用于减少注射引起的皮肤反应的肾上腺素能受体激动剂和填充剂的可注射组合物的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种可注射组合物，其包括填充剂或肉毒杆菌毒素以及肾上腺素能受体激动剂，该组合物可以用于减轻、减小或避免由注射引起的皮肤反应，特别是发红、瘀斑、瘀伤、流血、红斑、水肿、坏死、溃疡、肿胀和/或炎症。
【专利说明】用于减少注射引起的皮肤反应的肾上腺素能受体激动剂和 填充剂的可注射组合物
【技术领域】
[0001] 本发明涉及外科手术及皮肤病学领域。
[0002] 本发明涉及一种可注射的组合物，其包括肾上腺素能受体激动剂（优选地为溴莫 尼定）和填充剂（优选地为透明质酸）。本发明用于预防和/或治疗由美容手术引起的表 面瘀伤及流血。
【背景技术】
[0003] 表面瘀伤及较小程度的流血是很多美容手术（包括皮下填充剂注射、肉毒杆菌毒 素注射及镭射磨皮）的常见结果，报告显示平均约占手术时间的三分之一。
[0004] 而抽脂术、丰胸术/胸部提升、面部拉皮以及腹壁整形术等外科手术中会出现更 严重的瘀伤。
[0005] 由于填充剂的皮下或皮内注射造成血管损伤或血管壁破裂而引起的瘀斑、瘀伤、 血液成分渗出会马上导致炎症、发红以及水肿，这些继发性即时反应的处理是大家尤其关 心的问题。
[0006] 尽管一般认为发红、皮肤红斑、瘀伤及流血不是大问题，但是大多数的医师会在手 术前提醒病人为这些可能发生的症状作好准备。特别地，医师们通常会注意不在手术前和 手术后使用阿司匹林或其它抗凝血药物，而是在手术后立即大量使用冰袋，同时常常使用 山金车（一种用于促进愈合的草药）。这种缺陷常常会让一些病人沮丧，尤其是那些进行美 容手术的病人。特别是对于瘀伤/流血的结果，医师们报告指出，病人们最关注的一个问题 是出现瘀伤时的停工期，当出现瘀伤时，病人们更愿意待在家里，而不是返回工作及参加社 交活动。
[0007] 因此，需要减轻美容或外科手术中（尤其是注射填充剂时）出现的瘀伤/流血。
[0008] 本发明经 申请人:证明，肾上腺素能受体激动剂与填充剂一起注射可以减少由于注 射引起的皮肤反应的发生。
【发明内容】
[0009] 本发明提供了一种由大量肾上腺素能受体激动剂（优选称为溴莫尼定的产品）和 填充剂或肉毒杆菌毒素（优选地为透明质酸）组成的组合物。所述组合物全身性给药于需 要的个体。
[0010] 本发明提供了大量的肾上腺素能受体激动剂（优选称为溴莫尼定的产品）与肉毒 杆菌毒素或填充剂（优选地为透明质酸）的结合在需要的个体中的使用。
[0011] 本发明提供了一种方法，用于减轻、减少或避免特别是美容手术中的瘀伤以及较 小程度地减轻、减少或避免流血，其通过给需要的个体提供包含皮肤填充剂（优选地为透 明质酸）以及大量的肾上腺素能受体激动剂（优选称为溴莫尼定的产品）实现。
[0012] 第一方面，本发明涉及一种组合物，其包括： -填充剂或肉毒杆菌毒素； -肾上腺素能受体激动剂。
[0013] 通过本发明的描述可以清楚地了解，本发明主要用于预防及治疗皮肤缺陷，特别 是那些由于皮肤老化（褶皱、皱纹、皮肤凹陷，……）或者皮肤损伤（疤痕，……）造成的 皮肤缺陷。
[0014] 在过去的几年里，皮肤缺陷的治疗已经获得巨大的关注。结果，人们提出了皮内或 皮下注射的化合物。
[0015] 作为首选，可以局部注射能够引起肌肉麻痹或收缩的肉毒杆菌毒素。
[0016] 或者在优选实施例中，可以注射填充剂。填充剂一般定义为能够填充皮肤组织的 生物材料。所述要求保护的可注射组合物也可以定义为"皮肤填充剂"（dermal filler)，该 组合物包含在水性介质中的所述填充剂,并表现出填充性质。
[0017] 在这种情况下，一些化合物如聚丙烯酰胺凝胶、聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA)颗粒或 硅酮都可以使用。
[0018] 最优选的化合物是可再吸收的分子，如透明质酸、胶原蛋白、藻酸盐、右旋糖酐、弹 性蛋白（elastine)或聚氨酯凝胶。
[0019] 透明质酸或透明质酸盐（hyaluronate)是一种广泛分布在结缔组织、上皮组织以 及神经组织中的不含硫的粘多糖。它是细胞外基质的主要成分之一。其显著有助于细胞增 殖及细胞迁移。它对皮肤含水量及皮肤弹性起重要作用。随着年龄增大，透明质酸的含量 及质量水平都不断下降，从而导致皮肤干燥和皱纹。
[0020] 透明质酸是一种天然形成的生物聚合物，它在水中会形成高粘度溶液。因此，它作 为一种药剂产品得到广泛应用。另外，由于未观察到任何免疫原性反应，该种化合物被认为 是非常安全的。到目前为止，只出现了极少不良事件。
[0021] 因此，有利地，填充剂为透明质酸或其药学上可接受的盐或衍生物，特别是其钠盐 或钾盐。透明质酸能够以不同的形式使用：它的盐、它的衍生物，如线性形式或交联的酯类 或酰胺类化合物。特别地，其分子量（一般在500kDa-5000kDa之间）及交联度取决于其应 用，特别是取决于需要填充的皱纹的深度。
[0022] 所述要求保护的组合物的第二个成分是肾上腺素能受体激动剂。已知肾上腺素能 受体激动剂能够绑定和激活肾上腺素能受体。
[0023] 本领域中众所周知的是，肾上腺素能受体包括α和β受体。二十世纪七十年代， 在α肾上腺素能受体中区分出α?和α2受体。同一年代，发现α2出现在血管平滑肌 上并显不出对血管收缩反应（vasoconstrictor response)的介导（"Subtypes offunct ional α丨-and a 2-adrenoceptors (功能性α丨和α 2肾上腺素能受体亚型）"JR Docherty ; European Journal of Pharmacology 361(1998) 1-15)。因此，表现出 α 肾上腺素能激动 性（a adrenergic agonism)特别是α 2肾上腺素能激动性的分子具有周围血管收缩活性。
[0024] 在要求保护的组合物中使用的激动剂可以指向α和/或β受体。不过，由于可 能存在副作用，最好不使用表现出β肾上腺素能激动性的分子。在本申请的余下部分中， 对β肾上腺素能受体不具有亲和力的分子将命名为"α肾上腺素能受体激动剂"。
[0025] 在α受体中，所述激动剂可以是α 1受体和α 2受体两者的激动剂，或者可以是 特别针对α 1或α 2受体的激动剂。优选地，选定的分子对α 2的亲和力比对α 1受体的 亲和力强，并且在本申请的余下部分中将通常被命名为" α 2肾上腺素能受体激动剂"。
[0026] 在优选实施例中，所述肾上腺素能受体激动剂为α 2肾上腺素能受体激动剂，优 选地为溴莫尼定。
[0027] α 2肾上腺素能受体的激动剂已经用于治疗很多问题，包括高血压、充血性心脏衰 竭、心绞痛、痉挛、青光眼、腹泻，以及抑制麻醉剂戒断症状（J. Ρ. Heible和R. R. Ruffolo， Therapeutic Applications of Agents Interacting with a-Adrenoceptors (与 a 肾上腺素能受体相互作用的因子的治疗应用），Progress in Basic and Clinical Pharmacology (《基础和临床药理学进展》），第8卷，180-206页，P. Lomax和E. S. Vesell Ed. , Karger, 1991) 〇
[0028] 尽管已有贴剂，但是肾上腺素能受体激动剂（如可乐定）主要采用口服。已知α 2 激动剂介导病人的中心及周围血管收缩。特别地，已知在受到寒冷或压力的刺激时，α 2肾 上腺素能受体激动剂会引起周边动脉的血管收缩。
[0029] 很多病人讲述了使用溴莫尼定来治疗眼睛问题及眼部疾病。在加拿大专利 CA2326690中，描述了仅在眼睛中局部使用该眼科药物来治疗眼部疾病。
[0030] 如上所述，本发明范围中最优选的化合物是（5-溴-喹喔啉-6-基）-(4,5_二 氢-IH-咪唑 _2_ 基）-胺（(5-Brom〇-quinoxalin_6-yl) - (4, 5-dihydr〇-lH-imidazol_2-y I)-amine)(-般称为溴莫尼定）及其药学上可接受的盐，特别是酒石酸盐。
[0031] 其他已知的能够用于本发明中的α 2肾上腺素能受体激动剂化合物是：可乐定、 apo 可乐定（apoclonidine)。
[0032] 更普遍地说，其他的α肾上腺素能受体激动剂化合物是：辛弗林、二甲己胺、抗利 尿激素及类似物、鸟氨加压素（ornipressine)、米多君、苯肾上腺素、赛洛唑啉、羟甲唑啉、 去甲肾上腺素、甲氧胺。
[0033] 对β受体也具有亲和力但某些情况下能够使用的化合物是：肾上腺素、麻黄碱、 依替福林。
[0034] 当然，所有这些化合物的药学上可接受的盐也包括在内。
[0035] 根据本发明，这里使用的术语"药学上可接受的盐"是指本发明可安全、有效地在 哺乳动物上局部使用并具有所需生物活性的那些化合物的盐。药学上可接受的盐包括存在 于本发明的化合物中的酸式盐或碱式盐。
[0036] 药学上可接受的酸式盐包括但不限于，盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫 酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸性磷酸盐、异烟酸盐（isonicotinate)、醋酸盐、乳酸盐、水杨 酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸 盐（gentisinate)、延胡索酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醒酸盐（glucaronate)、鹿糖盐、甲酸 盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和巴莫酸盐（即，1， 1'-亚甲基-双（2-羟基-3-萘甲酸盐））。本发明的某些化合物能够与各种氨基酸反应 形成药学上可接受的盐。
[0037] 合适的碱式盐包括但不限于，铝盐、钙盐、锂盐、镁盐、钾盐、钠盐、锌盐和二乙醇胺 盐。关于药学上可接受的盐的综述参考BERGE ET AL.，66 J.PHARM. Sci. 1-19(1977)。
[0038] 根据第一个实施例，所述要求保护的组合物仅包含填充剂（或其混合物）以及肾 上腺素能受体激动剂（或其混合物），优选地为透明质酸和溴莫尼定。
[0039] 根据本发明的另一实施例，所述要求保护的组合物还包含一种或多种其他成分。
[0040] 上述一种或多种其他成分可以是活性成分，例如，麻醉剂。优选的麻醉剂是利多卡 因或其药学上可接受的盐。其他活性成分是例如生长因子、肽…… 所述要求保护的组合物还包含其他药学上可接受的成分，如载体、赋形剂、防腐剂…… 在一个实施例中，本发明的化合物对需要该化合物的病人的给药方式为全身给药途 径，优选地通过注射给药。因此，本发明中的化合物在药学上可接受的载体中递送到皮肤的 患病区域。这里使用的药学上可接受的载体是任意药学上可接受的药剂，其能够应用于皮 肤，通过真皮、皮内或透皮递送药物或药品。药学上可接受的载体和本发明化合物的组合一 起称为本发明的可注射药剂。
[0041] 在本发明的范围内，所述组合物是药学上可接受的可注射药剂。在本发明中，"药 学上可接受的可注射药剂"是指任何可用于全身给药的药学上可接受的药剂。优选地，所述 组合物在真皮浅层、真皮中层或真皮深层通过皮下或皮内途径给药。一般来说，所述要求保 护的组合物包含在溶液或凝胶中，优选地包含在水性溶液或凝胶中。
[0042] 所述要求保护的组合物由治疗有效量的肾上腺素能受体激动剂和填充剂组成，或 包含治疗有效量的肾上腺素能受体激动剂和填充剂。这里使用的"本发明化合物的治疗有 效量"是指能够有效实现本发明目标效果的化合物的最小量。
[0043] 通常，所述要求保护的组合物包含： -填充剂，优选地为HA，其占组合物重量的1% -2. 5% ; -肾上腺素能受体激动剂，优选地为溴莫尼定，其占组合物重量的〇. 0001% -1% ; -可选的麻醉剂，其占组合物重量的〇. 01% -3%。
[0044] 如上所述，要求保护的组合物旨在对患者或病人给药，特别是通过面部注射（前 额、眼睛、鼻唇沟、……）进行给药。这里使用的术语"患者"或"病人"是等同用语，表示任 何将要或已经给予本发明化合物或药剂的动物，优选地是哺乳动物，更优选地是人类。这里 使用的术语"哺乳动物"包括任何哺乳动物。
[0045] 因此，本发明还提供了一种药剂，以向病人递送全身剂量的化合物。实际上，对于 给药程序，活性化合物的量如下： -对于填充剂，优选地为HA :在0. 05mg/kg-2mg/kg体重之间。其表示从5mg-100mg。
[0046] -对于肾上腺素能受体激动剂，优选地为溴莫尼定：在5. l(T3mg-0. 8mg/kg体重之 间。其表示从〇· 5 μ g_40mg。
[0047] 在优选实施例中，所述要求保护的待注射组合物的体积在0. I-IOml之间，一般在 0.5_4ml之间。优选地，所述体积以单剂量注射器的形式提供。所述注射能够重复进行，例 如在4-18个月后重注射。
[0048] 本发明的另一方面是一种制品，其包括装在合适的带有标签的容器中的本发明全 身药剂及使用说明。所述容器优选地是单剂量注射器。
[0049] 优选地，使用说明与本发明的药剂包装在一起，例如，小册子或包装标签。标签说 明解释本发明的药剂如何以足以治疗病人的量及时间段进行给药。优选地，标签包括剂量 和给药说明、药剂组成、临床药理学、耐药性、药物代谢动力学、吸收、生物利用率以及各种 7Mc Fztt 心、O
[0050] 接着，要求保护的可注射组合物可整合成一试剂盒，其包括含有所述组合物的注 射器。在所述试剂盒中，两种活性成分，即填充剂和肾上腺素能受体激动剂，能够以混合物 形式装在注射器中，或者能够装在两个独立的注射器中，使用时混合。
[0051] 所述要求保护的组合物优选地在适合保存各活性成分的条件下进行灭菌。
[0052] 如上所述，要求保护的组合物用于预防和/或治疗各种皮肤缺陷，特别是褶皱、皱 纹、皮肤凹陷和疤痕。其用于美容治疗或治疗处理。
[0053] 根据本发明，已经表明要求保护的组合物的主要优点在于减轻、减少或避免红斑、 瘀斑、瘀伤或流血，特别是由于注射皮肤填充剂造成的。
[0054] 要求保护的组合物的其他潜在优点如下： -当所述组合物还包含麻醉剂（如，利多卡因）时，所述麻醉剂的药效能够获得提高： 由α肾上腺素能激动剂提供的血管收缩效果限制了麻醉剂的大面积扩散，从而导致麻醉 只在严格的注射部位有效； -通过减少炎症，填充剂能够持续更长时间，这可能是由于其降解减缓了 ：填充剂的炎 症越重，剧烈的组织反应越多，并且炎症种类（inflammatory species)的水平越高，从而加 速填充剂的降解。在填充剂中加入血管收缩分子能够限制吸引至注射部位的炎症种类； -观察到能够减轻水肿和肿胀：原因与上述优点相同，填充剂的血管收缩活性限制了 与注射有关的液流，从而阻碍了注射部位附近的液体浓度升高。
[0055] 更笼统地说，所述要求保护的组合物因此意图用于减轻、减少或避免所有由注射 引起的不希望的皮肤反应（即时的和/或继发性的）。其确实包括瘀斑、瘀伤或流血，但还 包括可能的发红、红斑、水肿、坏死、溃疡、肿胀和炎症。
[0056] 所述要求保护的包含两种活性成分的组合物可以同时使用、单独使用或按顺序使 用。换句话说，本发明提供了一种试剂盒，其成分为大量肾上腺素能受体激动剂（优选地为 称为溴莫尼定的产品）和填充剂（优选地为透明质酸）的结合。
[0057] 除了上述这些，下述的实例用于阐述具体实施例，但不限制本发明的保护范围。
【专利附图】
【附图说明】
[0058] 图1显示了要求保护的组合物（试验2)与单独的填充剂（试验1)相比较，原发 刺激指数（Irritating Primary Index, IPI)在0-8天之间的演变； 图2显示了要求保护的组合物（试验2)与单独的填充剂（试验1)相比较，在第8天 时的炎症反应的总分数。
【具体实施方式】
[0059] 研究内容 进行含有利多卡因和名为RADACT014的血管收缩剂药物（溴莫尼定）的基于透明质酸 的皮肤填充剂的皮内试验，以评估溴莫尼定减少兔子皮内注射填充剂后引起的刺激性的潜 力。
[0060] 两只成年兔子通过皮内途径接受0. 2mL试验产品RADACT014(试验2)、NaCl 0. 9% (试验5 :阴性对照）和10LDEEP010 (与RADACT014相同的透明质酸填充剂，但是不含利多 卡因和溴莫尼定；试验1 :阳性对照）。
[0061] 将使用含有溴莫尼定的填充剂（一批RADACT014(试验2))测得的结果与不含溴 莫尼定的皮肤填充剂（阳性对照：试验1)进行对比。
[0062] 注射后0-8天检查这些部位的组织反应的大体证据（gross evidence)，如红斑、 水肿和坏死（图1)，并在第8天处死后进行组织学观察，在显微镜下观察组织反应（图2)。
[0063] 该研究根据ISO 10993标准的要求进行：医疗器械的生物学评价（Biological Evaluation ofmedical devices),第10部分：刺激和迟发型超敏反应试验。
[0064] 材料和方法 制各对照夺联诱明质酸填充剂：10LDEEP010 交联的透明质酸填充剂10LDEEP010 (试验1)通过用25 %的BDDE (-种来自细菌来源 的透明质酸钠，其特征是具有2-4 X IO6Da左右的高分子量）进行交联获得。交联后，向交联 的透明质酸中加入盐酸利多卡因，使浓度达到0.3%。通过将混合物挤出网状物（mesh)得 到均匀混合的利多卡因。所得到的凝胶装入ImL注射器中，其浓度为20mg/mL，并经蒸汽灭 菌。
[0065] 制各含有溴草尼定的夺联诱明质酸填充剂：RADACT014 对相同的透明质酸采用相同的交联条件，得到不含利多卡因的填充剂。同时，用SgNaOH 和42g纯化水制备4N氢氧化钠溶液。通过将0. 22g酒石酸溴莫尼定和0. 33g盐酸利多卡 因溶解在9. 45mL的磷酸盐缓冲液中制得另一种含有溴莫尼定和利多卡因的溶液。用NaOH 溶液将PH调节到6。然后，将溴莫尼定和利多卡因对0. 22微米进行过滤。
[0066] 通过3个步骤使5g含有上述2种活性成分的溶液和50g前面的交联透明质酸凝 胶缓慢混合获得含有溴莫尼定和利多卡因的填充剂（称为RADACT014(试验2)):机械混合 5分钟后打碎15分钟，然后再混合5分钟。将所得凝胶装入ImL注射器中，并采用蒸汽灭 菌。透明质酸酶消化后测定各活性成分的终浓度，通过HPLC-MS-MS测得的溴莫尼定的浓度 为0. 16%，通过HPLC测得的利多卡因的浓度为0. 29%。
[0067] 调杳即时不自反应事件的ΜΦ 通过动物研究评价RADACT014减少刺激的潜力，该研究的进行依据IS010993-10要求： 医疗器械的生物学评价-刺激和迟发型超敏反应试验。
[0068] 研究方案 在第0天（DO)，两只成年兔子通过皮内途径接受0. 2mL试验产品（试验I :10LDEEP010 和试验2 :RADACT014)和阴性对照（试验5 :生理盐水），采用27G针头注射。在这些条件 下，每个产品注射4个部位。
[0069] 然后，从第0天到第8天，每天检查2次注射部位的组织反应大体证据，如红斑、水 肿、溃疡和坏死，用以下标准评分：
【权利要求】
1. 一种可注射组合物，其包括： 透明质酸或其药学上可接受的盐或衍生物； a肾上腺素能受体激动剂； 利多卡因。
2. 根据权利要求1所述的组合物，其中肾上腺素能受体激动剂是a 2肾上腺素能受体 激动剂。
3. 根据权利要求1所述的组合物，其中肾上腺素能受体激动剂溴莫尼定、赛洛唑啉或 轻甲唑啉。
4. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包括： 透明质酸，其占组合物重量的1% -2. 5% ; 肾上腺素能受体激动剂，优选地为溴莫尼定，其占组合物重量的〇. 0001% -1% ; 利多卡因，其占组合物重量的0.01% -3%。
5. 根据权利要求1或4所述的组合物，所述组合制备物同时使用。
6. 根据权利要求1或4所述的组合物，所述组合制备物同时使用，用于预防或治疗皮肤 缺陷，特别是褶皱、皱纹、皮肤凹陷和疤痕。
7. 根据权利要求1或4所述的组合物，所述组合制备物同时使用，用于减轻、减小或避 免由注射引起的皮肤反应，特别是发红、瘀斑、瘀伤、流血、红斑、水肿、坏死、溃疡、肿胀和/ 或炎症。
8. -种试剂盒，其包括注射器并包括权利要求1或4所述的组合物。
9. 根据权利要求8所述的试剂盒，其用于预防或治疗皮肤缺陷，特别是褶皱、皱纹、皮 肤凹陷和疤痕。
10. 根据权利要求8所述的试剂盒，其用于减轻、减小或避免由注射引起的皮肤反应， 特别是发红、瘀斑、瘀伤、流血、红斑、水肿、坏死、溃疡、肿胀和/或炎症。
【文档编号】A61P17/02GK104324378SQ201410508012
【公开日】2015年2月4日 申请日期:2010年5月28日 优先权日:2009年5月29日
【发明者】I·博科伦, F·布鲁耐尔, B·贺巴爵, C·维拉德 申请人:盖尔德马研究及发展公司