本发明属于医药
技术领域：
，具体涉及一种调高PTEN基因表达抑制肺癌细胞生长的组合药物。
背景技术：
：肺癌是常见癌症之一，目前的治疗方案主要为化疗。不过，现有可用的药物并不多，主要为顺铂等常见抗癌药物。有研究者尝试利用中药进行治疗，但所得的效果并不是很好。PTEN是第一个同时兼具脂质和蛋白双特异性磷酸酶活性的抑癌基因，于1997年从人类第10q23.3染色体位点分离并得到，可参与细胞周期调控并抑制肿瘤细胞增殖及促进肿瘤细胞凋亡。在研究新的抗癌药物时，可以其是否可以调高PTEN的表达来进行。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种调高PTEN基因表达抑制肺癌细胞生长的组合药物，该组合物按重量百分比由如下组分组成：20-35%麦角甾醇过氧化物，65-80%雷公藤甲素。本发明可以显著的上调PTEN的表达。本发明发现，当单独使用麦角甾醇过氧化物或雷公藤甲素时，对PTEN的表达几乎不产生影响。另外，当麦角甾醇的添加量过少时，也不产生较为明显的上调作用。优选的，所述组合物按重量百分比由如下组分组成：25-30%麦角甾醇过氧化物，70-75%雷公藤甲素。作为最优方案，所述组合物按重量百分比由如下组分组成：26%麦角甾醇过氧化物，74%雷公藤甲素。本发明的目的还在于提供由上述组合物作为活性成分的制剂，所述制剂为药学意义上可接受的任何一种制剂。优选的，所述制剂为注射剂。所述制剂还包括辅剂，所述辅剂为药学意义上可接受的任何一种辅剂。优选的，所述辅剂为乙二醇。本发明的目的还在于提供上述组合物或者制剂在制备治疗肺癌药物方面的应用。本发明的有益效果：本发明可以调高PTEN蛋白和PTENmRNA的表达，可产生良好的抑瘤率，具有较好的应用前景。具体实施方式下面通过实施例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述
发明内容所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。实施例1制备药物组合物，按重量百分比计，将下属组分混合：20-35%麦角甾醇过氧化物，65-80%雷公藤甲素。将所得混合物按10%（W/W）加入生理盐水中，再加入5%（W/W）乙二醇。实施例1制备药物组合物，按重量百分比计，将下属组分混合：20-35%麦角甾醇过氧化物，65-80%雷公藤甲素。将所得混合物按10%（W/W）加入生理盐水中，再加入5%（W/W）乙二醇。实施例2制备药物组合物，按重量百分比计，将下属组分混合：20-35%麦角甾醇过氧化物，65-80%雷公藤甲素。将所得混合物按10%（W/W）加入生理盐水中，再加入5%（W/W）乙二醇。实施例3制备药物组合物，按重量百分比计，将下属组分混合：20-35%麦角甾醇过氧化物，65-80%雷公藤甲素。将所得混合物按10%（W/W）加入生理盐水中，再加入5%（W/W）乙二醇。实施例4制备药物组合物，按重量百分比计，将下属组分混合：20-35%麦角甾醇过氧化物，65-80%雷公藤甲素。将所得混合物按10%（W/W）加入生理盐水中，再加入5%（W/W）乙二醇。对比实施例1制备药物组合物，按重量百分比计，将下属组分混合：15%麦角甾醇过氧化物，85%雷公藤甲素。将所得混合物按10%（W/W）加入生理盐水中，再加入5%（W/W）乙二醇。对比实施例2将雷公藤甲素按10%（W/W）加入生理盐水中，再加入5%（W/W）乙二醇。实验例取对数生长期Lewis肺癌细胞，胰酶消化后离心收集细胞（1800r/min离心5min），用无血清DMEM培养基重悬洗涤并调整细胞浓度为1×107个/mL，用1mL注射器吸取细胞悬液0.2mL（含细胞数2×106个）注射于C57BL/6小鼠左侧腋部皮下，建立小鼠皮下移植瘤动物模型。接种10d后，检测小鼠成瘤状况，将符合要求的成瘤小鼠分为实验组和对照组，各组均在接种10d后晨起空腹给药。①对照组：0.2mL/10g0.9%氯化钠溶液灌胃10d，并分别在第1、3、5天腹腔注射0.9%氯化钠溶液0.4mL；②实验组（实施例1-4、对比实施例1和对比实施例2）：0.2mL/10g0.9%氯化钠溶液灌胃10d，并分别在第1、3、5天腹腔注射0.4mL；称取瘤质量，计算抑瘤率给药第11天处死小鼠，完整剥取腋部皮下肿瘤组织，精密电子天平称重，分别计算各组抑瘤率，抑瘤率（%）=（对照组平均瘤质量-实验组平均瘤质量/对照组平均瘤质量）×100%。Westernblot法检测肿瘤组织PTEN蛋白表达剪取肿瘤组织约0.1g，加入RIPA细胞裂解液1mL（内含1mmol/LPMSF）进行裂解，离心收集组织总蛋白样品。经SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白组分，将蛋白转印于PVDF膜上，5%脱脂奶粉封闭2h，加入一抗（PTEN：500倍稀释）4℃孵育过夜，再加入HRP标记的二抗（1∶10000比例稀释），室温封闭2h，洗涤干净，ECL显色后胶片曝光并用ImageJ软件分析结果。称取肿瘤组织0.1g液氮研磨，加入1mLTrizol提取总RNA。根据RevertAidTMfirstStrandcDNASynthesisKit试剂盒逆转录成cDNA，以此cDNA作为荧光定量模板，按照特定的反应体系和反应条件进行扩增，引物序列是Forwardprimer5’-TTTGGTCACCCTTTGAGTCC-3’，Reverseprimer5’-GCTTTTACCTAGGGGGCAAG-3’，以β-actin作为内参，RelativeQuantificationStudy为分析方法，最终计算取2-△△Ct。实验结果如表1和表2所示。表1抑瘤率实施例1实施例2实施例3实施例4对比实施例1对比实施例2抑瘤率（%）66.159.462.268.49.75.5表2PTEN蛋白、PTENmRNA的表达实施例1实施例2实施例3实施例4对比实施例1对比实施例2对照组PTEN蛋白1.831.771.801.990.250.250.22PTENmRNA3.443.013.393.561.131.101.06当前第1页1 2 3