液。最后，将纯化后的吴茱萸提取液进行干燥。根据本发明的实施例，利用强酸性阳离子交换树脂对吴茱萸提取液滤液进行纯化进一步包括首先，将吴茱萸提取物滤液减压浓缩，浓缩至50°C测相对密度为
1.15-1. 25，优选为I. 20，调整浓缩液pH值至2-3，静置，离心，上清液用强酸性阳离子交换树脂进行纯化。接着，使用除杂洗脱剂进行除杂。接下来，使用洗脱溶剂进行洗脱，以便获得经过纯化的吴茱萸提取液。根据本发明的实施例，所采用的强酸性阳离子交换树脂的类型并不受特别限制。根据本发明的实施例，可以采用的强酸性阳离子交换树脂为D001、732型、0011型、或D072，其中优选采用732型。根据本发明的具体示例，吴茱萸提取液滤液的上样流速可以为0. 5-1. 5树脂柱体积/小时，优选I树脂柱体积/小时。根据本发明的具体示例，可以采用的除杂洗脱剂为水，该洗脱剂的洗脱流速可以为1-3树脂柱体积/小时，优选2树脂柱体积/小时。根据本发明的具体示例，可以采用的洗脱溶剂为70% -90%乙醇，该洗脱溶剂的洗脱速度可以为1-3树脂柱体积/小时，优选采用80%乙醇作为洗脱溶剂并且洗脱速度为2树脂柱体积/小时。根据本发明的实施例，本发明的药物组合物可以进一步包括药学上可接受的辅料，从而可以使得药物组合物能够呈现适于给药的形式。优选本发明的药物组合物可以呈选自软膏剂、凝胶剂、栓剂、外用洗剂、片剂、颗粒剂、口服溶液、胶囊剂、内服膏剂、气雾剂或喷雾剂的至少一种的形式，根据本发明的具体示例，其中临床剂型优选为泡腾片、软膏、栓齐U、凝胶剂。由此，可以方便使得本发明的药物组合物适于为对象进行给药。进一步，本发明的药物组合物，是以有效量的金荞麦和吴茱萸为原料，加入药学上可接受的辅料，按照常规工艺，制成临床可接受的中药制剂，如软膏剂、凝胶剂、栓剂、外用洗剂、片剂、颗粒剂、口服溶液、胶囊剂、内服膏剂、气雾剂或喷雾剂。根据本发明的实施例，优选金荞麦和吴茱萸的重量比例为0.28 I. 67 1，更优选金荞麦与吴茱萸的重量比例为0.42 I. 12 1，最优选金荞麦与吴茱萸的重量比例为0. 69 I。进一步，本发明的药物组合物，是以有效量的金荞麦提取物和吴茱萸提取物为原料，加入药学上可接受的辅料，按照常规工艺，制成临床可接受的中药制剂，如软膏剂、凝胶剂、栓剂、外用洗剂、片剂、颗粒剂、口服溶液、胶囊剂、内服膏剂、气雾剂或喷雾剂。根据本发明的实施例，优选金荞麦提取物和吴茱萸提取物的重量比例为I 6 1，更优选金荞麦提取物与吴茱萸提取物的重量比例为I. 5 4 1，最优选金荞麦提取物与吴茱萸提取物的重量比例为2. 5 I。具体地，根据本发明实施例的药物组合物中的金荞麦提取物和吴茱萸提取物可以分别由以下方法制备。需要说明的是，在本文中使用的单位“目”，指的是颗粒粒度能够实现通过每平方英寸上具有所限定数目孔的筛子，本领域技术人员可以方便地通过公式目数X孔径(微米数)=15000，确定筛的孔径，从而可以确定以微米为单位的颗粒粒度。其中，金荞麦提取物的制备方法，步骤如下(I)备料将检测合格的金荞麦生药过40-60目筛粉碎，得金荞麦粉；(2)提取金荞麦粉用8-12倍量30% -60%的乙醇，50_70°C回流提取2_3次，每次0. 5-2小时。提取液合并过滤，60°C减压浓缩至无醇味，加药材重量0. 5-1. 5倍量的水溶解后，抽滤，备用；(3)纯化滤液用已处理合格的大孔吸附树脂分离纯化，上样浓度选择
0.02-0. 20g/ml，上样流速为0. 5-4树脂柱体积/小时，吸附4小时后，先用4_8树脂柱体积的水洗脱除杂，洗脱流速为3-6柱体积/小时，再用60% -90%的乙醇洗脱6-10个柱体积，洗脱流速为1-3柱体积/小时，回收乙醇洗脱部分，50-60°C减压浓缩至干，真空干燥，粉碎，得红棕色粉末即金荞麦提取物。其中，在步骤(3)中，大孔树脂吸附能力的大小除取决于比表面积外，还与吸附质的分子量和构型有关，只有当孔径对于吸附质足够大时，比表面积才能充分发挥作用。因此，需要综合考虑比表面积和孔径大小不同的大孔树脂分离效果。有大量不同类型的大孔树脂可以从市售获得，从中可以优选出适合金荞麦多酚类物质提取纯化的特定类型。本发明人进行了艰苦的研究，进行对多种不同型号大孔树脂的研究，其中D101、DM-130、HPD-600可以获得显著良好的纯化效果。吴茱萸提取物的制备方法，步骤如下(I)备料将检测合格的吴茱萸生药粉碎，过40-60目筛，得吴茱萸粉碎料；(2)提取加入吴茱萸粉碎料总量8-12倍量的pH值为2_4的盐酸乙醇作为提取溶剂，加热回流提取2-3次，每次1-2小时，过滤，合并滤液，浓缩至50°C测相对密度为
1.15-1. 25，放冷，得浓缩液，调整浓缩液pH值至2-3，静置，过滤，备用。(3)纯化取与药液等体积量的树脂装柱，径高比为I : 10，药液pH值1-3，上样流速0. 5-1. 5树脂柱体积/小时；上样完毕，吸附1-3小时，用6-9倍体积水，洗至流出液无颜色，洗脱流速为1-3倍树脂体积/小时；收集70% -90%乙醇洗出液至生物碱检查呈阴性(流出液滴加10%硅钨酸无沉淀)，洗脱流速为1-3倍树脂体积/小时，回收乙醇，减压浓缩，真空干燥后，粉碎，得棕色粉末。其中，在步骤(3)中，吴茱萸的主要成分是吲哚类生物碱，碱性较弱，可以采用强、酸性阳离子交换树脂。交联度大的离子交换树脂，交换容量大，但交联网孔小，不利于大离子的进入；交联度小的树脂，交换容量小，但交联网孔大，易于离子的扩散和交换，因此，需要综合考虑交联度不同的强酸性阳离子交换树脂的交换能力。有大量不同类型的阳离子交换树脂可以从市售获得，从中可以优选出适合吴茱萸总生物碱纯化的特定类型。本发明人进行了多种强酸性阳离子交换树脂的研究，型号为D001、732型、OOll型、D072的树脂均获得良好的纯化效果。将金荞麦提 取物和吴茱萸提取物混合，并加入药学上可接受的辅料，按照常规工艺，制成临床可接受的中药制剂，如制成软膏剂、凝胶剂、栓剂、泡腾片、外用洗剂、片剂、颗粒剂、口服溶液、胶囊剂、内服膏剂、气雾剂或喷雾剂。本发明所述组合物优选的制备工艺如下金荞麦提取物的制备方法，优选步骤如下(I)备料将检测合格的金荞麦生药过50目筛粉碎，得金荞麦粉；(2)提取金荞麦粉用8倍量50%的乙醇，60°C回流提取3次，每次I小时。提取液合并过滤，60°C减压浓缩至无醇味，加药材重量I倍量的水溶解后，抽滤，备用；(3)纯化滤液用已处理合格的DlOl大孔树脂分离纯化，上样浓度选择0. 08g/ml,上样流速为2树脂柱体积/小时，吸附4小时后，先用6树脂柱体积的水洗脱除杂，洗脱流速为4树脂柱体积/小时，再用70%的乙醇洗脱8树脂柱体积，洗脱流速为2树脂柱体积/小时，回收乙醇洗脱部分，60°C减压浓缩至干，真空干燥，粉碎，得红棕色粉末。吴茱萸提取物的制备方法，优选步骤如下(I)备料将检测合格的吴茱萸生药粉碎，过50目筛，得吴茱萸粉碎料；(2)提取加入吴茱萸粉碎料总量10倍量的pH值为3的盐酸乙醇作为提取溶剂，加热回流提取3次，每次I. 5小时，过滤，合并滤液，浓缩至50°C测相对密度为I. 20，放冷，得浓缩液，调整浓缩液PH值至3，静置，过滤，滤液作为样品纯化备用溶液；(3)纯化取与药液等体积量的732型强酸性阳离子交换树脂装柱，径高比为I 10，药液pH值2，上样流速I树脂体积/小时；上样完毕，吸附2小时，用8倍体积水，洗至流出液无颜色，洗脱流速为2倍树脂体积/小时；收集80%乙醇洗出液至生物碱检查呈阴性(流出液滴加10%硅钨酸无沉淀)，洗脱流速为2倍树脂体积/小时，回收乙醇，减压浓缩，真空干燥后，粉碎，得棕色粉末。将金荞麦提取物和吴茱萸提取物混合，并且加入药学上可接受的辅料，按照常规工艺，制成临床可接受的中药制剂，如制成软膏剂、凝胶剂、栓剂、泡腾片、外用洗剂、片剂、颗粒剂、口服溶液、胶囊剂、内服膏剂、气雾剂或喷雾剂。根据本发明的实施例，优选金荞麦提取物和吴茱萸提取物的重量比例为I 6 1，更优选金荞麦提取物与吴茱萸提取物的重量比例为I. 5 4 1，最优选金荞麦提取物与吴茱萸提取物的重量比例为2. 5 I。针对不同的剂型及适应症，本发明制剂优选的剂型为软膏剂、栓剂、凝胶剂、泡腾片。本发明的技术方案所优选的剂型之一为软膏剂，由金荞麦提取物和吴茱萸提取物作为活性成分，其他成分为药用软膏基质辅料。其中辅料可为凡士林、羊毛脂、液体石蜡、石蜡、硬脂酸镁、蜂蜡、肉豆蘧酸异丙酯等软膏基质。
金荞麦吴茱萸软膏的制备方法可以如下取白凡士林、蜂蜡、十八醇、单硬脂酸丙二醇酯置于70°C水浴中熔化，将处方量的金荞麦提取物和吴茱萸提取物(过100目筛)和肉豆蘧酸异丙酯混合，搅拌均匀，必要时可置于研钵中研磨均匀，然后缓慢加入其他已熔化好的基质中，边加边搅拌，待完全均匀后，停止加热，继续搅拌至室温，即得。在上述金荞麦吴茱萸组合物制备方法中，以总重量为IOOg计，优选的制备方法包括取白凡士林10 40g、蜂腊5 20g、十八醇0. 5 10g、单硬脂酸丙二醇酯I 5g置于70°C水浴中熔化，将处方量的金荞麦提取物3. 5 14g (过100目筛)、吴茱萸提取物I. 5g 6g(过100目筛)和肉豆蘧酸异丙酯20 40g混合，搅拌均匀，必要时可置于研钵中研磨均匀，然后缓慢加入其他已熔化好的基质中，边加边搅拌，待完全均匀后，停止加热，继续搅拌至室温，即得。在上述金荞麦吴茱萸组合物制备方法中，以总重量为IOOg计，优选的制备方法包 括取白凡士林30g、蜂腊10g、十八醇5g、单硬脂酸丙二醇酯5g置于70°C水浴中熔化,将处方量的金荞麦提取物9g(过100目筛)、吴茱萸提取物4. 5g(过100目筛)和肉豆蘧酸异丙酯35g混合，搅拌均匀，必要时可置于研钵中研磨均匀，然后缓慢加入其他已熔化好的基质中，边加边搅拌，待完全均匀后，停止加热，继续搅拌至室温，即得。以有效量的金荞麦和吴茱萸提取物作为原料，通过加入药学上可接受的辅料，按照常规工艺，还可以制成其他临床可接受的中药制剂，如制成凝胶剂、栓剂、泡腾片、外用洗齐U、片剂、颗粒剂、口服溶液、胶囊剂、内服膏剂、气雾剂或喷雾剂。.发明人发现，与现有技术相比，根据本发明实施例的由药材提取得到的药物复方制剂，采用了两味中药的新型提取方法，得到的提取物有效成分含量高，使得本发明的制剂易于制备并使制剂质量显著得到提高。根据本发明实施例的药物组合物具有易于实施、实施效果好、提取物纯度高、制剂制备容易、质量可控的特点。药效学试验表明根据本发明的实施例的药物组合物对抗二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有显著性抑制作用，表明其具有显著抗炎作用，并且组合物的抗炎作用明显高于单独使用其中一种的效果。根据本发明的实施例的药物组合物对HPV-DNA有明显的破坏作用，无论是单独还是组合其抗HPV病毒作用均要强于200 u M阿昔洛韦，其组合相比单独一种药物对于HPV病毒有更强的杀灭作用。与阳性对照药阿昔洛韦相比，根据本发明的实施例的药物组合物对HPVE7癌基因表达的抑制作用非常明显，进一步表明该组合物可用于治疗HPV感染引起的疾病，如宫颈糜烂、宫颈癌前病变、宫颈癌等宫颈疾病；女阴上皮内瘤变；如扁平疣、寻常疣、掌跖疣、尖锐湿疣和免疫功能低下引起的传染性软疣等疣病；以及如角化棘皮瘤、日光性角化病、溢脂性角化病等皮肤癌前病变的药物。金荞麦吴茱萸提取物的组合配比试验显示，当金荞麦提取物和吴茱萸提取物比例在7 3时，对HPVE7基因的抑制作用最为明显，表明在此配比下对于治疗HPV感染引起的疾病具有最佳疗效。根据本发明的实施例的药物组合物对宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制凋亡作用结果表明，金荞麦吴茱萸组合物可显著抑制宫颈癌Hela细胞的体外增殖，且药物对细胞的抑制效应随着培养时间的延长和药物浓度的增加而增加。流式细胞仪检测表明，根据本发明的实施例的药物组合物处理后人宫颈癌HeLa细胞凋亡率明显增高，并且具有明显的时间和药物浓度依赖。
根据本发明的实施例的药物组合物对宫颈癌前病变(CIN)小鼠宫颈组织PCNA、EGFR和bcl-2表达的影响试验表明，根据本发明的实施例的药物组合物通过抑制增殖因子PCNA, EGFR和bcl-2的表达而起到抑制宫颈上皮异型细胞增生作用，与模型组相比具有显著差异，提示根据本发明的实施例的药物组合物对于治疗宫颈癌前病变的极大潜力。组合物刺激性试验表明，低剂量和正常剂量多次连续给药对家兔完整皮肤和破损皮肤无刺激性，高剂量组对家兔破损皮肤有轻微刺激性，停药后刺激反应很快消失，表明根据本发明的实施例的药物组合物不会对药物制剂的正常使用造成影响，即使在高剂量下对家兔皮肤的刺激反应是轻微的，可逆的。本发明进行的急性毒性试验表明金荞麦提取物、吴茱萸提取物及其二者组合物的小鼠灌胃给药剂量相当于成人日正常给药剂量500倍的条件下，仅出现轻微体征反应，而且只持续了短短两天后即恢复正常，解剖主要脏器未见病变，表明该组合药物使用安全，可以安全有效地治疗HPV感染引起的疾病。发明人进一步发现，应用本发明方法制备得到的药物组合物对于同是由于HPV感染引起的宫颈疾病如宫颈糜烂、宫颈癌前病变、宫颈癌；由HPV感染引起的女阴上皮内瘤变；以及由HPV感染引起的疣病，如扁平疣、寻常疣、掌跖疣、尖锐湿疣和免疫功能低下引起的传染性软疣；以及由HPV感染引起的皮肤癌前病变如角化棘皮瘤、日光性角化病、溢脂性角化病均具有非常好的疗效，安全性高。同时采用本发明制备方法得到的药物有效成分含量高，使得本发明的制剂易于制备并使制剂的工艺、质量可控性大大提高，同时工艺简单，无污染，工业化可操作性强。本发明所述的药物或药物组合物可单独应用于患者，还可以与手术、物理治疗联合使用。给药的剂量一般由医师根据患者的具体情况(如年龄、性别、患病时间、患处病变程度、身体状况等)确定。需要说明的是，根据本发明实施例的金荞麦提取物和吴茱萸提取物的提取纯化工艺是经过大量试验摸索得出，尤其是对可能影响吴茱萸生物碱提取的关键点进行了控制，根据吴茱萸所含化学成分，吴茱萸所含生物碱为吲哚类弱碱性生物碱，用酸性醇溶液提高生物碱类物质的提取得率，并在酸性水溶条件下除去大部分杂质，减少后续去杂工序，732型强酸性阳离子交换树脂进一步去杂。工艺简单易操作，所提取生物碱含量高。由此，根据本发明的又一方面，本发明提供了根据本发明实施例的药物组合物在制备药物中的用途，该药物可以用于抑制HPV E7基因的表达。此外，发明人惊奇地发现，本发明的药物能够用于治疗炎症。根据本发明的一些具体示例，本发明的药物能够用于治疗由HPV感染引起的宫颈疾病、女阴上皮内瘤变、疣病以及皮肤癌前病变。根据本发明的一个实施例，本发明的药物能够用于治疗或预防宫颈癌或宫颈癌前病变。根据本发明的另一个实施例，本发明的药物能够用于治疗或预防尖锐湿疣。具体地，本发明的药物能够用于由HPV感染引起的，如宫颈糜烂、宫颈癌前病变、宫颈癌等宫颈疾病；由HPV感染引起的女阴上皮内瘤变；以及由HPV感染引起的如扁平疣、寻常疣、掌跖疣、尖锐湿疣和免疫功能低下引起的传染性软疣等疣病；以及由HPV感染引起的，如角化棘皮瘤、日光性角化病、溢脂性角化病等皮肤癌前病变。
根据本发明的再一方面，本发明提供了一种制备药物的方法。根据本发明的实施例，该方法包括下列步骤制备金荞麦提取物；制备吴茱萸提取物；以及将金荞麦提取物和吴茱萸提取物按照预定的重量比率进行混合，以便得到药物，其中，制备金荞麦提取物进一步包括下列步骤将金荞麦进行加醇提取，以便获得金荞麦提取液；以及将金荞麦提取液进行纯化、干燥，以便获得金荞麦提取物。制备吴茱萸提取物进一步包括下列步骤将吴茱萸进行加醇提取，以便获得吴茱萸提取液；以及将吴茱萸提取液进行纯化、干燥，以便获得吴茱萸提取物。关于金荞麦提取物和吴茱萸提取物的制备方法，前面已经进行了详细描述，不再赘述。利用上述制备药物的方法所得到的药物，能够有效地治疗和预防HPV感染引起的疾病，能够对感染HPV的患者进行有效地治疗。根据本发明的实施例，本发明制备的药物可以用于抑制HPV E7基因的表达。此外，发明人惊奇地发现，本发明的药物能够用于治疗炎症。根据本发明的一些具体示例，本发明的药物能够用于治疗由HPV感染引起的宫颈疾病、女阴上皮内瘤变、疣病以及皮肤癌前病变。根据本发明的一个实施例，本发明的药物能够用于治疗或预防宫颈癌或宫颈癌前病变。根据本发明的另一个实施例，本发明的药物能够用于治疗或预防尖锐湿疣。具体地，本发明 的药物能够用于由HPV感染引起的，如宫颈糜烂、宫颈癌前病变、宫颈癌等宫颈疾病；由HPV感染引起的女阴上皮内瘤变；以及由HPV感染引起的如扁平疣、寻常疣、掌跖疣、尖锐湿疣和免疫功能低下引起的传染性软疣等疣病；以及由HPV感染引起的，如角化棘皮瘤、日光性角化病、溢脂性角化病等皮肤癌前病变。根据本发明的又一方面，本发明还提供了一种药物，其是通过上述制备药物的方法制备的。如前所述，利用该药物，能够有效地治疗和预防HPV感染引起的疾病，能够对感染HPV的患者进行有效地治疗。另外，发明人发现，该药物还可以有效地抑制E7基因的表达。此外，发明人惊奇地发现，该药物能够治疗炎症。根据本发明的另一方面，本发明还提供了一种对根据本发明实施例的药物组合物或药物进行检测的方法。根据本发明的实施例，该方法包括确定药物组合物或药物中的有效成分含量；以及将该有效成分含量与预定的阈值进行比较。在本文中所使用的术语“有效成分”是指这样一种化合物，该化合物的含量可以有效地反映药物组合物或者药物的有效性。根据本发明的一个实施例，有效成分为选自表儿茶素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的至少一种。利用根据本发明实施例的对本发明的药物组合物或药物进行检测的方法，能够有效地对药物组合物或药物进行检测，并且检测灵敏度、准确性高，稳定性好。根据本发明的实施例，在该方法中，针对金荞麦提取物，其有效成分为表儿茶素，阈值为至少0. 57mg。根据本发明的实施例，在该方法中，针对吴茱萸提取物，其有效成分为吴茱萸碱和吴茱萸次碱，阈值为至少4. 7mg。根据本发明的实施例，在该方法中，当有效成分为表儿茶素时，确定药物组合物或药物中的有效成分含量可以进一步包括将药物组合物或药物用由氯仿、甲醇和冰醋酸组成的提取剂进行超声提取；将提取液挥发干燥，并用甲醇溶解残渣，以便获得含有表儿茶素的甲醇溶液；以及通过高效液相色谱分析，确定该含有表儿茶素的甲醇溶液中的表儿茶素含量。由此，能够方便有效地确定药物组合物或药物中的表儿茶素含量。根据本发明的实施例，在该方法中，当有效成分为吴茱萸碱和吴茱萸次碱时，确定药物组合物或药物中的有效成分含量进一步包括将药物组合物或药物用由氯仿、甲醇和氨水组成的提取剂进行超声提取；将提取液挥发干燥，并用甲醇溶解残渣，以便获得含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的甲醇溶液；以及通过高效液相色谱分析，确定所述含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的甲醇溶液中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的总含量。根据本发明的具体实施例，对本发明的药物组合物或药物进行检测的方法可以包括如下(I)取本药物组合物制剂0. 5g，加无水乙醇10ml，水浴加热至熔化，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取金荞麦对照品2g,加无水乙醇20ml,超声提取60分钟，过滤，滤液浓缩至5ml，作为对照品溶液。吸取供试品滤液20 u I点于硅胶G薄层板上，吸取10 ii I对照品溶液点于同一娃胶G薄层板上,经展开,取出，晾干。展开剂三氯甲烷-甲醇-乙酸(13 4 2. 5)
显色剂喷以5%的香草醛-浓硫酸显色剂，105°C加热显色至斑点清晰结论在供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点。(2)取本药物组合物制剂0. 5g，加无水乙醇10ml，水浴加热至熔化，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取吴茱萸碱对照品、吴茱萸次碱对照品，加无水乙醇分别制成每Iml含0. 2mg和I. 5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品滤液20 U I点于硅胶G薄层板上，吸取IOiU对照品点于同一硅胶G薄层板上，经展开，取出，晾干。展开剂以氯仿甲醇氨水饱和(10 : I : 0. 5)显色剂置紫外光灯(365nm)下检视。结论在供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点。(3)表儿茶素的含量测定分别制备供试品溶液和对照品溶液，用高效液相色谱法测定；对照品为表儿茶素；色谱条件与系统适用性试验5 ii m, 250mmX 4. 6mm, Dikma C18色谱柱,流动相乙腈-0. I %柠檬酸水溶液(13 87)，流速lml/min，检测波长279nm，柱温25°C，理论塔板数按表儿茶素计算不低于5000，表儿茶素峰与相近峰的分离度R大于I. 5。其中对照品溶液的制备精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24小时的表儿茶素对照品适量，加甲醇制成每Iml含241. g的对照品溶液。其中供试品溶液制备称取本药物组合物制剂约0. 2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入25ml (氯仿-甲醇I 5. 5)和0.5ml冰乙酸，密塞，称定重量，超声提取45min，放冷，摇匀，再称定重量，甲醇补足减失的重量，过滤，取滤液5ml，挥干，残渣加适量甲醇超声溶解，转溶至IOml量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，过0. 22 滤膜，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10iU，注入液相色谱仪，测定，即得。药物组合物含金荞麦以表儿茶素(C15H14O6)计，每I克不得少于0. 57mg。(4)吴茱萸碱、吴茱萸次碱的含量测定分别制备供试品溶液和对照品溶液，用高效液相色谱法测定；对照品为吴茱萸碱、吴茱萸次碱；色谱条件与系统适用性试验以Nucleosil 5C18柱(250mmX 4. 6mm, 5 y m,Phenamenex,USA)为色谱柱,流动相乙腈-甲醇-磷酸(73 : 27 : 0. 3),流速lml/min,检测波长225nm，柱温为室温，理论板数按吴茱萸碱峰计算，应不低于3000。
其中对照品溶液制备精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24小时的吴茱萸碱、吴茱萸次碱对照品适量，加甲醇制成每Iml含吴茱萸碱129 u g、吴茱萸次碱145 y g的对照品溶液。其中供试品溶液制备称取本药物组合物制剂约0. 2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入25ml氯仿-甲醇(4 I)和0.5ml氨水，密塞，称定重量，超声提取45min，放冷，摇匀，再称定重量，氯仿补足减失的重量，过滤，取滤液5ml，挥干，残渣加适量甲醇超声溶解，转溶至IOml量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，过0. 22 y m滤膜，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10iU，注入液相色谱仪，测定，即得。药物组合物含吴茱萸以吴茱萸碱(C19H17N3O)和吴茱萸次碱(C18H13N3O)的总量计，每I克不得少于4. Img0根据本发明的实施例，HPLC (高效液相色谱)方法灵敏度高，准确性高，稳定性好，优于其他测定方法，也不同于绝大多数中药只对有效部位群进行控制而实际可控性差的现 状。为了便于理解，以下将通过具体实施例对本发明进行描述。需要特别指出的是，这些描述仅仅是示例性的描述，并不构成对本发明范围的限制。
具体实施例方式下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例I金荞麦提取工艺过程将金荞麦生药粉碎，过50目筛，得金荞麦粗粉料；取2kg金荞麦粗粉料加入10倍量(重量比，下同)的50%的乙醇溶液中，60°C加热回流2次，每次I. 5h，合并滤液，过滤，滤液60°C减压浓缩至无醇味后，加适量2. Ikg水溶解后，抽滤，备用。取预处理过的D-IOl大孔树脂装柱，药液上样流速为2树脂柱体积/小时，吸附4小时，先用6个柱体积的水洗脱除杂，除杂流速为4树脂柱体积/小时，再用70%乙醇洗脱8个柱体积，洗脱流速为2树脂柱体积/小时，回收乙醇洗脱部分，60°C减压浓缩至干，真空干燥，粉碎，得180g金荞麦提取物。实施例2吴茱萸提取工艺过程将吴茱萸生药粉碎，过50目筛，得吴茱萸粗粉料df6kg吴茱萸粗粉加入10倍量的pH值为3的盐酸乙醇(醇浓度为80%)溶液，加热回流3次，每次I. 5h，过滤，合并滤液，浓缩至50°C测相对密度为I. 20，放冷，得浓缩液，调整浓缩液pH值至2，静置，离心，得上清液4000ml，备用。取4000ml的732强酸型阳离子交换树脂，装柱，径高比约为I : 10，药液上柱吸附流速I树脂柱体积/小时，上样完毕，吸附2小时，用8倍体积水，洗至流出液无颜色，洗脱流速为2树脂柱体积/小时；收集80%乙醇洗出液至生物碱检查呈阴性(流出液滴加10%硅钨酸无沉淀)，洗脱流速为2树脂柱体积/小时，回收乙醇，减压浓缩，真空干燥后，得吴茱萸提取物150g。以下是具体试验证明本发明药物组合物效果的实施例实施例3比较本发明药物组合物与两种药物成分单独使用时的抗炎效果—、动物及材料(一)动物
I、种属昆明小鼠，由武汉大学医学院实验动物中心提供，动物合格证号19-013 ；2、体重18-22g;3、性别雌雄各半；4、年龄成年健康；5、动物数60只。(二)受试物I、受试物金荞麦提取物(根据实施例I制备)、吴茱萸提取物(根据实施例2制 备)、将金荞麦提取物(根据实施例I制备)和吴茱萸提取物(根据实施例2制备)按I : I的重量比均匀混合制备成的药物组合物；以阿司匹林为阳性对照药。2、含量低、中、高三个提取物组合物含量分别为25mg/ml、50mg/ml、100mg/ml，单独药物组(即仅金荞麦体提取物或者仅吴茱萸提取物)含量为50mg/ml。(三)给药途径将用0. 5% CMC-Na溶解的药物直接涂抹于受试小鼠的耳朵。二、试验方法将动物分为6组，每组昆明小鼠10只，共60只。一组为空白对照组(给不含药物的0.5% CMC-Na)，五组为试验组(三个高中低不同剂量组、两个单独药物组)。用二甲苯50微升/只，涂于小鼠左耳处致炎，30分钟后右耳再分别涂以不含药物的空白基质，高中低3个剂量本发明制剂、以及2个单独药物制剂，给药量为0. 2ml/10g。隔2小时后脱颈椎处死，剪下每只小鼠左右两耳廓，用直径8_打孔器在双耳对称处取下两耳片，用分析天平称重，以右耳减去左耳片重为右耳肿胀度，分别计算肿胀抑制率，各药物组与对照组比较，结果见表I :表I各组药物对二甲苯诱致鼠耳廓的肿胀作用结果
权利要求
1.一种药物组合物，其特征在于，包括金荞麦提取物和吴茱萸提取物， 其中，所述金荞麦提取物是醇提取物，所述吴茱萸提取物是醇提取物。
2.根据权利要求I所述的药物组合物，其特征在于，所述金荞麦提取物是通过下列步骤制备的 将金荞麦进行加醇提取，以便获得金荞麦提取液；以及 将所述金荞麦提取液进行纯化、干燥，以便获得所述金荞麦提取物， 任选地，将金荞麦进行加醇提取进一步包括 将所述金荞麦用8-12倍重量的30-60%乙醇，在50-70摄氏度下回流提取2_3次，每次.0. 5-2小时，合并提取液，获得所述金荞麦提取液， 任选地，将金荞麦进行加醇提取进一步包括 将所述金荞麦用8倍重量的50%乙醇，在60摄氏度下回流提取3次，每次I小时，合并提取液，获得所述金荞麦提取液， 任选地，将所述金荞麦提取液进行纯化、干燥进一步包括 将所述金荞麦提取液进行过滤，获得金荞麦提取液滤液； 利用大孔吸附树脂对所述金荞麦提取液滤液进行纯化，获得纯化后的金荞麦提取液；以及 将所述纯化后的金荞麦提取液进行减压浓缩和真空干燥， 任选地，利用大孔吸附树脂对所述金荞麦提取液滤液进行纯化进一步包括 将所述金荞麦提取物滤液减压浓缩，除醇，用大孔吸附树脂洗脱； 使用除杂洗脱剂进行除杂；以及 使用洗脱溶剂进行洗脱，以便获得所述经过纯化的金荞麦提取液， 其中， 任选地，所述减压浓缩采用60摄氏度减压浓缩， 任选地，大孔树脂采用选自D101、DM-130和HPD-600的至少一种， 任选地，所述金荞麦提取液滤液的上样浓度为0. 02-0. 20g/ml，优选为0. 08g/ml，所述金荞麦提取液滤液的上样流速为0. 5-4树脂柱体积/小时，优选2树脂柱体积/小时， 任选地，所述除杂洗脱剂为水，所述洗脱剂的洗脱流速为3-6树脂柱体积/小时，优选4树脂柱体积/小时， 任选地，所述洗脱溶剂为60-90%乙醇，所述洗脱溶剂的洗脱速度为1-3柱体积/小时，优选采用70%乙醇洗脱溶剂的洗脱速度为2柱体积/小时。
3.根据权利要求I所述的药物组合物，其特征在于，所述吴茱萸提取物是通过下列步骤制备的 将吴茱萸进行加醇提取，以便获得吴茱萸提取液；以及 将所述吴茱萸提取液进行纯化、干燥，以便获得所述吴茱萸提取物， 任选地，将吴茱萸进行加醇提取进一步包括 将所述吴茱萸用8-12倍重量的pH值为2-4的盐酸乙醇，加热回流提取2-3次，每次1-2小时，合并提取液，获得所述吴茱萸提取液， 任选地，将吴茱萸进行加醇提取进一步包括 将所述吴茱萸用10倍重量的pH值为3的盐酸乙醇，加热回流提取3次，每次I. 5小时，合并提取液，获得所述吴茱萸提取液， 任选地，将所述吴茱萸提取液进行纯化、干燥进一步包括 将所述吴茱萸提取液进行过滤，获得吴茱萸提取液滤液； 利用强酸性阳离子交换树脂对所述吴茱萸提取液滤液进行纯化，获得纯化后的吴茱萸提取液；以及 将所述纯化后的吴茱萸提取液进行减压浓缩和真空干燥， 任选地，利用强酸性阳离子交换树脂对所述吴茱萸提取液滤液进行纯化进一步包括将所述吴茱萸提取物滤液减压浓缩，调整浓缩液PH值至1-3，静置，离心，上清液用强酸性阳离子交换树脂纯化； 使用除杂洗脱剂进行除杂；以及 使用洗脱溶剂进行洗脱，以便获得所述经过纯化的吴茱萸提取液， 其中， 任选地，所述强酸性阳离子交换树脂，优选采用选自D001、732型、OOll型和D072的至少一种，更优选采用732型， 任选地，所述吴茱萸提取液滤液浓缩至50°C相对密度为I. 15-1. 25，优选为I. 20，所述吴茱萸提取液滤液的上样流速为0. 5-1. 5树脂柱体积/小时，优选I树脂柱体积/小时，任选地，所述除杂洗脱剂为水，所述洗脱剂的洗脱流速为1-3树脂柱体积/小时，优选2树脂柱体积/小时， 任选地，所述洗脱溶剂为70%-90%乙醇，所述洗脱溶剂的洗脱速度为1-3树脂柱体积/小时，优选采用80%乙醇洗脱溶剂的洗脱速度为2柱体积/小时， 任选地，所述金荞麦提取物与所述吴茱萸提取物的重量比例为1-6 1， 任选地，所述金荞麦提取物与所述吴茱萸提取物的重量比例为1.5-4 1， 任选地，所述金荞麦提取物与所述吴茱萸提取物的重量比率为2. 5 1， 任选地，所述药物组合物进一步包括药学上可接受的辅料， 任选地，所述药物组合物呈选自软膏剂、凝胶剂、栓剂、外用洗剂、片剂、颗粒剂、口服溶液、胶囊剂、内服膏剂、气雾剂或喷雾剂的至少一种的形式， 任选地，所述片剂为泡腾片， 任选地，所述药物组合物呈软膏的形式， 任选地，所述药物组合物呈栓剂的形式， 任选地，所述药物组合物呈凝胶剂的形式， 任选地，所述药物组合物用于抑制HPV E7基因的表达， 任选地，所述药物组合物用于治疗炎症， 任选地，所述药物组合物用于治疗由HPV感染引起的宫颈疾病、女阴上皮内瘤变、疣病以及皮肤癌前病变， 任选地，所述药物组合物用于治疗或预防宫颈癌或宫颈癌前病变， 任选地，所述药物组合物用于治疗或预防尖锐湿疣。
4.权利要求1-3任一项所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于抑制HPV E7基因的表达， 任选地，所述药物用于治疗炎症，任选地，所述药物用于治疗由HPV感染引起的宫颈疾病、女阴上皮内瘤变、疣病以及皮肤癌前病变， 任选地，所述药物用于治疗或预防宫颈癌或宫颈癌前病变， 任选地，所述药物用于治疗或预防尖锐湿疣。
5.一种制备药物的方法，其特征在于，包括下列步骤 其中，所述金荞麦提取物是醇提取物； 所述吴茱萸提取物是醇提取物； 将所述金荞麦提取物和所述吴茱萸提取物按照预定的重量比例进行混合，以便得到所述药物， 其中， 任选地，所述金荞麦提取物是通过下列步骤制备的 将金荞麦进行加醇提取，以便获得金荞麦提取液；以及 将所述金荞麦提取液进行纯化、干燥，以便获得所述金荞麦提取物， 所述吴茱萸提取物是通过下列步骤制备的 将吴茱萸进行加醇提取，以便获得吴茱萸提取液；以及 将所述吴茱萸提取液进行纯化、干燥，以便获得所述吴茱萸提取物。
任选地，所述金荞麦提取物与所述吴茱萸提取物的重量比例为1-6 1， 任选地，所述金荞麦提取物与所述吴茱萸提取物的重量比例为1.5-4 1， 任选地，所述金荞麦提取物与所述吴茱萸提取物的重量比例为2. 5 1， 任选地，将金荞麦进行加醇提取进一步包括 将所述金荞麦用8-12倍重量的30-60%乙醇，在50-70摄氏度下回流提取2_3次，每次0. 5-2小时，合并提取液，获得所述金荞麦提取液， 任选地，将金荞麦进行加醇提取进一步包括 将所述金荞麦用8倍重量的50%乙醇，在60摄氏度下回流提取3次，每次I小时，合并提取液，获得所述金荞麦提取液， 任选地，将所述金荞麦提取液进行纯化、干燥进一步包括 将所述金荞麦提取液进行过滤，获得金荞麦提取液滤液； 利用大孔吸附树脂对所述金荞麦提取液滤液进行纯化，获得纯化后的金荞麦提取液；以及 将所述纯化后的金荞麦提取液进行减压浓缩和真空干燥， 任选地，利用大孔吸附树脂对所述金荞麦提取液滤液进行纯化进一步包括 将所述金荞麦提取物滤液减压浓缩，除醇，用非极性大孔吸附树脂洗脱； 使用除杂洗脱剂进行除杂；以及 使用洗脱溶剂进行洗脱，以便获得所述经过纯化的金荞麦提取液， 其中， 任选地，所述减压浓缩采用60摄氏度减压浓缩，非极性大孔树脂采用D101、DM-130或HPD-600大孔树脂， 所述金荞麦提取液滤液的上样浓度为0. 02-0. 20g/ml优选为0. 08g/ml，所述金荞麦提取液滤液的上样流速为0. 5-4树脂柱体积/小时优选2树脂柱体积/小时，所述除杂洗脱剂为水，所述洗脱剂的洗脱流速为3-6柱体积/小时优选4柱体积/小时；以及 所述洗脱溶剂为60-90%乙醇，所述洗脱溶剂的洗脱速度为1-3树脂柱体积/小时优选采用70%乙醇洗脱溶剂的洗脱速度为2柱体积/小时， 任选地，将吴茱萸进行加醇提取进一步包括 将所述吴茱萸用8-12倍重量的pH值为2-4的盐酸乙醇，加热回流提取2-3次，每次1-2小时，合并提取液，获得所述吴茱萸提取液， 任选地，将吴茱萸进行加醇提取进一步包括 将所述吴茱萸用10倍重量的pH值为3的盐酸乙醇，加热回流提取3次，每次I. 5小时，合并提取液，获得所述吴茱萸提取液， 任选地，将所述吴茱萸提取液进行纯化、干燥进一步包括 将所述吴茱萸提取液进行过滤，获得吴茱萸提取液滤液； 利用强酸性阳离子交换树脂对所述吴茱萸提取液滤液进行纯化，获得纯化后的吴茱萸提取液；以及 将所述纯化后的吴茱萸提取液进行减压浓缩和真空干燥， 任选地，利用强酸性阳离子交换树脂对所述吴茱萸提取液滤液进行纯化进一步包括将所述吴茱萸提取物滤液减压浓缩，调整浓缩液PH值至2-3，静置，离心，上清液用强酸性阳离子交换树脂纯化； 使用除杂洗脱剂进行除杂；以及 使用洗脱溶剂进行洗脱，以便获得所述经过纯化的吴茱萸提取液， 其中， 所述强酸性阳离子交换树脂优选采用DOOl、732型、0011型D072，优选采用732型， 所述吴茱萸提取液滤液浓缩至50°C测相对密度为I. 15-1. 25，优选为I. 20，所述吴茱萸提取液滤液的上样流速为0. 5-1. 5柱体积/小时优选I柱体积/小时， 所述除杂洗脱剂为水，所述洗脱剂的洗脱流速为1-3柱体积/小时优选2柱体积/小时；以及 所述洗脱溶剂为70% -90%乙醇，所述洗脱溶剂的洗脱速度为1-3柱体积/小时优选采用80%乙醇洗脱溶剂的洗脱速度为2柱体积/小时， 任选地，进一步包括将该方法制备的药物制成选自软膏剂、凝胶剂、栓剂、外用洗剂、片齐U、颗粒剂、口服溶液、胶囊剂、内服膏剂、气雾剂或喷雾剂的至少一种的形式， 任选地，所述片剂为泡腾片， 任选地，所述药物呈软膏的形式， 任选地，所述药物呈栓剂的形式， 任选地，所述药物呈凝胶剂的形式， 任选地，所述药物用于抑制HPV E7基因的表达， 任选地，所述药物用于治疗炎症， 任选地，所述药物用于治疗由HPV感染引起的宫颈疾病、女阴上皮内瘤变、疣病以及皮肤癌前病变， 任选地，所述药物用于治疗或预防宫颈癌或宫颈癌前病变，任选地，所述药物用于治疗或预防尖锐湿疣。
6.一种药物，其是根据权利要求5所述的方法制备的。
7.一种对权利要求1-3任一项所述的药物组合物或权利要求6所述的药物进行检测的方法，其特征在于，包括 确定所述药物组合物或药物 中的有效成分含量；以及 将所述有效成分含量与预定的阈值进行比较， 其中， 所述金荞麦的有效成分为选自表儿茶素； 吴茱萸的有效成分为选自吴茱萸碱和/或吴茱萸次碱的至少一种， 任选地，针对金荞麦提取物，所述有效成分为表儿茶素，所述阈值为至少0. 57mg,任选地，针对吴茱萸提取物，所述有效成分为吴茱萸碱和吴茱萸次碱，所述总量的阈值至少4. 7mg, 任选地，当所述有效成分为表儿茶素时，确定所述药物组合物或药物中的有效成分含量进一步包括 将所述药物组合物或所述药物用由氯仿、甲醇和冰醋酸组成的提取剂进行超声提取；将提取液挥发干燥，并用甲醇溶解残渣，以便获得含有表儿茶素的甲醇溶液；以及通过高效液相色谱分析，确定所述含有表儿茶素的甲醇溶液中的表儿茶素含量，任选地，当所述有效成分为吴茱萸碱和吴茱萸次碱时，确定所述药物组合物或药物中的有效成分含量进一步包括 将所述药物组合物或所述药物用由氯仿、甲醇和氨水组成的提取剂进行超声提取；将提取液挥发干燥，并用甲醇溶解残渣，以便获得含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的甲醇溶液；以及 通过高效液相色谱分析，确定所述含有吴茱萸碱和吴茱萸次碱的甲醇溶液中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的总含量。
全文摘要
本发明涉及金荞麦与吴茱萸的药物组合物及其制备方法和质量检测方法。其中，药物组合物包括金荞麦提取物和吴茱萸提取物，金荞麦提取物是醇提取物，吴茱萸提取物是醇提取物。本发明的药物组合物可用来制备治疗HPV感染的药物。
文档编号A61P35/00GK102652773SQ20121008821
公开日2012年9月5日 申请日期2012年3月29日 优先权日2012年3月29日
发明者张思佳, 牟峰, 王俊, 陈顺钦, 黄伟, 黄璐 申请人:武汉华大基因科技有限公司, 武汉华大药业有限公司, 深圳华大基因科技有限公司