专利名称：包含新的紫杉烷类化合物的细胞毒剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的细胞毒剂及其治疗用途。更具体地说，本发明涉及新的包含紫杉烷类化合物的细胞毒剂及其治疗用途。这些新的细胞毒剂通过紫杉烷与细胞结合剂的化学连接以靶向方式将紫杉烷类药物递送到特定细胞群体而具有治疗用途。
背景技术：
有许多关于尝试用单克隆抗体-药物缀合物特异性靶向肿瘤细胞的报道(Sela等，Immuoconjugates 189-216(C.Vogel编著，1987)；Ghose等，Targeted Drugs1-22(E.Goldberg编著，1983)；Diener等，Antibodymediated delivery systems 1-23(J.Rodwell编著，1988)；Pietersz等，Antibody mediated delivery systems 25-53(J.Rodwell编著，1988)；Bumol等，Antibody mediated delivery systems 55-79(J.Rodwell编著，1988)。所有引用的参考文献及专利都通过引用结合到本文中。
甲氨蝶呤、柔红霉素、多柔比星、长春新碱、长春碱、美法仑、丝裂霉素C和苯丁酸氮芥等细胞毒药物已经成功地与多种鼠单克隆抗体缀合。在某些情况下，药物分子通过诸如以下的中间载体分子与抗体分子连接血清白蛋白(Garnett等，46 Cancer Res.2407-2412(1986)；Ohkawa等，23 Cancer Immunol.Immunother.81-86(1986)；Endo等，47Cancer Res.1076-1080(1980))、右旋糖酐(Hurwitz等，2 Appl.Biochem.25-35(1980)；Manabi等，34 Biochem.Pharmacol.289-291(1985)；Dillman等，46 Cancer Res.4886-4891(1986)；Shoval等，85 ProcNatl.Acad.Sci.8276-8280(1988))或聚谷氨酸(Tsukada等，73 J.Natl.Canc.Inst.721-729(1984)；Kato等，27 J.Med.Chem.1602-1607(1984)；Tsukada等，52Br.J.Cancer 111-116(1985))。
各种各样的连接技术已经用于制备这些免疫缀合物，并且对可裂解和不可裂解的连接分子都进行了研究。然而在大多数情形下，只有在药物分子能够在靶点从缀合物中释放出未修饰形式时，才能观测到药物的全部细胞毒潜力。
一种用于制备抗体-药物缀合物的可裂解连接分子是基于顺式乌头酸的酸不稳定连接分子，其利用不同胞内隔室的酸性环境，例如受体介导的内吞作用中所遇到的内体和溶酶体。Shen和Ryser引入这种方法制备柔红霉素与大分子载体的缀合物(102 Biochem.Biophys.Res.Commun.1048-1054(1981))。Yang和Reisfeld使用相同的方法使柔红霉素与抗黑素瘤抗体缀合(80 J.Natl.Canc.Inst.1154-1159(1988))。Dillman等也以类似方式使用酸不稳定连接分子制备柔红霉素与抗T细胞抗体的缀合物(48 Cancer Res. 6097-6102(1988))。
Trouet等人开发出另一种方法，涉及经肽间隔臂连接柔红霉素与抗体(79 Proc.Natl.Acad.Sci.626-629(1982))。使用这种方法的前提是游离药物可通过溶酶体肽酶作用从这样的缀合物释放出来。
然而体外细胞毒性测试显示，抗体-药物缀合物很难达到与游离非缀合药物相同的细胞毒功效。这表明从抗体释放药物分子的机理是非常低效的。在免疫毒素领域，单克隆抗体和催化活性蛋白毒素经二硫桥连接形成的缀合物比含其它连接分子的缀合物具有更大的细胞毒性。参见Lambert等，260 J. Biol.Chem.12035-12041(1985)；Lambert等，Immunotoxins 175-209(A.Frankel编著，1988)；Ghetie等，48Cancer Res.2610-2617(1988)。这归因于高浓度的细胞内谷胱甘肽，其促使抗体分子和毒素之间的二硫键有效裂解。尽管如此，很少报道使用二硫桥制备药物与大分子的缀合物。Shen等人(260 J.Biol.Chem.10905-10908(1985))介绍了使甲氨蝶呤转化为巯基乙酰胺衍生物，然后经二硫键与多聚-D-赖氨酸缀合。另一报道介绍了制备包含毒性药物刺孢霉素(calicheamycin)与抗体的三硫化物缀合物(Hinman等，53 Cancer Res.3336-3342(1993))。
二硫键连接的抗体-药物缀合物缺乏的一个原因是，没有可利用的细胞毒药物，其中含有容易用于经二硫桥连接药物与抗体的含硫原子的基团。此外，化学修饰现有药物却不降低其细胞毒作用是困难的。
现有抗体-药物缀合物的另一个主要缺点是它们无力递送足够浓度的药物到靶位，因为靶抗原的数目有限以及抗癌药物如甲氨蝶呤、柔红霉素和长春新碱的细胞毒性相对温和。为了达到显著的细胞毒性，必须将大量药物分子与抗体直接连接或通过高分子载体连接。然而，这样大幅度修饰的抗体常常表现出与靶抗原的结合减弱并且在体内快速从血流清除。
尽管存在上述困难，但据报道，称为美登木素生物碱的有效细胞毒剂包含细胞结合部分和细胞毒药物基团(USP 5,208,020、USP5,416,064，以及R.V.J.Chari，31 Advanced Drug Delivery Reviews89-104(1998))。同样地，对包含细胞结合部分和有效抗肿瘤抗体CC-1065的类似物和衍生物的有效细胞毒剂也有报道(USP 5,475,092和USP 5,585,499)。
紫杉醇(paclitaxel，商品名Taxol(泰素))——天然细胞毒性产物和多西他赛(docetaxel，亦称紫杉特尔，商品名Taxotere(泰索帝)，紫杉萜类抗肿瘤药)--半合成衍生物，这两种药物均被广泛用于治疗癌症。这些化合物均属于紫杉烷类(taxanes)化合物家族。紫杉烷类化合物是有丝分裂纺锤体毒物，抑制微管蛋白解聚作用，从而导致微管装配速度提高，最终导致细胞死亡。尽管多西他赛和紫杉醇是有效的癌症治疗药物，但是由于它们对异常细胞的非特异毒性，所以它们的抗肿瘤活性受到限制。
此外，紫杉醇和多西他赛等化合物的自身功效不足以用于细胞结合剂的缀合物。最近，报道了一些要比多西他赛或紫杉醇功效好的新的多西他赛类似物(Ojima等，39，J.Med. Chem.3889-3896(1996))。然而，这些化合物缺乏允许经可裂解键与细胞结合剂连接的合适官能团。
因此，非常需要一种用紫杉烷类药物治疗疾病而副作用降低且不损害它们的细胞毒性的方法。
US 6,436,931、US 6,372,738和US 6,340,701介绍了经二硫桥与单克隆抗体连接的紫杉烷类化合物。上述紫杉烷类化合物的使用功效似乎还不够。
发明概述同第一个实施方案所公开的一样，本发明目的之一是提供高毒性且还可有效用于治疗多种疾病的紫杉烷类化合物。
本发明另一目的是提供新的紫杉烷类化合物。
上述和其它目的已经通过获得包含一种或多种连接有细胞结合剂的紫杉烷类化合物的细胞毒剂而实现。
在第二个实施方案中，本发明提供一种治疗组合物，其包含(A)有效量的一种或多种连接有细胞结合剂的紫杉烷类化合物，和(B)药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
在第三个实施方案中，本发明提供一种选择性杀死细胞群体的方法，该方法包括使靶细胞或含靶细胞的组织与细胞毒性量的包含一种或多种连接有细胞结合剂的紫杉烷类化合物的细胞毒剂接触。
发明详述本发明基于新的紫杉烷类化合物的合成方法，该紫杉烷类化合物既保留了高细胞毒性又可与细胞结合剂有效连接。已经证实，用可裂解键例如二硫键连接高细胞毒药物与抗体可确保全部活性药物在细胞内释放，并且这类缀合物是抗原特异性方式的细胞毒素(US6,340,701、US 6,372,738、US 6,436,931)。然而，现有技术披露修饰现有药物却不降低其细胞毒潜力是非常困难的。本公开发明用化学基团修饰已公开的紫杉烷类化合物而解决了这一难题。结果，本发明公开的新的紫杉烷类化合物保持并且在某种情形下甚至可以增强已知的紫杉烷类化合物的细胞毒功效。细胞结合剂-紫杉烷复合物仅允许针对不需要的细胞以靶向方式发挥紫杉烷类化合物的全部细胞毒性作用，从而避免了因损害非靶向健康细胞而产生的副作用。因此，本发明提供消除要被杀死或裂解的患病细胞或异常细胞(例如肿瘤细胞(尤其是实体瘤细胞))的有效药物。
本发明细胞毒剂包含一种或多种通过连接基连接细胞结合剂的紫杉烷类化合物。所述连接基为通过常规方法与紫杉烷共价结合的化学基团部分。在一个优选的实施方案中，所述化学基团可经酯键与紫杉烷共价结合。
本发明所用紫杉烷类化合物具有以下式(I)结构 Z＝H或式II基团；R1为连接基或任选取代的芳基或杂环基、1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基、-OR2、或者任何所述1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基或者任选取代的芳基或杂环基所形成的氨基甲酸酯基。优选R1为-OR2或任选取代的芳基或杂环基；R2为1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基、任选取代的芳基或杂环基。优选R2为烷基，更优选取代的烷基，例如叔丁基。
R3为连接基或任选取代的芳基或杂环基、1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基R4为连接基、H、羟基、烷氧基、烯氧基、任选取代的烷酰基氧基、芳酰基氧基、烯酰基氧基、炔酰基氧基、环烷酰基氧基、烷氧基乙酰基、烷硫基乙酰基、烷氧基羰氧基、环烷氧基、环烯氧基、氨基甲酰基氧基、烷基氨基甲酰基氧基、或二烷基氨基甲酰基氧基、杂环型或芳基型醚基、酯基或氨基甲酸酯基、或者1-10个碳原子的直链、支链或环状烷基或烯基的酯基或醚基或者式-OCOX的氨基甲酸酯基，其中X为含氮杂环基例如未取代或取代的哌啶子基、吗啉代、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或者式-OCONR9R10的氨基甲酸酯基，其中R9和R10相同或不同，并且为H、1-10个原子的直链、支链或环状烷基、或者1-10个碳原子的未取代或取代的芳基。优选R4为连接基或烷酰基氧基。
R5或R7为H；R6为H；R7或R5与R形成化学键(环醚)；R8为任选取代的芳基或杂环基；本发明将用下面三个主要实施方案作出更全面的说明。
实施方案1R4为连接基；Z＝H或式II基团；R1为任选取代的芳基或杂环基、1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基、-OR2、或者任何所述1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基或者任选取代的芳基或杂环基所形成的氨基甲酸酯基；R2为1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基、任选取代的芳基或杂环基；优选R1为叔丁氧基、巴豆基、二甲基丙烯酰基、异丁烯基、己烯基、环戊烯基、环己烯基、呋喃基、吡咯基(pyrollyl)、噻吩基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、吗啉代、哌啶子基、哌嗪子基、唑基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
更优选R1为叔丁氧基、异丁烯基、巴豆基、二甲基丙烯酰基、噻吩基、噻唑基或呋喃基；R3为任选取代的芳基或杂环基、1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基；优选R3为巴豆基、二甲基丙烯酰基、丙烯基、异丁烯基、己烯基、环戊烯基、环己烯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、吡啶基、唑基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
更优选R3为异丁烯基、巴豆基、二甲基丙烯酰基、噻吩基、噻唑基、吡啶基、叔丁基或呋喃基。
R4为连接基。
合适的连接基为本领域众所周知的，包括二硫基、硫醚基、酸不稳定基、光不稳定基、肽酶不稳定基和酯酶不稳定基。优选二硫基和硫醚基。
当连接基为含巯基或二硫基的基团时，含巯基或二硫基的侧链可以为直链、支链、芳族或杂环基团。本领域普通技术人员很容易确定合适的侧链。
含巯基或二硫基的取代基的具体实例包括-O(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-OCO(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-O(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、-OCO-(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、-OCONR12(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-OCO-苯基-X′SZ′、-OCO-呋喃基-X′SZ′、-OCO-唑基-X′SZ′、-OCO-噻唑基-X′SZ′、-OCO-噻吩基-X′SZ′、-OCO-咪唑基-X′SZ′、-OCO-吗啉代-X′SZ′、-OCO-哌嗪子基-X′SZ′、-OCO-哌啶子基-X′SZ′、和-OCO-N-甲基哌嗪子基-X′SZ′或-OCO-N-甲基哌嗪子基-X′SZ′，其中
Z′为H、巯基保护基或SR′，其中X′为化学键、1-10个碳原子的直链或支链烷基、或者具有2-20个重复乙烯氧基单元的聚乙二醇间隔基；R′和R12相同或不同，并且为1-10个碳原子的直链、支链或环状烷基，或者未取代或取代的芳基或杂环基，R12还可以为H，R13、R14、R15和R16相同或不同，并且为H或1-4个碳原子的直链或支链烷基，R17和R18都为H或烷基，n为1-10的整数，m为1-10的整数并且还可以为0，y为1-20的整数并且还可以为0。
R5或R7为H，R6为H，R7或R5与R形成化学键(环醚)，R8为任选取代的芳基或杂环基，优选R8为3-甲氧基苯基、3-氯苯基、2，5-二甲氧基苯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、吲哚基、唑基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
实施方案2R1为连接基；Z为式II基团；R1为连接基。
合适的连接基为本领域众所周知的，包括二硫基、硫醚基、酸不稳定基、光不稳定基、肽酶不稳定基和酯酶不稳定基。优选二硫基和硫醚基。
当连接基为含巯基或二硫基的基团时，含巯基或二硫基的侧链可以为直链、支链、芳族或杂环基团。本领域普通技术人员很容易确定合适的侧链。
含巯基或二硫基的取代基的具体实例包括-(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-O(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、-O(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、-NR12(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、苯基-X′SZ′、呋喃基-XSZ′、唑基-X′SZ′、噻唑基-X′SZ′、噻吩基-X′SZ′、咪唑基-X′SZ′、吗啉代-X′SZ′、-哌嗪子基-X′SZ′、哌啶子基-XSZ′、-呋喃基-X′SZ′、-噻吩基-X′SZ′、-噻唑基-X′SZ′以及-N-甲基哌嗪子基-X′SZ′、-吗啉代-X′SZ′、-哌嗪子基-X′SZ′、-哌啶子基-X′SZ′或-N-甲基哌嗪子基-X′SZ′，其中Z′为H、巯基保护基或SR′，其中X′为化学键、1-10个碳原子的直链或支链烷基、或者具有2-20个重复乙烯氧基单元的聚乙二醇间隔基；R′和R12相同或不同，并且为1-10个碳原子的直链、支链或环状烷基，或者未取代或取代的芳基或杂环基，R12还可以为H，R13、R14、R15和R16相同或不同，并且为H或1-4个碳原子的直链或支链烷基，R17和R18都为H或烷基，n为1-10的整数，m为1-10的整数并且还可以为0，y为1-20的整数并且还可以为0。
R3为任选取代的芳基或杂环基、1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基；优选R3为巴豆基、二甲基丙烯酰基、丙烯基、异丁烯基、己烯基、环戊烯基、环己烯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、唑基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
更优选R3为异丁烯基、巴豆基、二甲基丙烯酰基、噻吩基、噻唑基、吡啶基、叔丁基或呋喃基。
R4为H、羟基、烷氧基、烯氧基、任选取代的烷酰基氧基、芳酰基氧基、烯酰基氧基、炔酰基氧基、环烷酰基氧基、烷氧基乙酰基、烷硫基乙酰基、烷氧基羰氧基、环烷氧基、环烯氧基、氨基甲酰基氧基、烷基氨基甲酰基氧基、或二烷基氨基甲酰基氧基、杂环型或芳基型醚基、酯基或氨基甲酸酯基、或者1-10个碳原子的直链、支链或环状烷基或烯基的酯基或醚基、或者式-OCOX的氨基甲酸酯基，其中X为含氮杂环基例如未取代或取代的哌啶子基、吗啉代、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或者式-OCONR9R10的氨基甲酸酯基，其中R9和R10相同或不同，并且为H、1-10个原子的直链、支链或环状烷基、或者5-10个碳原子的未取代或取代的芳基；R5或R7为H；R6为H；R7或R5与R形成化学键(环醚)；R8为任选取代的芳基或杂环基；优选R8为3-甲氧基苯基、3-氯苯基、2，5-二甲氧基苯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、唑基、咪唑基、吡啶基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
实施方案3R3为连接基；Z为式II基团；R1为任选取代的芳基或杂环基、1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基、-OR2、或者任何所述1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基或者任选取代的芳基或杂环基所形成的氨基甲酸酯基；R2为1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基、任选取代的芳基或杂环基；优选R1为叔丁氧基、巴豆基、二甲基丙烯酰基、异丁烯基、己烯基、环戊烯基、环己烯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、吗啉代、哌啶子基、哌嗪子基、唑基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
更优选R1为叔丁氧基、异丁烯基、巴豆基、二甲基丙烯酰基、噻吩基、噻唑基或呋喃基；R3为连接基。
合适的连接基为本领域众所周知的，包括二硫基、硫醚基、酸不稳定基、光不稳定基、肽酶不稳定基和酯酶不稳定基。优选二硫基和硫醚基。
当连接基为含巯基或二硫基的基团时，含巯基或二硫基的侧链可以为直链、支链、芳族或杂环基团。本领域普通技术人员很容易确定合适的侧链。
含巯基或二硫基的取代基的具体实例包括-(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、苯基-X′SZ′、呋喃基-X′SZ′、唑基-X′SZ′、噻唑基-X′SZ′、噻吩基-X′SZ′、咪唑基-X′SZ′，其中Z′为H、巯基保护基或SR′，其中X′为化学键、1-10个碳原子的直链或支链烷基、或者具有2-20个重复乙烯氧基单元的聚乙二醇间隔基；R′为1-10个碳原子的直链、支链或环状烷基，或者未取代或取代的芳基或杂环基，R13、R14、R15和R16相同或不同，并且为H或1-4个碳原子的直链或支链烷基，R17和R18都为H或烷基，n为1-10的整数，m为1-10的整数并且还可以为0，y为1-20的整数并且还可以为0。
R4为H、羟基、烷氧基、烯氧基、任选取代的烷酰基氧基、芳酰基氧基、烯酰基氧基、炔酰基氧基、环烷酰基氧基、烷氧基乙酰基、烷硫基乙酰基、烷氧基羰氧基、环烷氧基、环烯氧基、氨基甲酰基氧基、烷基氨基甲酰基氧基、或二烷基氨基甲酰基氧基、杂环型或芳基型醚基、酯基或氨基甲酸酯基、或者1-10个碳原子的直链、支链或环状烷基或烯基的酯基或醚基、或者式-OCOX的氨基甲酸酯基，其中X为含氮杂环基例如未取代或取代的哌啶子基、吗啉代、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或者式-OCONR9R10的氨基甲酸酯基，其中R9和R10相同或不同，并且为H、1-10个原子的直链、支链或环状烷基、或者5-10个碳原子的未取代或取代的芳基；R5或R7为H；R6为H；R7或R5与R形成化学键(环醚)；R8为任选取代的芳基或杂环基；优选R8为3-甲氧基苯基、3-氯苯基、2，5-二甲氧基苯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、唑基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
本发明已经合成下列化合物
3′-异丁烯基系列
2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。边搅拌边向10-乙酰氧基-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(1.30g，1.25mmol)的乙醇(25ml)的溶液中加入肼一水合物(10.5ml)。15分钟后，反应物用乙酸乙酯(50ml)稀释，有机层用氯化铵(50ml)、水(50ml)和盐水(50ml)萃取。然后，有机层经无水硫酸钠干燥，过滤后真空浓缩。残余物在硅胶柱上用40％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂进行纯化。合并含所需产物流分后浓缩，得到1.1g白色固体2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。
1H NMR(CDCl3)δ 1.08(s，24H)，1.23(s，3H)，1.36(s，9H)，1.67(s，3H)，1.70(s，3H)，1.76(s，3H)，1.82(m，1H)，1.88(s，3H)，2.16(s，3H)，2.31(m，1H)，2.50(m，2H)，3.17(br s，1H)，3.79(s，3H)，3.85(d，J＝6.4Hz，1H)，3.95(s，1H)，4.18(m，2 H)，4.29(d，J＝8.4Hz，1H)，4.37(d，J＝2Hz，1H)，4.41(d，J＝8.4Hz，1H)，4.74(t，J＝9Hz，1H)，4.90(t，J＝9.8Hz，2H)，5.17(d，J＝1.6Hz，1H)，5.32(d，J＝9.2Hz，1H)，5.65(d，J＝6.8Hz，1H)，6.10(t，J＝8.8Hz，1H)，6.93(d，J＝9.2Hz，1H)，7.05(dd，J＝9.2，3.0Hz，1H)，7.28(d，J＝3.0Hz，1H).
m/z LC/MS C52H79NO16SiNa+计算值1024.5；实测值1024.3。
7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。将2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(1.1g，1.1mmol)、二氯甲烷(7ml)和吡啶(0.44ml，5.5mmol)的溶液用干冰和丙酮浴冷却至-30℃。滴加三氟甲磺酸酐(0.37ml，2.2mmol)的二氯甲烷(0.3ml)溶液。边搅拌边将所得溶液逐渐升至室温。1小时后，反应物用乙酸乙酯(25ml)稀释，有机层用氯化铵(25ml)、水(25ml)和盐水(25ml)萃取。然后，有机层经无水硫酸钠干燥，过滤后真空浓缩。残余物在硅胶柱上用20％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂进行纯化。合并含所需产物流分后浓缩，得到565mg固体7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。
1H NMR(CDCl3)δ1.10(m，24H)，1.26(s，3H)，1.38(s，9H)，1.68(s，3H)，1.72(s，3H)，1.92(s，3H)，1.95(s，3H)，2.20(s，3H)，2.28(m，1H)，2.31(m，1H)，2.50(m，1H)，2.80(m，1H)，3.80(s，3H)，3.95(d，J＝6.4Hz，1H)，3.98(s，3 H)，4.36(d，J＝8.0Hz，1H)，4.38(d，J＝2.4Hz，1H)，4.44(d，J＝8.0Hz，1H)，4.76(t，J＝9.2Hz，1H)，4.88(m，2H)，5.33(m，2H)，5.38(dd，J＝6.8，10.4Hz，1H)，5.68(d，J＝6.4Hz，1H)，6.13(t，J＝8.8Hz，1H)，6.95(d，J＝9.2Hz，1H)，7.07(dd，J＝3.2，9.2Hz，1H)，7.26(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C53H78F3NO18SSiNa+计算值1156.4；实测值1156.1。
7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-10-氧代-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。向7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(565mg，0.5mmol)的二氯甲烷(20ml)搅拌溶液中加入4-甲基吗啉N-氧化物(NMO)(117mg，1.00mmol)，然后加入高钌酸四丙基铵(TPAP)(10mg，0.03mmol)。于室温搅拌所得混合物并监测。8小时后，反应物经硅藻土(celite)过滤，用二氯甲烷清洗硅藻土垫。真空浓缩合并的上清液，所得残余物在硅胶柱上用25％乙酸乙酯/己烷进行纯化。合并含产物流分后浓缩，得到325mg固体7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-10-氧代-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。
1H NMR(CDCl3)δ1.10(m，21H)，1.20(s，3H)，1.30(s，3H)，1.38(s，9H)，1.68(s，3H)，1.72(s，3H)，1.92(s，3H)，1.94(s，3H)，2.18(s，3H)，2.23(m，1H)，2.35(m，1H)，2.63(m，1H)，2.83(m，1H)，3.71(m，2H)，3.81(s，3H)，4.00(s，3H)，4.34(d，J＝8.4Hz，1H)，4.39(d，J＝2.0Hz，1H)，4.45(d，J＝8.4Hz，1H)，4.78(t，J＝9.2Hz，1H)，4.87(m，2H)，5.19(dd，J＝8.0，10.0Hz，1H)，5.34(d，J＝8.8Hz，1H)，5.79(d，J＝6.0Hz，1H)，6.09(t，J＝8.8Hz，1H)，6.98(d，J＝9.2Hz，1H)，7.09(dd，J＝3.2 9.2Hz，1H)，7.25(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C53H76F3NO18SSiNa+计算值1154.4；实测值1154.4。
7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。向7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-10-氧代-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(323mg，0.286mmol)和乙醇(3.5ml)的充分搅拌混合物中加入硼氢化钠(58mg，1.5mmol)。10分钟后，反应物用乙酸乙酯(15ml)稀释，用盐水(15ml)萃取两次。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤后真空浓缩。残余物用硅胶制备型薄层色谱法纯化(用50％乙酸乙酯/己烷作为展开剂)，得到所需产物7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(171mg)以及副产物7α，10α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(78mg)。
7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛1H NMR(CDCl3)δ 1.09(m，24H)，1.24(s，3H)，1.38(s，9H)，1.68(s，3H)，1.71(s，3H)，1.78(s，3H)，1.97(s，3H)，2.10(s，3H)，2.23-2.33(m，2H)，2.34-2.45(m，2H)，2.50(d，J＝3.2Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.98(s，3H)，4.02(d，J＝6.0Hz，1H)，4.25(d，J＝7.2Hz，1H)，4.34(d，J＝7.2Hz，1H)，4.45(d，J＝2.4Hz，1H)，4.73-4.83(m，4 H)，4.98(m，2H)，5.35(d，J＝8.8Hz，1H)，5.67(d，J＝6.4Hz，1H)，5.97(t，J＝8.8Hz，1H)，6.96(d，J＝9.2Hz，1H)，7.06(dd，J＝3.29.2Hz，1H)，7.29(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C52H79NO15SiNa+计算值1008.5；实测值1008.4。
7α，10α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛1H NMR(CDCl3)δ1.10(m，21H)，1.19(s，3H)，1.34(s，3H)，1.39(s，9H)，1.66(s，3H)，1.70(s，3H)，1.84(s，3H)，1.88(s，3H)，2.07(s，3H)，2.21(m，1H)，2.29(m，1H)，2.38(m，2H)，3.66(d，J＝7.6Hz，1H)，3.81(s，3H)，3.96(s，3H)，4.39-4.47(m，4H)，4.74(t，J＝8.4Hz，1H)，4.82(br s，1H)，4.90(m，1H)，5.08(d，J＝4.4Hz，1H)，5.35(d，J＝8.8Hz，1H)，5.42(d，J＝6.0Hz，1H)，6.12(t，J＝8.8Hz，1H)，6.95(d，J＝8.8Hz，1H)，7.07(dd，J＝3.2，8.8Hz，1H)，7.32(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C52H77NO15SiNa+计算值1006.5；实测值1006.4。
7α，10α-环氧-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。将7α，10α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(20mg，0.02mmol)溶于1∶1乙腈∶吡啶混合物(2ml)中，所得溶液用冰浴冷却至0℃。向该溶液中加入氟化氢-吡啶(0.2ml)，将所得溶液逐渐升至室温。16小时后，该反应物用乙酸乙酯(15ml)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液(15ml)猝灭。有机层用盐水(20ml)洗涤1次，然后经无水硫酸钠干燥，过滤后真空浓缩。粗制残余物用硅胶制备型薄层色谱法纯化(用70％乙酸乙酯/己烷作为展开剂)。收刮含所需产物带后用乙酸乙酯在过滤器中清洗。合并有机层后真空浓缩，得到12mg白色固体7α，10α-环氧-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。
1H NMR(CDCl3)δ1.19(s，3H)，1.32(s，3H)，1.41(s，9H)，1.73(s，6H)，1.85(s，3H)，1.89(s，3H)，2.03(s，3H)，2.28-2.42(m，4H)，3.69(dd，J＝2.0，7.2Hz，1H)，3.81(s，3H)，3.89(s，3H)，4.25(dd，J＝2.4，4.4，1H)，4.34(d，J＝6.0Hz，1H)，4.36(d，J＝6.0Hz，1H)，4.53(d，J＝7.6Hz，1H)，4.82(m，2 H)，5.00(d，J＝9.2Hz，1H)，5.08(m，1H)，5.25(d，J＝8.8Hz，1H)，5.35(d，J＝6.0Hz，1H)，6.17(t，J＝7.6Hz，1H)，6.94(d，J＝9.2Hz，1H)，7.06(dd，J＝3.2，9.2Hz，1H)，7.28(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C43H57NO15Na+计算值850.4；实测值850.3。
7α，9α-环氧-2′-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。将7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(25mg，0.025mmol)溶于1∶1乙腈∶吡啶混合物(2ml)中，所得溶液用冰浴冷却至0℃。向该溶液中加入氟化氢-吡啶(0.25ml)，将所得溶液温度逐渐升至室温。16小时后，该反应物用乙酸乙酯(15ml)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液(15ml)猝灭。有机层用盐水(20ml)洗涤1次，然后经无水硫酸钠干燥，过滤后真空浓缩。粗制残余物用硅胶制备型薄层色谱法纯化(用70％乙酸乙酯/己烷作为展开剂)。收刮包含所需产物带，在过滤器中用乙酸乙酯清洗。合并有机层后真空浓缩，得到12mg白色固体7α，9α-环氧-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。
1H NMR(CDCl3)δ1.12(s，3H).1.23(s，3H)，1.41(s，9H)，1.73(s，6H)，1.80(s，3H)，2.01(s，3H)，2.07(s，3H)，2.15-2.21(m，1H)，2.23-2.28(m，1H)，2.36-2.44(m，1H)，2.43-2.49(m，1H)，2.52(d，J＝6.8Hz，1H)，3.75(br s，1H)，3.80(s，3H)，3.93(s，3H)，4.05(d，J＝6.4Hz，1H)，4.26(d，J＝2.4，4.8Hz，1H)，4.30(d，J＝7.6Hz，1H)，4.32(d，J＝7.6Hz，1H)，4.76-4.83(m，4H)，4.91(t，J＝2.0Hz，1H)，4.98(d，J＝9.6Hz，1H)，5.26(d，J＝8.4Hz，1H)，5.65(d，J＝6.4Hz，1H)，6.01(t，J＝8.8Hz，1H)，6.95(d，J＝9.2Hz，1H)，7.06(dd，J＝3.2 9.2Hz，1H)，7.28(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C43H59NO15Na+计算值852.4；实测值852.3。
7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-乙酰氧基-多西他赛。在氮气氛下，向7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(85mg，0.086mmol)的吡啶(1ml)溶液中加入二甲基氨基吡啶(DMAP)(16mg，0.13mmol)和乙酸酐(0.025ml，0.26mmol)。反应物于室温搅拌，4小时后用乙酸乙酯(20ml)稀释，再用盐水(25ml)洗涤1次。分离有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤后真空浓缩。残余物用硅胶制备型薄层色谱法纯化(用50％乙酸乙酯/己烷作为展开剂)。收刮包含所需产物带，在过滤器中用乙酸乙酯清洗。合并有机层后真空浓缩，得到75mg白色固体7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-1 0-乙酰氧基-多西他赛。
1H NMR(CDCl3)δ1.10(m，21H)，1.22(s，6H)，1.38(s，9H)，1.67(s，3H)，1.70(s，3H)，1.73(s，3H)，1.94(s，3H)，2.07(s，3H)，2.10(s，3H)，2.31(m，3H)，2.48(m，1H)，3.78(s，3H)，3.97(s，3H)，3.98(d，J＝6.0Hz，1H)，4.24(d，J＝7.2Hz，1H)，4.32(d，J＝7.2Hz，1H)，4.45(d，J＝2.0Hz，1H)，4.77(m，2H)，4.82(d，J＝6.0Hz，1H)，4.91(s，1H)，4.93(d，J＝9.2Hz，1H)，5.36(d，J＝8.4Hz，1H)，5.68(d，J＝9.2Hz，1H)，5.70(d，J＝6.0Hz，1H)，5.89(t，J＝8.8Hz，1H)，6.94(d，J＝9.2Hz，1H)，7.05(dd，J＝3.2 9.2Hz，1H)，7.29(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C54H81NO16SiNa+计算值1050.5；实测值1050.5。
7α，9α-环氧-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-乙酰氧基-多西他赛。将7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-乙酰氧基-多西他赛(75mg，0.073mmol)溶于1∶1乙腈∶吡啶混合物(3ml)中，所得溶液用冰浴冷却至0℃。向该溶液中加入氟化氢-吡啶(0.5ml)，将所得溶液温度逐渐升至室温。16小时后，该反应物用乙酸乙酯(25ml)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液(25ml)猝灭。有机层用盐水(30ml)洗涤1次，然后经无水硫酸钠干燥，过滤后真空浓缩。粗制残余物用硅胶制备型薄层色谱法纯化(用70％乙酸乙酯/己烷作为展开剂)。收刮包含所需产物带，在过滤器中用乙酸乙酯清洗。合并有机层后真空浓缩，得到52mg 7α，9α-环氧-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-乙酰氧基-多西他赛。
1H NMR(CDCl3)δ1.26(s，3H)，1.28(s，3H)，1.41(s，9H)，1.74(s，6H)，1.76(s，3H)，1.99(s，3H)，2.09(s，3H)，2.11(s，3H)，2.18(m，1H)，2.27(m，1H)，2.36(m，1H)，2.49(m，1H)，3.81(s，3H)，3.91(s，1H)，3.94(s，3H)，4.02(d，J＝6.0Hz，1H)，4.28(m，2H)，4.33(d，J＝7.2Hz，1H)，4.80(m，2H)，4.86(d，J＝6.4Hz，1H)，4.91(s，1H)，5.00(d，J＝9.2Hz，1H)，5.29(d，J＝8.4Hz，1H)，5.67(d，J＝6.4Hz，1H)，5.71(d，J＝6.4Hz，1H)，6.01(t，J＝8.8Hz，1H)，6.96(d，J＝9.2Hz，1 H)，7.07(dd，J＝3.2 9.2Hz，1H)7.28(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C45H61NO16Na+计算值894.4；实测值894.5。
7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-甲氧基羰基氧基-多西他赛。在氮气氛下，将7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(28mg，0.029mmol)溶于无水四氢呋喃(0.65ml)中，所得溶液用干冰和丙酮浴冷却至-40℃。向该溶液中加入1.0M LiHMDS(0.04ml，0.039mmol)后搅拌15分钟。向该溶液中加入氯甲酸甲酯(0.003ml，0.036mmol)，于-40℃监测反应。1小时后，该反应物用乙酸乙酯(15ml)稀释，用水(15ml)萃取，再用盐水(15ml)洗涤有机层。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤后真空浓缩。残余物用硅胶制备型薄层色谱法纯化(用5％甲醇/二氯甲烷作为展开剂)。收刮包含所需产物带，在过滤器中用乙酸乙酯清洗。合并有机层后真空浓缩，得到9mg白色固体7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-甲氧基羰基氧基-多西他赛。
1H NMR(CDCl3)δ 1.10(m，21H)，1.22(s，3H)，1.24(s，3H)，1.39(s，9H)，1.68(s，3H)，1.71(s，3H)，1.75(s，3H)，1.96(s，3H)，2.08(s，3H)，2.30(m，3H)，2.50(m，1H)，3.78(s，3H)，3.80(s，3H)，3.98(d，J＝6.0Hz，1H)，3.99(s，3H)，4.25(d，J＝7.2Hz，1H)，4.34(d，J＝7.2Hz，1H)，4.46(d，J＝2.0Hz，1H)，4.78(m，2H)，4.91(m，3H)，5.37(d，J＝8.4Hz，1H)，5.57(d，J＝6.4Hz，1H)，5.70(d，J＝6.0Hz，1H)，5.93(t，J＝8.8Hz，1H)，6.95(d，J＝9.2Hz，1H)，7.06(dd，J＝3.29.2Hz，1H)，7.30(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C45H81NO17SiNa+计算值1066.5；实测值1066.3。
7α，9α-环氧-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-甲氧基羰基氧基-多西他赛。将7α，19α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基-10-甲氧基羰基氧基-多西他赛(9mg，0.008mmol)溶于1∶1乙腈∶吡啶混合物(1.2ml)中，所得溶液用冰浴冷却至0℃。向该溶液中加入氟化氢-吡啶(0.15ml)，将所得溶液温度逐渐升至室温。16小时后，该反应物用乙酸乙酯(15ml)稀释，再用饱和碳酸氢钠溶液(15ml)猝灭。有机层用盐水(15ml)洗涤1次，然后经无水硫酸钠干燥，过滤后真空浓缩。粗制残余物用硅胶制备型薄层色谱法纯化(用60％乙酸乙酯/己烷作为展开剂)。收刮包含所需产物带，在过滤器中用乙酸乙酯清洗。合并有机层后真空浓缩，得到4mg 7α，9α-环氧-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-甲氧基羰基氧基-多西他赛。
1H NMR(CDCl3)δ1.25(s，3H)，1.27(s，3H)，1.40(s，9H)，1.73(s，6H)，1.76(s，3H)，1.99(s，3H)，2.07(s，3H)，2.18(m，1H)，2.25(m，1H)，2.34(m，1H)，2.48(m，1H)，3.78(s，3H)，3.80(s，3H)，3.83(s，1H)，3.93(s，3H)，4.01(d，J＝6.0Hz，1H)，4.28(m，2H)，4.31(d，J＝7.6Hz，1H)，4.80(m，2H)，4.90(s，1H)，4.94(d，J＝7.6Hz，1H)，4.97(d，J＝9.6Hz，1H)，5.27(d，J＝7.6Hz，1H)，5.55(d，J＝6.0Hz，1H)，5.70(d，J＝6.0Hz，1H)，6.03(t，J＝8.8Hz，1H)，6.95(d，J＝9.2Hz，1H)，7.06(dd，J＝3.2 9.2Hz，1H)，7.28(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C45H61NO17Na+计算值910.4；实测值910.4。
7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-二甲基氨基羰基氧基-多西他赛。在氮气氛下，将7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(28mg，0.029mmol)溶于无水四氢呋喃(0.65ml)中，所得溶液用干冰和丙酮浴冷却至-40℃。向该溶液中加入1.0M LiHMDS(0.04ml，0.039mmol)并搅拌15分钟。向该溶液中加入二甲基氨基甲酰氟(0.003mg，0.031mmol)后于-40℃监测反应。1小时后，该反应物用乙酸乙酯(15ml)稀释，用水(15ml)萃取，然后用盐水(15ml)洗涤有机层。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤后真空浓缩。残余物用硅胶制备型薄层色谱法纯化(用5％甲醇/二氯甲烷作为展开剂)。收刮包含所需产物带，在过滤器中用乙酸乙酯清洗。合并有机层后真空浓缩，得到20mg白色固体7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-二甲基氨基羰基氧基-多西他赛。
1H NMR(CDCl3)δ1.10(m，21H)，1.23(s，6H)，1.39(s，9H)，1.68(s，3H)，1.71(s，3H)，1.73(s，3H)，1.98(s，3H)，2.09(s，3H)，2.31(m，3H)，2.49(m，1H)，2.93m(s，6H)，3.80(s，3H)，3.98(s，3H)，3.96(d，J＝6.0Hz，1H)，4.25(d，J＝7.2Hz，1H)，4.33(d，J＝7.2Hz，1H)，4.46(d，J＝2.0Hz，1H)，4.77(m，2H)，4.88(d，J＝6.4Hz，1H)，4.92(m，2H)，5.36(d，J＝8.4Hz，1H)，5.68(d，J＝6.0Hz，1H)，5.71(d，J＝6.4Hz，1H)，5.93(t，J＝8.8Hz，1H)，6.95(d，J＝9.2Hz，1H)，7.05(dd，J＝32 9.2Hz，1H)，7.30(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C55H84N2O16SiNa+计算值1079.6；实测值1079.5。
7α，9α-环氧-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-二甲基氨基羰基氧基-多西他赛。将7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-1 0-二甲基氨基羰基氧基-多西他赛(20mg，0.016mmol)溶于1∶1乙腈∶吡啶混合物(1.2ml)中，所得溶液用冰浴冷却至0℃。向该溶液中加入氟化氢-吡啶(0.25ml)，将所得溶液温度逐渐升至室温。16小时后，该反应物用乙酸乙酯(15ml)稀释，再用饱和碳酸氢钠溶液(15ml)猝灭。有机层用盐水(15ml)洗涤1次，然后经无水硫酸钠干燥，过滤后真空浓缩。粗制残余物用硅胶制备型薄层色谱法纯化(用70％乙酸乙酯/己烷作为展开剂)。收刮包含所需产物带，在过滤器中用乙酸乙酯清洗。合并有机层后真空浓缩，得到12mg 7α，9α-环氧-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-二甲基氨基羰基氧基-多西他赛。
1H NMR(CDCl3)δ1.24(s，3H)，1.26(s，3H)，1.40(s，9H)，1.73(s，6H)，1.74(s，3H)，2.00(s，3H)，2.07(s，3H)，2.17(m，1H)，2.25(m，1H)，2.36(m，1H)，2.48(m，1H)，2.93(s，3H)，2.94(s，3H)，3.79(s，3H)，3.86(s，1H)，3.92(s，3H)，4.02(d，J＝6.0Hz，1H)，4.28(m，2H)，4.31(d，J＝7.6Hz，1H)，4.80(m，2H)，4.89(d，J＝6.0Hz，1H)，4.90(s，1H)，4.97(d，J＝9.6Hz，1H)，5.28(d，J＝8.4Hz，1H)，5.67(d，J＝6.0Hz，1H)，5.70(d，J＝6.0Hz，1H)，6.02(t，J＝8.4Hz，1H)，6.94(d，J＝9.2Hz，1H)，7.05(dd，J＝3.2 9.2Hz，1H)，7.29(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C46H64N2O16Na+计算值923.4；实测值923.4。
3′-(2-呋喃基)系列
10-乙酰氧基-7-(三乙基甲硅烷基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。将(3R，4S)-1-叔丁氧基羰基)-3-三异丙基甲硅烷氧基-4-(2-呋喃基)-2-吖丁啶酮(1.27g，3.11mmol)和7-(三乙基甲硅烷基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-浆果赤霉素III(1.9g，2.5mmol)的混合物溶于无水THF(20ml)中。将混合物冷却至-40℃，滴加1.0M LiHMDS(3.5ml，3.5mmol)。反应物在-40℃至-20℃之间搅拌1小时后反应完成。该反应物用饱和氯化铵水溶液猝灭，用乙酸乙酯(100ml×2)萃取。合并的有机层用水(30ml×1)洗涤，经硫酸镁干燥后真空浓缩。粗制残余物在硅胶柱上用30％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂进行纯化，得到白色固体10-乙酰氧基-7-(三乙基甲硅烷基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(2.88g，98％)1H NMR(CDCl3)δ 0.53(m，6 H)，0.89(m，30H)，1.18(s，6H)，1.36(s，9H)，1.69(s，3H)，1.85(m，1H)，1.96(s，3H)，2.11(s，3H)，2.25(s，3H)，2.35(m，2H)，2.46(m，1H)，3.33(s，1H)，3.71(s，3H)，3.72(d，J＝6.8Hz，1H)，3.87(s，3H)，4.22(d，J＝8.0Hz，1H)，4.40(m，2H)，4.84(d，J＝8.0，1H)，4.89(d，J＝1.2Hz，1H)，5.24(m，2H)，5.61(d，J＝6.8Hz，1H)，6.12(t，J＝8.4Hz，1H)，6.1 8(d，J＝3.2Hz，1H)，6.27(dd，J＝3.2，2.0Hz，1H)，6.41(s，1H)，6.88(d，J＝9.2Hz，1H)，6.97(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.20(d，J＝3.2Hz，1H)，7.28(br s，1H).
m/z LC/MS C60H91NO18Si2Na+计算值1192.6；实测值1192.3。
10-乙酰氧基-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。将10-乙酰氧基-7-(三乙基甲硅烷基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(670mg，0.57mmol)溶于乙醇(2.5ml)中。滴加5％盐酸/乙醇溶液(5.0ml)。反应物于室温搅拌5小时后反应完成。反应物用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭，产物用乙酸乙酯(75ml×2)萃取。合并的乙酸乙酯层用水(25ml×1)和盐水(25ml×1)洗涤，经硫酸镁干燥后真空浓缩。粗制的10-乙酰氧基-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛无需纯化就可直接使用1H NMR(CDCl3)δ0.92(m，21H)，1.12(s，3H)，1.25(s，3H)，1.39(s，9H)，1.70(s，3H)，1.85(m，4H)，2.19(s，3H)，2.27(s，3H)，2.37(m，2H)，2.51(m，1H)，3.33(s，1H)，3.74(m，4H)，3.89(s，3H)，4.26(d，J＝8.4，1H)，4.38(m，2H)，4.90(m，2H)，5.24(m，2H)，5.62(d，J＝6.8Hz，1H)，6.19(m，2H)，6.30(m，2H)，6.88(d，J＝9.2，1H)，7.00(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.21(d，J＝3.2Hz，1H)，7.30(br s，1H).
m/z LC/MS C54H77NO18SiNa+计算值1078.5；实测值1078.3。
2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。将10-乙酰氧基-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(605mg，0.573mmol)溶于乙醇(12.0ml)中。5分钟内滴加肼一水合物(5.0ml)后反应完成。该反应物用乙酸乙酯稀释，用饱和氯化铵水溶液猝灭。产物用乙酸乙酯(75ml×2)萃取，用水(25ml×1)和盐水(25ml×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥后真空浓缩。粗制残余物在硅胶柱上用40％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂进行纯化，得到白色固体2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(507.6mg，87％，两步)1H NMR(CDCl3)δ 0.95(m，21H)，1.11(s，3H)，1.24(s，3H)，1.40(s，9H)，1.79(s，3H)，1.86(m，1H)，1.91(s，3H)，2.29(s，3H)，2.36(m，2H)，2.57(m，1H)，3.29(br s，1H)，3.76(s，3H)，3.88(d，J＝6.8Hz，1H)，3.92(s，3H)，4.19(m，2H)，4.43(d，J＝8.4Hz，1H)，4.45(d，J＝8.4Hz，1H)，4.91(m.2H)，5.24(m，3H)，5.65(d，J＝6.8Hz，1H)，6.21(m，2H)，6.31(dd，J＝3.2，1.6，1H)，6.90(d，J＝9.2Hz，1H)，7.02(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.23(d，J＝3.2Hz，1H)，7.30(br s，1H).
m/z LC/MS C52H75NO17SiNa+计算值1036.5；实测值1036.3。
7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。将2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(1.7g，1.68mmol)溶于二氯甲烷(10.0ml)并冷却至-30℃。加入吡啶(0.68ml，8.4mmol)，然后加入三氟甲磺酸酐(0.57ml，3.4mmol)的二氯甲烷(0.5ml)溶液，使反应变黄色。在1小时内将反应物缓慢升至0℃，此时反应完成。产物用乙酸乙酯(150ml×1)萃取，用水(50ml×1)和盐水(50ml×1)洗涤，经硫酸镁干燥后真空浓缩。粗制的残余物在硅胶柱上用25％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂进行纯化，得到白色固体7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(1.44g，75％)
1H NMR(CDCl3)δ0.94(m，21H)，1.09(s，3H)，1.22(s，3H)，1.39(s，9H)1.92(m，6H)，2.30(m，5H)，2.40(m，1H)，2.79(m，1H)，3.44(s，1H)，3.74(s，3H)，3.91(s，3H)，3.95(d，J＝6.4Hz，1H)，4.01(d，J＝1.6Hz，1H)，4.30(d，J＝8.4Hz，1H)，4.42(d，J＝8.4Hz，1H)，4.89(m，2H)，5.24(m，2H)，5.36(m，2H)，5.64(d，J＝6.4Hz，1H)，6.21(m，2H)，6.30(dd，J＝3.2，1.6Hz，1H)，6.90(d，J＝9.2Hz，1H)，7.02(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.19(d，J＝3.2Hz，1H)，7.30(br s，1H).
m/z LC/MS C53H74F3NO19SSiNa+计算值1168.4；实测值1168.4。
7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-10-氧代-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。向7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(1.44g，1.26mmol)和二氯甲烷(30ml)的搅拌溶液中加入4-甲基吗啉N-氧化物(NMO)(590mg，5mmol)，然后加入高钌酸四丙基铵(TPAP)(62mg，0.18mmol)。于室温搅拌所得混合物并监测。8小时后反应物经硅藻土过滤，用二氯甲烷清洗硅藻土垫。真空浓缩合并的上清液，所得残余物在硅胶柱上用10％乙酸乙酯/己烷进行纯化。合并含产物流分后浓缩，得到619mg固体7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-10-氧代-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。
1H NMR(CDCl3)δ 0.91(m，21H)，1.15(s，3H)，1.25(s，3H)，1.37(s，9H)，1.89(s，6H)，2.14(m，1H)，2.27(s，3H)，2.32(m，1H)2.51，(m，1H)，2.79(m，1H)，3.67(d，J＝6.4Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.85(s，1H)，3.91(s，3H)，4.38(d，J＝8.4Hz，1H)，4.40(d，J＝8.4Hz，1H)，4.81(d，J＝8.8z，1H)，4.89(d，J＝1.2Hz，1H)，5.17(m，1H)，5.24(m，2H)，5.72(d，J＝6.0Hz，1H)，6.14(t，J＝8.8Hz，1H)，6.20(d，J＝3.2Hz，1H)，6.28(d，J＝3.2，1.6Hz，1H)，6.90(d，J＝9.2Hz，1H)，7.01(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.15(d，J＝3.2Hz，1H)，7.29(brs，1H).
m/z LC/MSC53H72F3NO19SSiNa+计算值1166.4；实测值1166.1。
7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛和7α，10α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。
将硼氢化钠(102mg，2.7mmol)加入到7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-10-氧代-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(618mg，0.54mmol)的乙醇(7.0ml)溶液中。5分钟后该反应完成，用乙酸乙酯稀释。产物用乙酸乙酯萃取(100ml×1)，用饱和氯化钠水溶液(50ml×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥后真空浓缩。粗制残余物在硅胶柱上用50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂进行纯化，得到7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(258mg，48％)和7α，10α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(231mg，43％)。
7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛1H NMR(CDCl3)δ 0.92(m，21H)，1.08(s，3H)，1.23(s，3H)，1.41(s，9H)，1.77(s，3H)，1.99(s，3H)，2.15(s，3H)，2.33(m，4H)，2.56(d，J＝6.8Hz，1H)，3.55(s，1H)，3.76(s，3H)，3.93(s，3H)，4.01(d，J＝6.0Hz，1，H)，4.25(d，J＝7.2Hz，1H)，4.32(d，J＝7.2Hz，1H)，4.77(m，3H)，4.92(br s，1H)，4.95(br s，1H)，5.27(m，2H)，5.64(d，J＝6.4Hz，1H)，6.06(t，J＝8.8Hz，1H)，6.20(d，J＝2.8Hz，1H)，6.29(dd，J＝3.2，2.0Hz，1H)，6.90(d，J＝9.2Hz，1H)，7.00(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.23(d，J＝3.2Hz，1H)，7.31(s，1H).
m/z LC/MS C52H75NO16SiNa+计算值1020.5；实测值1020.4。
7α，10α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛1H NMR(CDCl3)δ 0.95(m，21H)，1.15(s，3H)，1.31(s，3H)，1.39(s，9H)，1.83(m，6H)，2.11(s，3H)，2.20-2.36(m，4H)，3.62(m，2H)，3.75(s，3H)，3.89(s，3H)，4.40(m，3H)，4.78(br s，1H)，4.92(br s，1H)，5.06(d，J＝4.0Hz，1H)，5.25(m，2H)，5.36(d，J＝6.0Hz，1H)，6.18(m，2H)，6.27(dd，J＝2.8，1.6Hz，1H)，6.88(d，J＝9.2Hz，1H)，6.99(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.22(d，J＝3.2Hz，1H)，7.29(br s，1H).
m/z LC/MSC52H73NO16SiNa+计算值1018.5；实测值1018.4。
7α，10α-环氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。将7α，10α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(49.1mg，0.049mmol)溶于吡啶-乙腈(1/1，2.0ml)并冷却至0℃。加入HF/吡啶(70∶30，0.5ml)，将该反应温度缓慢升至室温过夜。该反应物用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭，用乙酸乙酯稀释。乙酸乙酯层再用饱和碳酸氢钠水溶液(15ml×2)洗涤，合并的水层用乙酸乙酯(40ml×2)洗涤。合并的乙酸乙酯层用水(15ml×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥后真空浓缩。粗制残余物用硅胶进行纯化(用50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)，得到7α，10α-环氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(33.5mg，81％)1H NMR(CDCl3)δ 1.16(s，3H)，1.30(s，3H)，1.40(s，9H)，1.79(s，3H)，1.87(s，3H)，2.03(s，3H)，2.06(m，1H)，2.34(m，3H)，3.58(s，1H)，3.66(dd，J＝7.2，2.8Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.88(s，3H)，3.93(d，J＝4.0Hz，1H)，4.34(m，2H)，4.49(d，J＝7.6Hz，1H)，4.67(d，J＝2.0Hz，1H)，4.81(br s，1H)，5.04(d，J＝2.0Hz，1H)，5.34(m，3H)，6.18(br s，1H)，6.26(d，J＝3.2Hz，1H)，6.31(dd，J＝3.2，2.0Hz，1H)，6.92(d，J＝9.2Hz，1H)，7.03(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.24(d，J＝3.2z，1H)，7.34(d，J＝1.2Hz，1H).
m/z LC/MS C43H53NO16Na+计算值862.3；实测值862.3。
7α，9α-环氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。将7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛溶于吡啶-乙腈(1/1，1.5ml)并冷却至0℃。加入HF/吡啶(70∶30，0.2ml)，将该反应温度缓慢升至室温过夜。该反应物用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭，用乙酸乙酯稀释。乙酸乙酯层再用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml×2)洗涤。合并的水层用乙酸乙酯(20ml×2)洗涤。然后，合并的乙酸乙酯层用水(10ml×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥后真空浓缩。粗制残余物用硅胶进行纯化(用75％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)，得到白色固体7α，9α-环氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(10.26mg，70％)1H NMR(CDCl3)δ1.09(s，3H)，1.23(s，3H)，1.40(s，9H)，1.77(s，3H)，1.95(s，3H)，2.07(s，3H)，2.21(m，2H)，2.37(m，2H)，2.50(d，J＝6.0Hz，1H)，3.51(s，1H)，3.71(d，J＝4.0Hz，1H)，3.77(s，3H)，3.91(s，3H)，4.02(d，J＝6.4Hz，1H)，4.26(d，J＝7.2Hz，1H)，4.29(d，J＝7.2Hz，1H)，4.68(d，J＝2.8Hz，1H)，4.78(m，3H)，4.88(br s，1H)，5.32(m 2H)，5.63(d，J＝6.4Hz，1H)，6.01(t，J＝8.8Hz，1H)，6.27(d，J＝3.2Hz，1H)，6.31(dd，J＝3.2，2.0Hz，1H)，6.92(d，J＝9.2Hz，1H)，7.20(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.24(d，J＝3.2Hz，1H)，7.34(d，J＝0.8Hz，1H).
m/z LC/MS C43H55NO16Na+计算值864.5；实测值864.3。
7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-乙酰氧基-多西他赛。将乙酸酐(8.1μL，0.858mmol)和DMAP(5mg，0.043mmol)加入到7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(28.5mg，0.0286mmol)的吡啶(0.5ml)溶液中。该反应物于室温搅拌3小时后完成反应。产物用乙酸乙酯(30ml×1)萃取，用水(15ml×1)和盐水(15ml×1)洗涤，经无水硫酸钠干燥后真空浓缩。粗制残余物用硅胶进行纯化(用50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)，得到白色固体7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-乙酰氧基-多西他赛(25mg，85％)。
1HNMR(CDCl3)δ 0.95(m，21H)，1.26(m，6H)，1.44(s，9H)，1.76(s，3H)，1.99(s，3H)，2.13(s，3H)，2.18(s，3H)，2.40(m，4H)，3.66(s，1H)，3.80(s，3H)，3.97(s，3H)，4.02(d，J＝6.4Hz，1H)，4.27(d，J＝7.2Hz，1H)，4.35(d，J＝7.2Hz，1H)，4.82(dd，J＝8.4，6.0Hz，1H)，4.86(d，J＝6.0Hz，1H)，4.95(br s，1H)，5.01(s，1H)，5.31(s，2H)，5.72(m，2H)，6.01(t，J＝8.8Hz，1H)，6.24(d，J＝3.2，1H)，6.32(dd，J＝3.2，1.6Hz，1H)，6.94(d，J＝9.2Hz，1H)，7.05(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.27(d，J＝3.2，1H)，7.34(d，J＝0.8Hz，1H).
m/z LC/MS C54H77NO17SiNa+计算值1062.5；实测值1062.5。
7α，9α-环氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-1 0-乙酰氧基-多西他赛。将7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-乙酰氧基-多西他赛(25mg，0.025mmol)溶于吡啶-乙腈(1/1，1.5ml)并冷却至0℃。加入HF/吡啶(70∶30，0.25ml)，将该反应温度缓慢升至室温过夜。该反应物用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭，用乙酸乙酯稀释。乙酸乙酯层再用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml×2)洗涤。合并的水层用乙酸乙酯(25ml×2)洗涤。然后，合并的乙酸乙酯层用水(10ml×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥后真空浓缩。粗制残余物用硅胶进行纯化(用80％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)，得到最终产物7α，9α-环氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-乙酰氧基-多西他赛(17.2mg，78％)1H NMR(CDCl3)δ1.24(s，6,H)，1.41(s，9H)，174(s，3H)，1.94(s，3H)，2.10(s，6H)，2.27(m，2H)，2.33(m，1H)，2.46(m，1H)，3.62(s，1H)，3.79(s，4H)，3.93(s，3H)，4.01(d，J＝6.0Hz，1H)，4.26(d，J＝7.2Hz，1H)，4.30(d，J＝7.2Hz，1H)，4.72(d，J＝3.6Hz，1H)，4.80(dd，J＝5.6，8.8Hz，1H)，4.85(d，J＝6.0Hz，1H)，4.89(br s，1H)，5.34(m，2H)，5.65(d，J＝6.0Hz，1H)，5.70(d，J＝6.0Hz，1H)，6.02(t，J＝8.8Hz，1H)，6.29(d，J＝3.2Hz，1H)，6.33(m，1H)，6.94(d，J＝9.2Hz，1H)，7.05(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.26(d，J＝3.2Hz，1H)，7.36(d，J＝1.2Hz，1H).
m/z LC/MS C45H57NO17Na+计算值906.4；实测值906.4。
具有SS连接基的3′-异丁烯基系列
前面已经介绍下列中间体2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。
7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。
7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-10-氧代-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。
7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。
7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-(4-甲基二硫基丁酰基)-多西他赛。在氮气氛下，向7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(28mg，0.029mmol)和二氯甲烷(1.5ml)的溶液中加入DMAP(3.5mg，0.028mmol)和4-甲基二硫丁酸(50mg，0.28mmol)。向该混合物中加入二异丙基碳二亚胺(0.045ml，0.28mmol)，所得混合物于室温搅拌过夜。然后，反应物用氯化铵(15ml)猝灭，用二氯甲烷(20ml)萃取。然后，有机层用盐水(15ml)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤后真空浓缩。残余物用硅胶制备型薄层色谱法纯化(用40％乙酸乙酯/己烷作为展开剂)。收刮包含所需产物带，在过滤器中用乙酸乙酯清洗。合并有机层后真空浓缩，得到23mg白色固体7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-(4-甲基二硫基丁酰基)-多西他赛。
1H NMR(CDCl3)δ1.10(m，21H)，1.21(s，3H)，1.23(s，3H)，1.39(s，9H)，1.68(s，3H)，1.71(s，3H)，1.74(s，3H)，1.95(s，3H)，2.06(dt，J＝2.0，7.2Hz，2H)，2.08(s，3H)，2.31(m，3H)，2.40(s，3H)，2.49(m，3H)，2.74(dt，J＝2.0，7.2Hz，2H)，3.80(s，3H)，3.98(s，4H)，4.25(d，J＝7.2Hz，1H)，4.33(d，J＝7.2Hz，1H)，4.46(d，J＝2.0Hz，1H)，4.77(m，2H)，4.84(d，J＝6.4Hz，1H)，4.92(s，1H)，4.92(d，J＝7.2Hz，1H)，5.36(d，J＝8.4Hz，1H)，5.71(overlapping d，J＝6.4Hz，2H)，5.90(t，J＝8.8Hz，1H)，6.95(d，J＝9.2Hz，1H)，7.06(dd，J＝3.2 9.2Hz，1H)，7.30(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C57H87NO16S2SiNa+计算值1156.5；实测值1156.2。
7α，9α-环氧-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-(4-甲基二硫基丁酰基)-多西他赛。将7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-1 0-(4-甲基二硫基丁酰基)-多西他赛(23mg，0.02mmol)溶于1∶1乙腈∶吡啶混合物(1.6ml)中，所得溶液用冰浴冷却至0℃。向该溶液中加入氟化氢-吡啶(0.25ml)，将所得溶液温度逐渐升至室温。16小时后，该反应物用乙酸乙酯(15ml)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液(15ml)猝灭。有机层用盐水(15ml)洗涤1次，然后经无水硫酸钠干燥，过滤后真空浓缩。粗制残余物用硅胶制备型薄层色谱法纯化(用65％乙酸乙酯/己烷作为展开剂)。收刮包含所需产物带，在过滤器中用乙酸乙酯清洗。合并有机层后真空浓缩，得到16mg 7α，9α-环氧-3′-去苯基-3′-(异丁烯基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-(4-甲基二硫基丁酰基)-多西他赛。
1H NMR(CDCl3)δ1.25(s，3H)，1.29(s，3H)，1.40(s，9H)，1.73(s，6H)，1.74(s，3H)，1.97(s，3H)，2.04(m，2H)，2.07(s，3H)，2.17(m，1H)，2.25(m，1H)，2.33(m，1H)，2.39(s，3H)，2.51(m，1H)，2.73(t，J＝7.2Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.83(s，1H)，3.93(s，3H)，4.00(d，J＝6.0Hz，1H)，4.26(m，2H)，4.31(d，J＝7.6Hz，1H)，4.78(m，2H)，4.84(d，J＝6.0Hz，1H)，4.90(s，1H)，4.96(d，J＝9.2Hz，1H)，5.27(d，J＝8.4Hz，1H)，5.68(d，J＝6.4Hz，1H)，5.70(d，J＝6.0Hz，1H)，6.00(t，J＝8.4Hz，1H)，6.94(d，J＝9.2Hz，1H)，7.05(dd，J＝3.2 9.2Hz，1H)，7.28(d，J＝3.2Hz，1H).
m/z LC/MS C48H67NO16S2Na+计算值1000.4；实测值1000.2。
具有SS连接基的3′-2-呋喃基系列
前面已经介绍下列中间体2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。
7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。
7-(三氟甲磺酰基氧基)-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-10-氧代-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。
7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛。
7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-(4-甲基二硫基丁酰基)-多西他赛。将DMAP(4.6mg，0.0374mmol)、4-甲基二硫丁酸(62mg，0.374mmol)和DIC(58.5μL，.0374mmol)加入到7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-多西他赛(37.3mg，0.0374mmol)的二氯甲烷(0.5ml)溶液中。反应物于室温搅拌过夜后完成反应，该反应物用饱和氯化铵水溶液猝灭。产物用乙酸乙酯(25ml×2)萃取，用水(15ml×1)洗涤，经硫酸镁干燥后真空浓缩。粗制残余物用硅胶进行纯化(用50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)，得到7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-(4-甲基二硫基丁酰基)-多西他赛(48.2mg，100+％)1H NMR(CDCl3)δ0.92(m，21H)，1.24(m，6H)，1.41(s，9H)，1.73(s，3H)，1.95(s，3H)，2.05(m，2H)，2.15(s，3H)，2.32(m，3H)，2.38(s，3H)，2.44-2.56(m 3H)，2.72(m，2H)，3.65(s，1H)，3.77(s，3H)，3.94(s，3H)，3.98(m，1H)，4.26(m，2H)，4.77(dd，J＝8.4，6.0Hz，1H)，4.83(d，J＝6.4Hz，1H)，4.92(br s，1H)，4.97(s，1H)，5.28(s，2H)5.68(m，2H)，5.98(t，J＝8.8Hz，1H)，6.20(d，J＝3.2 Hz，1H)，6.29(dd，J＝3.2，2.0Hz，1H)，6.90(d，J＝9.2Hz，1H)，7.01(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.24(d，J＝3.2Hz，1H)，7.31(d，J＝1.2，1H).
m/z LC/MS C57H83NO17S2SiNa+计算值1168.5；实测值1168.4 7α，9α-环氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-1 0-(4-甲基二硫基丁酰基)-多西他赛。将7α，9α-环氧-2′-(三异丙基甲硅烷氧基)-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-(4-甲基二硫基丁酰基)-多西他赛(42.8mg，0.0374mmol)溶于吡啶-乙腈(1/1，3.0ml)并冷却至0℃。加入HF/吡啶(70∶30，0.5ml)后，将该反应温度缓慢升至室温过夜。该反应物用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭，用乙酸乙酯稀释。乙酸乙酯层再用饱和碳酸氢钠水溶液(15ml×2)洗涤，然后合并的水层用乙酸乙酯(40ml×2)洗涤。合并的乙酸乙酯层用水(15ml×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥后真空浓缩。粗制残余物用硅胶进行纯化(用50％乙酸乙酯/己烷作为洗脱剂)，得到7α，9α-环氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-(4-甲基二硫基丁酰基)-多西他赛(22.9mg，62％，两步)1H NMR(CDCl3)δ 1.24(m，6H)，1.41(s，9H)，1.74(s，3H)，1.93(s，3H)，2.04(m，2H)，2.09(s，3H)，2.24(m，2H)，2.33(m，1H)，2.37(s，3H)，2.42-2.56(m，3H)，2.72(t，J＝6.8Hz，2H)，3.62(s，1H)，3.75(d，J＝8.4Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.93(s，3H)，3.99(d，J＝6.0Hz，1H)，4.26(d，J＝7.2Hz，1H)，4.30(d，J＝7.2Hz，1H)，4.70(d，J＝3.6Hz，1H)，4.77(dd，J＝8.8，5.6Hz，1H)，4.83(d，J＝6.0Hz，1H)，4.88(br s，1H)，5.33(br s，2H)，5.67(m，2H)，6.01(t，J＝8.8Hz，1H)，6.28(d，J＝3.2，1H)，6.32(dd，J＝3.2，2.0Hz，1H)，6.92(d，J＝9.2Hz，1H)，7.03(dd，J＝9.2，3.2Hz，1H)，7.25(d，J＝3.2，1H)，7.35(m，1H).
m/z LC/MS C48H63NO17S2Na+计算值1012.3；实测值1012.3。
根据Riou，Naudin和Lavelle，Biochemical and BiophysicalResearch Communications；第187卷，第1期，1992，第164-170页所述的方法，对本发明化合物的活性进行测定。
本发明紫杉烷类化合物和细胞结合剂的缀合物可使用目前已知的或下文介绍的任何方法制得。多种缀合方法参见USP 5,416,064和USP 5,475,092。对紫杉烷酯进行修饰可产生游离氨基，然后通过酸不稳定连接分子或光不稳定连接分子与抗体或其它细胞结合剂相连接。紫杉烷酯可与肽缩合，然后与细胞结合剂连接，产生肽酶不稳定连接分子。紫杉烷酯上的羟基可琥珀酰化，然后与细胞结合剂连接，从而得到缀合物，这种缀合物可被细胞内酯酶裂解后释放游离药物。最优选处理紫杉烷的醚、酯或氨基甲酸酯产生游离巯基或保护的巯基，然后含二硫基或巯基的紫杉烷通过二硫键与细胞结合剂连接。
本发明的代表性缀合物为抗体-紫杉烷、抗体片段-紫杉烷表皮生长因子(EGF)-紫杉烷、促黑素细胞激素(MSH)-紫杉烷、促甲状腺激素(TSH)-紫杉烷、雌激素-紫杉烷、雌激素类似物-紫杉烷、雄激素-紫杉烷、雄激素类似物-紫杉烷以及叶酸-紫杉烷。
抗体、抗体片段、蛋白或肽激素、蛋白或肽生长因子以及其它蛋白的紫杉烷缀合物通过已知方法以相同的方式形成。例如，肽和抗体可通过已知方法用交联剂修饰，例如3-(2-吡啶基二硫基)丙酸N-琥珀酰亚胺酯、4-(2-吡啶基二硫基)戊酸N-琥珀酰亚胺酯(SPP)、4-琥珀酰亚胺基-氧羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫基)-甲苯(SMPT)、3-(2-吡啶基二硫基)丁酸N-琥珀酰亚胺酯(SDPB)、3-(2-(5-硝基-吡啶基二硫基)丁酸N-磺基琥珀酰亚胺酯(SSNPB)、2-亚氨基硫杂戊烷或者S-乙酰基琥珀酸酐。参见Carlsson等，173 Biochem.J.723-737(1978)；Blattler等，24 Biochem.1517-1524(1985)；Lambert等，22 Biochem.3913-3920(1983)；Klotz等，96 Arch.Biochem.Biophys.605(1962)；Liu等，18 Biochem.690(1979)，Blakey和Thorpe，1 Antibody，lmmunoconjugates&Radiopharmaceuticals，1-16(1988)，Worrell等，1Anti-Cancer Drug Design 179-184(1986)。然后，使如此衍生的游离或保护的含巯基细胞结合剂与含二硫基或巯基的紫杉烷反应生成缀合物。该缀合物可通过HPLC或凝胶过滤法纯化。
优选单克隆抗体-紫杉烷或细胞结合剂-紫杉烷缀合物经二硫键结合在一起，如上所述，它们能够递送紫杉烷分子。这样的细胞结合缀合物通过已知方法制备，例如用吡啶基二硫基丙酸琥珀酰亚胺酯(SPDP)修饰单克隆抗体(Carlsson等，173 Biochem.J.723-737(1978))。然后，将所得的硫吡啶基经含巯基的紫杉烷处理置换产生二硫键连接的缀合物。或者，在芳基二硫紫杉烷的情况下，细胞结合缀合物的形成通过先前引入抗体分子的巯基直接置换紫杉烷的芳基-巯基来实现。通过任何一种方法经二硫键桥很容易制备含有1-10个紫杉烷药物分子的缀合物。
更具体地说，将二硫-硝基吡啶基修饰的抗体(在0.05M磷酸钾缓冲液(pH 7.5，含有2mM EDTA)中，浓度2.5mg/ml)用含巯基的紫杉烷(1.3摩尔当量/二硫吡啶基)处理。从修饰抗体中释放硫-硝基吡啶用分光光度法于325nm监测，约16小时完成。抗体-紫杉烷缀合物通过Sephadex G-25或Sephacryl S300柱凝胶过滤进行纯化，使其不含未反应药物和其它低分子量物质。每个抗体分子结合紫杉烷基团的数量可通过测量于230nm和275nm时吸光度的比率来测定。平均1-10个紫杉烷分子/抗体分子可用这种方法经二硫键连接。
抗原表达细胞的结合亲合力的缀合效应可用前面介绍的Liu等，93 Proc.Natl.Acad.Sci 8618-8623(1996)所述的方法测定。紫杉烷及其抗体缀合物对非贴壁细胞系例如Namalwa和HL-60的细胞毒性可通过细胞增殖曲线后插法(back-extrapolation)测定，参见Goldmacher等，135 J.Immunol.3648-3651(1985)。这些化合物对贴壁细胞系例如COLO 205和A-375的细胞毒性可用产克隆测定法测定，参见Goldmacher等，102 J.Cell Biol.1312-1319(1986)。
实施例缀合用IGT-15-075-SH的合成 7α，9α-环氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-10-(N-2，2-二甲基-2-巯基-乙基氨基甲酰基)-多西他赛(IGT-15-075-SH)。在一个小瓶中，将7α，9α-环氧-3′-去苯基-3′-(2-呋喃基)-2-去苯甲酰基-2-(2，5-二甲氧基苯甲酰基)-1 0-(N-2，2-二甲基-2-甲基二硫基-乙基氨基甲酰基)-多西他赛(36mg，0.0353mmol)溶于甲醇(1.0ml)和乙酸乙酯(0.73ml)的混合物中。在另外一个小瓶中，将DTT(55mg，0.343mmol)溶于50mM KP缓冲液pH7.5(0.73ml)中，然后将其加入紫杉烷类化合物溶液中。用高效液相色谱法监测该反应直到反应完成(约19小时)。该反应物用50mM KP缓冲液pH6.5(6ml)猝灭，用乙酸乙酯(3×20ml)萃取。合并的有机层用水洗涤，经无水硫酸钠干燥后浓缩。残余物用二醇柱通过高效液相色谱法纯化，得到所需产物(27mg，79％)，将其立即等分后贮存供缀合时使用。m/zLC/MS C48H64N2O17SNa+计算值995.4；实测值995.5。
紫杉烷类化合物与单克隆抗体缀合。CanAg抗原在人结肠肿瘤细胞和其它实体瘤的表面优先表达，选取可结合该抗原的HuC242抗体，用于缀合紫杉烷类化合物。
在第一个步骤中，使抗体与改性剂5-硝基-2-吡啶基二硫丁酸N-磺基琥珀酰亚胺酯(SSNPB)反应以引入硝基吡啶基二硫基。将浓度为8mg/ml的huC242抗体(525mg，0.0036mmol)和水性缓冲液(含有0.05M磷酸钾、0.05M氯化钠和2mM乙二胺四乙酸(EDTA)，pH 6.5)(65.6ml)的溶液用8倍摩尔过量的SSNPB(0.0288mmol，13.62mg)的二甲基乙酰胺(DMA)(3.28ml)溶液处理。反应混合物于室温搅拌90分钟，然后将其加到已经用含有0.05M磷酸钾、0.05M氯化钠和2mM EDTA，水性缓冲液(pH7.5，65.6ml)平衡的Sephadex G25凝胶过滤柱(50mm×35.5mm，柱容积＝700ml)上。收集含修饰抗体的流分，然后合并得到产物502.4mg(95.7％)。一小等份修饰抗体用二硫苏糖醇处理以裂解硝基-吡啶基二硫化物，用分光光度法测定所释放的硝基-吡啶-2-硫酮(硝基-吡啶-2-硫酮ε325nm＝10,964M-1cm-1和ε280nm＝3,344M-1cm-1，抗体ε280nm＝217,560M-1cm-1)。每分子抗体平均连接有4.53个硝基吡啶基二硫化物分子。
将修饰抗体(502.0mg，0.0034mmol)用上述缓冲液(pH 7.5)稀释至2.5mg/ml，然后用紫杉烷类IGT-15-075(0.020mmol，19.5mg)的DMA溶液处理，这样缓冲液的DMA最终浓度为20％。缀合混合物于室温搅拌16小时。使反应混合物通过已经用磷酸缓冲盐溶液(PBS)pH 6.5平衡的Sephacryl S300凝胶过滤柱(50mm×42cm，柱容积＝825ml)而纯化。合并含有单体抗体-紫杉烷类缀合物的流分，针对PBS缓冲液透析。最终的缀合物(251mg)用下列消光系数进行分光光度测定(紫杉烷类化合物ε323nm＝4,299M-1cm-1，ε280nm＝565M-1cm-1，抗体ε280nm＝217,560M-1cm-1)。缀合物平均含有4.16个紫杉烷类化合物分子。
结合测定。采用基于荧光的测定法，来测定huC242抗体及其紫杉烷类缀合物对表达抗原的HT-29人结肠肿瘤细胞的相对结合亲和力。将抗体-紫杉烷类缀合物和无保护抗体以初始浓度1×10-7M加入到96孔圆底板，用3倍系列稀释液滴定，每种浓度都有两份。将HT-29细胞以50,000细胞/孔加入到包含不同浓度抗体或缀合物的各孔以及对照孔中。将板在冰上孵育3小时。孵育期后，洗涤各板上的细胞，加入荧光标记的结合人源化IgG(如huC242)的第二抗体，各板在冰上孵育1小时。孵育期后再次洗涤各板，用1％甲醛/PBS溶液固定细胞。用Becton Dickinson FACSCalibur荧光分析仪读取培养板各孔的荧光数据。将数据以相对最高浓度抗体或缀合物时获得的最大荧光强度的百分率作图(
图1)。
上述结果表明，紫杉烷类化合物与抗体的缀合没有改变对靶细胞的结合亲和力。
huC242-紫杉烷类缀合物的体外功效和特异性将游离紫杉烷类huC242-紫杉烷类缀合物的样品加入到96孔平底组织培养板国，然后用1×10-12M至3×10-7M的系列稀释液滴定。向各孔中加入人结肠肿瘤细胞COLO 205或人黑素瘤细胞A-375。每个细胞系每种药物浓度都一式三份。各板于37℃、5％CO2气氛下孵育4天。
孵育期结束时，向各孔中加入20μl四唑试剂WST-8(2-(2-甲氧基-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-二磺基苯基)-2-四唑，一钠盐))，然后将各板放回培养箱中培养2小时。然后，用Molecular Devices读板仪于450nm测量培养板各孔的吸光度。将紫杉烷类化合物或缀合物各个浓度下的细胞存活分数绘制为图2a，b。
上述结果表明，与抗体的缀合使紫杉烷类化合物表现出高靶向特异性。因此，huC242-紫杉烷类化合物对杀死靶细胞--人结肠肿瘤COLO 205细胞非常有效，其IC50值为8×10-11M。相比之下，抗原阴性细胞敏感性约为它的1/150，其IC50值为1.2×10-8M，表明细胞毒效应的抗原特异性(图2x)。另一方面，游离紫杉烷类化合物对这两种细胞系具有同等功效(IC50约为1×10-10M)(图2b)。
权利要求
1.具有下式(I)结构的紫杉烷类化合物 其中Z＝H或式II基团；R1为连接基或任选取代的芳基或杂环基、1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基、-OR2、或者任何所述1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基或者任选取代的芳基或杂环基所形成的氨基甲酸酯基；R2为1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基、任选取代的芳基或杂环基；R3为连接基或任选取代的芳基或杂环基、1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基；R4为连接基、H、羟基、烷氧基、烯氧基、任选取代的烷酰基氧基、芳酰基氧基、烯酰基氧基、炔酰基氧基、环烷酰基氧基、烷氧基乙酰基、烷硫基乙酰基、烷氧基羰氧基、环烷氧基、环烯氧基、氨基甲酰基氧基、烷基氨基甲酰基氧基、或二烷基氨基甲酰基氧基、杂环型或芳基型醚基、酯基或氨基甲酸酯基、或者1-10个碳原子的直链、支链或环状烷基或烯基的酯基或醚基或者式-OCOX的氨基甲酸酯基，其中X为含氮杂环基例如未取代或取代的哌啶子基、吗啉代、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或者式-OCONR9R10的氨基甲酸酯基，其中R9和R10相同或不同，并且为H、1-10个原子的直链、支链或环状烷基、或者1-10个碳原子的未取代或取代的芳基；R5或R7为H；R6为H；R7或R5与R形成化学键(环醚)；R8为任选取代的芳基或杂环基。
2.式(I)化合物，其中R1为-OR2或者任选取代的芳基或杂环基。
3.式(I)化合物，其中R2为烷基，更优选取代的烷基，例如叔丁基。
4.式(I)化合物，其中R4为连接基或烷酰基氧基。
5.权利要求1的化合物，其中R1选自以下取代基叔丁氧基、巴豆基、二甲基丙烯酰基、异丁烯基、己烯基、环戊烯基、环己烯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、唑基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
6.权利要求5的化合物，其中R1为叔丁氧基、异丁烯基、巴豆基、二甲基丙烯酰基、噻吩基、噻唑基或呋喃基。
7.权利要求1的化合物，其中R3选自以下取代基巴豆基、二甲基丙烯酰基、丙烯基、异丁烯基、己烯基、环戊烯基、环己烯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、吗啉代、哌啶子基、哌嗪子基、唑基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
8.权利要求7的化合物，其中R3为异丁烯基、巴豆基、二甲基丙烯酰基、噻吩基、噻唑基、吡啶基、叔丁基或呋喃基。
9.权利要求1的化合物，其中所述连接基包括下列基团二硫基、硫醚基、酸不稳定基、光不稳定基、肽酶不稳定基和酯酶不稳定基。
10.权利要求9的化合物，其中所述连接基包括二硫基和硫醚基。
11.权利要求10的化合物，其中所述连接基为含巯基或二硫基的基团，带巯基或二硫基的侧链可以为直链或支链、芳族或杂环基团。
12.权利要求11的化合物，其中所述连接基位于R1时选自以下取代基-(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-O(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、-O-(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、-NR12(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、苯基-X′SZ′、呋喃基-XSZ′、唑基-X′SZ′、噻唑基-X′SZ′、噻吩基-X′SZ′、咪唑基-X′SZ′、吗啉代-X′SZ′、-哌嗪子基-X′SZ′、哌啶子基-XSZ′、-呋喃基-X′SZ′、-噻吩基-X′SZ′、-噻唑基-X′SZ′以及-N-甲基哌嗪子基-X′SZ′、-吗啉代-X′SZ′、-哌嗪子基-X′SZ′、-哌啶子基-X′SZ′或-N-甲基哌嗪子基-X′SZ′，其中Z′为H、巯基保护基或SR′，其中-X′为化学键、1-10个碳原子的直链或支链烷基、或者具有2-20个重复乙烯氧基单元的聚乙二醇间隔基；R′和R12相同或不同，并且为1-10个碳原子的直链、支链或环状烷基，或者未取代或取代的芳基或杂环基，R12还可以为H，R13、R14、R15和R16相同或不同，并且为H或1-4个碳原子的直链或支链烷基，R17和R18都为H或烷基，n为1-10的整数，m为1-10的整数并且还可以为0，y为1-20的整数并且还可以为0。
13.权利要求11的化合物，其中所述连接基位于R4时选自以下取代基-O(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-OCO(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-O(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、-OCO-(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、 -OCONR12(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-OCO-苯基-X′SZ′、-OCO-呋喃基-X′SZ′、-OCO-唑基-X′SZ′、-OCO-噻唑基-X′SZ′、-OCO-噻吩基-X′SZ′、-OCO-咪唑基-X′SZ′、-OCO-吗啉代-X′SZ′、-OCO-哌嗪子基-X′SZ′、-OCO-哌啶子基-X′SZ′和-OCO-N-甲基哌嗪子基-X′SZ′或-OCO-N-甲基哌嗪子基-X′SZ′，其中Z′为H、巯基保护基或SR′，其中X′为化学键、1-10个碳原子的直链或支链烷基、或者具有2-20个重复乙烯氧基单元的聚乙二醇间隔基；R′和R12相同或不同，并且为1-10个碳原子的直链、支链或环状烷基，或者未取代或取代的芳基或杂环基，R12还可以为H，R13、R14、R15和R16相同或不同，并且为H或1-4个碳原子的直链或支链烷基，R17和R18都为H或烷基，n为1-10的整数，m为1-10的整数并且还可以为0，y为1-20的整数并且还可以为0。
14.权利要求11的化合物，其中所述连接基位于R3时选自以下取代基-(CR13R14)m(CR15R16)n(OCH2CH2)ySZ′、-(CR13R14)m(CR17＝CR18)(CR15R16)m(OCH2CH2)ySZ′、苯基-X′SZ′、呋喃基-X′SZ′、唑基-X′SZ′、噻唑基-X′SZ′、噻吩基-X′SZ′、咪唑基-X′SZ′，其中Z′为H、巯基保护基或SR′，其中X′为化学键、1-10个碳原子的直链或支链烷基、或者具有2-20个重复乙烯氧基单元的聚乙二醇间隔基；R′为1-10个碳原子的直链、支链或环状烷基，或者未取代或取代的芳基或杂环基，R13、R14、R15和R16相同或不同，并且为H或1-4个碳原子的直链或支链烷基，R17和R18都为H或烷基，n为1-10的整数，m为1-10的整数并且还可以为0，y为1-20的整数并且还可以为0。
15.权利要求1的化合物，其中R8为3-甲氧基苯基、3-氯苯基、2，5-二甲氧基苯基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、咪唑基、吡啶基、唑基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基。
16.权利要求1的化合物，其中R5为H，R和R7形成化学键。
17.权利要求1的化合物，其中，在式(I)化合物中，R4为连接基；Z＝H或式II基团；R1为任选取代的芳基或杂环基、1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基、-OR2、或者任何所述1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基或者任选取代的芳基或杂环基所形成的氨基甲酸酯基；R2为1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基、任选取代的芳基或杂环基；R3为任选取代的芳基或杂环基、1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基；R4为连接基；R5或R7为H；R6为H；R7或R5与R形成化学键(环醚)；R8为任选取代的芳基或杂环基。
18.权利要求1的化合物，其中Z为式II基团；R1为连接基；R3为任选取代的芳基或杂环基、1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基；R4为H、羟基、烷氧基、烯氧基、任选取代的烷酰基氧基、芳酰基氧基、烯酰基氧基、炔酰基氧基、环烷酰基氧基、烷氧基乙酰基、烷硫基乙酰基、烷氧基羰氧基、环烷氧基、环烯氧基、氨基甲酰基氧基、烷基氨基甲酰基氧基、或二烷基氨基甲酰基氧基、杂环型或芳基型醚基、酯基或氨基甲酸酯基、或者1-10个碳原子的直链、支链或环状烷基或烯基的酯基或醚基、或者式-OCOX的氨基甲酸酯基，其中X为含氮杂环基例如未取代或取代的哌啶子基、吗啉代、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或者式-OCONR9R10的氨基甲酸酯基，其中R9和R10相同或不同，并且为H、1-10个原子的直链、支链或环状烷基、或者5-10个碳原子的未取代或取代的芳基；R5或R7为H；R6为H；R7或R5与R形成化学键(环醚)；R8为任选取代的芳基或杂环基。
19.权利要求1的化合物，其中R3为连接基；Z为式II基团；R1为任选取代的芳基或杂环基、1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基、-OR2、或者任何所述1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基或者任选取代的芳基或杂环基所形成的氨基甲酸酯基；R2为1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基、任选取代的芳基或杂环基；R3为连接基；R4为H、羟基、烷氧基、烯氧基、任选取代的烷酰基氧基、芳酰基氧基、烯酰基氧基、炔酰基氧基、环烷酰基氧基、烷氧基乙酰基、烷硫基乙酰基、烷氧基羰氧基、环烷氧基、环烯氧基、氨基甲酰基氧基、烷基氨基甲酰基氧基、或二烷基氨基甲酰基氧基、杂环型或芳基型醚基、酯基或氨基甲酸酯基、或者1-10个碳原子的直链、支链或环状烷基或烯基的酯基或醚基、或者式-OCOX的氨基甲酸酯基，其中X为含氮杂环基例如未取代或取代的哌啶子基、吗啉代、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或者式-OCONR9R10的氨基甲酸酯基，其中R9和R10相同或不同，并且为H、1-10个原子的直链、支链或环状烷基、或者5-10个碳原子的未取代或取代的芳基；R5或R7为H；R6为H；R7或R5与R形成化学键(环醚)；R8为任选取代的芳基或杂环基。
20.一种细胞毒剂，其包含一种或多种通过连接基与细胞结合剂共价结合的紫杉烷类化合物，其中至少一种所述紫杉烷类化合物为式(III)化合物 其中R1为连接基；R2为1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基、任选取代的芳基或杂环基；R3为任选取代的芳基或杂环基、1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基；R4为H、羟基、烷氧基、烯氧基、任选取代的烷酰基氧基、芳酰基氧基、烯酰基氧基、炔酰基氧基、环烷酰基氧基、烷氧基乙酰基、烷硫基乙酰基、烷氧基羰氧基、环烷氧基、环烯氧基、氨基甲酰基氧基、烷基氨基甲酰基氧基、或二烷基氨基甲酰基氧基、杂环型或芳基型醚基、酯基或氨基甲酸酯基、或者1-10个碳原子的直链、支链或环状烷基或烯基的酯基或醚基、或者式-OCOX的氨基甲酸酯基，其中X为含氮杂环基例如未取代或取代的哌啶子基、吗啉代、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或者式-OCONR9R10的氨基甲酸酯基，其中R9和R10相同或不同，并且为H、1-10个原子的直链、支链或环状烷基、或者1-10个碳原子的未取代或取代的芳基；R5或R7为H；R6为H；R7或R5与R形成化学键(环醚)；R8为任选取代的芳基或杂环基。
21.一种细胞毒剂，其包含一种或多种通过连接基与细胞结合剂共价结合的紫杉烷类化合物，其中至少一种所述紫杉烷类化合物为式(III)化合物 其中R1为任选取代的芳基或杂环基、1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基、-OR2、或者任何所述1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基或者任选取代的芳基或杂环基所形成的氨基甲酸酯基；R2为1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基、任选取代的芳基或杂环基；R3为连接基；R4为H、羟基、烷氧基、烯氧基、任选取代的烷酰基氧基、芳酰基氧基、烯酰基氧基、炔酰基氧基、环烷酰基氧基、烷氧基乙酰基、烷硫基乙酰基、烷氧基羰氧基、环烷氧基、环烯氧基、氨基甲酰基氧基、烷基氨基甲酰基氧基、或二烷基氨基甲酰基氧基、杂环型或芳基型醚基、酯基或氨基甲酸酯基、或者1-10个碳原子的直链、支链或环状烷基或烯基的酯基或醚基、或者式-OCOX的氨基甲酸酯基，其中X为含氮杂环基例如未取代或取代的哌啶子基、吗啉代、哌嗪子基、N-甲基哌嗪子基或者式-OCONR9R10的氨基甲酸酯基，其中R9和R10相同或不同，并且为H、1-10个原子的直链、支链或环状烷基，或者1-10个碳原子的未取代或取代的芳基；R5或R7为H；R6为H；R7或R5与R形成化学键(环醚)；R8为任选取代的芳基或杂环基。
22.一种细胞毒剂，其包含一种或多种通过连接基与细胞结合剂共价结合的紫杉烷类化合物，其中至少一种所述紫杉烷类化合物为式(III)化合物 其中R1为任选取代的芳基或杂环基、1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基、-OR2、或者任何所述1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基或者任选取代的芳基或杂环基所形成的氨基甲酸酯基；R2为1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基、任选取代的芳基或杂环基；R3为任选取代的芳基或杂环基、1-10个碳原子的烷基、2-10个碳原子的烯基或炔基、3-10个碳原子的环烷基或环烯基R4为连接基；R5或R7为H；R6为H；R7或R5与R形成化学键(环醚)；R8为任选取代的芳基或杂环基。
23.一种治疗组合物，其包含(A)治疗有效量的权利要求19、20或21中任一项的细胞毒剂；和(B)药学上可接受的载体。
24.权利要求19、20或21中任一项的细胞毒剂，其中所述细胞结合剂选自抗体、抗体片段、干扰素、淋巴因子、激素、维生素、生长因子、集落刺激因子和转铁蛋白。
25.权利要求19、20或21中任一项的细胞毒剂，其中所述细胞结合剂为抗体。
26.权利要求19、20或21中任一项的细胞毒剂，其中所述细胞结合剂为单克隆抗体。
27.权利要求19、20或21中任一项的细胞毒剂，其中所述细胞结合剂为抗原特异性抗体片段。
28.权利要求19、20或21中任一项的细胞毒剂，其中所述抗体片段为sFV、Fab、Fab′或F(ab′)2。
29.权利要求19、20或21中任一项的细胞毒剂，其中所述细胞结合剂为生长因子或集落刺激因子。
30.一种选择性杀死细胞群体的方法，该方法包括使靶细胞或含靶细胞的组织与有效量的权利要求20、21或22中任一项的细胞毒剂接触。
全文摘要
本发明涉及新的细胞毒剂及其治疗用途。更具体地说，本发明涉及新的包含紫杉烷类化合物的细胞毒剂及其治疗用途。这些新的细胞毒剂通过紫杉烷与细胞结合剂的化学连接以靶向方式将紫杉烷类药物递送到特定细胞群体而具有治疗用途。
文档编号C07K16/30GK101094857SQ200580045888
公开日2007年12月26日 申请日期2005年12月2日 优先权日2004年12月7日
发明者M·L·米勒, R·V·J·查里, E·巴罗格卢, A·科默康 申请人:艾文蒂斯药品公司