核桃粕提取物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药制药技术领域，涉及核桃柏提取物及其制备方法和应用，具体涉 及核桃柏提取物、其制备方法以及该提取物在制备治疗胆结石、利胆药物及保健品方面的 应用。
【背景技术】
[0002] 胆结石是一种严重威胁人类健康的常见病、多发病，受多种因素影响而反复发作， 近年来由于我国人民生活水平提高，饮食习惯的改变，环境因素变化，胆结石的发病率呈现 逐年上升，在西方国家其发病率为10% -20%，在我国为2. 4% -7%，部分地区高达16. 8%。 临床上患者常出现中上腹或右上腹闷胀不舒服，嗳气和厌食油腻食物等消化不良症状，易 被当作"肝炎"、"胃炎"而拖延治疗。每年大约20%的"无症状"胆囊结石患者出现胆绞痛。 当夜餐后或在夜间，胆囊结石易卡在胆囊颈部或胆管内，使用胆囊内压力升高，胆囊膨胀产 生剧烈的绞痛。这种绞痛常常是持续性阵发性加重，严重者出现休克甚至生命危险。除此 之外，一些小的结石落入胆总管、排入十二指肠，不仅损伤总胆管末端肝胰壶腹括约肌，反 复如此，还会造成胆总管末端狭窄，继发总胆管结石及胆源性胰腺炎。近年来，胆管癌的发 生率显著提高，有资料表明约〇. 5% -1 %的胆囊结石并发胆囊癌。这种情况时常误诊，有统 计误诊率可达79. 5%。往往在胆结石手术时才发现胆囊癌，多为晚期，疗效极差，绝大多数 患者在一年内死亡。
[0003] 目前，治疗仍以手术为主，但术后残石率及复发率高（可达30 % -50 % )，再次手术 难度和风险将成培加大。西药治疗胆结石的疗程较长，通常要服用半年至两年才能达到效 果，且副作用，价格也相对较贵。因此，寻找治疗胆结石的高效低毒的药物刻不容缓。
[0004] 胡桃仁（juglans regia L )是胡桃科植物的成熟种子，其性温味苦，归肾、肺、大 肠经，具有补肾，温肺，润肠的功效，多用于肾阳不足，腰膝酸软，阳痿遗精，虚寒咳嗽，肠燥 便秘。主要含有脂肪、蛋白质、酚酸类成分，现代研究发现，核桃仁具有抗氧化、抗癌、抗衰 老、提高免疫力、改善记忆力和治疗急性肝损伤等药理作用。核桃柏为核桃仁榨油后的剩余 物，保留了核桃仁中的主要化学成分，但长期以来，经过榨油后的核桃柏除部分用来提取蛋 白质品外，常常成为工业生产的副产品，被当做饲料低价处理或废弃。
【发明内容】
[0005] 为了充分利用资源，本发明提供了核桃柏提取物的制备方法，以及在制备治疗胆 结石等消化系统药物、保健品等方面的应用。
[0006] 本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
[0007] 1.核桃柏提取物的制备：
[0008] (1)将核桃柏粉碎，核桃柏粉末用石油醚提取或超临界萃取，石油醚提取后弃去石 油醚液，过滤得滤渣，或超临界萃取后得滤渣。
[0009] (2)滤渣用水或体积浓度为30% -80%醇溶液提取，减压蒸干，得到核桃柏提取 物。
[0010] 步骤⑴中药材粉碎目数为10-40目，优选20目。
[0011] 所述的石油醚为沸程在60_90°C的石油醚，石油醚用量为核桃柏的质量的3-5倍， 优选5倍。
[0012] 所述步骤（1)的超临界萃取压力为25-35MPa，优选30MPa，萃取温度为30-60°C，优 选45°C，萃取时间l_5h，优选3h。
[0013] 所述步骤（1)中的石油醚提取的提取方法为回流、冷浸或闪式提取，每次Imin~ 4小时，提取次数1-3次，优选冷浸提取。
[0014] 步骤（2)中所述的醇溶液为甲醇、乙醇或正丁醇的含水溶液，体积浓度为 30 % -80 %，优选40 % -70 %，更优选70 %。所述醇溶液优选乙醇溶液。
[0015] 所述的水或醇溶液的用量为核桃柏质量的的8-20倍量，优选10倍。
[0016] 步骤（2)中所述的提取所用方法为回流、冷浸或闪式提取，每次Imin~3h，优选回 流提取。
[0017] 所述的回流提取中，提取时间为1~3小时，回流温度为70~90°C，优选0. 5小 时。
[0018] 冷浸时间为1~3小时，优选3小时。
[0019] 闪式提取时间为20秒-3分钟，优选1分钟。
[0020] 核桃柏提取物以总有机酸含量为指标，以核桃仁中特有的成分glansreginins A 为对照品，分光光度法测得总有机酸含量大于30%，为30. 8% -37. 1 %。此提取方法总有机 酸收率高，方法简单重现性好。
[0021] 2.核桃柏提取物的预防胆结石的研究
[0022] 采用健康雄性C57BL/6J小鼠，给予高脂饲料制胆结石模型，给一定浓度提取物， 检测血液高密度脂蛋白（HDL-C)、低密度脂蛋白（LDL-C)、胆固醇（CHO)、甘油三酯（TG)Ji 汁流量和胆汁胆固醇（CHO)、总胆红素（TBIL)。实验数据采用SPSS16. 0软件进行统计学分 析，组间比较采用单因素方差分析（One-Way AN0VA)，方差齐性时用LSDt-test分析方法进 行组间比较，方差不齐时用Dunnett ' sT3分析，实验结果以平均值土标准误差（MeaniSEM) 表示。核桃柏提取物组血清中的CHO含量与模型组含量比较显著降低，HDL-C的含量显著 高于模型组，LDL-C含量较模型组含量有显著下降，核桃柏提取物组与模型组比较，核桃柏 提取物组小鼠胆汁中CHO含量有显著降低。各组胆汁中TBIL含量以核桃柏提取物组降低 的较多，但无统计学意义。
[0023] 为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例进行进一步阐述。应理解为这些 实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，下列实施例中未提及的具体实验方 法，通常按照常规实验方法进行。
【具体实施方式】：
[0024] 提取工艺优化
[0025] 选用提取时间、溶剂倍量、提取次数、乙醇浓度4个因素，每个因素3个水平，以核 桃柏粉末中glansreginins A的含量（mg/g)为考察指标，按照（L934)正交表（见表1)设 计方案进行实验，优化提取工艺。
[0026] 精密称取核桃柏粉末20. 0g，9份，按正交试验设计表进行提取，过滤，浓缩，稀释 至适当浓度后，作为待测液，用于总有机酸的含量测定，正交实验设计结果见表2,方差分析 见表3。
[0027] 表.IL9 (34)提取工艺正交设计
[0028]
[0029]
[0030]
[0031] 实验结果表明，以glansreginins A含量为指标进行直观分析时，各因素对结果的 影响大小依次为C>D>B>A，以浸膏为指标得到的结果与以glansreginins A为指标的结果 一致，最佳工艺条件为A1B2C3D2,进一步方差分析结果表明提取次数和醇浓度对指标成分 提取的影响较显著。提取次数优选3次，提取溶剂优选乙醇，浓度优选70%，提取时间对提 取率影响不大。
[0032] 实施例1
[0033] 将核桃柏粉碎，取50g核桃柏粉以3倍量的石油醚（60-90)冷浸2次，每次4h，弃 去石油醚液，得滤渣，将滤渣以10倍量浓度为70 %的乙醇溶液回流提取2次，每次lh，减压 回收溶剂，减压浓缩至干，得核桃柏提取物，以glansreginins A为对照品，分光光度法测得 总有机酸含量为35. 1%。
[0034] 实施例2
[0035] 将核桃柏粉碎，取50g核桃柏粉用超临界萃取压力30MPa，萃取温度为40°C，萃取 时间3h，得滤渣，将滤渣以12倍量浓度为40%的甲醇溶液超声提取2次，每次0. 5h，减压回 收溶剂，减压浓缩至干，得核桃柏提取物，以glansreginins A为对照品，分光光度法测得总 有机酸含量为31. 1%。
[0036] 实施例3
[0037] 将核桃柏粉碎，取50g核桃柏粉以5倍量的石油醚（60-90)冷浸3次，每次4h，弃 去石油醚液，得滤渣，将滤渣以20倍量浓度为60 %的正丁醇溶液冷浸提取3次，每次4h，减 压回收溶剂，减压浓缩至干，得核桃柏提取物，以glansreginins A为对照品，分光光度法测 得总有机酸含量为32. 1%。
[0038] 实施例4
[0039] 将核桃柏粉碎，取50g核桃柏粉以5倍量的石油醚（60-90)回流提取3次，每次lh， 弃去石油醚液，得滤渣，将滤渣以10倍量浓度为60 %的乙醇溶液回流提取3次，每次I. 5h， 减压回收溶剂，减压浓缩至干，得核桃柏提取物，以glansreginins A为对照品，分光光度法 测得总有机酸含量为33. 8%。
[0040] 实施例5
[0041] 将核桃柏粉碎，取50g核桃柏粉以5倍量的石油醚（60-90)回流提取3次，每次lh， 弃去石油醚液，得滤渣，将滤渣以10倍量浓度为70%的乙醇溶液回流提取3次，每次I. 5h， 减压回收溶剂，减压浓缩至干，得核桃柏提取物，以glansreginins A为对照品，分光光度法 测得总有机酸含量为37. 1%。
[0042] 实施例6
[0043] 将核桃柏粉碎，取50g核桃柏粉以5倍量的石油醚（60-90)回流提取3次，每次lh， 弃去石油醚液，得滤渣，将滤渣以10倍量浓度为50 %的乙醇溶液回流提取3次，每次I. 5h， 减压回收溶剂，减压浓缩至干，得核桃柏提取物，以glansreginins A为对照品，分光光度法 测得总有机酸含量为26. 1%。
[0044] 实施例7
[0045] 将核桃柏粉碎，取50g核桃柏粉以5倍量的石油醚（60-90)回流提取3次，每次lh， 弃去石油醚液，得滤渣，将滤渣以10倍量浓度为80 %的乙醇溶液回流提取3次，每次I. 5h， 减压回收溶剂，减压浓缩至干，得核桃柏提取物，以glansreginins A为对照品，分光光度法 测得总有机酸含量为36. 3%。
[0046] 实施例8
[0047] 健康雄性C57BL/6J小鼠32只（20±2g)，随机分组：空白对照组、模型对照组、阳 性对照组和给药组。模型对照、阳性对照组和给药组小鼠给予致石饲料，饮水不限，空白对 照组予正常饲料。给药组和阳性对照组小鼠每日上午固定时间称重灌胃，灌给核桃柏提取 物（实施例1)和熊去氧胆酸片（UDCA)，剂量分别为0· Olmg/g和0· 02mg/g，每日1次；模型 对照组和空白对照组给予等体积的蒸馏水。喂养8周。实验最后ld，禁食24h，