专利名称：新的嘧啶胺衍生物及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的取代的N-(3-苯甲酰基氨基苯基)-4-吡啶基-2-嘧啶胺衍生物、它们的制备方法、含有它们的药物组合物、它们任选地与一种或多种其他药学活性化合物联合用于治疗对于抑制蛋白激酶活性有响应的疾病、尤其是肿瘤疾病的用途，以及治疗所述疾病的方法。
蛋白激酶(PK)是一种催化细胞蛋白质中特定的丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基的磷酸化作用的酶。底物蛋白质的这些翻译后修饰充当调节细胞增殖、活化和/或分化的分子开关。在很多疾病状态中已经观察到异常或过度的PK活性，包括良性和恶性增殖性疾病。在很多情况下，已经可以通过体外和体内利用PK抑制剂来治疗疾病，例如增殖性疾病。
鉴于蛋白激酶抑制剂数量之大和增殖性及其他PK-相关性疾病种类之多，一直需要提供新的种类的化合物，它们可用作PK抑制剂，因而可用于治疗这些PK-相关性疾病。所需要的是新的药学上有利的PK抑制性化合物。
费城染色体是慢性骨髓性白血病(CML)的标志，它携带一种杂合基因，该基因含有bcr基因的N-末端外显子和c-Abl基因的主要C-末端部分(外显子2-11)。该基因编码190kD、210kD或230kD嵌合蛋白之一，这取决于所涉及的是bcr中的三个可供选择的断裂点中的哪一个。Bcr-Abl蛋白的Abl-部分含有Abl-酪氨酸激酶，它在野生型c-Abl中被严格调节，但是在Bcr-Abl融合蛋白中被组成活化。这种失调的酪氨酸激酶与多种细胞信号传导途径发生相互作用，引起细胞转化和失调的细胞增殖(Lugo等，Science247，1079)。
p210 Bcr-Abl在95％的CML患者和大约33％的急性成淋巴细胞白血病(ALL)患者中表达。较小的p190 kD蛋白的表达更经常出现在ALL中，但在CML中很少出现，其临床特征在于显著的单核细胞增多。230kD融合蛋白与罕见的慢性中性细胞白血病有关，该疾病进展为原始细胞危象的速度很慢。在晚期CML、尤其在ALL中，同源细胞经常出现于其中Bcr-Abl蛋白的激酶结构域发生突变的患者中。所述的突变体包括例如E225V和M351T转变(Shah等，Cancer Research2，117-225)。
突变的ras致癌基因通常与肿瘤的发展有关。ras蛋白由三种不同的基因表达，即Neuroblastoma(N)-ras、Harvey(Ha)-ras和Kirsten(K)-ras。K-ras最经常在实体瘤中产生突变，例如结肠癌、肺癌和，特别是胰腺癌；N-ras在出血性肿瘤，主要是急性骨髓性白血病中突变(Lyons等，Endocrine-Related Cancer8，219)。已经证实ras可以调节引起细胞转化的多种途径，包括，例如通过结合并激活Raf激酶的Raf/MEK途径。
下面详细描述的式1的N-(3-苯甲酰基氨基苯基)-4-吡啶基-2-嘧啶胺衍生物显示出对蛋白激酶活性的优良抑制作用，尤其是对一种或多种酪氨酸激酶的抑制作用，例如Bcr-Abl、突变的Bcr-Abl、c-Abl、Raf、受体酪氨酸激酶PDGF-R、Flt3、VEGF-R、EGF-R和c-Kit，以及两种或多种这些激酶的组合。具体地讲，本发明的化合物对在抗药患者中观察到的Bcr-Abl的某些突变体形式表现出较高的效力。鉴于这些活性，这些化合物能够用于治疗尤其涉及这些激酶的异常或过度活性的疾病，例如用于治疗白血病的特殊病例和实体瘤例如结肠癌、肺癌和胰腺癌。
本发明涉及式1化合物和该化合物的N-氧化物或可药用盐， 其中R1代表氢且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氢；
R3代表低级烷基、氟代烷基、羟基烷基或氨基甲酰基；R4代表氢、低级烷基或卤素；并且R5和R6彼此独立地表示氢、低级烷基、羟基-低级烷基、低级烷氧基-低级烷基、低级酰氧基-低级烷基、羧基-低级烷基、低级烷氧基羰基-低级烷基、氨基-低级烷基、低级烷基氨基-低级烷基、二(低级烷基)氨基-低级烷基、N-低级烷基哌啶基、N-低级烷基吡咯烷基或低级酰基，或者R5R6一起表示具有四、五或六个碳原子的亚烷基、具有一个氧和三或四个碳原子的氧杂-低级亚烷基或具有一个氮和三或四个碳原子的氮杂-低级亚烷基，其中氮原子是未取代的或者被低级烷基、羟基-低级烷基或低级烷氧基-低级烷基所取代，并且其中在所有情况下低级亚烷基均可以是部分或完全不饱和的和/或低级亚烷基的碳原子可以被低级烷基、羟基或低级烷氧基取代。
若无另外说明，上下文所用的一般术语优选在本文中具有下列含义前缀“低级”表示具有至多且包括最多7个、尤其是至多且包括最多4个碳原子的基团，所述基团是直链的或者是具有单个或多个分支的支链。
若复数形式用于化合物、盐等，其也表示单一的化合物、盐等。
任何不对称的碳原子都可能以(R)-、(S)-或(R，S)-构型存在，优选(R)-或(S)-构型。这些化合物因而可以以异构体的混合物或者纯的异构体存在，优选以对映体纯的非对映体存在。
本发明还涉及式1化合物可能的互变异构体。
低级烷基优选是这样的烷基，其含有从1且包括1个、至7且包括7个碳原子，优选从1且包括1个、至4且包括4个碳原子，并且是直链或支链的；优选地，低级烷基是丁基，例如正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基，丙基，例如正丙基或异丙基，乙基或甲基。优选地，低级烷基是甲基、丙基或叔丁基。
低级酰基优选地是甲酰基或低级烷基羰基，特别是乙酰基。
羟基烷基尤其是羟基-低级烷基，优选羟基甲基、2-羟基乙基或2-羟基-2-丙基。
氟代烷基尤其是氟代-低级烷基，优选三氟甲基或五氟乙基。
卤素尤其是氟、氯、溴或碘，尤其是氟、氯或溴。
低级烷氧基尤其是甲氧基、乙氧基、异丙氧基或叔丁氧基。
低级烷氧基羰基尤其是叔丁氧基羰基、异丙氧基羰基、甲氧基羰基或乙氧基羰基。
盐尤其是式1化合物的可药用盐。
所述的盐可以是例如酸加成盐，优选由具有碱性氮原子的式1化合物与有机或无机酸形成的盐，尤其是可药用盐。适合的无机酸例如是氢卤酸，例如盐酸、硫酸或磷酸。适合的有机酸例如是羧酸、膦酸、磺酸或氨基磺酸，例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、十二烷酸、乙醇酸、乳酸、富马酸、琥珀酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、氨基酸(例如谷氨酸或天冬氨酸)、马来酸、羟基马来酸、甲基马来酸、环己烷羧酸、金刚烷羧酸、苯甲酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、邻苯二甲酸、苯乙酸、扁桃酸、肉桂酸、甲烷-或乙烷-磺酸、2-羟基乙烷磺酸、乙烷-1，2-二磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、1，5-萘二磺酸、2-、3-或4-甲基苯磺酸、甲基硫酸、乙基硫酸、十二烷基硫酸、N-环己基氨基磺酸、N-甲基-、N-乙基-或N-丙基-氨基磺酸，或者其他有机质子酸，例如抗坏血酸。
出于分离或纯化的目的，也有可能使用药学上不可接受的盐，例如苦味酸盐或高氯酸盐。就治疗用途而言，仅采用可药用盐或游离化合物(适用的话为药物制剂的形式)，它们因此是优选的。
鉴于新化合物的游离形式与盐形式(包括能够用作中间体的那些盐，例如用于新化合物的纯化或鉴别)之间的密切关系，如果适当的话，上下文任何对游离化合物的称谓均应理解为也表示相应的盐。
式1化合物及其N-氧化物具有有价值的药理性质，如上下文所述。
本发明的化合物作为c-Abl、Bcr-Abl、Raf和VEGF-受体酪氨酸激酶活性抑制剂的功效可以证明如下抗c-Abl蛋白酪氨酸激酶活性试验。本试验是按照滤膜结合测定法如下进行的克隆His-标记的c-Abl激酶结构域，在杆状病毒/Sf9系统中表达，如Bhat等，J Biol Chem.272，16170-5(1997)所述。利用两步工艺将37kD的蛋白质(c-Abl激酶)经过钴金属螯合物柱随后经阴离子交换柱纯化，得到1-2mg/L的Sf9细胞。在考马斯蓝染色后，经SDS-PAGE判断c-Abl激酶的纯度为＞90％。测定剂含有c-Abl激酶(50ng)，20mM Tris-HCl，pH7.5，10mMmgCl2，10μM Na3VO4，1mM DTT和0.06μCi/测定[γ33P]-ATP(5μM ATP)，在1％ DMSO的存在下使用30μg/mLpoly-Ala，Glu，Lys，Tyr-6:2:5:1(Poly-AEKY，Sigma P1152)，总体积为30μL。加入10μL 250mM EDTA终止反应，将30μL反应混合物转移至预先用甲醇浸泡5分钟的Immobilon-PVDF膜(Millipore，Bedford，MA，USA)上，用水冲洗，然后用0.5％H3PO4浸泡5分钟，安装在未与真空源连接的真空歧管上。点上全部样本后，连接真空，将各孔用200μL H3PO4冲洗。取下膜，在振荡器上用0.5％H3PO4洗涤(4次)，用乙醇洗涤一次。将膜在环境温度下干燥，安装在Packard TopCount 96-孔框架上，加入10μL/孔MicroscintTM(Packard)后，进行计数。
抗Bcr-Abl活性试验。用p210 Bcr-Abl表达载体pGDp210Bcr/Abl转染的鼠髓祖代细胞系32Dcl3(32D-bcr/abl)由J.Griffin处获得(Dana FaberCancer Institue，Bosten，MA，USA)。细胞表达与组成型活性Abl激酶融合的Bcr-Abl蛋白质，并独立地增殖生长因子。在RPMI 1640(AMIMED)，10％胎牛血清，2mM谷氨酰胺(Gibco)(“完全培养基”)中扩充细胞，通过在冷冻培养基(95％FCS，5％DMSO(SIGMA))中冷冻2×106细胞/小瓶的等分试样制备工作储备液。融化后，使用在最大10-12代期间的细胞进行实验。
就细胞测定而言，将化合物溶于DMSO，用完全培养基稀释得到起始浓度为10μM，随后制备在完全培养基中的系列3-倍稀释液。将含有200’00032D-Bcr/Abl细胞的50μL完全培养基接种在96孔圆底组织培养平板的每孔中。向小孔加入50μL/孔供试化合物的系列3-倍稀释液，一式三份。使用未经处理的细胞作为对照。将化合物与细胞一起在37℃，5％CO2下培育90分钟，随后将组织培养平板在1300rpm下离心(Beckman GPR离心机)，通过小心的抽吸除去上清液，注意不要除去任何沉积的细胞。加入150μL溶解缓冲液(50mM Tris/HCl，pH 7.4，150mM氯化钠，5mM EDTA，1mM EGTA，1％NP-40，2mM原钒酸钠，1mM PMSF，50μg/mL抑肽酶，80μg/mL亮肽素)使细胞沉积物溶解，立即用于ELISA或者在平板中冷冻在-20℃下备用。在4℃下将黑色ELISA平板(Packard HTRF-96黑色平板)用含50ng来自Upstate的兔多克隆抗-abl-SH3结构域Ab 06-466的50μLPBS/孔预涂敷过夜。用含有0.05％Tween 20(PBST)和0.5％TopBlock(Juro)的200μL/孔PBS洗涤3次后，在室温下将残留的蛋白质结合部位用200μL/孔PBST，3％TopBlock封闭4小时，随后在4℃下与50μL未经处理或经过化合物处理的细胞溶胞产物(20μg总蛋白/孔)培育3-4小时。洗涤3次后，加入在封闭缓冲液中稀释至0.2μμg/mL的、用碱性磷酸酶(Zymed)标记的50μL/孔抗-磷酸酪氨酸Ab PY20(AP)，培育过夜(4℃)。就全部培育步骤而言，用平板密封剂(Costar)覆盖平板。最后，将平板用洗涤缓冲液再洗涤三次，用去离子水洗涤一次，然后加入90μL/孔含有EmeraldII的AP-底物CDPStar RTU。将已用Packard TopSealTM-A平板密封剂密封的平板在室温下暗处培育45分钟，通过利用Packard Top Count微量平板闪烁计数器(Top Count)测量每秒的计数(CPS)对发光进行量化。计算未经处理的32D-Bcr/Abl细胞溶胞产物所得ELISA-计数(CPS)与测定背景(全部组分，但是没有细胞溶胞产物)所得计数之差，计为100％，它反映存在于这些细胞中的组成型磷酸化Bcr-Abl蛋白。化合物对Bcr-Abl激酶活性的活性以Bcr-Abl磷酸化的减少百分比表示。利用图形外推从剂量响应曲线测定IC50和IC90值。
抗突变体Bcr-Abl活性试验化合物对M351T突变体Bcr-Abl激酶活性的活性按照上面的描述进行评价，所不同的是用突变体Bcr-Abl转染的32Dcl3细胞代替p210 Bcr-Abl。
c-Raf-1蛋白激酶试验通过用GST-c-Raf-1重组杆状病毒和产生活性c-Raf-1激酶所需的v-Src和v-Ras重组杆状病毒对Sf21细胞进行三重转染获得重组c-Raf-1蛋白(Williams等，PNAS 1992；892922-6)。需要活性Ras(v-Ras)来使c-Raf-1聚集到细胞膜，并且需要v-Src来磷酸化c-Raf-1以使其完全激活。将细胞以2.5×107细胞的密度接种在150mm的盘子中，然后在室温下1小时以使细胞粘附在150mm的盘子上。抽吸培养液(含有10％FBS的SF900II)，然后分别以MOI为3.0、2.5和2.5加入重组的杆状病毒GST-c-Raf-1、v-Ras和v-Src，总体积为4-5mL。将细胞在室温下培育1小时，然后加入15mL培养液。将被感染的细胞在27℃下培育48-72小时。将感染的Sf21细胞刮下并收集在50mL的试管中，然后在4℃及1100g下在Sorvall离心机中离心10分钟。将细胞团用冰冷的PBS洗涤一次，然后用0.6mL溶解缓冲液/2.5×107细胞进行溶解。在冰上放置10分钟(不定时地用吸管抽吸)后完成细胞的完全溶解。将细胞溶胞产物在4℃及14,500g下在带有SS-34转子的Sorvall离心机中离心10分钟，然后将上清液转移到新试管中并在-80℃下贮存。将c-Raf-1用100μL填充的谷胱甘肽-琼脂糖4B珠粒(其在冰冷的PBS中平衡)/2.5×107细胞从细胞溶胞产物中纯化。将GST-c-Raf-1在4℃下在摇动下与珠粒结合1小时。将与珠粒结合的GST-c-Raf-1转移到柱子中。将柱子用溶解缓冲液洗涤一次，然后用冰冷的Tris缓冲盐水洗涤两次。加入冰冷的洗脱缓冲液，然后停止柱子内的流动以使得游离的谷胱甘肽破坏GST-c-Raf-1与谷胱甘肽琼脂糖珠粒之间的相互作用。将级分(1mL)收集在预先冷却的试管中。每个试管均含有10％甘油(终浓度)以保持在冷冻融化循环过程中的激酶活性。将GST-c-Raf-1激酶蛋白的纯化级分贮存在-80℃下。
用IκB作为c-Raf-1激酶的底物。IκB在细菌中以His-标记的蛋白BL21的形式表达。使含有IκB质粒的LysS细菌在LB培养基中生长至OD600为0.6，然后在37℃下用IPTG(终浓度为1mM)诱导表达IκB3小时，然后通过在超声缓冲液[50mM Tris pH 8.0，1mM DTT，1mM EDTA]中超声处理(超声3次，每次1分钟)使细菌溶解，然后在10,000g下离心15分钟。将上清液与硫酸铵混合以得到终浓度为30％。将该混合物在4℃下摇动15分钟，然后在10,000g下离心15分钟。将沉积物重新悬浮在含有10mM BSA的结合缓冲液(Novagen)中。将该溶液涂覆到Ni-琼脂糖(Novagen)上并且按照Novagen手册进行洗涤。用洗脱缓冲液(0.4M咪唑，0.2M NaCl，8mM Tris pH 7.9)将IκB从柱子中洗脱。将含有蛋白的级分在50mM Tris pH 8，1mM DTT中进行透析。
c-Raf-1蛋白激酶的活性在含或者不含抑制剂的条件下通过测定[γ33P]ATP中的33P结合进入IκB来进行测定。试验在96孔板中在室温下进行60分钟。它含有(总体积为30μL)c-Raf-1激酶(400ng)、25mM Tris·HCl，pH 7.5、5mMmgCl2、5mM MnCl2、10μM Na3VO4、1mM DTT和0.3μCi/测定[γ33P]-ATP(10μM ATP)，在1％DMSO的存在下使用600ng IκB。加入10μL 250mM EDTA终止反应，将30μL反应混合物转移到预先用甲醇浸泡5分钟的Immobilon-PVDF膜(Millipore，Bedford，MA，USA)上，用水冲洗，然后用0.5％H3PO4浸泡5分钟，安装在未与真空源连接的真空歧管上。点上全部样本后，连接真空，将各孔用200μL0.5％H3PO4冲洗。取下膜，在振荡器上用0.5％H3PO4洗涤(4次)，用乙醇洗涤一次。将膜在室温下干燥，安装在Packard TopCount 96-孔框架中，加入10μL/孔MicroscintTM(Packard)后，进行计数。
抗VEGF-受体酪氨酸激酶活性试验。本试验是用Flt-1 VEGF-受体酪氨酸激酶进行的。详细工艺如下将30μL激酶在20mM Tris·HCl pH 7.5，3mM二氯化锰(MnCl2)，3mM氯化镁(MgCl2)，10μM钒酸钠，0.25mg/mL聚乙二醇(PEG)20000，1mM二硫苏糖醇中的溶液(10ng Flt-1的激酶结构域，Shibuya等，Oncogene5，519-24)与3μg/μL poly(Glu，Tyr)4:1(Sigma，Buchs，瑞士)，8μM[33P]-ATP(0.2μCi)，1％DMSO和0至100μM供试化合物一起在室温下培育10分钟。然后加入10μL 0.25M乙二胺四乙酸(EDTA)pH 7终止反应。利用多通道分配器(LAB SYSTEMS，USA)，将20μL等分试样通过Gibco-BRL微量滴定过滤歧管上样到PVDF(＝聚二氟乙烯)Immobilon P膜(Millipore，Bedford，USA)上，连接真空。完全除去液体后，将膜在含有0.5％磷酸(H3PO4)的水浴中洗涤4次，然后用乙醇洗涤一次，每次培育10分钟，同时振荡，然后安装在Hewlett Packard TopCount歧管中，加入10μL Microscint(β-闪烁计数器液体)后测量放射性。利用至少四种浓度(通常为0.01、0.1、1.0和10μmol)的各化合物抑制百分比的线性回归分析测定IC50值。可以发现式1化合物的IC50值在1至10’000nM的范围内，优选在1至100nM的范围内。
利用另一种体外细胞实验可以证实对VEGF-诱导的KDR-受体自磷酸化的抑制作用在6孔细胞培养平板中，将永久性表达人VEGF受体(KDR)的转染CHO细胞接种在含有10％胎牛血清(FCS)的完全培养基中，在37℃和5％CO2下培育，直至它们显示约80％的融合。然后将供试化合物用培养基(没有FCS，含有0.1％牛血清白蛋白)稀释，加入到细胞中(对照包含培养基，没有供试化合物)。在37℃下培育2小时后，加入重组VEGF(最终的VEGF浓度为20ng/mL)。在37℃下培育另外5分钟后，将细胞用冰冷的PBS(磷酸盐缓冲盐水)洗涤2次，立即溶解在100μL溶解缓冲液/孔中。然后将溶胞产物离心，以除去细胞核，并利用商业化蛋白质测定法(BIORAD)测定上清液的蛋白质浓度。溶胞产物然后可以立即使用或者(如果必要的话)贮存在-20℃下。
进行夹心ELISA，以测量KDR-受体磷酸化将KDR的单克隆抗体(例如Mab 1495.12.14)固定在黑色ELISA平板(OptiPlateTMHTRF-96，Packard)上。然后洗涤平板，将剩余的游离蛋白质结合部位用含1％BSA的PBS溶液饱和。然后在这些平板中将细胞溶胞产物(20μg蛋白质/孔)在4℃下与抗-磷酸酪氨酸抗体一起培育过夜，所述抗体与碱性磷酸酶偶联(PY20AP，Transduction Laboratories)。再次洗涤平板，然后利用发光AP底物(CDP-Star，即用型，含有Emerald II；TROPIX)证实抗-磷酸酪氨酸抗体与所捕获的磷酸化受体的结合。在Packard Top Count微量平板闪烁计数器(Top Count)中测量发光。阳性对照(用VEGF刺激)与阴性对照(不用VEGF刺激)的信号之差相当于VEGF-诱导的KDR-受体磷酸化(＝100％)。以对VEGF-诱导的KDR-受体磷酸化的抑制％计算供试物质的活性，其中诱发一半最大抑制作用的物质浓度被定义为ED50(抑制50％的有效剂量)。式1化合物的ED50值优选地在0.25nM至1000nM的范围内，优选0.25至250nM。
式1化合物或其N-氧化物也在不同程度上抑制其他参与由营养因子(trophic factor)介导的信号传导的酪氨酸激酶，例如Raf、Bcr-Abl和Abl激酶；Arg；Src家族的激酶，尤其是c-Src激酶、Lck和Fyn；EGF家族的激酶，例如c-erbB2激酶(HER-2)、c-erbB3激酶、c-erbB4激酶；胰岛素样生长因子受体激酶(IGF-1激酶)，尤其是PDGF-受体酪氨酸激酶家族的成员，例如PDGF-受体激酶、CSF-1-受体激酶、Kit-受体激酶和VEGF-受体激酶；和丝氨酸/苏氨酸激酶，它们全都在哺乳动物细胞、包括人类细胞的生长调节和转化中发挥作用。
对c-erbB2酪氨酸激酶(HER-2)的抑制作用例如可以利用已知工艺按照与EGF-R蛋白激酶抑制作用相同的方式进行测量。
在这些研究的基础上，本发明的式1化合物显示出治疗功效，尤其是对依赖于蛋白激酶的疾病、特别是增殖性疾病显示出治疗功效。
在它们作为VEGF-受体酪氨酸激酶活性抑制剂的功效基础上，式1化合物主要抑制血管的生长，因而可例如有效对抗大量与失调性血管生成有关的疾病，尤其是由眼新血管形成所导致的疾病，尤其是视网膜病，例如糖尿病性视网膜病或老年黄斑变性，牛皮癣，成血管细胞瘤，例如血管瘤，肾小球膜细胞增殖障碍，例如慢性或急性肾疾病，例如糖尿病性肾病，恶性肾硬化，血栓形成性微血管病综合征或移植排斥，或者尤其是炎性肾疾病，例如肾小球性肾炎，尤其是肾小球膜增殖性肾小球性肾炎，溶血性尿毒症综合征，糖尿病性肾病，高血压性肾硬化，动脉粥样化，动脉再狭窄，自身免疫疾病，糖尿病，子宫内膜异位，慢性哮喘，尤其是肿瘤疾病(实体瘤，以及白血病和其他“液体肿瘤”，尤其是表达c-kit、KDR、Flt-1或Flt-3的那些)，尤其是例如乳腺癌、结肠癌、肺癌(尤其是小细胞肺癌)、前列腺癌或卡波济氏肉瘤。式1化合物(或其N-氧化物)抑制肿瘤的生长，尤其适合于防止肿瘤的转移性扩散和微转移瘤的生长。
式1化合物可以单独或者与一种或多种其他治疗剂联合给药，可能的联合疗法采取固定组合或者本发明化合物与一种或多种其他治疗剂交错给药或者彼此独立给药的方式，或者采取固定组合和一种或多种其他治疗剂联合给药的方式。此外，式1化合物还可以与化疗、放疗、免疫疗法、手术干预或它们的组合联合给药，尤其是用于肿瘤疗法，例如白血病疗法。在其他治疗策略背景下，长期疗法和辅助疗法同样是可能的，如上所述。其他可能的治疗是维持患者在肿瘤消退后的状态的疗法，或者甚至是化学预防性疗法，例如对于面临危险的患者。
就可能的组合而言，治疗剂尤其是一种或多种抗增殖的、细胞抑制性或细胞毒性化合物，例如一种或几种选自但不限于如下的化疗剂多胺生物合成抑制剂、蛋白激酶抑制剂、尤其是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶例如蛋白激酶C的抑制剂，或酪氨酸蛋白激酶例如EGF受体酪氨酸激酶例如PKI166、VEGF受体酪氨酸激酶例如PTK787或PDGF受体酪氨酸激酶例如STI571的抑制剂、细胞因子、负性生长调节剂、例如TGF-β或IFN-β、芳化酶抑制剂，例如来曲唑或阿那曲唑(anastrozole)、SH2结构域与磷酸化的蛋白质相互作用的抑制剂、抗雌激素、拓扑异构酶I抑制剂，例如伊立替康(irinotecan)、拓扑异构酶II抑制剂、微管活化剂，例如紫杉醇、海绵内酯(discodermolide)或埃坡霉素、烷化剂、抗肿瘤抗代谢物，例如，吉西他滨或卡培他滨(capecitabine)，铂化合物，例如卡铂或顺铂、抗血管生成化合物、戈那瑞林激动剂、抗雄激素、二膦酸类，例如AREDIA或ZOMETA，和曲妥珠单抗(trastuzumab)。对于组合而言，优选的治疗剂尤其选自伊达比星、阿糖胞苷、干扰素、羟基脲和bisulfan。用代码、通用名或商标名表示的活性剂的结构可以参见标准概要“The Merck Index”的现行版本或者选自数据库例如Patents International(例如IMS WorldPublications)。在本文中将其相应的内容引入作为参考。
本发明的化合物不仅可用于人类的(预防性，优选治疗性)治疗，而且可用于其他温血动物的治疗，例如商业上有用的动物，例如啮齿动物，例如小鼠、兔或大鼠，或者豚鼠。该化合物也可以用作上述试验系统中的参照标准，以便与其他化合物比较。
总的来讲，本发明还涉及式1化合物或其N-氧化物体外或体内抑制酪氨酸激酶活性的用途。
关于下文提到的优选的式1化合物及其N-氧化物，可以合理地使用来自上文提到的一般定义的取代基定义，例如用更具体的定义或者尤其用优选的定义代替更一般性的定义。
确切而言，本发明涉及式1化合物和该化合物的N-氧化物或可药用盐，其中R1代表氢且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氢；R3代表低级烷基、氟代烷基、羟基烷基或氨基甲酰基；R4代表低级烷基；并且R5和R6彼此独立地表示氢、低级烷基、羟基-低级烷基、低级烷氧基-低级烷基、低级酰氧基-低级烷基、羧基-低级烷基、低级烷氧基羰基-低级烷基、氨基-低级烷基、低级烷基氨基-低级烷基、二(低级烷基)氨基-低级烷基、N-低级烷基哌啶基、N-低级烷基吡咯烷基或低级酰基，或者R5R6一起表示具有四、五或六个碳原子的亚烷基、具有一个氧和三或四个碳原子的氧杂-低级亚烷基或具有一个氮和三或四个碳原子的氮杂-低级亚烷基，其中氮原子是未取代的或者被低级烷基、羟基-低级烷基或低级烷氧基-低级烷基所取代，并且其中在所有情况下低级亚烷基均可以是部分或完全不饱和的和/或低级亚烷基的碳原子可以被低级烷基、羟基或低级烷氧基取代。
更确切地，本发明涉及式1化合物和该化合物的N-氧化物或可药用盐，其中R1代表氢且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氢；R3代表三氟甲基；R4代表甲基；并且R5和R6彼此独立地表示氢、低级烷基、羟基-低级烷基、低级烷氧基-低级烷基、低级酰氧基-低级烷基、羧基-低级烷基、低级烷氧基羰基-低级烷基、氨基-低级烷基、低级烷基氨基-低级烷基、二(低级烷基)氨基-低级烷基、N-低级烷基哌啶基、N-低级烷基吡咯烷基或乙酰基，或者R5R6一起表示具有四、五或六个碳原子的亚烷基、具有一个氧和三或四个碳原子的氧杂-低级亚烷基或具有一个氮和三或四个碳原子的氮杂-低级亚烷基，其中氮原子是未取代的或者被低级烷基、羟基-低级烷基或低级烷氧基-低级烷基所取代，并且其中在所有情况下低级亚烷基均可以是部分或完全不饱和的和/或低级亚烷基的碳原子可以被低级烷基、羟基或低级烷氧基取代。
更确切地，本发明涉及式1化合物和该化合物的N-氧化物或可药用盐，其中R1代表氢且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氢；R3代表三氟甲基；R4代表甲基；并且R5和R6彼此独立地表示氢、低级烷基、羟基-低级烷基、氨基-低级烷基、低级烷基氨基-低级烷基、二(低级烷基)氨基-低级烷基、N-低级烷基哌啶基或低级酰基，或者R5R6一起表示具有四或五个碳原子的亚烷基、具有一个氧和三或四个碳原子的氧杂-低级亚烷基或具有一个氮和三或四个碳原子的氮杂-低级亚烷基，其中氮原子是未取代的或者被低级烷基、羟基-低级烷基或低级烷氧基-低级烷基所取代，并且其中在所有情况下低级亚烷基均可以是部分或完全不饱和的和/或低级亚烷基的碳原子可以被低级烷基取代。
优选下面的式1化合物和该化合物的N-氧化物或可药用盐，其中R1代表氢且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氢；R3代表三氟甲基；R4代表甲基；并且R5和R6彼此独立地表示氢、低级烷基、二(低级烷基)氨基-低级烷基、N-低级烷基哌啶基或低级乙酰基，或者R5R6一起表示具有四或五个碳原子的亚烷基、具有一个氧和四个碳原子的氧杂-低级亚烷基或具有一个氮和三或四个碳原子的氮杂-低级亚烷基，其中氮原子是未取代的或者被低级烷基所取代，并且其中氮杂-低级亚烷基可以是不饱和的和/或氮杂-低级亚烷基的碳原子可以被低级烷基取代。
特别优选的是下面的式1化合物和该化合物的N-氧化物或可药用盐，其中R1代表氢且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氢；R3代表三氟甲基；R4代表甲基；并且R5和R6彼此独立地表示氢、甲基、乙基、2-二甲基氨基乙基、4-甲基-1-哌啶基或乙酰基，或者NR5R6一起表示吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、吗啉-4-基、N-甲基哌嗪-1-基、1H-咪唑基、1H-2-甲基咪唑基、1H-4-甲基咪唑基或1H-2，4-二甲基咪唑基。
特别优选的是实施例的化合物。
本发明尤其涉及式1化合物或者其N-氧化物或可能的互变异构体或者该化合物的可药用盐在制备用于治疗对于抑制蛋白激酶活性有响应的疾病的药物组合物中的用途，其中所述的疾病是一种肿瘤疾病。
更具体地讲，本发明涉及式1化合物或者其N-氧化物或可能的互变异构体或者该化合物的可药用盐在制备用于治疗对于抑制Raf和/或Abl酪氨酸激酶活性有响应的白血病的药物组合物中的用途。
此外，本发明还涉及式1化合物或其N-氧化物或可能的互变异构体或者该化合物的可药用盐在治疗对于抑制蛋白激酶活性有响应的疾病中的用途。
此外，本发明还提供了治疗对于抑制蛋白激酶活性有响应的疾病的方法，该方法包括对需要所述治疗的温血动物施用对抗所述疾病有效量的式1化合物或者其N-氧化物或可药用盐，其中各基团和符号具有如上所定义的含义。
本发明的化合物可以通过虽然迄今尚未应用于本发明的新化合物但其本身是已知的方法制备，尤其是如下方法，其特征在于，为了合成其中符号R1、R2、R3和R4如式1化合物所定义的式1化合物，将式2的取代的苯甲酸
其中R1、R2和R3如式1化合物所定义，或者其中羧基-COOH为活化形式的衍生物与式3的3-(4-(3-吡啶基)-2-嘧啶氨基)苯胺反应， 其中R4如式1化合物所定义，反应任选地在脱水剂和惰性碱和/或适合的催化剂的存在下，并且任选地在惰性溶剂的存在下进行；其中，如果必要的话，上述起始化合物2和3也可以以其中的官能团是被保护的形式存在和/或以盐的形式存在，只要存在成盐基团并且以盐形式反应是可能的；除去式1化合物的被保护衍生物中的任何保护基团；并且如果需要的话，将所得式1化合物转化为另一种式1化合物或其N-氧化物，将游离的式1化合物转化为盐，将得到的式1化合物的盐转化为游离化合物或另一种盐，和/或将式1的异构体化合物的混合物分离为单个的异构体。
其中羧基为活化形式的式2化合物的衍生物尤其是一种反应性酯、反应性酸酐或反应性环状酰胺。
式2的酸的反应性酯尤其是在酯化基团的连接碳原子上为不饱和的酯，例如乙烯基酯型的酯，例如真正的乙烯基酯(例如可由相应的酯与乙酸乙烯酯的酯基转移作用而得；活化乙烯基酯法)，氨基甲酰基乙烯基酯(例如可由相应的酸用异噁唑鎓试剂处理而得；1，2-噁唑鎓或Woodward法)或1-低级烷氧基乙烯基酯(例如可由相应的酸用低级烷氧基乙炔处理而得；乙氧基乙炔法)，或者脒基型的酯，例如N，N′-二取代的脒基酯(例如可由相应的酸用适合的N，N′-二取代的碳二亚胺例如N，N′-二环己基碳二亚胺处理而得；碳二亚胺法)或N，N-二取代的脒基酯(例如可由相应的酸用N，N-二-取代的氨基氰处理而得；氰氨法)，适合的芳基酯，尤其是被吸电子取代基适当取代的苯基酯(例如可由相应的酸用适当取代的苯酚例如4-硝基苯酚、4-甲基磺酰基苯酚、2，4，5-三氯苯酚、2，3，4，5，6-五氯苯酚或4-苯基重氮苯酚处理而得，反应在缩合剂例如N，N′-二环己基碳二亚胺的存在下进行；活化芳基酯法)，氰基甲酯(例如可在碱的存在下由相应的酸用氯乙腈处理而得；氰基甲酯法)，硫酯，尤其是未取代或取代的、例如硝基取代的苯硫基酯(例如可由相应的酸用未取代或取代的、例如硝基取代的苯硫酚处理而得，尤其通过酸酐或碳二亚胺法；活化的硫酯法)，氨基或酰氨基酯(例如可由相应的酸用N-羟基-氨基或N-羟基-酰氨基化合物处理而得，例如N-羟基-琥珀酰亚胺、N-羟基-哌啶、N-羟基-邻苯二甲酰亚胺或1-羟基-苯并三唑，例如通过酸酐或碳二亚胺法；活化的N-羟基酯法)，或者甲硅烷基酯(例如可由相应的酸用甲硅烷基化剂例如六甲基乙硅氮烷处理而得，其易于与羟基而不是氨基反应)。
式2的酸的酸酐可以是该酸的对称型或者优选混合型酸酐，例如与无机酸的酸酐，例如酰卤，尤其是酰氯(例如可由相应的酸用亚硫酰氯、五氯化磷或草酰氯处理而得；酰氯法)，叠氮化物(例如可由相应的酸酯经由相应的酰肼再用亚硝酸处理而得；叠氮化物法)，与碳酸半衍生物例如相应的酯，例如碳酸低级烷基半酯的酸酐(例如可由相应的酸用卤代甲酸、例如氯甲酸的低级烷基酯处理或者用1-低级烷氧基羰基-2-低级烷氧基-1，2-二氢喹啉例如1-低级烷氧基羰基-2-乙氧基-1，2-二氢喹啉处理而得；混合的O-烷基碳酸酐法)或与二卤化、尤其是二氯化磷酸的酸酐(例如可由相应的酸用磷酰氯处理而得；磷酰氯法)；或者与有机酸的酸酐，例如与下列酸的混合型酸酐有机羧酸(例如可由相应的酸用未取代或取代的低级烷烃-或苯基烷烃-羧酸酰卤处理而得，例如苯基乙酰氯、新戊酰氯或三氟乙酰氯；混合型羧酸酐法)、有机磺酸(例如可由相应的酸的盐、例如碱金属盐用适合的有机磺酸酰卤，例如低级烷烃-或芳基-、例如甲烷-或对-甲苯-磺酰氯处理而得；混合型磺酸酐法)或有机膦酸(例如可由相应的酸用适合的有机膦酸酐或膦酸氰化物处理而得；混合型膦酸酐法)；和对称的酸酐(例如可在碳二亚胺或1-二乙氨基丙炔的存在下由相应酸的缩合作用而得；对称酸酐法)。
适合的环状酰胺尤其是与芳香性五元二氮杂环的酰胺，例如与咪唑类化合物例如咪唑的酰胺(例如可由相应的酸用N，N′-羰基二咪唑处理而得；咪唑酰胺法)，或者与吡唑类化合物，例如3，5-二甲基吡唑的酰胺(例如可由酰肼用乙酰丙酮处理而得；吡唑酰胺法)。
其中羧基为活化形式的式2的酸的衍生物优选地是就地生成的。例如，在适合的N，N-二取代的碳二亚胺例如N，N′-二环己基碳二亚胺的存在下，使式2的酸与式3的胺的混合物反应，可以就地生成N，N′-二-取代的脒基酯。例如，在适合的碱、优选叔胺，例如三乙胺或二甲氨基吡啶的存在下，通过与丙基膦酸酐或氰基膦酸二乙酯反应，可以就地生成式2的酸与有机膦酸的反应性混合酸酐。
反应可以按照本身已知的方式进行，反应条件尤其依赖于式2羧酸的羧基是否和如何被活化，反应通常在适合的溶剂或稀释剂或其混合物的存在下，如果必要的话在一种缩合剂的存在下(例如当参与反应的羧基为酸酐形式时，所述缩合剂也可以是一种酸结合剂)，在冷却或加热下，例如温度从大约-30℃至大约+150℃，尤其是大约0℃至+100℃，优选从室温(约+20℃)至+70℃，在开放或封闭的反应容器中和/或在惰性气氛中，例如氮气氛中进行。惯用的缩合剂例如有碳二亚胺，例如N，N′-二乙基-、N，N′-二丙基-、N，N′-二环己基-或N-乙基-N′-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺；适合的羰基化合物例如羰基二咪唑；1，2-噁唑鎓化合物例如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓3’-磺酸盐和2-叔丁基-5-甲基-异噁唑鎓高氯酸盐；或者适合的酰基氨基化合物，例如2-乙氧基-1-乙氧羰基-1，2-二氢喹啉。惯用的酸结合缩合剂例如有碱金属碳酸盐或碳酸氢盐，例如钠或钾的碳酸盐或碳酸氢盐(习惯上与硫酸盐一起使用)；或者有机碱，例如惯用的吡啶或三乙胺，或者位阻性三-低级烷基胺，例如N，N-二异丙基-N-乙基-胺。
在优选的变化方式中，在适合的溶剂例如N，N-二甲基甲酰胺中，在丙基膦酸酐或氰基膦酸二乙酯和三乙胺的存在下，在1至48小时之间，在0℃至大约50℃之间、优选在室温下，使式2的羧酸与式3的胺反应。
如果式2或3化合物中的一个或多个其他官能团，例如羧基、羟基或氨基是保护的形式或需要保护时(因为它们不应当参与反应)，则这些基团可以是通常用于合成酰胺、特别是肽化合物、头孢菌素和青霉素以及核酸衍生物和糖的那些基团。
保护基团可以已经存在于前体中，并且应当保护所涉及的官能团不发生所不希望的副反应，例如酰化、醚化、酯化、氧化、溶剂分解和相似的反应。保护基团的一个特征是它们本身容易被除去，也就是不会发生所不需要的副反应，通常可通过溶剂分解、还原、光解或者酶活性、例如在类似于生理条件的条件下除去，并且它们不存在于终产物中。专业人员知道或者能够容易地确定哪些保护基团适合于上下文提到的反应。
将所述官能团用所述的基团保护、保护基团本身和它们的脱除反应例如描述在如上文所引用的肽合成标准参考书中，以及关于保护基团的专著例如J.F.W.McOmie，″Protective Groups in Organic Chemistry″，Plenum Press，London and New York 1973，″Methoden der organischenChemie″(有机化学方法)，Houben-Weyl，第4版，15/I卷，Georg ThiemeVerlag，Stuttgart 1974，以及T.W.greene，″Protective Groups in OrganicSynthesis″，Wiley，New York。
在根据需要进行的另外的方法步骤中，起始化合物中不应当参与反应的官能团可以以未保护的形式存在，或者可以被保护起来，例如通过上文在“保护基团”中提到的一种或多种保护基团进行保护。然后按照其中所述的方法之一完全或部分除去保护基团。
具有成盐基团的式1化合物的盐可以按照本身已知的方式制备。式1化合物的酸加成盐因而可以通过用酸或适合的阴离子交换试剂处理来得到。
盐通常能够转化为游离化合物，例如用适合的碱性试剂处理，例如碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐或碱金属氢氧化物，通常为碳酸钾或氢氧化钠。
通过适合的分离方法，立体异构体混合物、例如非对映体混合物可以按照本身已知的方式分离为它们相应的异构体。非对映体混合物例如可以通过分级结晶、色谱、溶剂分布和相似工艺分离为它们的单个非对映体。这种分离可以发生在起始化合物的水平或者式1化合物本身。对映体可以通过形成非对映体盐来分离，例如与对映体纯的手性酸生成盐，或者通过使用具有手性配体的色谱底物的色谱法，例如HPLC。
其中在基团R1或R2中的氢与氮或氧原子连接的式1化合物可以转化为其中的氢被低级烷基代替的各种化合物，该转化可以例如在惰性溶剂中，优选在贵金属催化剂，尤其是分散形式的催化剂，例如铜，或贵金属盐，例如氯化亚铜(I)或硫酸铜(II)的存在下，例如与重氮低级烷基化合物尤其是重氮甲烷反应来进行。与低级烷基卤化物反应也是可能的，或者与其他携带离去基团的低级烷烃反应，例如被强有机磺酸酯化的低级烷基醇，所述磺酸可以是例如低级烷基磺酸(其任选地被卤素例如氟取代)；芳族磺酸，例如未取代或取代的苯磺酸，所述取代基优选选自低级烷基，例如甲基，卤素，例如溴，和/或硝基，例如被甲磺酸或对-甲苯磺酸酯化。烷基化在将酰胺烷基化的常规条件下进行，尤其是在水溶液中和/或在极性溶剂(通常为醇，例如甲醇、乙醇、异丙醇或乙二醇，或者极性非质子溶剂，例如四氢呋喃、二噁烷或二甲基甲酰胺)的存在下，酌情在酸性或碱性催化剂的存在下，一般在约0℃至相应反应混合物的沸点温度下，优选在20℃至回流温度之间的温度下进行，如果必要的话在加压下，例如在密封的试管中，和/或在惰性气氛下，通常为氮或氩气氛下进行。
应当强调的是，与本章提到的转化作用相类似的反应也可以发生在适当的中间体水平。
本文所述的全部方法步骤都可以在已知的反应条件下进行，优选具体提到的那些条件，其中，可以不存在或者通常存在溶剂或稀释剂，优选例如对所用试剂而言是惰性的并且能够溶解它们的溶剂或稀释剂；可以不存在或存在催化剂、缩合剂或中和剂，例如离子交换剂，通常为阳离子交换剂，例如H+型的阳离子交换剂，这取决于反应和/或反应物的类型；在低温、常温或高温下进行，例如在-100℃至约190℃的范围内，优选约-80℃至约150℃，例如-80至-60℃、室温、-20至40℃或所用溶剂的沸点；在大气压下或在密封容器中，酌情在压力下，和/或在惰性气氛中，例如在氩或氮气氛下进行。
盐可以存在于所有起始化合物和中间体中，如果它们含有成盐基团的话。盐也可以存在于这类化合物的反应期间，只要反应不会因此而被干扰。
在所有反应阶段，可以将所存在的异构体混合物分离为它们单个的异构体，例如非对映体或对映体，或者分离为异构体的任意混合物，例如外消旋体或非对映体混合物。
本发明还涉及如下的方法形式，其中，以可在任意阶段作为中间体得到的化合物作为原料并进行剩余的步骤；或者在任意阶段暂停该过程；或者在反应条件下生成原料；或者使用原料的反应性衍生物或盐的形式；或者生成可通过本发明的方法获得的化合物并就地加工所述化合物。在优选的实施方式中，采用可以生成上述优选的化合物，特别是尤其优选的、主要优选的和/或首优的化合物的原料。
在优选的实施方式中，式1化合物是按照或者类似于如实施例所定义的方法和方法步骤进行制备的。
式1化合物、包括它们的盐，也可以以水合物的形式得到，或者它们的晶体例如可以包含用于结晶的溶剂(以溶剂化物存在)。
本发明还涉及治疗对于抑制蛋白激酶活性有响应的肿瘤疾病的方法，该方法包括对需要所述治疗的温血动物施用对抗所述疾病有效量的式1化合物或者其N-氧化物或可药用盐，其中各基团和符号具有如上式1所定义的含义。
确切而言，本发明涉及治疗对于抑制Raf和/或Abl酪氨酸激酶活性有响应的白血病的方法，该方法包括对需要所述治疗的温血动物施用对抗所述白血病有效量的式1化合物或者其N-氧化物或可药用盐，其中各基团和符号具有如上式1所定义的含义。
本发明还涉及药物组合物，它包含式1化合物或其N-氧化物作为活性成分，尤其能够用于治疗前面提到的疾病。用于对温血动物、尤其是人类肠内给药，例如鼻、口腔、直肠或者尤其是口服给药，和胃肠外给药，例如静脉内、肌内或皮下给药的组合物尤其是优选的。组合物包含单独的活性成分，或者优选还包含药学上可接受的载体。活性成分的剂量依赖于所要治疗的疾病和物种、其年龄、体重与个体条件、个体药动学数据和给药的方式。
本发明尤其涉及包含式1化合物、其互变异构体、N-氧化物或可药用盐或者水合物或溶剂化物和至少一种药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明还涉及用在人或动物体的预防性或者尤其是治疗性处置方法中的药物组合物，其制备方法(尤其是用于治疗肿瘤的组合物)，以及治疗肿瘤疾病、尤其是上文提到的那些疾病的方法。
本发明还涉及式1化合物或其N-氧化物用于制备药物制剂的方法和用途，所述制剂包含式1化合物或其N-氧化物作为活性组分(活性成分)。
在优选的实施方式中，药物制剂适合于对温血动物给药，尤其是人类或商业上有用的哺乳动物，所述动物患有对于抑制Abl酪氨酸激酶有响应的疾病，例如慢性骨髓性白血病(CML)、急性成淋巴细胞白血病(ALL)等，所述制剂包含有效量的用于抑制Bcr-Abl融合蛋白以及抑制突变的Bcr-Abl融合蛋白例如E255K、E225V、F317L或M351T突变的Bcr-Abl的式1化合物或其N-氧化物或者其可药用盐(如果存在成盐基团的话)，以及至少一种可药用载体。在优选的实施方式中，式1化合物或其N-氧化物可用于治疗对STI571治疗有抗药性的白血病。式1化合物或其N-氧化物尤其可用于克服对STI571治疗的抵抗性。对STI571治疗有抗药性的白血病患者已记载于许多出版物例如Susan Brandford等(Blood.2002年5月1日；99(9)3472-5)、Christophe Barthe等或Andreas Hochhaus等(Science.2001年9月21日；293(5538)2163)中。优选地，术语“抗药性”是指STI571抑制各种功能性Abl激酶结构域的IC50高于抑制天然的人Abl激酶结构域的IC50，即，高于约0.025μM，优选高于约0.15μM，更优选高于约0.25μM，最优选高于约5μM。
在另一种优选的实施方式中，药物制剂适合于对温血动物给药，尤其是人类或商业上有用的哺乳动物，所述动物患有对于抑制Raf激酶有响应的疾病，例如急性骨髓性白血病或实体瘤例如结肠、肺或胰腺肿瘤，所述制剂包含有效量的可以抑制Raf激酶的式1化合物或其N-氧化物或其可药用盐(如果存在成盐基团的话)，以及至少一种可药用载体。
用于温血动物、尤其是人类或商业上有用的哺乳动物的肿瘤与其他增殖性疾病的预防性或者尤其是治疗性处置的药物组合物同样是优选的，其中，所述的动物需要这类治疗、尤其是患有所述的疾病，并且所述组合物包含对所述疾病预防或者尤其是治疗有效量的新的式1化合物或其N-氧化物作为活性成分。
药物组合物包含大约1％至大约95％活性成分，单剂给药形式在优选的实施方式中包含大约20％至大约90％活性成分，不是单剂类型的形式在优选的实施方式中包含大约5％至大约20％活性成分。单元剂型例如有包衣与未包衣片、安瓿剂、小瓶剂、栓剂或胶囊剂。其它的剂型例如有软膏剂、霜剂、糊剂、泡沫剂、酊剂、唇膏剂、滴剂、喷雾剂、分散体等。实例为含有约0.05g至约1.0g活性成分的胶囊剂。
本发明的药物组合物是按照本身已知的方式制备的，例如通过常规的混合、造粒、包衣、溶解或冻干过程进行制备。
优选使用活性成分的溶液，以及混悬液或分散体，尤其是等渗的水溶液、分散体或混悬液，在例如包含单独的活性成分或者还含有载体例如甘露醇的冻干组合物的情况下，它们可以在使用前制备。该药物组合物可以被灭菌和/或可以包含赋形剂，例如防腐剂、稳定剂、湿润剂和/或乳化剂、增溶剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂，并且按照本身已知的方式制备，例如通过常规的溶解和冻干过程进行制备。所述溶液或混悬液可以包含增粘剂，通常是羧基甲基纤维素钠、羧基甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮或明胶或增溶剂，例如Tween 80[聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单油酸酯；ICI Americas，Inc，USA的商标]。
在油中的混悬液包含惯用于注射目的的植物油、合成或半合成油作为油性组分。就此而言，可以具体提到液体脂肪酸酯，它含有具有8至22、尤其是12至22个碳原子的长链脂肪酸作为酸组分，例如月桂酸、十三酸、肉豆蔻酸、十五酸、棕榈酸、十七酸、硬脂酸、花生酸、二十二碳酸或相应的不饱和酸例如油酸、反油酸、芥酸、顺芜酸或亚油酸，如果需要的话，还可以加入抗氧化剂例如维生素E、β-胡萝卜素或3，5-二-叔丁基-4-羟基甲苯。这些脂肪酸酯的醇组分最多具有6个碳原子，可以是一元醇或多元醇，例如一元醇、二元醇或三元醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或戊醇或其异构体，尤其是乙二醇和甘油。因此，作为脂肪酸酯可以提到下面这些油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、″Labrafil M 2375″(聚氧乙烯甘油三油酸酯，Gattefossé，Paris)、″Labrafil M 1944 CS″(通过杏仁油的醇解所制备的不饱和的聚乙二醇化的甘油酯，其由甘油酯和聚乙二醇酯组成，Gattefossé，法国)、″Labrasol″(通过TCM的醇解所制备的饱和的聚乙二醇化的甘油酯，其由甘油酯和聚乙二醇酯组成，Gattefossé，法国)和/或″Miglyol 812″(链长为C8至C12的饱和脂肪酸的甘油三酯，Hüls AG，德国)，尤其是植物油例如棉籽油、杏仁油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油、豆油，更尤其是花生油。
注射制剂的生产通常在无菌条件下进行，将其填充到例如安瓿或小瓶中然后将容器密封的过程也在无菌条件下进行。
口服给药用药物组合物例如可以这样获得，将活性成分与一种或多种固体载体混合，如果需要的话将所得混合物造粒，加工该混合物或颗粒(如果需要或必要的话，加入另外的赋形剂)形成片剂或片芯。
适合的载体尤其是填充剂，例如糖、例如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇、纤维素制品和/或磷酸钙例如磷酸三钙或磷酸氢钙和粘合剂，例如淀粉、例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉或马铃薯淀粉、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮，和/或崩解剂(如果需要的话)，例如以上提到的淀粉以及羧甲基淀粉、交联的聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸或其盐例如藻酸钠。另外的赋形剂尤其是流动调节剂和润滑剂，例如硅酸、滑石、硬脂酸或其盐例如硬脂酸镁或硬脂酸钙和/或聚乙二醇或其衍生物。
片芯可以带有适宜的、任选为肠溶性的包衣，包衣可以使用浓糖溶液，其中可以包含阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化钛，或者使用在适宜有机溶剂或溶剂混合物中的包衣溶液，或者就肠溶包衣制备而言，使用适宜的纤维素制品的溶液，例如乙酰基纤维素邻苯二甲酸酯或羟丙甲基纤维素邻苯二甲酸酯。染料或颜料可以加入到片剂或片剂包衣中，例如作为鉴别目的，或者指示活性成分的不同剂量。
口服给药用药物组合物还包括由明胶组成的硬胶囊剂，和由明胶和增塑剂例如甘油或山梨醇组成的软密封胶囊剂。硬胶囊剂可以含有颗粒形式的活性成分，例如与填充剂例如玉米淀粉、粘合剂和/或助流剂例如滑石或硬脂酸镁和可选的稳定剂的混合物。在软胶囊剂中，优选将活性成分溶解或悬浮在适宜的液体赋形剂例如脂肪油、石蜡油或液体聚乙二醇或乙二醇或丙二醇的脂肪酸酯中，还可以向其中加入稳定剂和例如聚氧乙烯脱水山梨醇的脂肪酸酯型的洗涤剂。
适合于直肠给药的药物组合物例如有栓剂，其由活性成分与栓剂基质组成。栓剂基质例如有天然或合成的甘油三酯、链烷烃类、聚乙二醇或高级烷醇类。
就胃肠外给药而言，活性成分的水溶性形式、例如水溶性盐的水溶液或者含有增粘剂，例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇和/或葡聚糖和(如果需要的话)稳定剂的水性注射混悬液是尤其适合的。活性成分、任选地与赋形剂一起，还可以是冻干产物的形式，可以在胃肠外给药之前通过加入适宜的溶剂制成溶液。
用于例如胃肠外给药的溶液也可以用作输注溶液。
优选的防腐剂例如有抗氧化剂，例如抗坏血酸，或者杀微生物剂，例如山梨酸或苯甲酸。
本发明同样涉及治疗上文提到的病理学状况之一的过程或方法，尤其是对于抑制酪氨酸激酶有响应的疾病，尤其是相应的肿瘤疾病。式1化合物或其N-氧化物可以原样给药或者尤其以药物组合物的形式对需要所述治疗的温血动物、例如人进行预防性或治疗性给药，优选给药量可有效对抗所述疾病。在体重约70kg的个体的情况下，每日给药剂量为大约0.05g至大约5g、优选大约0.25g至大约1.5g本发明的化合物。
本发明尤其还涉及式1化合物或其N-氧化物或者其可药用盐、尤其是被认为是优选的式1化合物或其可药用盐本身或者含有至少一种可药用载体的药物制剂用于上文提到的一种或多种疾病、优选对抑制蛋白激酶有响应的疾病、尤其是肿瘤疾病，更尤其是对于抑制Abl酪氨酸激酶有响应的白血病或对于抑制Raf激酶有响应的肿瘤的治疗性和预防性处置的用途。
用在每种情况中的优选剂量、组合物和药物制剂(药物)的制备如上所述。
新的原料和/或中间体以及其制备方法同样是本发明的主题。在优选的实施方式中，选择可以获得优选化合物的原料和反应条件。
式2和3的原料是已知的、商业上可得到的或者可以类似于或按照本领域已知的方法合成。
下列实施例起到阐述发明的目的，并不限制发明的范围。
实施例实施例14-二乙基氨基-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺将含有约50％丙基膦酸酐的N，N-二甲基甲酰胺溶液(Fluka，Buchs，瑞士；1.14mL，约1.8mmol)加入到搅拌中的4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺(277.3mg，1mmol)、4-二乙基氨基-3-(三氟甲基)-苯甲酸(261.3mg，1mmol)和三乙基胺(1.33mL，9.6mmol)在3mL N，N-二甲基甲酰胺的混合物中。在室温下搅拌24小时后，将混合物用半饱和碳酸氢钠水溶液处理，用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取液干燥(Na2SO4)并在减压下蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用二氯甲烷/甲醇洗脱。将纯级分合并，蒸发，将残余物用丙酮结晶得到白色固体状标题化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)0.96(t，6H)；2.23(s，3H)；3.02(q，4H)；7.23(d，1H)；7.44(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.51-7.54(m，1H)；7.66(d，1H)；8.06(d，1H)；8.21(dd，1H)；8.24(m，1H)；8.48(dt，1H)；8.52(d，1H)；8.68(dd，1H)；9.0(s，1H)；9.28(d，1H)；10.34(s，1H)。
实施例1.14-二乙基氨基-3-(三氟甲基)-苄腈将4-溴-3-(三氟甲基)-苄腈(Yonezawa等，Synthetic Communications(1996)，26，1575-1578；6.0g，24mmol)、二乙基胺(8.3mL，80mmol)和25mLN，N-二甲基乙酰胺的混合物在紧密封闭的容器中于135℃下搅拌16小时。冷却后，将反应混合物用半饱和碳酸氢钠水溶液处理，用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机萃取液干燥(Na2SO4)并减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用己烷/乙酸乙酯洗脱得到橙色油状标题化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)0.96(t，6H)；3.08(q，4H)；7.61(d，1H)；8.04(dd，1H)；8.16(d，1H)。
实施例1.24-二乙基氨基-3-(三氟甲基)-苯甲酸将4-二乙基氨基-3-(三氟甲基)-苄腈(1.21g，5mmol)、12mL乙酸和8mL发烟盐酸(37％)的混合物在95℃下振荡20小时。冷却后，将反应混合物在减压下蒸发至干。将固体残余物溶于温热的半饱和碳酸钠水溶液，并且通过滴加2M盐酸将pH调节至约5-6。滤出所形成的沉淀物，用水洗涤，然后真空干燥得到白色固体。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)0.94(t，δH)；3.02(q，4H)；7.58(d，1H)；8.11-8.16(m，2H)；13.35(br.，1H)。
实施例2N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-4-(1-吡咯烷基)-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺标题化合物用实施例1中所述的类似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-(1-吡咯烷基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸作为原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.91-1.96(m，4H)；2.22(s，3H)；3.38-3.46(m，4H)；7.06(d，1H)；7.20(d，1H)；7.43(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.50-7.54(m，1H)；8.05-8.07(m，2H)；8.24(d，1H)；8.48(dt，1H)；8.51(d，1H)；8.68(dd，1H)；8.97(s，1H)；9.28(m，1H)；10.08(s，1H)。
实施例2.14-(1-吡咯烷基)-3-(三氟甲基)-苄腈标题化合物用实施例1.1中所述的类似方法制得，使用4-溴-3-(三氟甲基)-苄腈和吡咯烷(Fluka，Buchs，瑞士)，反应温度为95℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.90-1.96(m，4H)；3.39-3.47(m，4H)；7.03(d，1H)；7.75(dd，1H)；7.99(d，1H)。
实施例2.24-(1-吡咯烷基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸标题化合物用实施例1.2中所述的类似方法制得，使用4-(1-吡咯烷基)-3-(三氟甲基)-苄腈。将粗产物用二氯甲烷/甲醇结晶。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.90-1.97(m，4H)；3.38-3.45(m，4H)；7.01(d，1H)；7.90(dd，1H)；8.10(d，1H)；12.65(br.，1H)。
实施例3N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-4-(4-吗啉基)-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺标题化合物用实施例1中所述的类似方法制得，用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-(4-吗啉基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸作为原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.23(s，3H)；2.96(m，4H)；3.74(m，4H)；7.23(d，1H)；7.44(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.52(ddd，1H)；7.66(d，1H)；8.07(d，1H)；8.23-8.25(m，2H)；8.48(dt，1H)；8.52(d，1H)；8.69(dd，1H)；8.99(s，1H)；9.28(m，1H)；10.34(s，1H)。
实施例3.14-(4-吗啉基)-3-(三氟甲基)-苄腈标题化合物用实施例1.1中所述的类似方法制得，使用4-溴-3-(三氟甲基)-苄腈和吗啉(Fluka，Buchs，瑞士)，反应温度为95℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)3.00(m，4H)；3.72(m，4H)；7.60(d，1H)；8.09(dd，1H)；8.19(d，1H)。
实施例3.24-(4-吗啉基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸标题化合物用实施例1.2中所述的类似方法制得，使用4-(4-吗啉基)-3-(三氟甲基)-苄腈。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.92-3.01(m，4H)；3.68-3.76(m，4H)；7.58(d，1H)；8.12-8.19(m，2H)；13.25(br.，1H)。
实施例4N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-4-(1-哌啶基)-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺标题化合物用实施例1中所述的类似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基)-1，3-苯二胺和4-(1-哌啶基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸作为原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.51-1.70(m，6H)；2.23(s，3H)；2.89-2.95(m，4H)；7.22(d，1H)；7.44(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.52(ddd，1H)；7.57(d，1H)；8.06(d，1H)；8.18-8.23(m，2H)；8.48(dt，1H)；8.51(d，1H)；8.68(dd，1H)；8.99(s，1H)；9.28(d，1H)；10.30(s，1H)。
实施例4.14-(1-哌啶基)-3-(三氟甲基)-苄腈标题化合物用实施例1.1中所述的类似方法制得，使用4-溴-3-(三氟甲基)-苄腈和哌啶(Fluka，Buchs，瑞士)，反应温度为95℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.51-1.59(m，2H)；1.59-1.68(m，4H)；2.93-3.00(m，4H)；7.51(d，1H)；8.03(dd，1H)；8.14(d，1H)。
实施例4.24-(1-哌啶基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸标题化合物用实施例1.2中所述的类似方法制得，使用4-(1-哌啶基)-3-(三氟甲基)-苄腈。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.51-1.59(m，2H)；1.59-1.69(m，4H)；2.89-2.97(m，4H)；7.49(m，1H)；8.10-8.15(m，2H)；13.19(br.，1H)。
实施例54-(4-甲基-1-哌嗪基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺标题化合物用实施例1中所述的类似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸作为原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.23(s，3H)；2.39-2.48(br.s，3H)；2.63-2.85(br.，4H)；3.00-3.09(br.m，4H)；7.23(d，1H)；7.44(d，1H)；7.49(dd，1H)；7.52(ddd，1H)；7.64(d，1H)；8.07(d，1H)；8.23-8.25(m，2H)；8.48(dt，1H)；8.52(d，1H)；8.69(dd，1H)；9.0(s，1H)；9.28(m，1H)；10.35(s，1H)。
实施例5.14-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸将4-溴-3-(三氟甲基)-苄腈(Yonezawa等，Synthetic Communications(1996)26，1575-8；2.47g，12mmol)、1-甲基哌嗪(Fluka，Buchs，瑞士，5.33mL，48mmol)和15mL N，N-二甲基乙酰胺的混合物在紧密封闭的容器中于95℃下搅拌14小时。冷却后，将反应混合物在减压下蒸发至干，将残余物用半饱和的碳酸钠水溶液处理并用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取液干燥(Na2SO4)并减压蒸除溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用二氯甲烷/甲醇洗脱得到浅黄色油状的4-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-(三氟甲基)-苄腈。
将由30mL二噁烷、15mL水和11.25mL 2M氢氧化钠水溶液组成的混合物加入到4-(4-甲基-1-哌嗪基)-3-(三氟甲基)-苄腈中，然后将反应混合物在95℃下振荡16小时。冷却后，将混合物蒸发。将形成的残余物用水处理，将pH用1M盐酸调节至约5-6并减压蒸除溶剂。将残余物用热甲醇处理，滤出不溶的盐，然后蒸发滤液得到粗品标题化合物，其不经进一步纯化即可用于随后的步骤。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.28(s，3H)；2.50-2.58(m，4H)；2.94-3.02(m，4H)；7.52(m，1H)；8.11-8.17(m，2H)；13.19(br.，1H)。
实施例64-(1H-咪唑-1-基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺标题化合物用实施例1中所述的类似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-(1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸作为原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.25(s，3H)；7.12-7.15(m，1H)；7.26(d，1H)；7.43-7.55(m，4H)；7.78(d，1H)；7.91(s，1H)；8.12(br.1H)；8.38-8.42(m，1H)；8.46-8.54(m，3H)；8.67-8.70(m，1H)；9.01(s，1H)；9.27-9.30(m，1H)；10.57(br.s，1H)。
实施例6.14-(1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苄腈标题化合物用实施例1.1中所述的类似方法制得，使用4-氯-3-(三氟甲基)-苄腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和咪唑(Fluka，Buchs，瑞士)，反应温度为110℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)7.13(m，1H)；7.47(s，1H)；7.85(d，1H)；7.91(s，1H)；8.37(dd，1H)；8.57(m，1H)。
实施例6.24-(1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸将4-(1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苄腈(1.99g，8.4mmol)、12mL乙酸和6mL 12M盐酸(37％)的混合物在95℃下振荡16小时。冷却后，将反应混合物在减压下蒸发。将形成的残余物溶于水，通过滴加1M氢氧化钠溶液将pH调节至约5-6。滤出沉淀物，用水洗涤，然后真空干燥得到固体状标题化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)7.13(s，1H)；7.47(s，1H)；7.75(d，1H)；7.91(s，1H)；8.31-8.39(m，2H)；13.84(br.，1H)。
实施例74-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺标题化合物用实施例1中所述的类似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸作为原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.09(s，3H)；2.26(s，3H)；6.96(d，1H)；7.24-7.28(m，2H)；7.45(d，1H)；7.50-7.55(m，2H)；7.78(d，1H)；8.12(d，1H)；8.40(m，1H)；8.46-8.51(m，2H)；8.53(d，1H)；8.69(dd，1H)；9.03(s，1H)；9.30(d，1H)；10.59(s，1H)。
实施例7.14-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苄腈标题化合物用实施例1.1中所述的类似方法制得，使用4-氯-3-(三氟甲基)-苄腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和2-甲基-咪唑(Fluka，Buchs，瑞士)，在145℃下反应38小时。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.06(s，3H)；6.95(m，1H)；7.25(m，1H)；7.86(d，1H)；8.39(dd，1H)；8.58(m，1H)。
实施例7.24-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸将4-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苄腈(1.01g，4mmol)、6mL乙酸和3mL 12M盐酸(37％)的混合物在95℃下振荡16小时。冷却后，将反应混合物在减压下蒸发至干。将形成的残余物与甲苯一起蒸发两次，溶于水，然后通过滴加1M氢氧化钠溶液将pH调节至约5-6。将水相用正丁醇萃取两次，将有机相蒸发得到米色固体状标题化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.06(s，3H)；6.98(d，1H)；7.28(br.，1H)；7.75(m，1H)；8.34-8.38(m，2H)。
实施例84-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺标题化合物用实施例1中所述的类似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸作为原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.19(s，3H)；2.25(s，3H)；7.16(s，1H)；7.26(d，1H)；7.45(d，1H)；7.49-7.56(m，2H)；7.72-7.77(m，2H)；8.12(br，1H)；8.38(br.d，1H)；8.45-8.51(m，2H)；8.53(d，1H)；8.69(dd，1H)；9.01(s，1H)；9.29(m，1H)；10.55(s，1H)。
实施例8.14-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苄腈标题化合物用实施例1.1中所述的类似方法制得，使用4-氯-3-(三氟甲基)苄腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和4(5)-甲基-咪唑(Fluka，Buchs，瑞士)，在145℃下反应14小时。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.17(s，3H)；7.16(br.s，1H)；7.76(br.s，1H)；7.81(d，1H)；8.34(dd，1H)；8.53-8.57(m，1H)。
实施例8.24-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸将4-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苄腈(1.01g，4mmol)、6mL乙酸和3mL 12M盐酸(37％)的混合物在95℃下振荡16小时。冷却后，将反应混合物在减压下蒸发至干。将形成的残余物与甲苯一起蒸发两次，溶于水，然后通过滴加1M氢氧化钠溶液将pH调节至约5-6。将水相用乙酸乙酯萃取两次。将有机相干燥(Na2SO4)，蒸发得到浅黄色固体状标题化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.18(s，3H)；7.16(br.s，1H)；7.69-7.77(m，2H)；8.30-8.37(m，2H)。
实施例94-(2，4-二甲基-1H-咪唑-1-基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺标题化合物用实施例1中所述的类似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-(2，4-二甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸作为原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.03(s，3H)；2.11(s，3H)；2.25(s，3H)；6.94(s，1H)；7.26(d，1H)；7.45(d，1H)；7.49-7.55(m，2H)；7.74(d，1H)；8.11(d，1H)；8.38(dd，1H)；8.45(d，1H)；8.49(dt，1H)；8.53(d，1H)；8.69(dd，1H)；9.02(s，1H)；9.29(d，1H)；10.57(s，1H)。
实施例9.14-(2，4-二甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苄腈标题化合物用实施例1.1中所述的类似方法制得，使用4-氯-3-(三氟甲基)-苄腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和2，4-二甲基-咪唑(Trans WorldChemicals)，在145℃下反应20小时。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.01(s，3H)；2.09(s，3H)；6.93(s，1H)；7.81(d，1H)；8.36(dd，1H)；8.54(d，1H)。
实施例9.24-(2，4-二甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苯甲酸将由11mL二噁烷、5.5mL水和4.9mL 2M氢氧化钠水溶液组成的混合物加入到4-(2，4-甲基-1H-咪唑-1-基)-3-(三氟甲基)-苄腈(0.65g，2.45mmol)中并将反应混合物在95℃下振荡16小时。冷却后，将混合物在减压下蒸发至干。将形成的残余物用水处理，将pH用2M盐酸调节至约5-6，然后将水相用正丁醇萃取两次。将合并的有机萃取液蒸发得到固体状标题化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.14(s，3H)；2.18(s，3H)；7.18(br.s，1H)；7.81(d，1H)；8.31-8.44(m，2H)。
实施例103-(1H-咪唑-1-基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-5-(三氟甲基)-苯甲酰胺标题化合物用实施例1中所述的类似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸作为原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.26(s，3H)；7.19(s，1H)；7.27(d，1H)；7.45(d，1H)；7.49-7.56(m，2H)；8.02(br，1H)；8.11(br.s，1H)；8.21(s，1H)；8.30(s，1H)；8.45-8.54(m，4H)；8.69(dd，1H)；9.01(s，1H)；9.30(m，1H)；10.50(br.s，1H)。
实施例10.13-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苄腈标题化合物用实施例1.1中所述的类似方法制得，使用3-氟-5-(三氟甲基)-苄腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和咪唑(Fluka，Buchs，瑞士)，在110℃下反应24小时。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)7.17(s，1H)；8.03(m，1H)；8.32(s，1H)；8.46(br.s，1H)；8.54(d，1H)；8.62(m，1H)。
实施例10.23-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸标题化合物用实施例6.2中所述的类似方法制得，使用3-(1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苄腈。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)7.17(s，1H)；8.03(s，1H)；8.12(s，1H)；8.35(s，1H)；8.41(s，1H)；8.53(s，1H)；13.90(br.，1H)。
实施例113-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-5-(三氟甲基)-苯甲酰胺标题化合物用实施例1中所述的类似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和3-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸作为原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.25(s，3H)；2.37(s，3H)；6.99(d，1H)；7.26(d，1H)；7.45(d，1H)；7.49-7.54(m，3H)；8.10-8.15(m，2H)；8.35(m，2H)；8.48(dt，1H)；8.53(d，1H)；8.68(dd，1H)；9.01(s，1H)；9.29(m，1H)；10.49(s，1H)。
实施例11.13-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苄腈标题化合物用实施例1.1中所述的类似方法制得，使用3-氟-5-(三氟甲基)-苄腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和2-甲基-咪唑(Fluka，Buchs，瑞士)，在145℃下反应24小时。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.36(s，3H)；6.97(d，1H)；7.48(d，1H)；8.26(br.s，1H)；8.41(m，1H)；8.46(br.s，1H)。
实施例11.23-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸标题化合物用实施例9.2中所述的类似方法制得，使用3-(2-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苄腈。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.33(s，3H)；6.97(d，1H)；7.48(d，1H)；8.10(br.，1H)；8.15(br.，1H)；8.22(br.，1H)。
实施例123-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-5-(三氟甲基)-苯甲酰胺标题化合物用实施例1中所述的类似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸作为原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.20(s，3H)；2.26(s，3H)；7.27(d，1H)；7.45(d，1H)；7.49-7.56(m，2H)；7.72(s，1H)；8.12(br.，1H)；8.18(s，1H)；8.25(s，1H)；8.39-8.55(m，4H)；8.69(m，1H)；9.01(s，1H)；9.31(m，1H)；10.48(s，1H)。
实施例12.13-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苄腈标题化合物用实施例1.1中所述的类似方法制得，使用3-氟-5-(三氟甲基)-苄腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和4(5)-甲基-咪唑(Fluka，Buchs，瑞士)，在145℃下反应24小时。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.18(s，3H)；7.74(m，1H)；8.27(br.s，1H)；8.39(br.s，1H)；8.43(d，1H)；8.56(br.s，1H)。
实施例12.23-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸标题化合物用实施例9.2中所述的类似方法制得，使用3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)-5-(三氟甲基)-苄腈。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.27(s，3H)；8.00(s，1H)；8.18(s，1H)；8.40(m)；8.47(br.，1H)。
实施例13N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(4-吗啉基)-5-(三氟甲基)-苯甲酰胺标题化合物用实施例1中所述的类似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和3-(4-吗啉基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸作为原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.24(s，3H)；3.28-3.32(m，4H)；3.75-3.79(m，4H)；7.23(d，1H)；7.39(br.，1H)；7.44(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.51(ddd，1H)；7.65(br.，1H)；7.73(br.，1H)；8.07(d，1H)；8.47(dt，1H)；8.52(d，1H)；8.68(dd，1H)；8.98(s，1H)；9.29(m，1H)；10.32(s，1H)。
实施例13.13-(4-吗啉基)-5-(三氟甲基)-苄腈标题化合物用实施例1.1中所述的类似方法制得，使用3-氟-5-(三氟甲基)-苄腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和吗啉(Fluka，Buchs，瑞士)，在105℃下反应14小时。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)3.25-3.35(m，4H)；3.69-3.77(m，4H)；7.49(br.s，1H)；7.56(br.s，1H)；7.66(br.s，1H)。
实施例13.23-(4-吗啉基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸标题化合物用实施例7.2中所述的类似方法制得，使用3-(4-吗啉基)-5-(三氟甲基)-苄腈。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)3.20-3.28(m，4H)；3.69-3.77(m，4H)；7.21(br.s，1H)；7.33(br.s，1H)；7.43(br.s，1H)。
实施例143-(4-甲基-1-哌嗪基)-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-5-(三氟甲基)-苯甲酰胺标题化合物用实施例1中所述的类似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和3-(4-甲基-1-哌嗪基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸作为原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ).2.24(s，6H)；2.46-2.50(m，4H)；3.30-3.36(m，4H)；7.24(d，1H)；7.37(br.s，1H)；7.44(d，1H)；7.49(dd，1H)；7.52(dd，1H)；7.62(br.s，1H)；7.72(br.s，1H)；8.08(d，1H)；8.47(dt，1H)；8.52(d，1H)；8.70(dd，1H)；8.99(s，1H)；9.30(d，1H)；10.31(s，1H)。
实施例14.13-(4-甲基-1-哌嗪基)-5-(三氟甲基)-苄腈标题化合物用实施例1.1中所述的类似方法制得，使用3-氟-5-(三氟甲基)-苄腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和1-甲基哌嗪(Fluka，Buchs，瑞士)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ).2.22(s，3H)；2.41-2.46(m，4H)；3.31-3.37(m，4H)；7.48(br.s，1H)；7.52(br.s，1H)；7.65(br.s，1H)。
实施例14.23-(4-甲基-1-哌嗪基)-5-(三氟甲基)-苯甲酸将由50mL二噁烷、25mL水和18.75mL 2M氢氧化钠水溶液组成的混合物加入到3-(4-甲基-1-哌嗪基)-5-(三氟甲基)-苄腈(2.69g，10mmol)中并将反应混合物在95℃下振荡16小时。冷却后，将混合物在减压下蒸发至干。将形成的残余物用水处理，将pH用2M盐酸调节至约5-6。滤出沉淀物，将滤液用正丁醇萃取两次。将合并的有机萃取液蒸发得到固体状标题化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.41(s，3H)；2.69-2.76(m，4H)；3.37-3.42(m，4H)；7.45(br.s，1H)；7.55(br.s，1H)；7.70(br.s，1H)。
实施例154-[[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺标题化合物用实施例1中所述的类似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-[[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基]-3-(三氟甲基)-苯甲酸作为原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.10(s，6H)；2.23(s，3H)；2.35(m，2H)；2.78(s，3H)；3.14(m，2H)；7.22(d，1H)；7.43(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.51(ddd，1H)；7.59(d，1H)；8.07(d，1H)；8.16-8.23(m，2H)；8.48(dt，1H)；8.51(d，1H)；8.68(dd，1H)；8.99(s，1H)；9.28(m，1H)；10.28(s，1H)。
实施例15.14-[[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基]-3-(三氟甲基)-苄腈标题化合物用实施例1.1中所述的类似方法制得，使用4-氯-3-(三氟甲基)-苄腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和N，N，N′-三甲基-1，2-乙二胺(Fluka，Buchs，瑞士)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.09(s，6H)；2.38(t，2H)；2.86(s，3H)；3.24(t，2H)；7.45(d，1H)；7.94(dd，1H)；8.09(d，1H)。
实施例15.24-[[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基]-3-(三氟甲基)-苯甲酸将由25mL二噁烷、12.5mL水和9.4mL 2M氢氧化钠水溶液组成的混合物加入到4-[[2-(二甲基氨基)乙基]甲基氨基]-3-(三氟甲基)-苄腈(1.35g，5mmol)中并将反应混合物在95℃下振荡16小时。冷却后，将混合物在减压下蒸发至干。将形成的残余物用水处理，将pH用1M盐酸调节至约5并将混合物在减压下蒸发至干。将固体残余物用甲醇处理，将悬浮液过滤，蒸发滤液得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.57(s，6H)；2.76(s，3H)；2.96(m，2H)；3.38(m，2H)；7.62(d，1H)；8.11-8.16(m，2H)。
实施例164-[甲基-(1-甲基-4-哌啶基)氨基]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-3-(三氟甲基)-苯甲酰胺标题化合物用实施例1中所述的类似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和4-[甲基(1-甲基-4-哌啶基)氨基]-5-(三氟甲基)-苯甲酸作为原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.46-1.57(m，2H)；1.62-1.68(m，2H)1.79-1.88(m，2H)；2.13(s，3H)；2.23(s，3H)；2.64(s，3H)；2.73-2.80(m，2H)；2.87-2.97(m，1H)；7.22(d，1H)；7.43(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.51(ddd，1H)；7.66(d，1H)；8.06(d，1H)；8.17-8.24(m，2H)；8.48(dt，1H)；8.51(d，1H)；8.68(dd，1H)；8.99(s，1H)；9.28(m，1H)；10.32(s，1H)。
实施例16.14-[甲基-(1-甲基-4-哌啶基)氨基]-3-(三氟甲基)-苯甲酸标题化合物用实施例5.1中所述的类似方法制得，使用4-氯-3-(三氟甲基)-苄腈(Lancaster Synthesis，GmbH)和1-甲基-4-(甲基氨基)-哌啶(Aldrich，Buchs，瑞士)。随后按照实施例5.1的描述在二噁烷和水的混合物中用氢氧化钠进行腈的水解。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.77-1.86(m，4H)；2.54(s，3H)；2.63(s，3H)；2.65-2.74(m)；3.13-3.23(m)；7.63(d，1H)；8.12-8.17(m，2H)。
实施例173-乙基氨基-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-5-(三氟甲基)-苯甲酰胺标题化合物用实施例1中所述的类似方法制得，使用4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺和3-乙基氨基-5-(三氟甲基)-苯甲酸作为原料。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.19(t，3H)；2.23(s，3H)；3.14(m，2H)；6.36(t，1H)；6.98(br.s，1H)；7.22(d，1H)；7.32(br.s，1H)；7.37(br.s，1H)；7.43(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.51(dd，1H)；8.06(d，1H)；8.48(dt，1H)；8.51(d，1H)；8.68(dd，1H)；9.00(s，1H)；9.28(m，1H)；10.25(s，1H)。
实施例17.13-乙基氨基-5-(三氟甲基)-苯甲酸甲酯将3-氨基-5-(三氟甲基)-苯甲酸甲酯(J.Med.Chem.(1969)12，299-303；4.23g，19.3mmol)、碳酸钾(8.0g，57.9mmol)和碘乙烷(3.12mL，38.6mmol)的混合物在20mL N，N-二甲基甲酰胺中于65℃下在紧密封闭的容器中搅拌14小时。冷却后，将反应混合物过滤并将滤液在减压下蒸发至干。将残余物用水处理，用乙酸乙酯萃取三次。将合并的萃取液干燥(Na2SO4)并减压蒸除溶剂。将形成的残余物通过硅胶柱色谱纯化，用己烷/二氯甲烷(1∶1)洗脱。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.18(t，3H)；3.10(m，2H)；3.85(s，3H)；6.46(t，1H)；7.02(br.1H)；7.29(br.s，1H)；7.37(br.，1H)。
实施例17.23-乙基氨基-5-(三氟甲基)-苯甲酸将3-乙基氨基-5-(三氟甲基)-苯甲酸甲酯(1.38g，5.6mmol)、5.5mL 1M氢氧化钠水溶液在12mL乙醇中的混合物在70℃下振荡4小时。冷却后，将混合物在减压下蒸发至干。将形成的残余物溶于水，将pH用1M盐酸调节至5。滤出沉淀物，用水洗涤，然后真空干燥得到标题化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)1.18(t，3H)；3.10(m，2H)；6.39(m，1H)；6.99(br.s，1H)；7.29(br.s，1H)；7.36(br.s，1H)；13.15(br.，1H)。
实施例183-乙酰基氨基-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]氨基]苯基]-5-(三氟甲基)-苯甲酰胺在20℃及氩气氛下，将氰基膦酸二乙酯(Aldrich，Buchs，瑞士；0.66mL，4.0mmol)加入到搅拌着的4-甲基-N-[4-(3-吡啶基)-2-嘧啶基]-1，3-苯二胺(554mg，2.0mmol)、3-乙酰基氨基-5-(三氟甲基)-苯甲酸(495mg，2.0mmol)和三乙基胺(1.12mL，8.0mmol)在10mL N，N-二甲基甲酰胺中的混合物中。在20℃下搅拌18小时后，将混合物用饱和碳酸氢钠水溶液处理，用乙酸乙酯萃取两次。将合并的萃取液干燥(MgSO4)，过滤，然后减压蒸除溶剂得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用二氯甲烷/甲醇/氨水洗脱。合并纯级分，减压蒸除溶剂，然后将残余物用乙酸乙酯-己烷结晶得到乳白色结晶固体状标题化合物。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)2.10(s，3H)；2.23(s，3H)；7.22(dd，1H)；7.43(dd，1H)；7.45-7.50(m，1H)；7.51-7.54(m，1H)；7.97(d，1H)；8.04(d，1H)；8.24(dd，1H)；8.28(m，1H)；8.49(dt，1H)；8.50(dd，1H)；8.68(dd，1H)；8.99(s，1H)；9.25(d，1H)；10.43(dd，1H)。
实施例18.13-乙酰基氨基-5-(三氟甲基)-苯甲酸将3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸(5.10g，20mmol)和乙酸酐(2.1mL，22mmol)在50mL吡啶中的混合物于22℃下搅拌14小时。然后将混合物在减压下蒸发至干得到残余物，将该残余物用2M盐酸处理并用乙酸乙酯萃取三次。将合并的萃取液用水洗涤，干燥(MgSO4)，然后减压蒸除溶剂得到粗产物，将该粗产物通过用乙酸乙酯-己烷重结晶而进行纯化得到米色结晶固体状标题化合物，m.p.194-220℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)7.80(d，1H)；8.27(d，1H)；8.35(d，1H)；10.46(s，1H)；13.50(br.s，1H)。
实施例18.23-氨基-5-(三氟甲基)-苯甲酸将3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸(Lancaster Synthesis，GmbH；11.75g，50mmol)的乙醇(300mL)溶液在常压及40℃下用阮内镍(1g)氢化。8小时后吸收计算量的氢气。然后将混合物过滤，减压蒸除溶剂得到粗产物，将该粗产物通过用二乙醚-己烷重结晶而进行纯化得到米色结晶固体状标题化合物，m.p.134-139℃。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，δ)5.86(br.s，2H)；7.02(d，1H)；7.24(d，1H)；7.38(d，1H)；13.11(br.s，1H)。
实施例19软胶囊剂如下制备5000粒软明胶胶囊，每粒胶囊包含0.05g前述实施例提到的式1化合物之一作为活性成分
将250g粉碎的活性成分悬浮在2L Lauroglykol(丙二醇月桂酸酯，GattefosséS.A.，Saint Priest，法国)中，在湿粉碎机中研磨，得到粒径为约1至3μm。然后利用胶囊填充机将0.419g混合物装入软明胶胶囊中。
实施例20药动学数据将供试式1化合物如下配制用于对来自法国IFACREDO的雌性OF1小鼠给药先溶于N-甲基-吡咯烷酮(NMP)，再用PEG300稀释至最终浓度为10％v/v NMP90％v/v PEG300，得到澄清的化合物溶液。调节浓度以递送10mL/kg体重的恒定体积。在临使用前制备化合物。将经过配制的化合物通过管饲法经口给药，以提供50mg/kg的剂量。在指定时间点，将小鼠(每次4只)用含3％异氟烷的医用氧麻醉，通过心脏穿刺获得血样，保存在肝素化试管中(约30IU/mL)。随后杀死动物，无需从麻醉中恢复。通过离心(10,000g，5分钟)从血液中制备血浆，立即分析或者冷冻贮存在-70℃下。
向血浆样本(10-250μL)掺加5μL内标，与200μL0.1M NaOH和500μL氯仿在1.5mL Eppendorf试管中混合，在Eppendorf混合器上剧烈振荡10分钟。然后，将混合物离心(10,000xg，3分钟)，将有机相转移至第二支Eppendorf试管中，在真空离心机(Speedvac 5301)中蒸发至干。将干燥残余物例如溶于250μL含有0.1％甲酸的10％v/v乙腈水溶液。随后通过例如高压液相色谱/串连质谱HPLC/MS-MS进行分析，分析采用Agilent 1100系列(Agilent，Palo Alto，CA，USA)HPLC系统，其带有真空脱气器、二元泵和恒温柱室，连接有冷却自动进样系统(HTS PAL，CTC Analytics，Zwingen，瑞士)。将样本(5-15μL)注射到Ultra Phenyl柱(粒径3μm，50×1mm；Restek，Bellefonte，USA)上，其带有相同材质的卫柱(4×2mm)(Phenomenex，Torrance，USA)。用水平衡并经过1分钟的等待时间后，洗脱样本，洗脱采用例如用含有0.2％v/v甲酸的0-100％乙腈/水线性梯度，时间为11分钟，流速为60μL/分钟。通过例如用100％水重新平衡3分钟至起始条件为下一份样本准备柱子。分离在例如40℃的柱温下进行。将柱洗脱液直接引入例如三阶段四极质谱仪(Quattro UltimaTM，Micromass，Manchester，UK)的离子源中，其由MasslynxTM3.5软件(Micromass，Manchester，UK)控制，采用电子喷射电离阳极模式(ESI+)作为电离技术。在母离子碎裂后，用MS/MS检测化合物。例如在0.002nmol/L下测定量化限度。利用如上所述加工的血浆中的已知量化合物、包括固定量内标，构建校准曲线。从所选择的被分析物子离子与其内标产物的峰面积比(纵坐标)对标称浓度(横坐标)的图计算未知样本的浓度。利用QuanlynxTM，MasslynxTM软件3.5(Micromass，Manchester，UK)进行回归分析。
实施例21体外抑制数据酶(c-Abl，Bcr-Abl)的体外抑制数据表示在下表中。将IC50值(nM)表达为数值范围，该范围包含了单个IC50测量值。被称为STI571的化合物的相应平均值(±SEM)为170±23nM(c-Abl，IC50；23次测定)和198±7nM(Bcr-Abl，IC50；71次测定)。
权利要求
1.式1化合物和该化合物的N-氧化物或可药用盐 其中R1代表氢且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氢；R3代表低级烷基、氟代烷基、羟基烷基或氨基甲酰基；R4代表氢、低级烷基或卤素；并且R5和R6彼此独立地表示氢、低级烷基、羟基-低级烷基、低级烷氧基-低级烷基、低级酰氧基-低级烷基、羧基-低级烷基、低级烷氧基羰基-低级烷基、氨基-低级烷基、低级烷基氨基-低级烷基、二(低级烷基)氨基-低级烷基、N-低级烷基哌啶基、N-低级烷基吡咯烷基或低级酰基，或者R5R6一起表示具有四、五或六个碳原子的亚烷基、具有一个氧和三或四个碳原子的氧杂-低级亚烷基或具有一个氮和三或四个碳原子的氮杂-低级亚烷基，其中氮原子是未取代的或者被低级烷基、羟基-低级烷基或低级烷氧基-低级烷基所取代，并且其中在所有情况下低级亚烷基均可以是部分或完全不饱和的和/或低级亚烷基的碳原子可以被低级烷基、羟基或低级烷氧基取代。
2.根据权利要求1所述的式1化合物和该化合物的N-氧化物或可药用盐，其中R1代表氢且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氢；R3代表低级烷基、氟代烷基、羟基烷基或氨基甲酰基；R4代表低级烷基；并且R5和R6彼此独立地表示氢、低级烷基、羟基-低级烷基、低级烷氧基-低级烷基、低级酰氧基-低级烷基、羧基-低级烷基、低级烷氧基羰基-低级烷基、氨基-低级烷基、低级烷基氨基-低级烷基、二(低级烷基)氨基-低级烷基、N-低级烷基哌啶基、N-低级烷基吡咯烷基或低级酰基，或者R5R6一起表示具有四、五或六个碳原子的亚烷基、具有一个氧和三或四个碳原子的氧杂-低级亚烷基或具有一个氮和三或四个碳原子的氮杂-低级亚烷基，其中氮原子是未取代的或者被低级烷基、羟基-低级烷基或低级烷氧基-低级烷基所取代，并且其中在所有情况下低级亚烷基均可以是部分或完全不饱和的和/或低级亚烷基的碳原子可以被低级烷基、羟基或低级烷氧基取代。
3.根据权利要求1所述的式1化合物和该化合物的N-氧化物或可药用盐，其中R1代表氢且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氢；R3代表三氟甲基；R4代表甲基；并且R5和R6彼此独立地表示氢、低级烷基、羟基-低级烷基、低级烷氧基-低级烷基、低级酰氧基-低级烷基、羧基-低级烷基、低级烷氧基羰基-低级烷基、氨基-低级烷基、低级烷基氨基-低级烷基、二(低级烷基)氨基-低级烷基、N-低级烷基哌啶基、N-低级烷基吡咯烷基或乙酰基，或者R5R6一起表示具有四、五或六个碳原子的亚烷基、具有一个氧和三或四个碳原子的氧杂-低级亚烷基或具有一个氮和三或四个碳原子的氮杂-低级亚烷基，其中氮原子是未取代的或者被低级烷基、羟基-低级烷基或低级烷氧基-低级烷基所取代，并且其中在所有情况下低级亚烷基均可以是部分或完全不饱和的和/或低级亚烷基的碳原子可以被低级烷基、羟基或低级烷氧基取代。
4.根据权利要求1所述的式1化合物和该化合物的N-氧化物或可药用盐，其中R1代表氢且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氢；R3代表三氟甲基；R4代表甲基；并且R5和R6彼此独立地表示氢、低级烷基、羟基-低级烷基、氨基-低级烷基、低级烷基氨基-低级烷基、二(低级烷基)氨基-低级烷基、N-低级烷基哌啶基或低级酰基，或者R5R6一起表示具有四或五个碳原子的亚烷基、具有一个氧和三或四个碳原子的氧杂-低级亚烷基或具有一个氮和三或四个碳原子的氮杂-低级亚烷基，其中氮原子是未取代的或者被低级烷基、羟基-低级烷基或低级烷氧基-低级烷基所取代，并且其中在所有情况下低级亚烷基均可以是部分或完全不饱和的和/或低级亚烷基的碳原子可以被低级烷基取代。
5.根据权利要求1所述的式1化合物和该化合物的N-氧化物或可药用盐，其中R1代表氢且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氢；R3代表三氟甲基；R4代表甲基；并且R5和R6彼此独立地表示氢、低级烷基、二(低级烷基)氨基-低级烷基、N-低级烷基哌啶基或低级乙酰基，或者R5R6一起表示具有四或五个碳原子的亚烷基、具有一个氧和四个碳原子的氧杂-低级亚烷基或具有一个氮和三或四个碳原子的氮杂-低级亚烷基，其中氮原子是未取代的或者被低级烷基所取代，并且其中氮杂-低级亚烷基可以是不饱和的和/或氮杂-低级亚烷基的碳原子可以被低级烷基取代。
6.根据权利要求1所述的式1化合物和该化合物的N-氧化物或可药用盐，其中R1代表氢且R2代表NR5R6，或者R1代表NR5R6且R2代表氢；R3代表三氟甲基；R4代表甲基；并且R5和R6彼此独立地表示氢、甲基、乙基、2-二甲基氨基乙基、4-甲基-1-哌啶基或乙酰基，或者NR5R6一起表示吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、吗啉-4-基、N-甲基哌嗪-1-基、1H-咪唑基、1H-2-甲基咪唑基、1H-4-甲基咪唑基或1H-2，4-二甲基咪唑基。
7.合成式1化合物或其N-氧化物或盐的方法 其中符号R1、R2、R3和R4如权利要求1所定义，其特征在于使式2化合物 其中R1、R2和R3如式1化合物所定义，或者其中羧基-COOH为活化形式的衍生物与式3的胺反应， 其中R4如式1化合物所定义，反应任选地在脱水剂和惰性碱和/或适合的催化剂的存在下，并且任选地在惰性溶剂的存在下进行；其中，如果必要的话，上述起始化合物2和3也可以以其中的官能团是被保护的形式存在和/或以盐的形式存在，只要存在成盐基团并且以盐形式反应是可能的；除去式1化合物的被保护衍生物中的任何保护基团；并且如果需要的话，将所得的式1化合物转化为另一种式1化合物或其N-氧化物，将游离的式1化合物转化为盐，将所得的式1化合物的盐转化为游离化合物或另一种盐，和/或将式1的异构体化合物的混合物分离为单个的异构体。
8.药物组合物，其包含作为活性成分的权利要求1所述的式1化合物或者其N-氧化物或可药用盐以及可药用载体。
9.权利要求1至6中的任何一项所述的式1化合物或其N-氧化物或可能的互变异构体或者该化合物的可药用盐在制备用于治疗对于抑制蛋白激酶活性有响应的疾病的药物组合物中的用途。
10.权利要求1至6中的任何一项所述的式1化合物或其N-氧化物或可能的互变异构体或者该化合物的可药用盐在治疗对于抑制蛋白激酶活性有响应的疾病中的用途。
11.治疗对于抑制蛋白激酶活性有响应的疾病的方法，该方法包括施用权利要求1所述的式1化合物或者其N-氧化物或可药用盐。
12.根据权利要求9至11中的任何一项所述的用途或方法，其中所述的疾病是肿瘤疾病。
13.根据权利要求9至11中的任何一项所述的用途或方法，其中所述的疾病是对于抑制Raf和/或Abl酪氨酸激酶活性有响应的白血病。
全文摘要
本发明涉及新的取代的N－(3－苯甲酰基氨基苯基)－4－吡啶基－2－嘧啶胺衍生物、制备这些化合物的方法、含有它们的药物组合物、它们任选地与一种或多种其他药学活性化合物组合用于治疗对于抑制蛋白激酶活性有响应的疾病、尤其是肿瘤疾病的用途以及治疗所述疾病的方法。
文档编号C07D401/04GK1684951SQ03823213
公开日2005年10月19日 申请日期2003年9月26日 优先权日2002年9月27日
发明者P·W·曼利, W·布赖滕施泰因, S·雅各布, P·菲雷 申请人:诺瓦提斯公司