本发明属于兽药领域，特别涉及一种防治猪圆环病毒病的中药成分方剂及其制备方法和应用。
背景技术：
目前我国养猪生产面临着日趋严峻的疫病威胁，发病情况复杂多变，生产风险与日俱增，控制成本显著提高，经济损失无法估量。其重要原因在于猪群中普遍存在免疫抑制性疾病。猪的免疫系统是机体保护自身的防御性结构，不仅能抵御外来细菌、病毒和其他有害物质的侵袭，还能清除体内衰老、突变、恶化或死亡的细胞，增进健康。猪免疫抑制性疾病直接导致在疾病诊治过程中使用大量药物，造成病原微生物的耐药性日新月异。同时动物机体的特异性和非特异性免疫力下降，对各种疫苗无法免疫应答，或产生的抗体效价低下。造成低致病力的病原体或弱毒疫苗也可能感染猪体发病，更为严重的是由免疫抑制所带来的混合感染，使疾病更为复杂，有时会造成新的综合征，甚至达到难以控制的程度。给养猪生产造成巨大的经济损失，同时带来公共卫生安全隐患。由于这些免疫抑制性疾病常以亚临床感染的形式出现，易被忽视，因此，必须加强对免疫抑制性疾病的重视，并做好防控工作。
猪群中最为普遍存在的免疫抑制性疾病即为猪圆环病毒2型感染。现已知pcv有两个血清型，pcv1为非致病性的病毒。pcv2为致病性的病毒，它是断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaningmultisystemicwastingsyndrome，pmws)的主要病原。本病最早发现于加拿大(1991)，除pmws外，pdns(猪皮炎与肾病综合征)、pnp(增生性坏死性肺炎)、prdc(猪呼吸道疾病综合征)、繁殖障碍、先天性颤抖、肠炎等疾病亦与pcv2感染有重要关联。
pvc2组织学上的显著病变是淋巴滤泡区减小或缺失，淋巴细胞耗竭，大量组织细胞浸润髓样组织。pcv2既不在树突状细胞(dc)中复制，也不诱导dc的凋亡，dc吞噬pvc2后，不对其进行抗原加工和递呈，所以dc是pcv2的良好避难所。又因为dc可以在机体到处移行，所以它成为pcv2散播到机体各处的良好载体。参与免疫调节的细胞因子表达数量的改变，导致抗原递呈细胞表面抗原mhci类分子和mhcii类分子表达下降，继而使得pcv2感染后，淋巴细胞不能有效地激活和增殖，最终破坏免疫功能。pcv2可以感染t淋巴细胞和b淋巴细胞，并可以复制，但却引起t淋巴细胞亚群和b淋巴细胞亚群都明显减少。原因可能是：其一，pcv2可以诱导淋巴细胞凋亡；其二，可能直接导致淋巴细胞的增殖减少。
应用中药调节机体免疫功能和防治传染病在我国已有数千年的历史，并以确切的疗效和较低的毒副残留及抗药性而广受欢迎。我国拥有丰富的中草药资源，应加速对其的研究与开发，打造具有中国特色的品牌。这对解决长期困扰养殖业发展的抗生素残留问题，发展绿色畜牧业，满足人们对食品安全的需求，增强我国动物性产品在国际市场的竞争力，都具有重要的经济意义和社会效益。但传统中药材在加工、使用、存贮、运输等诸多环节存有不便。中药现代化便是把中药中的活性成分一一分离出来进行研究。
现有的疫苗、抗生素、化药等不足以明显降低猪圆环病毒病的发病率，导致养殖产业巨大的经济损失。抗生素、激素、化学类合成药物可以促进动物生长、减少疾病发生，但这些药物长期使用会使病原微生物产生耐药性、产品药物残留及环境污染等，严重威胁人类健康。同时影响到我国农副产品的出口。然而，本发明作者通过大量试验发现，黄芪甲苷等中药成分联用具有防治猪圆环病毒病和提高机体免疫功能的作用，现有技术中没有公开过该中药成分复方具有防治猪圆环病毒病和提高机体免疫功能的作用。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种防治猪圆环病毒病的中药成分方剂及其应用，同时本发明还提供一种所述防治猪圆环病毒病的中药成分方剂的制备方法，该中药成分方剂能有效提高动物免疫抗体效价，降低发病率，促进动物的生长发育，全面增强动物免疫功能和防御疾病的能力，克服了疫苗、化药、抗生素的毒副作用与食品安全隐患，研发前景乐观，临床应用广阔，以解决上述现有技术存在的问题。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明中一种防治猪圆环病毒病的中药成分方剂，所述中药成分方剂由黄芪甲苷、红景天苷、石吊兰素、芝麻素组成，所述黄芪甲苷、红景天苷、石吊兰素和芝麻素的质量配比比例为1-4:1-4:1-4:1-4。
本发明中一种防治猪圆环病毒病的中药成分方剂的制备方法，所述中药成分方剂为药液，其工艺步骤为：将黄芪甲苷、红景天苷、石吊兰素和芝麻素按质量比1-4:1-4:1-4:1-4，加生理盐水制成总浓度为2mg/ml的药液。
本发明中一种防治猪圆环病毒病的中药成分方剂作为注射剂的应用，具体步骤为：将所述中药成分方剂药液对猪进行颈部肌肉注射，每天1次，每次2ml，持续3天即可。
相对于现有技术，本发明的有益效果为：本发明提出一种中药成分方剂作为兽药防治猪圆环病毒病的应用，能有效提高动物免疫抗体效价，降低发病率，促进动物的生长发育，全面增强动物免疫功能和防御疾病的能力，克服了疫苗、化药、抗生素的毒副作用与食品安全隐患，研发前景乐观，临床应用广阔。
具体实施方式
结合以下具体实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
中国药品生物制品鉴定所购得的黄芪甲苷、红景天苷、石吊兰素和芝麻素按质量比1:1:1:1，加生理盐水制成总浓度为2mg/ml的药液，进行仔猪体内试验。
40头健康普通级“杜×大×长”三元杂交断奶仔猪，50日龄，购自南京农业大学江浦试验猪场。适应环境后随机分为4组，每组10头，公母各半。pcv2组和治疗组以107tcid50/ml的pcv2ah株攻毒，每头颈部肌肉注射2.0ml，1次，同时滴鼻2.0ml，1次。空白组和药物对照组不进行攻毒。各组隔离饲养。于试验的第三周第1d治疗组和药物对照组对侧颈部肌肉注射该中药成分复方液每天1次，每次2.0ml，持续3天。空白组和pcv2组不进行颈部肌肉注射该中药成分方剂。试验总周期为4周。
试验最后1d仔猪清晨空腹前腔静脉采血，实时荧光定量pt-pcr法检测血清中pcv2的抗原含量。结果发现，pcv2组的抗原含量为7.31(lg)/μl，治疗组的抗原含量为3.56(lg)/μl，两者差异极显著，空白组和药物对照组均未检测到pcv2抗原。试验表明，该中药成分方剂能显著降低机体内的病毒含量，抑制病毒血症的产生，具有明显的抗pcv2病毒作用。
试验最后1d动物前腔静脉采血1ml，3000rpmin离心10min取血清。全自动生化分析仪检测机体中igg、igm、白蛋白(alb)和球蛋白(glo)的水平。结果发现pcv2组的igg水平为1.40mg/ml，治疗组的igg水平为1.83mg/ml，两者差异极显著，空白组的igg水平为1.51mg/ml，药物对照组的igg水平为1.62mg/ml。pcv2组的igm水平为0.68mg/ml，治疗组的igm水平为0.87mg/ml，两者差异显著，空白组的igm水平为0.65mg/ml，药物对照组的igm水平为0.72mg/ml。pcv2组的血清alb含量为27.6g/l，治疗组的alb含量为38.1g/l，两者差异极显著，空白组的alb含量为35.0g/l，药物对照组的alb含量为36.7g/l。pcv2组的血清glo含量为28.8g/l，治疗组的glo含量为38.0g/l，两者差异极显著，空白组的glo含量为37.3g/l，药物对照组的glo含量为36.9g/l。试验表明，该中药成分方剂能大幅上调仔猪血清中igg的水平，从而提高防病抗病能力。同时还能显著提高igm水平，影响体液免疫反应。白蛋白作为一种贮存蛋白质，可随时修补组织和提供能量。该中药成分方剂能显著上调alb水平，增加机体肝脏代谢功能。同时还能显著提高glo水平，增强机体免疫功能。
试验最后1d动物前腔静脉采血1ml，3000rpmin离心10min取血清。酶联免疫吸附法检测血清中il-4、il-10、il-2和ifn-γ的含量。结果发现，pcv2组的il-4含量为112.3pg/ml，治疗组的il-4含量为84.5pg/ml，两者差异极显著，空白组的il-4含量为72.6pg/ml，药物对照组的il-4含量为74.0pg/ml。pcv2组的il-10含量为177.5pg/ml，治疗组的il-10含量为102.9pg/ml，两者差异极显著，空白组的il-10含量为98.6pg/ml，药物对照组的il-10含量为103.7pg/ml。pcv2组的il-2含量为288.4pg/ml，治疗组的il-2含量为314.7pg/ml，两者差异显著，空白组的il-2含量为258.6pg/ml，药物对照组的il-2含量为262.9pg/ml。pcv2组的ifn-γ含量为187.1pg/ml，治疗组的ifn-γ含量为254.9pg/ml，两者差异极显著，空白组的ifn-γ含量为160.8pg/ml，药物对照组的ifn-γ含量为158.3pg/ml。试验表明，该中药成分方剂能显著下调il-4和il-10水平，减弱静止性th0细胞向th2方向分化，抑制th2效应，从而解除机体免疫耐受情况；同时该中药成分方剂能显著上调il-2和ifn-γ水平，促进静止性th0细胞向th1方向分化，增强th1效应，从而改善机体免疫抑制状态。
实施例2
中国药品生物制品鉴定所购得的黄芪甲苷、红景天苷、石吊兰素和芝麻素按质量比2:1:3:4，加生理盐水制成总浓度为2mg/ml的药液，进行仔猪体内试验。
40头健康普通级“杜×大×长”三元杂交断奶仔猪，50日龄，购自南京农业大学江浦试验猪场。适应环境后随机分为4组，每组10头，公母各半。预防组和药物对照组颈部肌肉注射该中药成分复方液每天1次，每次2.0ml，持续3天。空白组和pcv2组不进行颈部肌肉注射该中药成分方剂。于试验的第4天，pcv2组和预防组以107tcid50/ml的pcv2ah株攻毒，每头对侧颈部肌肉注射2.0ml，1次，同时滴鼻2.0ml，1次。空白组和药物对照组不进行攻毒。各组隔离饲养。试验总周期为4周。
分别于试验的第1d和最后1d早上8：00空腹称重，根据初重和末重计算平均日增重。平均日增重＝头均净增重/试验天数。记录仔猪的采食量，计算日均采食量，试验结束后计算料重比。料重比＝日均采食量/平均日增重。结果发现，pcv2组的平均日增重为421.7g，预防组的平均日增重为519.3g，两者差异极显著，空白组的平均日增重为526.4g，药物对照组的平均日增重为548.9g。pcv2组的日均采食量为795.2g，预防组的日均采食量为907.6g，两者差异极显著，空白组的日均采食量为945.1g，药物对照组的日均采食量为987.0g。pcv2组的料重比为1.89，预防组的料重比为1.75，空白组的料重比为1.80，药物对照组的料重比1.80。试验表明，该中药成分方剂可以大幅提升仔猪的日增重，采食量的增加与仔猪消化能力的提高有关。同时料重比下降，说明动物生长性能明显改善，营养状态良好。
试验最后1d动物前腔静脉采血1ml，3000rpmin离心10min取血清。酶联免疫吸附法检测血清中pcv2的抗体水平及超氧化物歧化酶(sod)活性。结果发现，pcv2组的pcv2抗体水平od值为0.198，预防组的pcv2抗体水平od值为0.406，两者差异极显著，空白组的pcv2抗体水平od值为0.087，药物对照组的pcv2抗体水平od值为0.075。pcv2组的血清sod含量为7.9ng/ml，预防组的sod含量为12.0ng/ml，两者差异极显著，空白组的sod含量为10.6ng/ml，药物对照组的sod含量为11.3ng/ml。试验表明，该中药成分方剂可以大幅上调仔猪pcv2的抗体水平，特异性的中和、消灭pcv2病原，从而增强机体免疫功能，预防疫病的发生。sod水平可反映出机体细胞受自由基攻击的严重程度和机体清除自由基的能力，该中药成分方剂可以减少过氧化作用的发生，通过抑制肌肉的脂质氧化，参与调控胴体品质和肉质风味。
试验最后1d动物前腔静脉采血1ml，血液分析仪测定机体红细胞(rbc)和血红蛋白(hgb)含量，全自动生化分析仪检测血液尿素(urea)水平。结果发现，pcv2组的rbc含量为4.81012/l，预防组的rbc含量为5.61012/l，两者差异极显著，空白组的rbc含量为5.41012/l，药物对照组的rbc含量为5.81012/l。pcv2组的血清hgb含量为89g/l，预防组的hgb含量为107g/l，两者差异极显著，空白组的hgb含量为105g/l，药物对照组的hgb含量为109g/l。pcv2组的血清尿素水平为3.8mmol/l，预防组的尿素水平为2.9mmol/l，两者差异极显著，空白组的尿素水平为3.1mmol/l，药物对照组的尿素水平为3.0mmol/l。试验表明，该中药成分方剂能显著上调仔猪红细胞数量，提高血红蛋白含量，改善机体贫血状态，增强动物体质。同时降低机体的尿素水平，这意味着蛋白质沉积增加，氨基酸平衡理想，加快了新陈代谢的速度，促进生长发育。
尽管本发明是参照具体实施例来描述，但这种描述并不意味着对本发明构成限制。参照本发明的描述，所公开的实施例的其他变化，对于本领域技术人员都是可以预料的，这种的变化应属于所属权利要求所限定的范围内。