胱氨酸蛋白酶抑制剂在制备防治紫外光诱导的皮肤损伤药物、保健品及各种制剂中的应用的制作方法

本发明涉及胱氨酸蛋白酶抑制剂在药学及保健品领域中的应用。更具体地说是胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystineproteaseinhibitor)在制备预防或治疗紫外光诱导的皮肤损伤药物、保健品及各种制剂中的应用。

背景技术：

阳光中的紫外线是人的皮肤受到紫外线辐射损伤的主要原因，紫外线辐射对于皮肤会产生多种病理作用，例如皮肤红肿，脱皮，炎症，溃烂，以及多种皮肤疾病等，并会产生大量活性氧化物，造成皮下细胞的dna损伤，加速皮肤衰老。事实上，人体皮肤衰老90％的原因是由于紫外线照射，而紫外线诱导的最严重的疾病是皮肤癌，已有研究证明，90％以上的皮肤癌是由阳光中的紫外线照射引起的。皮肤癌患者占所有癌症患者中的40％，全世界每年有300多万新发皮肤癌病例，而皮肤癌基金会也指出，五分之一的美国人在一生中的某个阶段会得皮肤癌。随着人类工业化的进展，大气层中负责阻挡紫外线的臭氧层在不断变薄，有专家曾预测，臭氧层厚度减少1％，紫外线辐射强度增加2％。因此，对于皮肤紫外线损伤的预防以及治疗对于人们提高皮肤的健康水平、防止皮肤癌等重大皮肤疾病的产生，都有着重大的社会经济意义和临床价值。

技术实现要素：

本发明人在实验中首次发现：各种胱氨酸蛋白酶抑制剂在防治紫外光诱导的细胞损伤和皮肤损伤中具有明显的保护作用。基于上述发现经过进一步实验从而完成了本发明。

本发明的目的是胱氨酸蛋白酶抑制剂作为唯一成分在制备预防或治疗紫外光诱导的皮肤损伤药物、保健品及各种制剂中的应用。

进一步的，胱氨酸蛋白酶抑制剂作为活性成分在制备预防或治疗紫外光诱导的皮肤损伤药物、保健品及各种制剂中的应用。

进一步的，胱氨酸蛋白酶抑制剂作为唯一活性成分在制备预防或治疗紫外光诱导的皮肤损伤药物、保健品及各种制剂中的应用。

进一步的，胱氨酸蛋白酶抑制剂在制备预防或治疗紫外光诱导的皮肤损伤药物、保健品及各种制剂中的应用，所述紫外光诱导皮肤损伤包括但不限于：表皮基质细胞减少，角质层增加，皮肤厚度增加。

进一步的，胱氨酸蛋白酶抑制剂在制备预防或治疗紫外光诱导的皮肤损伤药物、保健品及各种制剂中的应用，所述紫外光诱导皮肤损伤为，细胞凋亡信号增加。

进一步的，胱氨酸蛋白酶抑制剂在制备预防或治疗紫外光诱导的皮肤损伤药物、保健品及各种制剂中的应用，所述紫外光诱导皮肤损伤为，细胞坏死信号增加。

进一步的，胱氨酸蛋白酶抑制剂在制备预防或治疗紫外光诱导的皮肤损伤药物、保健品及各种制剂的应用，所述紫外光诱导皮肤损伤为，皮肤或者细胞自荧光增加。

进一步的，其中所述紫外光诱导的皮肤损伤，为皮肤受到紫外光辐射的人。

进一步的，胱氨酸蛋白酶抑制剂在制备防治紫外光诱导的皮肤损伤药物中、保健品及各种制剂的应用，所述的胱氨酸蛋白酶抑制剂制备的药物组合物是各种外用涂抹制剂，片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、混悬剂、糖浆剂、各种肠溶制剂及注射剂。

本发明发现胱氨酸蛋白酶抑制剂在制备防治紫外光诱导的皮肤损伤药物、保健品及各种制剂中的应用，为预防和治疗紫外光诱导的皮肤损伤建立基础，可以有效的预防和减少紫外光诱导的皮肤损伤。

附图说明

图1紫外光损伤b16细胞24小时后，紫外光剂量依赖性地增加细胞凋亡坏死。

图2紫外光损伤b16细胞0.5-3小时后，紫外光诱导b16细胞绿色荧光上升图。该自发荧光上升和细胞死亡成正相关性。

图3胱氨酸抑制剂预处理1小时，紫外光再照射b16细胞0.5-3小时后，检测b16细胞的自发荧光，发现胱氨酸抑制剂的处理可以完全地防止紫外光诱导b16细胞绿色荧光的上升，说明胱氨酸抑制剂的处理可以防止紫外光诱导的b16细胞的死亡。

此外，在运用小鼠作为紫外损伤模型的研究中，我们获得了相似的结果。

具体实施方式

下面将通过具体描述，对本发明作进一步的说明。

除非另有限定，本文中所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解相同的含义。

发明人进行了大量的实验，确定了胱氨酸蛋白酶抑制剂可以保护紫外光诱导的皮肤损伤。

一.实验方法

根据本发明，使用b16细胞，培养在37摄氏度，5％的二氧化碳环境中。使用紫外光处理细胞后，重新放回普通培养液中培养。

1小时，使用激光共聚焦显微镜对紫外光处理过的细胞进行成像。其中激光共聚焦显微镜的激发波长为440-600nm。

24小时后，使用细胞凋亡坏死检测试剂盒，用流式细胞仪检测紫外光处理过的细胞凋亡坏死信号。

根据本发明，使用雄性c57小鼠，uvc、照射的小鼠重量在15-25g范围之间。紫外线辐射完成后，小鼠在动物房中进行饲养，条件为22-24℃，12小时的明/暗循环，并可自由进食取水。

24小时内，使用激光共聚焦显微镜对紫外线照射的皮肤进行无创成像。三天后牺牲小鼠，取损伤皮肤组织，进行h&e(苏木精&伊红染色)检测。小鼠的皮肤组织用激光共聚焦显微镜成像，其中激光共聚焦显微镜的激发波长为440-600nm。

皮肤组织的储存：皮肤取出后，取出适量组织浸泡于4％多聚甲醛，用于制作石蜡切片，剩余组织用铝箔纸包裹好，使用液氮冷冻，之后转移到-80℃冰箱长期保存。

皮肤组织石蜡切片：将皮肤组织浸泡4％多聚甲醛溶液24h，然后依照石蜡切片的制作方法依次浸自来水、蒸馏水、梯度酒精、二甲苯、石蜡，制作成石蜡切片。

皮肤石蜡切片的h&e染色：将石蜡切片浸二甲苯脱蜡，然后依次浸于梯度酒精、蒸馏水，苏木素染色10分钟，自来水流水冲洗30min，蒸馏水浸泡30s，95％乙醇10s，伊红复染30s，70％酒精洗涤2次，依次浸梯度酒精、二甲苯，中性树脂封片。

对染色结果拍照、量化：对上述两种染色进行拍照。并针对表皮角质化厚度，表皮厚度等指标进行量化。

统计分析：所有数据按照平均值±标准差的方式给出，数据使用单因素方差分析进行评估，p值小于0.05认为是统计学显著的。

细胞实验的结果如下所述：

图1紫外光损伤b16细胞24小时后，紫外光剂量依赖性地增加细胞凋亡坏死。

图2紫外光损伤b16细胞0.5-3小时后，紫外光诱导b16细胞绿色荧光上升图。该自发荧光上升和细胞死亡成正相关性。

图3胱氨酸抑制剂预处理1小时，紫外光再照射b16细胞0.5-3小时后，检测b16细胞的自发荧光，发现胱氨酸抑制剂的处理可以完全地防止紫外光诱导b16细胞绿色荧光的上升，说明胱氨酸抑制剂的处理可以防止紫外光诱导的b16细胞的死亡。

此外，在运用小鼠作为紫外损伤模型的研究中，我们获得了相似的结果。

由以上实验可以得出，胱氨酸蛋白酶抑制剂可以减少紫外光诱导的皮肤损伤。其中损伤的具体形式为，表皮基质细胞减少，角质层增加。皮肤厚度增加。细胞凋亡信号增加，坏死信号增加。皮肤或者细胞自荧光增加。

因此，胱氨酸蛋白酶抑制剂在制备防治紫外光诱导的皮肤损伤药物、保健品及各种制剂中有重要的应用价值。

基于上述发现经过进一步实验从而完成了本发明。因此提出对胱氨酸蛋白酶抑制剂在制备防治紫外光诱导的皮肤损伤药物、保健品及各种制剂中的应用。

本发明的目的是胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystineproteaseinhibitor)作为唯一成分在制备预防或治疗紫外光诱导的皮肤损伤药物、保健品及各种制剂中的应用。

胱氨酸蛋白酶抑制剂作为活性成分在制备预防或治疗紫外光诱导的皮肤损伤药物、保健品及各种制剂中的应用。

胱氨酸蛋白酶抑制剂作为唯一活性成分在制备预防或治疗紫外光诱导的皮肤损伤药物、保健品及各种制剂中的应用。

其中所述紫外光诱导的皮肤损伤，为皮肤受到紫外光辐射的人。

胱氨酸蛋白酶抑制剂在制备防治紫外光诱导的皮肤损伤药物、保健品及各种制剂中的应用，所述的胱氨酸蛋白酶抑制剂制备的药物组合物是各种外用涂抹制剂，片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、混悬剂、糖浆剂、各种肠溶制剂及注射剂。

本领域的技术人员应当明了，尽管为了举例说明的目的，本文描述了本发明的具体实施方式，但可以对其进行各种修改而不偏离本发明的精神和范围。因此，本发明的具体实施方式和实施例不应当视为限制本发明的范围。本发明仅受所附权利要求的限制。本申请中引用的所有文献均完整地并入本文作为参考。