不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于制药领域，具体涉及不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝 胶剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)是一种与组织创伤的愈合过程密切相关的内源 性活性因子，对组织创伤愈合、神经损伤修复及血管再生有显著的促进作用。bFGF是由146 个氨基酸组成的单链多肽，分子量为17KD。临床应用表明，rh-bFGF对人体烧伤、创伤、手术 伤等具有显著的促进愈合作用，且无局部及全身毒副作用。bFGF不仅可以加速创伤愈合，而 且可以减少疤痕的形成，在促进烧伤、创伤和褥疮等组织损伤的再生和修复方面展示了非 凡和独到的功效。
[0003] 目前已上市的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂主要为外用凝胶且不可应 用于眼部。其制剂多为多计量包装，多次重复使用。制剂开封后，很容易在使用和保存过程 中受到微生物污染，进而产生各种安全隐患。为了防止微生物二次污染问题，多剂量制剂中 都添加了各种抑菌剂（preservtive)。抑菌剂虽然在防止微生物污染方面有积极意义，但其 也会导致很多不良反应。据报道抑菌剂的存在对眼部的表面细胞会产生刺激性。滴眼液中 抑菌剂可直接影响泪液的成分，改变眼球表面的微环境，使原本紧密连接的上皮细胞结构 损害，严重者出现角膜上皮脱落、缺损、上皮糜烂，进而发生角膜溃疡，甚至角膜溶解、穿孔、 失明等。近年来，由抑菌剂滥用引发的问题越来越受到关注。此外，对于用于治疗创伤、手 术伤、烧伤、烫伤及溃烂等创面损伤等直接与伤口接触的眼用制剂，抑菌剂对创面的损害也 不可忽略。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题在于提供一种不含抑菌剂的不含抑菌剂的重组人碱 性成纤维细胞生长因子凝胶剂。
[0005] 本发明提供一种不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂，其特征 在于，包括以下组分：重组人碱性成纤维细胞生长因子IX IO6~9X10 6IU、蛋白稳定剂 0· 01~5. 0g、增稠剂0· 1~20. 0g、pH调节剂0· 1~10. 0g、缓冲剂0· 1~10. 0g、保湿剂 0. 1~50. 0g，加注射用水定容至1000ml。
[0006] 进一步地，所述pH调节剂为三乙醇胺、氢氧化钠、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸氢 二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硼酸、硼砂、醋酸、醋酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠、酒石酸、酒石 酸钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾、盐酸、硫酸、硝酸、磷酸中 的一种或者多种混合。
[0007] PH调节剂的作用是调节滴眼液的酸碱度，使之与泪液的酸碱度相等或相近，以减 少滴眼液的刺激性，并使药物稳定，提高药效。
[0008] 进一步地，所述增稠剂为糊精及衍生物、海藻酸钠及其衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、 聚乙烯醇、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、阿拉伯胶、西黄 耆胶、瓜尔豆胶、卡波普、植物凝集素、透明质酸、黄原胶、壳聚糖、泰洛沙泊中的一种或多种 混合。
[0009] 进一步地，所述保湿剂为甘油、丙二醇一种或多种混合。
[0010] 保湿剂的作用在于提高凝胶剂的润滑作用。
[0011] 进一步地，所述蛋白稳定剂为甘露醇、十二烷基硫酸钠、苷氨酸、吐温、右旋糖苷、 透明质酸、硫酸软骨素、肝素中的一种或多种混合。
[0012] 蛋白稳定剂的作用是为了增加滴眼液主药的稳定性，提高药效。
[0013] 进一步地，所述缓冲剂为枸橼酸纳/枸橼酸缓冲对、磷酸盐缓冲对、tris-盐酸缓 冲对、甘氨酸-三乙胺缓冲对中的一种或多种混合。
[0014] 进一步地，所述不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂采用不含抑 菌剂的独立包装，所述不含抑菌剂的独立包装的容器的容积范围为0. 1~0. 5ml/支。
[0015] 本发明还提供不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂的制备方法， 包括以下步骤：
[0016] Sl :称取增稠剂0· 1~20. 0g，pH调节剂0· 1~10.0 g溶于适量注射用水中，灭菌 30min ；
[0017] S2 :称取重组人碱性成纤维细胞生长因子IX IO6~9 X 10 6IU、蛋白稳定剂0.01~ 5. 〇g、缓冲剂0. 1~10. 〇g、及保湿剂0. 1~50g溶于适量注射用水中；
[0018] S3 :将步骤S2所得的药液经过0. 01~10. 00 μ m微孔滤膜过滤5次后与步骤Sl 所得药液混合，并用注射用水定容至1000ml，搅拌均匀；
[0019] S4 :灌装步骤S3所得药液至不含抑菌剂的包装容器中，容器的容积范围为0. 1~ 0· 5ml 支。
[0020] 本发明提供的不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂无抑菌剂，用 完即弃，可避免抑菌剂的存在对眼部产生的刺激，以及使用及储存过程中可能出现的微生 物污染。
【具体实施方式】
[0021] 实施例1
[0022] 本发明实施例提供一种不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂，包 括以下组分：重组人碱性成纤维细胞生长因子IX l〇6IU、甘露醇0.0 lg、聚乙烯醇0. lg、氢 氧化钠0. lg、磷酸盐缓冲对0. lg、甘油0. lg，加注射用水定容至1000ml。
[0023] 本发明实施例还提供一种不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂 的制备方法，包括以下步骤：
[0024] Sl :称取聚乙烯醇0. lg，氢氧化钠0.1 g溶于注射用水中，121°C热压灭菌30min ;
[0025] 32:称取重组人碱性成纤维细胞生长因子1\10611甘露醇0.018、磷酸盐缓冲 0. lg、甘油0.1 g溶于注射用水中；
[0026] S3 :将步骤S2所得的药液经过0. 01~10. 00 μ m微孔滤膜过滤5次后与步骤Sl 所得药液混合，并用注射用水定容至1000ml，搅拌均匀；
[0027] S4 :检测步骤S3所得药液，合格后，在百级环境下，灌装药液至不含抑菌剂的包装 容器中，容器的容积范围为〇. 1~〇.5ml/支。
[0028] 实施例2
[0029] 本发明实施例提供一种不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂，包 括以下组分：重组人碱性成纤维细胞生长因子9X 106IU、十二烷基硫酸钠5. 0g、羧甲基纤维 素20. 0g、碳酸钠10. 0g、枸橼酸纳/枸橼酸缓冲对10. 0g、丙二醇50g，加注射用水定容至 1000 ml0
[0030] 本实施例提供的不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂的制备方 法与实施例1相同。
[0031] 实施例3
[0032] 本发明实施例提供一种不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂，包 括以下组分：重组人碱性成纤维细胞生长因子6X 106IU、透明质酸lg、海藻酸钠3g、磷酸氢 二钠2. 5g、磷酸盐缓冲对I. 5g、甘油30g，加注射用水定容至1000ml。
[0033] 本实施例提供的不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂的制备方 法与实施例1相同。
[0034] 实施例4
[0035] 本发明实施例提供一种不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂，包 括以下组分：重组人碱性成纤维细胞生长因子4X10 6IU、硫酸软骨素1.5g、羟丙基甲基纤维 素4. 5g、盐酸I. 5g、磷酸盐缓冲对4. 5g、甘油15g，加注射用水定容至1000ml。
[0036] 本实施例提供的不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂的制备方 法与实施例1相同。
[0037] 实验一
[0038] 稳定性实验
[0039] bFGF生物学活性使用中国药典2010版第三部附录XG中记载的方法，采用BalB/c 3T3细胞，MTT法进行测定。稳定性实验结果显示，本品在室温下约可存放3个月无明显活 性丧失，可满足正常使用要求。在4~8°C储存条件下，放置两年后仍保持原有活性。处活 性外，在稳定性试验过程中，制剂外观、PH值、黏度、无菌、活性各项试验均未发现明显变化。 综上所述，在4~8°C存储条件下，本发明制剂具有良好的稳定性。
[0040] 实验二
[0041] 皮肤过敏实验
[0042] 采用实施例3制得的不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶剂，分别 以每克含20^、40^、80^、100^(相当于人临床用量的1倍、2倍、4倍、5倍）涂于豚 鼠正常及破损皮肤受试区，面积均为2cm 2，结果表明，一次用药和多次用药，对照组与给药 组比较观察，皮肤刺激反应强度均< 0. 5分，说明不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生 长因子凝胶剂一次用药和多次用药对豚鼠完整和破损皮肤均无刺激性。
[0043] 实验三
[0044] 体外释放试验
[0045] 参照DiBase MD等的方法进行，体外释放符合零级动力学模式。
[0046] 本发明临床应用情况如下：
[0047] 临床应用本实施例3制得的不含抑菌剂的重组人碱性成纤维细胞生长因子凝胶