专利名称：一种甘草酸环状样二聚体介导靶向给药体及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明属于药品技术领域，具体是ー种甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药体(GN-Dimer)，同时，本发明还涉及制备该化合物的方法及其在药品中的应用。
背景技术：
甘草酸是甘草中最主要的活性成分，自然界的甘草酸有两种立体异构体(18 α -H,18 β -H)。18 β -甘草皂苷通常称为甘草酸，18 α -H通常称为异甘草酸或甘草酸优对映体(GFA)。构象分析表明，18 β-H与C = O上的羧基在同一平面，而18 α-H不在同一平面；由于位阻效应，18 α-H亲脂性大于前者，在体内易与受体蛋白结合，故具有很强的肝亲和性。GFA与天然甘草酸比较具有极性较低、吸收更好、体内分布较合理、肝脏靶向性和抗炎作用更强，对肾脏11 β -HSD的抑制能力更弱而显示低副作用等特点；因此，GFA用作肝靶向载体 既为活性成分又充当药物载体，具有独特优点，为此选择GFA作为药物载体具有临床意义。大量研究显示抗氧化剂可以改善肝纤维化，抑制脂质过氧化引发的胶原基因表达上调。N-こ酰半胱氨酸(NAC)是细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)的前体，能提高细胞内GSH的生物合成，并具有多途径抗生物氧化作用，能清除体内活性氧簇(reactive oxygenSpeCieS，R0S)。こ酰半胱氨酸镁(NAOMg)是NAC的结构改良，通过引入缺电子原子镁，与NAC形成稳定的盐。镁是生物膜组成部分，參与控制细胞的完整性和细胞的免疫功能稳定，又是ー些激酶活性需要的原子；因此镁原子有益作用不仅能改善NAC用药时的屛障(化学不稳定性、首过效应强、体内消除过快及NAC的不良反应等)；同时Mg2+具有防止肝纤维化患者出现缺镁的各种不良症状，提高NAC的抗肝纤维化作用。长其应用NAC或こ酰半胱氨酸镁均可能出现IgE超敏反应，使临床应用受到限制；而甘草酸优对映体虽具有抑制IgE超敏反应作用，但长其用药也有可能出现甲醛固酮增高症的副作用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供ー种甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药体，该化合物具有对肝部疾病治疗效果好、服用安全可靠特点。本发明的另一目的是提供该甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药体的制备方法，该方法具有エ艺过程简单、稳定，产品得率高的特点。本发明的目的还在于提供甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药体在治疗肝损伤、肝纤维化、肝硬化、肝癌、非酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝以及艾滋病疾病中的应用。本发明提供了以下技术方案ー种甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药体，其特征在于该给药体包括摩尔比为1:1-5的被载药和载药体，所述的被载药选用こ酰半胱氨酸、こ酰半胱氨酸镁、半胱氨酸或5-氟尿嘧啶中的任意ー种；所述载药体为甘草酸优对映体。甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药体的制备方法，包括以下步骤按照1:1-5的摩尔比折算后的重量比称取被载药和甘草酸优对映体，将被载药和甘草酸优对映体分别溶于一定量的溶媒中，然后混合前述溶液并搅拌，用冰醋酸调节PH，继续搅拌后过滤、减压蒸干溶媒和冰醋酸，即得目标产物。所述 溶媒为四氢呋喃，用量分别为被载药重量的15-35倍以及18 α甘草酸重量的3-6 倍。所述的甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药体应用于抗炎、抗氧化应激、治疗肝损伤、肝纤维化、肝硬化、肝癌、非酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝以及艾滋病的治疗。本发明的有益效果是经大量的药理、生化研究证明，本发明制备得到的甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药体在不同动物的肝毒剂引起的肝纤维化和肝硬化模型中，能明显阻止动物血清转氨酶的升高，抗脂质过氧化，减轻肝细胞脂肪变、炎症和坏死，其抗肝纤维化和肝硬化作用明显优于18 α甘草酸、こ酰半胱氨酸、水飞蓟宾葡甲胺(SM)和こ酰半胱氨酸镁，且化学性质稳定，不良反应降低。甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药体能发挥抗炎、抗氧化应激等作用，其应用领域不断拓宽，它对于人类肝损伤、肝纤维化和肝硬化治疗具有十分积极的现实意义。本发明所提供的制备方法还具有エ艺过程简单、稳定，产品收得率高、质量稳定的特点。本发明中所提到的こ酰半胱氨酸、半胱氨酸、四氢呋喃、冰醋酸均为药用原辅料，且均为外购得到，こ酰半胱氨酸镁和18 α甘草酸也外购获得。本发明中涉及的配比及其百分含量均以重量比计。
具体实施例方式本发明提供的甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药体，其中的载药体甘草酸优对映体具有很强的肝亲和性，并在极性溶剂中能形成环状样ニ聚体，有环状空洞结构，可将药物包在其中，形成肝靶向载体的特性。利用其特异性、可溶性优势，包裹或携帯药物进入肝组织，综合载药体和被载体的治疗优势，提高治疗药物的疗效，降低不良反应，同时发挥甘草酸良好的抗炎和抗氧应激的效果。被载药可以是こ酰半胱氨酸镁或こ酰半胱氨酸；由于甘草酸优对映体具有抑制こ酰半胱氨酸镁引起的IgE超敏反应作用，甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药体综合了こ酰半胱氨酸镁盐和甘草酸的治疗优势，具有靶向性，能更好地发挥甘草酸和こ酰半胱氨酸以及镁离子的治疗作用。以下通过具体实施例对本发明的技术方案作进ー步说明。在这些实施例中，除另有说明タト，所有百分含量均以重量比计。实施例I :按照こ酰半胱氨酸镁18α甘草酸=1:2的摩尔比折算后的重量比称取こ酰半胱氨酸镁盐35g和18 α甘草酸166g，将こ酰半胱氨酸镁盐溶于500g(即500ml)四氢呋喃中，18 α甘草酸溶于1000g(即1000ml)四氢呋喃中，混合溶液搅拌；接着用冰醋酸调节pH至
4.5^2. 5，继续搅拌30min，过滤后减压蒸干溶媒和冰醋酸，即得甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药载体。实施例2:按照こ酰半胱氨酸18 α甘草酸=1:5的摩尔比折算后的重量比称取こ酰半胱氨酸16. 3g和18 α甘草酸207. 5g，将こ酰半胱氨酸溶于700g(即7000ml)四氢呋喃中，18 α甘草酸溶于500g(即500ml)四氢呋喃中，混合溶液搅拌；接着用冰醋酸调节pH至4. 0^2.0,继续搅拌30min，过滤后减压蒸干溶媒和冰醋酸，即得甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药载体。实施例3:按照5-氟尿嘧啶甘草酸优对映体=1 2的摩尔比折算后的质量比称取5-氟尿嘧啶25. 8g和18 α甘草酸166g，将NAC溶于250g(即250ml)四氢呋喃中，18 α甘草酸溶于500g(即500ml)四氢呋喃中，混合溶液搅拌；接着用冰醋酸调节pH至5. (Γ2. O,继续搅拌30min，过滤后减压蒸干溶媒和冰醋酸，即得甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药载体。实施例4 按照半胱氨酸18α甘草酸=1:2的摩尔比折算后的质量比称取半胱氨酸13. 9g和18 α甘草酸166g，将半胱氨酸溶于500g(即500ml)四氢呋喃中，18 α甘草酸溶于IOOOg (即1000ml)四氢呋喃中，混合溶液搅拌；接着用冰醋酸调节pH至2. 8^3. 2，继续搅拌30min，过滤后减压蒸干溶媒和冰醋酸，即得甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药载体。以下通过具体药理实验对本发明提供的甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药体的疗效作进ー步说明。一、药理作用I.本制剂对四氯化碳致大鼠肝纤维化的治疗作用I. I实验试剂和器材I. I. I实验动物清洁级雄性SD大鼠150± 10g，由浙江省医学科学院实验动物中心提供。I. I. 2试剂四氯化碳(分析纯)、橄榄油、甲醛、Hyp、MDA、T-SOD指标试剂盒、TGF-β I、ALT、AST、TP、GLB、ALB、TbiI 试剂盒。I. I. 3实验设备Biofuge 28RS低温高速离心机、Leica2235轮转式切片机、日立7060全自动生化分析仪、Biofuge28RS低温高速离心机、01ympasB41显微镜、Zenyth340_st酶标仪(ANTHOS LAB tec，奥地利)。I. 2受试药物的配制取四氯化碳25mL，加橄榄油使溶液至IOOmL,混勻，作为实验用造模剂。I. 3本制剂对四氯化碳致大鼠肝纤维化的治疗作用I. 3. I动物分组大鼠145只随机分为两大组正常组15只、造模组130只。造模期间标准饲料，自由饮水进食。造模组以25%CC141ml · kg-1皮下注射SC，3t/Week，连续8周，正常对照组Iml · kg-Ι橄榄油皮下注射SC。第八周结束后随机在造模组中处死7只，取肝脏进行病理切片检查网格染色法，评定肝纤维化程度，造模结束后，对已成模的大鼠分成8组，GN-Dimer高、中、低组每组15只、SM组15只、NAC · Mg组15只、NAC组15只、模型组15只。GN-Dimer低、中、高组分别腹腔注射ipGN-Dimer 25mg · kg-1 · D-I、50mg · kg-1 · D_l、100mg · kg-1 · D-I, NAC · Mg 组腹腔注射 ip50mg · kg-1 · D-I, SM 组腹腔注射ip50mg *kg-l *D-1，模型组和正常对照组腹腔注射ip等体积的O. 9%生理盐水。给药治疗8周后，处死各组大鼠，取血和肝组织，測定相关指标。I. 3. 2肝组织指标测定MDA、S0D、Hyp指标测试按照试剂盒说明的方法进行处理，后酶标仪測定相应波长下的SOD值。I. 3. 3血清学指标测定取大鼠血液10ml，置于生化采血管中，静止30分钟，2000 X g离心10分钟，按照试剂盒说明书操作检测ALT、AST、TP、GLB、ALB、Tbil。I. 3. 4TGF-0 I指标测定根据试剂盒说明，取大鼠肝脏组织，4°C下高速分散，制成10%肝组织匀浆，2000Xg · min-ι离心10分钟，精密取上清液100 μ 1，Elisa法测定TGF-β I表达量。I. 3. 5肝纤维化病理检测取由4%多聚甲醛固定的大鼠肝组织，在进行常规脱水、石蜡包埋后，进行切片，VG染色，镜检，光镜下观察不同视野确定肝组织肝纤维化程度。I. 4数据统计 根据上述研究所得的甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药体(以下简称ニ聚体)抗肝纤维化作用指标数据，以SPSS 10. O进行整理分析，得出研究結果。I. 5 结果I. 5. I血清学指标的影响模型组大鼠血清学指标明显高于正常组大鼠和各治疗组大鼠，ニ聚体、NAC和水飞蓟宾葡甲胺对于大鼠肝纤维化治疗中，各项血清生化指标尤其是对于Tbil、ALT、AST有显著的复常作用提示其对于大鼠肝纤维化均有一定的治疗作用，其中二聚体中剂量给药组的指标显示其效果明显优于甘草酸优对映体、NAC · Mg和水飞蓟宾葡甲胺(P < O. 05)。具体指标数据结果见表I。表I各组肝纤维化ALT、AST和Tbil指标的影响(x土S)
组别[n l' ALT(U/L)Γ AST (U/L)Tbil (μ mo I/L) :
正常组15 40. 73±5.8683.07±7.410. 35±0. 14 ^
模型组15 131.83±11· 531 125.80± 17. 371 UeiCUe1 :
GN-Dimer 低 15 103. 21 ±9. 762131·09±10·47 0· 93±0· 2 3234 :
GN-Dimer 中 15 93·71±11·322111. 89± 10 . 532 0 ·91±0· 2 9234 :
GN-Dimer 高 15 83·07±7·562105.04±9· 8120.88±0· 25234 ^
NAC 组15 91·23±9·1423119.87± 11. 342 1.07±0· 222 '
NAC · Mg 组15 79. 54 ± 6. 32299. 08 ± 9 . 7 323O. 89 ± O. 182 '
GFA 组15 68.90±7. 512395.42±7.41230.98±0. 172 ^
SM 组[15 Ι:86·76±6·182 Γ 105. 38±9· 972I. 10±0· 362 :注I.与正常组比较，P < O. 01，2.与模型组比较，P < 0.01 ;3.与NAC组比较，P
<O. 05 ；4.与 NAC · Mg 组比较，P < O. 05 ;5·与 SM 组比较，P < O. 01。I. 5. 2肝纤维化蛋白类指标影响实验结果显示模型组TP值明显高于正常组大鼠和各治疗组大鼠，ALB和A/G值则低于正常组大鼠和各治疗组大鼠。由各项蛋白类指标可见，ニ聚体、NAC、NAC · Mg和水飞蓟宾葡甲胺均可降低TP和升高ALB和A/G值，其中与模型组和其它治疗组比较，ニ聚体高剂量能显著提高血清蛋白比A/G比例和降低TP值，提示ニ聚体高剂量在本研究中对肝纤维化治疗效果优于NAC、NAC · Mg和水飞蓟宾葡甲胺。具体指标数据结果见表2。表2各组肝纤维化TP、ALB和A/G的影响(x±s)
组别nTP(g/L)ALB (g/L)A/G
正常组I: 15 54. 19±2· 13 [ 34·81±1·95 Γ 1.80±0· 2权利要求
1.ー种甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药体，其特征在于该给药体包括摩尔比为1:1-5的被载药和载药体，所述的被载药选用こ酰半胱氨酸、こ酰半胱氨酸镁、半胱氨酸或5-氟尿嘧啶等中的任意ー种；所述载药体为甘草酸优对映体。
2.甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药体的制备方法，包括以下步骤按照1:1-5的摩尔比折算后的重量比称取被载药和甘草酸优对映体，将被载药和甘草酸优对映体分别溶于一定量的溶媒中，然后混合前述溶液并搅拌，用冰醋酸调节PH，继续搅拌后过滤、减压蒸干溶媒和冰醋酸，即得目标产物。
3.根据权利要求2所述的甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药体的制备方法，其特征在于所述溶媒为四氢呋喃，用量分别为被载药重量的15-35倍以及甘草酸优对映体重量的3-6 倍。
4.权利要求I所述的甘草酸环状样ニ聚体介导靶向给药体应用于抗炎、抗氧化应激、治疗肝损伤、肝纤维化、肝硬化、肝癌、非酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝以及艾滋病的治疗。
全文摘要
本发明涉及一种甘草酸环状样二聚体介导靶向给药体及其制备方法和应用。目的是提供的该给药体对肝部疾病治疗效果好，提供的制备方法具有工艺过程简单、产品得率高的特点，以及该给药体应用于疾病治疗。技术方案是一种甘草酸环状样二聚体介导靶向给药体，该给药体包括摩尔比为1:1-5的被载药和载药体，所述的被载药选用乙酰半胱氨酸、乙酰半胱氨酸镁、半胱氨酸或5-氟尿嘧啶中的任意一种；所述载药体为甘草酸优对映体。制备方法是，包括以下步骤按照1:1-5的摩尔比折算后的重量比称取被载药和甘草酸优对映体，然后分别溶于溶媒中，然后混合前述溶液并搅拌，用冰醋酸调节pH，继续搅拌后过滤、减压蒸干溶媒和冰醋酸，即得目标产物。
文档编号A61P35/00GK102716488SQ20121021160
公开日2012年10月10日 申请日期2012年6月21日 优先权日2012年6月21日
发明者席建军, 庄让笑, 方红英, 梁伟峰, 潘红英, 王福根, 邵益丹, 韦翊 申请人:杭州市第六人民医院